বিসিএ অ্যাসে অ্যাবসর্বেন্স রিডিং এবং কাঙ্ক্ষিত প্রোটিন ভরের ভিত্তিতে সঠিক নমুনা ভলিউম গণনা করুন। ওয়েস্টার্ন ব্লট এবং অন্যান্য ল্যাবরেটরি অ্যাপ্লিকেশনের জন্য প্রোটিন লোডিংয়ের জন্য অপরিহার্য।
এই টুলটি বিসিএএ অগ্রভাগ ফলাফল এবং নমুনা ভরের ভিত্তিতে প্রয়োজনীয় নমুনা ভলিউম হিসাব করে। প্রতিটি নমুনার জন্য অগ্রভাগ মান এবং নমুনা ভর প্রবেশ করান যাতে সংশ্লিষ্ট নমুনা ভলিউম হিসাব করা যায়।
নমুনা ভলিউম নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে হিসাব করা হয়:
• tipAbsorbanceRange
• tipSampleMass
• tipSampleVolume
• tipStandardCurve
BCA অ্যাবসর্বেন্স নমুনা ভলিউম ক্যালকুলেটর একটি বিশেষায়িত টুল যা গবেষক এবং ল্যাব প্রযুক্তিবিদদের BCA (বাইকিঞ্চোনিনিক অ্যাসিড) অ্যাসায় ফলাফলের ভিত্তিতে পরীক্ষার জন্য সঠিক নমুনা ভলিউম নির্ধারণ করতে সহায়তা করে। এই ক্যালকুলেটর আপনার BCA অ্যাসায়ের অ্যাবসর্বেন্স রিডিং এবং আপনার কাঙ্খিত নমুনা ভর গ্রহণ করে পরীক্ষার জন্য প্রয়োজনীয় সঠিক ভলিউম গণনা করে, যেমন ওয়েস্টার্ন ব্লটিং, এনজাইমেটিক অ্যাসায় এবং অন্যান্য প্রোটিন বিশ্লেষণ প্রযুক্তিতে প্রোটিন লোডিংয়ের জন্য।
BCA অ্যাসায় হল জীববিজ্ঞান এবং অণুজীববিজ্ঞান ল্যাবরেটরিতে প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণের জন্য সবচেয়ে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত পদ্ধতিগুলির একটি। আপনার প্রোটিন নমুনার অ্যাবসর্বেন্স পরিমাপ করে এবং একটি স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের সাথে তুলনা করে, আপনি উচ্চ সঠিকতার সাথে প্রোটিন ঘনত্ব নির্ধারণ করতে পারেন। আমাদের ক্যালকুলেটর এই প্রক্রিয়াকে সহজ করে দেয়, স্বয়ংক্রিয়ভাবে অ্যাবসর্বেন্স রিডিংগুলিকে আপনার পরীক্ষার জন্য প্রয়োজনীয় সঠিক নমুনা ভলিউমে রূপান্তর করে।
বাইকিঞ্চোনিনিক অ্যাসিড (BCA) অ্যাসায় একটি রসায়নিক অ্যাসায় যা একটি সমাধানে প্রোটিনের মোট ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য ব্যবহৃত হয়। এই অ্যাসায়ের মূলনীতি হল অ্যালকালাইন অবস্থায় একটি Cu²⁺-প্রোটিন জটিলের গঠন, তারপরে Cu²⁺ থেকে Cu¹⁺-এ হ্রাস। হ্রাসের পরিমাণ প্রোটিনের উপস্থিতির সাথে অনুপাতিক। BCA অ্যালকালাইন পরিবেশে Cu¹⁺ এর সাথে একটি বেগুনি রঙের জটিল গঠন করে, যা প্রোটিনের হ্রাস পর্যবেক্ষণের ভিত্তি প্রদান করে।
বেগুনি রঙের তীব্রতা প্রোটিন ঘনত্বের সাথে অনুপাতিকভাবে বাড়ে, যা একটি স্পেকট্রোফোটোমিটার ব্যবহার করে প্রায় 562 nm-এ পরিমাপ করা যায়। তারপর অ্যাবসর্বেন্স রিডিংগুলি একটি স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের সাথে তুলনা করে অজানা নমুনাগুলির প্রোটিন ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়।
BCA অ্যাবসর্বেন্স ফলাফলের ভিত্তিতে নমুনা ভলিউম গণনার জন্য মৌলিক ফর্মুলা হল:
যেখানে:
প্রোটিন ঘনত্বটি অ্যাবসর্বেন্স রিডিং থেকে একটি স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ সমীকরণ ব্যবহার করে গণনা করা হয়:
