DNS Koncentráció Számító

Bevezetés

A DNS koncentráció számító egy alapvető eszköz molekuláris biológusok, genetikusok és laboratóriumi technikusok számára, akiknek pontosan meg kell határozniuk a DNS koncentrációját mintáikban. A DNS koncentráció mérése alapvető eljárás a molekuláris biológiai laboratóriumokban, amely kritikus minőségellenőrzési lépésként szolgál a PCR, szekvenálás, klónozás és egyéb molekuláris technikák folytatása előtt. Ez a számító spektrofotométeres elveket alkalmaz a DNS koncentrációjának kiszámítására az UV abszorbancia 260nm-nél (A260) alapján, alkalmazva a standard átváltási tényezőt és figyelembe véve az eredeti minta hígítását.

Felhasználóbarát számítónk leegyszerűsíti a koncentráció (ng/μL) és a DNS teljes mennyiségének meghatározását mintáiban, megszüntetve a manuális számítások szükségességét és csökkentve a matematikai hibák kockázatát. Legyen szó akár minták előkészítéséről a következő generációs szekvenáláshoz, plazmid előkészítések kvantálásáról vagy genomi DNS kivonási hozamok értékeléséről, ez az eszköz gyors és megbízható eredményeket nyújt a kutatási és diagnosztikai munkafolyamatok támogatására.

Hogyan számítják a DNS koncentrációt

Az Alapelv

A DNS koncentráció számítása a Beer-Lambert törvényen alapul, amely kimondja, hogy egy oldat abszorbanciája közvetlenül arányos az oldatban lévő elnyelő faj koncentrációjával és a fény útjának hosszával az oldaton keresztül. Kétláncú DNS esetén az 1,0-ás abszorbancia 260nm-nél (A260) egy 1cm-es útvonalhosszú kávéban körülbelül 50 ng/μL koncentrációnak felel meg.

A Képlet

A DNS koncentrációt a következő képlettel számítják:

$\text{DNS Koncentráció (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{Hígítási Tényező}$

Ahol:

• A260 az abszorbancia mérés 260nm-nél
• 50 a kétláncú DNS standard átváltási tényezője (50 ng/μL, ha A260 = 1.0)
• Hígítási Tényező az a tényező, amellyel az eredeti mintát hígították a méréshez

A minta teljes DNS mennyisége ezután a következőképpen számítható:

$\text{Teljes DNS (μg)} = \frac{\text{Koncentráció (ng/μL)} \times \text{Térfogat (μL)}}{1000}$

A Változók Megértése

1. Absorbancia 260nm-nél (A260):

   • Ez a mérés azt mutatja, hogy mennyi UV fényt nyel el a DNS minta 260nm-es hullámhosszon
   • A DNS nukleotidok (különösen a nitrogénbázisok) UV fényt nyelnek el, csúcsabszorbanciával 260nm-nél
   • Minél magasabb az abszorbancia, annál több DNS található az oldatban

2. Átváltási Tényező (50):

   • A 50 ng/μL standard átváltási tényező kifejezetten a kétláncú DNS-re vonatkozik
   • Egyláncú DNS esetén a tényező 33 ng/μL
   • RNS esetén a tényező 40 ng/μL
   • Oligonukleotidok esetén a tényező a szekvenciától függően változik

3. Hígítási Tényező:

   • Ha a mintát hígították a mérés előtt (pl. 1 rész minta 9 rész puffert = hígítási tényező 10)
   • Kiszámítva: (Minta Térfogata + Hígító Térfogata) ÷ Minta Térfogata
   • Azt használják, hogy meghatározzák a koncentrációt az eredeti, hígítatlan mintában

4. Térfogat:

   • A DNS oldat teljes térfogata mikroliterben (μL)
   • A minta teljes DNS mennyiségének kiszámításához használják

Hogyan Használjuk Ezt a Számítót

Kövesse ezeket a lépéseket a DNS koncentráció pontos meghatározásához:

1. Készítse El Mintáját:

   • Győződjön meg arról, hogy DNS mintája megfelelően feloldódott és keveredett
   • Ha a várható koncentráció magas, készítsen hígítást, hogy a mérés a lineáris tartományba essen (tipikusan A260 0.1 és 1.0 között)