একটি স্ট্যান্ডার্ড BCA অ্যাসায়ের জন্য, সাধারণ স্লোপ প্রায় 2.0 এবং ইন্টারসেপ্ট প্রায় শূন্যের কাছাকাছি থাকে, যদিও এই মানগুলি আপনার নির্দিষ্ট অ্যাসায়ের শর্ত এবং স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের উপর ভিত্তি করে পরিবর্তিত হতে পারে।
আমাদের ক্যালকুলেটর BCA অ্যাসায় ফলাফল থেকে নমুনার ভলিউম নির্ধারণের প্রক্রিয়াকে সহজ করে দেয়। সঠিক গণনার জন্য নিম্নলিখিত পদক্ষেপগুলি অনুসরণ করুন:
নমুনা তথ্য প্রবেশ করুন:
স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের ধরন নির্বাচন করুন:
ফলাফল দেখুন:
ফলাফল কপি বা রপ্তানি করুন:
চলুন একটি ব্যবহারিক উদাহরণের মাধ্যমে চলি:
এটি মানে আপনি 20 μg প্রোটিন পেতে আপনার নমুনার 13.33 μL লোড করা উচিত।
ক্যালকুলেটর বেশ কয়েকটি গুরুত্বপূর্ণ তথ্য প্রদান করে:
প্রোটিন ঘনত্ব: এটি আপনার অ্যাবসর্বেন্স রিডিং থেকে নির্বাচিত স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ব্যবহার করে গণনা করা হয়। এটি আপনার নমুনায় প্রতি ইউনিট ভলিউমে প্রোটিনের পরিমাণ (μg/μL) উপস্থাপন করে।
নমুনা ভলিউম: এটি আপনার নমুনার সেই ভলিউম যা আপনার কাঙ্খিত প্রোটিন পরিমাণ ধারণ করে। এই মানটি আপনি আপনার পরীক্ষার প্রস্তুতির সময় ব্যবহার করবেন।
সতর্কতা এবং সুপারিশ: ক্যালকুলেটর নিম্নলিখিত সতর্কতা প্রদান করতে পারে:
এই ক্যালকুলেটরের সবচেয়ে সাধারণ অ্যাপ্লিকেশনগুলির মধ্যে একটি হল ওয়েস্টার্ন ব্লটিংয়ের জন্য নমুনা প্রস্তুত করা। সঙ্গতিপূর্ণ প্রোটিন লোডিং নির্ভরযোগ্য ওয়েস্টার্ন ব্লট ফলাফলের জন্য গুরুত্বপূর্ণ, এবং এই ক্যালকুলেটর নিশ্চিত করে যে আপনি প্রতিটি নমুনার জন্য একই পরিমাণ প্রোটিন লোড করেন, এমনকি যখন তাদের ঘনত্ব ভিন্ন হয়।
উদাহরণ কাজপ্রবাহ:
এনজাইমেটিক অ্যাসায়ের জন্য, এটি প্রায়শই প্রয়োজনীয় যে একটি নির্দিষ্ট পরিমাণ প্রোটিন ব্যবহার করা হয় যাতে বিভিন্ন নমুনা বা পরীক্ষার মধ্যে প্রতিক্রিয়া শর্তগুলি মানক করা যায়।
উদাহরণ কাজপ্রবাহ:
ইমিউনোপ্রিসিপিটেশন (IP) পরীক্ষাগুলিতে, শুরুতে একটি সঙ্গতিপূর্ণ পরিমাণ প্রোটিন থাকা গুরুত্বপূর্ণ যাতে বিভিন্ন অবস্থার মধ্যে ফলাফলগুলি তুলনা করা যায়।
উদাহরণ কাজপ্রবাহ:
প্রোটিন শুদ্ধকরণের সময়, বিভিন্ন পদক্ষেপে প্রোটিন ঘনত্ব ট্র্যাক করা প্রয়োজন হতে পারে।
উদাহরণ কাজপ্রবাহ:
যদিও ক্যালকুলেটর স্ট্যান্ডার্ড BCA অ্যাসায়ের জন্য ডিফল্ট প্যারামিটারগুলি প্রদান করে, আপনি যদি আপনার নিজস্ব স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ তৈরি করে থাকেন তবে আপনি কাস্টম মানও প্রবেশ করতে পারেন। এটি বিশেষভাবে উপকারী যখন:
একটি কাস্টম স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ব্যবহার করতে:
ক্যালকুলেটর আপনাকে একাধিক নমুনা যোগ করতে এবং একসাথে তাদের ভলিউম গণনা করতে দেয়। এটি বিশেষভাবে উপকারী যখন পরীক্ষাগুলির জন্য সঙ্গতিপূর্ণ প্রোটিন লোডিং প্রয়োজন।
ব্যাচ প্রসেসিংয়ের সুবিধা:
যদি আপনার অ্যাবসর্বেন্স রিডিং 2.0 এর উপরে হয়, তবে এটি BCA অ্যাসায়ের লিনিয়ার পরিসরের বাইরে হতে পারে। এই ক্ষেত্রে:
অ্যাবসর্বেন্স রিডিং 0.1 এর নিচে থাকলে, আপনি অ্যাসায়ের সনাক্তকরণের সীমার কাছাকাছি থাকতে পারেন, যা সঠিকতাকে প্রভাবিত করতে পারে। বিবেচনা করুন:
যদি ক্যালকুলেটর একটি ভলিউম প্রস্তাব করে যা আপনার অ্যাপ্লিকেশনের জন্য খুব বড়:
প্রোটিনগুলির সঠিক পরিমাণ নির্ধারণ জীববিজ্ঞান এবং অণুজীববিজ্ঞান উভয় ক্ষেত্রেই একটি মৌলিক প্রয়োজনীয়তা ছিল যখন এই ক্ষেত্রগুলি উদ্ভূত হয়েছিল। প্রাথমিক পদ্ধতিগুলি নাইট্রোজেন কনটেন্ট নির্ধারণের উপর নির্ভর করেছিল, যা সময়সাপেক্ষ এবং বিশেষায়িত যন্ত্রপাতির প্রয়োজন।
কেজলডাল পদ্ধতি (1883): প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণের জন্য অন্যতম প্রাচীন পদ্ধতি, যা নাইট্রোজেন কনটেন্ট পরিমাপের উপর ভিত্তি করে।
বায়ুরেট পরীক্ষা (1900-এর দশকের শুরু): এই পদ্ধতিটি পেপটাইড বন্ড এবং কপার আয়নের মধ্যে প্রতিক্রিয়ার উপর নির্ভর করে, যা একটি বেগুনি রঙ উৎপন্ন করে।
লোরি অ্যাসায় (1951): অলিভার লোরি দ্বারা উন্নত, এই পদ্ধতিটি বায়ুরেট প্রতিক্রিয়ার সাথে ফোলিন-সিওকালটিউ রেজেন্টকে একত্রিত করে, সংবেদনশীলতা বাড়ায়।
ব্র্যাডফোর্ড অ্যাসায় (1976): মেরিয়ন ব্র্যাডফোর্ড এই পদ্ধতি তৈরি করেন, যা প্রোটিনের সাথে আবদ্ধ কোয়ামাসি ব্রিলিয়ান্ট ব্লু G-250 রং ব্যবহার করে, যা প্রোটিনের সাথে আবদ্ধ হয়ে শোষণের সর্বাধিক স্থান পরিবর্তন করে।
BCA অ্যাসায় (1985): পল স্মিথ এবং পিয়ার্স কেমিক্যাল কোম্পানির সহকর্মীদের দ্বারা উন্নত, এই পদ্ধতিটি বিদ্যমান পদ্ধতিগুলির সীমাবদ্ধতাগুলি মোকাবেলা করার জন্য তৈরি করা হয়েছিল, বিশেষ করে প্রোটিন নিষ্কাশন এবং শুদ্ধকরণের সময় সাধারণভাবে ব্যবহৃত বিভিন্ন রাসায়নিকের হস্তক্ষেপ।
BCA অ্যাসায় প্রথম 1985 সালে স্মিথ এবং অন্যান্যদের দ্বারা "বাইকিঞ্চোনিনিক অ্যাসিড ব্যবহার করে প্রোটিন পরিমাপ" শিরোনামে একটি পত্রিকায় বর্ণনা করা হয়েছিল। এটি বিদ্যমান পদ্ধতিগুলির সীমাবদ্ধতাগুলি মোকাবেলা করার জন্য তৈরি করা হয়েছিল, বিশেষ করে বিভিন্ন রাসায়নিকের হস্তক্ষেপ যা সাধারণত প্রোটিন নিষ্কাশন এবং শুদ্ধকরণের সময় ব্যবহৃত হয়।
মূল উদ্ভাবন ছিল BCA ব্যবহার করে Cu¹⁺ আয়নাগুলির সনাক্তকরণ, যা প্রোটিন দ্বারা Cu²⁺ এর হ্রাসের ফলে উৎপন্ন হয়, একটি বেগুনি রঙের জটিল তৈরি করে যা স্পেকট্রোফোটোমেট্রিকভাবে পরিমাপ করা যেতে পারে। এটি কয়েকটি সুবিধা প্রদান করেছে:
এর পরিচয়ের পর থেকে, BCA অ্যাসায় বিশ্বব্যাপী জীববিজ্ঞান এবং অণুজীববিজ্ঞান ল্যাবরেটরিতে প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণের জন্য সবচেয়ে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি হয়ে উঠেছে।
1=IF(B2<=0,"ত্রুটি: অবৈধ অ্যাবসর্বেন্স",IF(C2<=0,"ত্রুটি: অবৈধ নমুনা ভর",C2/(2*B2)))
2
3' যেখানে:
4' B2 অ্যাবসর্বেন্স রিডিং ধারণ করে
5' C2 μg-এ কাঙ্খিত নমুনা ভর ধারণ করে