2. Mérje Az Absorbanciát:

   • Használjon spektrofotométert vagy nanodrop eszközt az absorbancia mérésére 260nm-nél
   • Mérje meg az absorbanciát 280nm-nél is a tisztaság értékeléséhez (A260/A280 arány)
   • Használja azt a puffert, amelyet a DNS feloldására/hígítására használt, mint üres referenciát

3. Adja Meg Az Értékeket a Számítóban:

   • Írja be a mért A260 értéket az "Absorbancia 260nm-nél" mezőbe
   • Adja meg a DNS oldatának teljes térfogatát mikroliterben
   • Írja be a hígítási tényezőt (ha nem történt hígítás, használjon 1-et)

4. Értelmezze Az Eredményeket:

   • A számító megjeleníti a DNS koncentrációt ng/μL-ben
   • A minta teljes DNS mennyisége μg-ban fog megjelenni
   • Használja ezeket az értékeket a megfelelő térfogat meghatározásához a további alkalmazásokhoz

5. Értékelje A DNS Tisztaságát (ha mérték az A280-at):

   • A260/A280 arány ~1.8 a tiszta DNS-t jelzi
   • Az alacsonyabb arányok fehérje szennyeződést jelezhetnek
   • A magasabb arányok RNS szennyeződést jelezhetnek

Felhasználási Esetek

A DNS koncentráció mérése számos molekuláris biológiai és biotechnológiai alkalmazásban kulcsszerepet játszik:

Molekuláris Klónozás

A DNS fragmentumok vektorokba való ligálása előtt a pontos koncentráció ismerete lehetővé teszi a kutatók számára az optimális insert-vektor arány kiszámítását, maximalizálva a transzformációs hatékonyságot. Például a legjobb eredményeket gyakran egy 3:1 moláris arányú insert-vektor arány biztosítja, amelyhez pontos koncentrációs mérések szükségesek mindkét komponens esetében.

PCR és qPCR

A PCR reakciók tipikusan 1-10 ng template DNS-t igényelnek az optimális amplifikációhoz. Túl kevés DNS esetén amplifikálási hiba léphet fel, míg túl sok gátolhatja a reakciót. A kvantitatív PCR (qPCR) esetében még pontosabb DNS kvantifikáció szükséges a megbízható standard görbék és a megbízható kvantifikáció biztosítása érdekében.

Következő Generációs Szekvenálás (NGS)

Az NGS könyvtár előkészítési protokollok pontos DNS bemeneti mennyiségeket írnak elő, gyakran 1-500 ng között, a platformtól és az alkalmazástól függően. A pontos koncentráció mérés elengedhetetlen a sikeres könyvtár előkészítéshez és a minták kiegyensúlyozott képviseletéhez a multiplexelt szekvenálási futamok során.

Transzfekciós Kísérletek

DNS bejuttatásakor eukarióta sejtekbe az optimális DNS mennyiség a sejttípustól és a transzfekciós módszertől függ. Tipikusan 0.5-5 μg plazmid DNS-t használnak egy 6-well lemezen, amely pontos koncentrációs méréseket igényel a kísérletek standardizálásához.

Igazságügyi DNS Elemzés

Igazságügyi alkalmazásokban a DNS minták gyakran korlátozottak és értékesek. A pontos kvantifikáció lehetővé teszi az igazságügyi tudósok számára, hogy meghatározzák, elegendő DNS áll-e rendelkezésre profilozáshoz, és hogy standardizálják a következő elemzésekhez használt DNS mennyiségét.

Korlátozó Enzim Emuláció

A korlátozó enzimek specifikus aktivitási egységekkel rendelkeznek, amelyek μg DNS-re vonatkoznak. A pontos DNS koncentráció ismerete lehetővé teszi a megfelelő enzim-DNS arányok biztosítását, garantálva a teljes emulációt anélkül, hogy a star aktivitás (nem specifikus vágás) előfordulna.