6' ফর্মুলাটি μL-এ প্রয়োজনীয় নমুনা ভলিউম ফেরত দেয়
71import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5 """অ্যাবসর্বেন্স থেকে প্রোটিন ঘনত্ব গণনা করুন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ব্যবহার করে।"""
6 if absorbance < 0:
7 raise ValueError("অ্যাবসর্বেন্স নেতিবাচক হতে পারে না")
8 return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11 """অ্যাবসর্বেন্স এবং কাঙ্খিত ভরের ভিত্তিতে প্রয়োজনীয় নমুনা ভলিউম গণনা করুন।"""
12 if sample_mass <= 0:
13 raise ValueError("নমুনা ভর ইতিবাচক হতে হবে")
14
15 protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16
17 if protein_concentration <= 0:
18 raise ValueError("গণনা করা প্রোটিন ঘনত্ব ইতিবাচক হতে হবে")
19
20 return sample_mass / protein_concentration
21
22# উদাহরণ ব্যবহার
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20 # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29 volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30 print(f"অ্যাবসর্বেন্স {absorbance} এবং কাঙ্খিত প্রোটিন ভর {sample_mass} μg এর জন্য:")
31 print(f"প্রোটিন ঘনত্ব: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32 print(f"প্রয়োজনীয় নমুনা ভলিউম: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34 print(f"ত্রুটি: {e}")
351# অ্যাবসর্বেন্স থেকে প্রোটিন ঘনত্ব গণনা করার জন্য ফাংশন
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3 if (absorbance < 0) {
4 stop("অ্যাবসর্বেন্স নেতিবাচক হতে পারে না")
5 }
6 return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# নমুনা ভলিউম গণনার জন্য ফাংশন
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11 if (sample_mass <= 0) {
12 stop("নমুনা ভর ইতিবাচক হতে হবে")
13 }
14
15 protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16
17 if (protein_concentration <= 0) {
18 stop("গণনা করা প্রোটিন ঘনত্ব ইতিবাচক হতে হবে")
19 }
20
21 return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# উদাহরণ ব্যবহার
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20 # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31 volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32 protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33
34 cat(sprintf("অ্যাবসর্বেন্স %.2f এবং কাঙ্খিত প্রোটিন ভর %.2f μg এর জন্য:\n", absorbance, sample_mass))
35 cat(sprintf("প্রোটিন ঘনত্ব: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36 cat(sprintf("প্রয়োজনীয় নমুনা ভলিউম: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38 cat(sprintf("ত্রুটি: %s\n", e$message))
39})
401function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2 if (absorbance < 0) {
3 throw new Error("অ্যাবসর্বেন্স নেতিবাচক হতে পারে না");
4 }
5 return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9 if (sampleMass <= 0) {
10 throw new Error("নমুনা ভর ইতিবাচক হতে হবে");
11 }
12
13 const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14
15 if (proteinConcentration <= 0) {
16 throw new Error("গণনা করা প্রোটিন ঘনত্ব ইতিবাচক হতে হবে");
17 }
18
19 return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// উদাহরণ ব্যবহার
23try {
24 const absorbance = 0.75;
25 const sampleMass = 20; // μg
26 const slope = 2.0;
27 const intercept = 0;
28
29 const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30 const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31
32 console.log(`অ্যাবসর্বেন্স ${absorbance} এবং কাঙ্খিত প্রোটিন ভর ${sampleMass} μg এর জন্য:`);
33 console.log(`প্রোটিন ঘনত্ব: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34 console.log(`প্রয়োজনীয় নমুনা ভলিউম: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36 console.error(`ত্রুটি: ${error.message}`);
37}
38অ্যাবসর্বেন্স এবং প্রোটিন ঘনত্বের মধ্যে সম্পর্ক সাধারণত একটি নির্দিষ্ট পরিসরের মধ্যে লিনিয়ার। নিচে একটি স্ট্যান্ডার্ড BCA কার্ভের ভিজ্যুয়ালাইজেশন দেওয়া হল:
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>
বিভিন্ন প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণের পদ্ধতির বিভিন্ন সুবিধা এবং সীমাবদ্ধতা রয়েছে। এখানে BCA অ্যাসায় অন্যান্য সাধারণ পদ্ধতির সাথে কীভাবে তুলনা করা হয়:
| পদ্ধতি | সংবেদনশীলতা পরিসর | সুবিধা | সীমাবদ্ধতা | সেরা জন্য |
|---|---|---|---|---|
| BCA অ্যাসায় | 5-2000 μg/mL | • ডিটারজেন্টের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ • প্রোটিন-থেকে-প্রোটিন পরিবর্তনের কম • স্থিতিশীল রঙের উন্নয়ন | • হ্রাসকারী এজেন্ট দ্বারা হস্তক্ষেপ • কিছু চেলেটিং এজেন্ট দ্বারা প্রভাবিত | • সাধারণ প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণ • ডিটারজেন্ট ধারণকারী নমুনা |
| ব্র্যাডফোর্ড অ্যাসায় | 1-1500 μg/mL | • দ্রুত (2-5 মিনিট) • কিছু হস্তক্ষেপকারী পদার্থ | • উচ্চ প্রোটিন-থেকে-প্রোটিন পরিবর্তন • ডিটারজেন্টের সাথে অ-সামঞ্জস্যপূর্ণ | • দ্রুত পরিমাপ • ডিটারজেন্ট-মুক্ত নমুনা |
| লোরি পদ্ধতি | 1-1500 μg/mL | • সুপ্রতিষ্ঠিত • ভাল সংবেদনশীলতা | • অনেক হস্তক্ষেপকারী পদার্থ • একাধিক পদক্ষেপ | • ঐতিহাসিক সঙ্গতি • বিশুদ্ধ প্রোটিন নমুনা |
| UV অ্যাবসর্বেন্স (280 nm) | 20-3000 μg/mL | • অ-ধ্বংসাত্মক • খুব দ্রুত • কোন রিএজেন্টের প্রয়োজন নেই | • নিউক্লিক অ্যাসিড দ্বারা প্রভাবিত • বিশুদ্ধ নমুনার প্রয়োজন | • বিশুদ্ধ প্রোটিন সমাধান • শুদ্ধকরণের সময় দ্রুত পরীক্ষা |