Alternatívák a Spektrofotométeres Méréshez

Bár az UV spektrofotometria a legelterjedtebb módszer a DNS kvantifikálására, számos alternatíva létezik:

1. Fluorometrikus Módszerek:

   • Fluoreszcens festékek, mint a PicoGreen, Qubit és SYBR Green, kifejezetten a kétláncú DNS-hez kötődnek
   • Érzékenyebbek, mint a spektrofotometria (képesek akár 25 pg/mL-t is észlelni)
   • Kevésbé érintettek olyan szennyező anyagok által, mint a fehérjék, RNS vagy szabad nukleotidok
   • Fluorométert és specifikus reagenseket igényelnek

2. Agaróz Gél Elektromos Áramlás:

   • A DNS mennyisége összehasonlítással kvantálható a standardok intenzitásával
   • Egyidejűleg információt nyújt a DNS méretéről és integritásáról
   • Kevésbé pontos, mint a spektrofotometrikus vagy fluorometrikus módszerek
   • Időigényes, de hasznos a vizuális megerősítéshez

3. Valós Idejű PCR:

   • Nagyon érzékeny módszer a specifikus DNS szekvenciák kvantifikálására
   • Rendkívül alacsony koncentrációk (akár néhány másolat) észlelésére is képes
   • Specifikus primereket és összetettebb felszerelést igényel
   • Amikor szekvenciára specifikus kvantifikálás szükséges

4. Digitális PCR:

   • Abszolút kvantifikáció standard görbék nélkül
   • Rendkívül pontos alacsony bőségű célok esetén
   • Drága és speciális felszerelést igényel
   • Ritka mutációk és másolatszám-változások elemzésére használják

A DNS Koncentráció Mérés Története

A DNS koncentráció pontos mérésének képessége jelentősen fejlődött a molekuláris biológia fejlődésével:

Korai Módszerek (1950-es évek - 1960-as évek)

A DNS struktúrájának 1953-as felfedezése után Watson és Crick által a tudósok elkezdték kidolgozni a DNS izolálásának és kvantifikálásának módszereit. A korai megközelítések színreakciós teszteken alapultak, mint például a difenil-amin reakció, amely kék színt produkált, amikor a DNS deoxiribóz cukraival reagált. Ezek a módszerek viszonylag érzéketlenek voltak és hajlamosak voltak a zavarokra.

Spektrofotométeres Éra (1970-es évek)

Az UV spektrofotometria alkalmazása a nukleinsavak kvantifikálásában elterjedtté vált az 1970-es években. A tudósok felfedezték, hogy a DNS UV fényt nyel el 260nm-es maximummal, és hogy az abszorbancia és a koncentráció közötti kapcsolat lineáris egy bizonyos tartományon belül. A 50 ng/μL átváltási tényező az A260 = 1.0 esetén ebben az időszakban alakult ki.

Fluorometrikus Forradalom (1980-as évek - 1990-es évek)

A DNS-specifikus fluoreszcens festékek kifejlesztése az 1980-as és 1990-es években forradalmasította a DNS kvantifikációt, különösen a híg minták esetén. A Hoechst festékek és később a PicoGreen lehetővé tették a sokkal érzékenyebb észlelést, mint amit a spektrofotometria lehetővé tett. Ezek a módszerek különösen fontosak lettek a PCR megjelenésével, amely gyakran precíz kvantifikációt igényelt a kis mennyiségű DNS esetében.

Modern Éra (2000-es évek - Jelen)

A mikrovolumen spektrofotométerek, mint a NanoDrop bevezetése az 2000-es évek elején átalakította a rutin DNS kvantifikációt, mivel csak 0.5-2 μL mintát igényeltek. Ez a technológia megszüntette a hígítások és kávék szükségességét, gyorsabbá és kényelmesebbé téve a folyamatot.

Ma az olyan fejlett technikák, mint a digitális PCR és a következő generációs szekvenálás, még tovább tolták a DNS kvantifikáció határait, lehetővé téve a specifikus szekvenciák abszolút kvantifikációját és egyes molekulák észlelését. Azonban az alapvető spektrofotometrikus elv, amelyet évtizedekkel ezelőtt megállapítottak, továbbra is a rutin DNS koncentráció mérésének alapja a laboratóriumokban világszerte.

Gyakorlati Példák

Nézzük meg néhány gyakorlati példát a DNS koncentráció számítására:

Példa 1: Standard Plazmid Előkészítés

Egy kutató tisztított egy plazmidot, és a következő méréseket kapta:

• A260 olvasás: 0.75
• Hígítás: 1:10 (hígítási tényező = 10)
• DNS oldat térfogata: 50 μL

Számítás:

• Koncentráció = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• Teljes DNS = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

Példa 2: Genomi DNS Kivonás

A vérből kivont genomi DNS után:

• A260 olvasás: 0.15
• Nincs hígítás (hígítási tényező = 1)
• DNS oldat térfogata: 200 μL

Számítás:

• Koncentráció = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• Teljes DNS = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

Példa 3: DNS Előkészítése Szekvenáláshoz

Egy szekvenálási protokoll pontosan 500 ng DNS-t igényel:

• DNS koncentráció: 125 ng/μL
• Szükséges mennyiség: 500 ng

Szükséges térfogat = 500 ÷ 125 = 4 μL DNS oldatból

Kód Példák

Itt vannak példák arra, hogyan lehet kiszámítani a DNS koncentrációt különböző programozási nyelvekben:

1' Excel képlet DNS koncentrációhoz
2=A260*50*HígításiTényező
3
4' Excel képlet a teljes DNS mennyiséghez μg-ban
5=(A260*50*HígításiTényező*Térfogat)/1000
6
7' Példa egy cellában A260=0.5, HígításiTényező=2, Térfogat=100
8=0.5*50*2*100/1000
9' Eredmény: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    Számítsa ki a DNS koncentrációját ng/μL-ben
4    
5    Paraméterek:
6    absorbance (float): Absorbancia mérés 260nm-nél
7    dilution_factor (float): A minta hígítási tényezője
8    
9    Visszatér:
10    float: DNS koncentráció ng/μL-ben
11    """
12    return absorbance * 50 * dilution_factor
13
14def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
15    """
16    Számítsa ki a teljes DNS mennyiséget μg-ban
17    
18    Paraméterek:
19    concentration (float): DNS koncentráció ng/μL-ben
20    volume_ul (float): DNS oldat térfogata μL-ben
21    
22    Visszatér:
23    float: Teljes DNS mennyiség μg-ban
24    """
25    return (concentration * volume_ul) / 1000
26
27# Példa használat
28absorbance = 0.8
29dilution_factor = 5
30volume = 75
31
32concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
33total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
34
35print(f"DNS Koncentráció: {concentration:.2f} ng/μL")
36print(f"Teljes DNS: {total_dna:.2f} μg")
37

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // Visszaadja a DNS koncentrációt ng/μL-ben
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // Visszaadja a teljes DNS mennyiséget μg-ban
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// Példa használat
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`DNS Koncentráció: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`Teljes DNS: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * Számítsa ki a DNS koncentrációját ng/μL-ben
4     * 
5     * @param absorbance Absorbancia mérés 260nm-nél
6     * @param dilutionFactor A minta hígítási tényezője
7     * @return DNS koncentráció ng/μL-ben
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * Számítsa ki a teljes DNS mennyiséget μg-ban
15     * 
16     * @param concentration DNS koncentráció ng/μL-ben
17     * @param volumeUL DNS oldat térfogata μL-ben
18     * @return Teljes DNS mennyiség μg-ban
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("DNS Koncentráció: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("Teljes DNS: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# R funkció a DNS koncentráció számításához
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # Visszaadja a DNS koncentrációt ng/μL-ben
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # Visszaadja a teljes DNS mennyiséget μg-ban
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# Példa használat
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("DNS Koncentráció: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("Teljes DNS: %.2f μg\n", total_dna))
23

Gyakran Ismételt Kérdések

Mi a különbség a DNS koncentráció és a DNS tisztaság között?

DNS koncentráció arra utal, hogy mennyi DNS található egy oldatban, tipikusan ng/μL vagy μg/mL mértékegységben. Megmondja, mennyi DNS van, de nem jelzi annak minőségét. DNS tisztaság az Ön DNS mintájában lévő szennyeződések jelenlétét értékeli, amelyet általában abszorbancia arányokkal, például A260/A280 (fehérje szennyeződés) és A260/A230 (szerves vegyületek szennyeződés) mérnek. A tiszta DNS tipikusan ~1.8-as A260/A280 arányt mutat, és 2.0-2.2-es A260/A230 arányt.

Miért különböző az átváltási tényező a DNS, RNS és fehérjék esetében?

Az átváltási tényezők eltérnek, mert minden biomolekulának egyedi extinkciós együtthatója van (a fény elnyelésének képessége) a különböző kémiai összetétele miatt. A kétláncú DNS-nek 50 ng/μL átváltási tényezője van A260=1.0 esetén, míg az egyláncú DNS 33 ng/μL, az RNS 40 ng/μL, és a fehérjék (280nm-nél mérve) széles spektrumot mutatnak, de átlagosan 1 mg/mL A280=1.0 esetén. Ezek a különbségek a nukleotidok vagy aminosavak eltérő összetételéből és azok abszorbancia tulajdonságaiból adódnak.