| ফ্লুরোমেট্রিক | 0.1-500 μg/mL | • সর্বোচ্চ সংবেদনশীলতা • বিস্তৃত গতিশীল পরিসর | • ব্যয়বহুল রিএজেন্ট • ফ্লুরোমিটার প্রয়োজন | • খুব পাতলা নমুনা • সীমিত নমুনা ভলিউম |
BCA (বাইকিঞ্চোনিনিক অ্যাসিড) অ্যাসায় প্রধানত একটি নমুনায় প্রোটিনের মোট ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য ব্যবহৃত হয়। এটি জীববিজ্ঞান, কোষবিজ্ঞান এবং অণুজীববিজ্ঞান গবেষণায় ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় যেমন ওয়েস্টার্ন ব্লটিং, এনজাইম অ্যাসায়, ইমিউনোপ্রিসিপিটেশন এবং প্রোটিন শুদ্ধকরণ।
BCA অ্যাসায় সাধারণত সঠিকতার মধ্যে 5-10% এর মধ্যে থাকে যখন সঠিকভাবে সম্পন্ন হয়। এর সঠিকতা বেশ কয়েকটি বিষয়ের উপর নির্ভর করে যার মধ্যে স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের গুণমান, হস্তক্ষেপকারী পদার্থের অনুপস্থিতি এবং অজানা প্রোটিনের রচনার স্ট্যান্ডার্ড প্রোটিনের সাথে সাদৃশ্য অন্তর্ভুক্ত রয়েছে।
বিভিন্ন পদার্থ BCA অ্যাসায় ফলাফলে হস্তক্ষেপ করতে পারে, যার মধ্যে রয়েছে:
মূল পার্থক্য হল:
যদি আপনার ক্যালকুলেটর একটি খুব বড় নমুনা ভলিউম দেখায়, এটি সাধারণত আপনার নমুনায় প্রোটিনের ঘনত্ব কম নির্দেশ করে। এটি হতে পারে:
আপনার নমুনা ঘন করার কথা বিবেচনা করুন বা আপনার পরীক্ষার নকশাকে কম প্রোটিন ঘনত্ব মেনে চলার জন্য সামঞ্জস্য করুন।
যদিও এটি প্রযুক্তিগতভাবে সম্ভব, এটি সঠিক পরিমাণ নির্ধারণের জন্য সুপারিশ করা হয় না। রিএজেন্ট, ইনকিউবেশন শর্ত এবং যন্ত্রপাতির ক্যালিব্রেশনের মধ্যে পরিবর্তনগুলি অ্যাবসর্বেন্স এবং প্রোটিন ঘনত্বের মধ্যে সম্পর্ককে প্রভাবিত করতে পারে। নির্ভরযোগ্য ফলাফলের জন্য, প্রতি সময় অ্যাসায় সম্পন্ন করার সময় একটি নতুন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ তৈরি করুন।
BCA প্রতিক্রিয়ায় তৈরি বেগুনি রঙ ঘরোয়া তাপমাত্রায় কয়েক ঘন্টা স্থিতিশীল এবং সেই সময়ের মধ্যে যেকোন সময় পরিমাপ করা যেতে পারে। তবে, সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য, এটি সুপারিশ করা হয় যে সমস্ত স্ট্যান্ডার্ড এবং নমুনাগুলি রঙের উন্নয়নের পরে প্রায় একই সময়ে পরিমাপ করা হয়।
এই ক্যালকুলেটরটি বিশেষভাবে BCA অ্যাসায় ফলাফলের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। যদিও মৌলিক নীতি (ঘনত্বকে ভলিউমে রূপান্তর করা) অন্যান্য পদ্ধতির জন্য প্রযোজ্য, অ্যাবসর্বেন্স এবং প্রোটিন ঘনত্বের মধ্যে সম্পর্ক বিভিন্ন অ্যাসায়ের মধ্যে পরিবর্তিত হয়। ব্র্যাডফোর্ড বা লোরি এর মতো অন্যান্য পদ্ধতির জন্য, আপনাকে বিভিন্ন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ প্যারামিটারগুলি ব্যবহার করতে হবে।
লিনিয়ার পরিসরের বাইরে (সাধারণত >2.0) অ্যাবসর্বেন্স রিডিংয়ের জন্য:
বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (BSA) হল BCA অ্যাসায়ের জন্য সবচেয়ে সাধারণভাবে ব্যবহৃত স্ট্যান্ডার্ড কারণ এটি:
তবে, যদি আপনার নমুনাগুলিতে একটি প্রাধান্য প্রোটিন থাকে যা BSA থেকে উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন হয়, তবে আরও সঠিক ফলাফলের জন্য সেই প্রোটিনটি আপনার স্ট্যান্ডার্ড হিসাবে ব্যবহার করার কথা বিবেচনা করুন।
BCA প্রতিক্রিয়ায় তৈরি বেগুনি রঙ ঘরোয়া তাপমাত্রায় কয়েক ঘন্টা স্থিতিশীল এবং সেই সময়ের মধ্যে যেকোন সময় পরিমাপ করা যেতে পারে। তবে, সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য, এটি সুপারিশ করা হয় যে সমস্ত স্ট্যান্ডার্ড এবং নমুনাগুলি রঙের উন্নয়নের পরে প্রায় একই সময়ে পরিমাপ করা হয়।
যদিও এটি প্রযুক্তিগতভাবে সম্ভব, এটি সঠিক পরিমাণ নির্ধারণের জন্য সুপারিশ করা হয় না। রিএজেন্ট, ইনকিউবেশন শর্ত এবং যন্ত্রপাতির ক্যালিব্রেশনের মধ্যে পরিবর্তনগুলি অ্যাবসর্বেন্স এবং প্রোটিন ঘনত্বের মধ্যে সম্পর্ককে প্রভাবিত করতে পারে। নির্ভরযোগ্য ফলাফলের জন্য, প্রতি সময় অ্যাসায় সম্পন্ন করার সময় একটি নতুন স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ তৈরি করুন।
স্মিথ পিকে, ক্রোহন আরআই, হারম্যানসন জিটি, ইত্যাদি। "বাইকিঞ্চোনিনিক অ্যাসিড ব্যবহার করে প্রোটিন পরিমাপ।" অ্যানালিটিক্যাল বায়োকেমিস্ট্রি। 1985;150(1):76-85। doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
থার্মো সায়েন্টিফিক। "পিয়ার্স BCA প্রোটিন অ্যাসায় কিট।" নির্দেশিকা। উপলব্ধ: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
ওয়াকার জেএম। "বাইকিঞ্চোনিনিক অ্যাসিড (BCA) অ্যাসায় প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণের জন্য।" ইন: ওয়াকার জেএম, সম্পাদক। প্রোটিন প্রোটোকলস হ্যান্ডবুক। স্প্রিংগার; 2009:11-15। doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
অলসন বিজে, মার্কওয়েল জে। "প্রোটিন ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য পরীক্ষাগুলি।" কারেন্ট প্রোটোকলস ইন প্রোটিন সায়েন্স। 2007;অধ্যায় 3:ইউনিট 3.4। doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
নোবল জিই, বেইলি এমজে। "প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণ।" মেথডস ইন এনজাইমোলজি। 2009;463:73-95। doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1
এখন আপনি BCA প্রোটিন পরিমাণ নির্ধারণ এবং নমুনা ভলিউম গণনার পিছনের নীতিগুলি বোঝেন, আমাদের ক্যালকুলেটরটি ব্যবহার করে আপনার ল্যাবরেটরি কাজের প্রবাহকে সহজ করুন। আপনার অ্যাবসর্বেন্স রিডিং এবং কাঙ্খিত নমুনা ভর প্রবেশ করান এবং তাত্ক্ষণিক, সঠিক নমুনা ভলিউম গণনা পান।
আপনি যদি ওয়েস্টার্ন ব্লটিং, এনজাইম অ্যাসায়, অথবা যেকোনো অন্যান্য প্রোটিন-ভিত্তিক পরীক্ষার জন্য নমুনা প্রস্তুত করছেন, আমাদের ক্যালকুলেটর সঙ্গতিপূর্ণ এবং নির্ভরযোগ্য ফলাফল নিশ্চিত করতে সহায়তা করবে। সময় সাশ্রয় করুন, ত্রুটি কমান এবং আপনার পরীক্ষার পুনরাবৃত্তি উন্নত করুন BCA অ্যাবসর্বেন্স নমুনা ভলিউম ক্যালকুলেটরের মাধ্যমে।
আপনার কাজে দরকারী হতে পারে আরো টুল খুঁজে বের করুন