Mennyire pontos a spektrofotométeres DNS kvantifikáció?

A spektrofotométeres DNS kvantifikáció általában pontos a lineáris tartományon belül (tipikusan A260 0.1 és 1.0 között), körülbelül ±3-5% pontossággal. Azonban a pontosság csökken a nagyon alacsony koncentrációknál (5 ng/μL alatt), és befolyásolhatják a szennyeződések, mint például fehérjék, RNS, szabad nukleotidok vagy bizonyos pufferek. Nagyon pontos mérésekhez híg minták esetén vagy amikor magas tisztaság szükséges, fluorometrikus módszerek, mint a Qubit vagy PicoGreen ajánlottak, mivel ezek specifikusabbak a kétláncú DNS-re.

Hogyan értelmezzem az A260/A280 arányt?

Az A260/A280 arány a DNS minta tisztaságát jelzi a fehérje szennyeződés szempontjából:

• Az ~1.8-as arány általában "tisztának" tekinthető DNS esetén
• Az alacsonyabb arányok fehérje szennyeződést jelezhetnek
• A magasabb arányok RNS szennyeződést jelezhetnek
• A megoldás pH-ja és ionerőssége szintén befolyásolhatja ezt az arányt

Bár hasznos minőségi ellenőrzésként, az A260/A280 arány nem garantálja a funkcionális DNS-t, mivel más szennyeződések vagy DNS degradáció nem befolyásolja ezt az arányt.

Mérhetem a DNS koncentrációt színes oldatokban?

A DNS koncentráció spektrofotometriás mérése színes oldatokban kihívást jelenthet, mivel a szín elnyelheti a 260nm-nél, zavarva a DNS mérést. Ilyen esetekben:

1. Végezzen el egy hullámhossz-ellenőrzést (220-320nm) az anomális abszorbancia minták ellenőrzésére
2. Használjon fluorometrikus módszert, mint a Qubit, amelyet kevésbé befolyásol a minta színe
3. Tisztítsa tovább a DNS-t a színes vegyületek eltávolítására
4. Alkalmazzon matematikai korrekciókat, ha a zavaró vegyület abszorbancia spektruma ismert

Mi a minimális térfogat a DNS koncentráció méréséhez?

A minimális térfogat az eszköztől függ:

• A hagyományos spektrofotométerek kávékkal általában 50-100 μL-t igényelnek
• A mikrovolumen spektrofotométerek, mint a NanoDrop, csak 0.5-2 μL-t igényelnek
• A fluorometrikus módszerek általában 1-20 μL mintát igényelnek a reagens térfogatával együtt
• A mikrolemez olvasók általában 100-200 μL-t használnak egy mélyedésben

A mikrovolumen spektrofotométerek forradalmasították a DNS kvantifikációt azáltal, hogy lehetővé tették az értékes minták méréseit minimális térfogatigényekkel.

Hogyan számítom ki a hígítási tényezőt?

A hígítási tényezőt a következőképpen számítják:

$\text{Hígítási Tényező} = \frac{\text{Teljes Térfogat (Minta + Hígító)}}{\text{Minta Térfogata}}$

Például:

• Ha 1 μL DNS-t ad hozzá 99 μL pufferhez, a hígítási tényező 100
• Ha 5 μL DNS-t ad hozzá 45 μL pufferhez, a hígítási tényező 10
• Ha hígítatlan DNS-t használ, a hígítási tényező 1

Mindig használja ugyanazt a puffert a hígításhoz, mint amit a spektrofotométer üres referenciájaként használt.

Hogyan konvertálhatók a különböző koncentrációs egységek között?

A DNS koncentráció egységkonverziói:

• 1 ng/μL = 1 μg/mL
• 1 μg/mL = 0.001 mg/mL
• 1 ng/μL = 1000 pg/μL
• 1 μM egy 1000 bp DNS fragmentum ≈ 660 ng/μL

A tömegbeli koncentráció (ng/μL) és a moláris koncentráció (nM) közötti konvertáláshoz DNS fragmentum esetén:

$\text{Koncentráció (nM)} = \frac{\text{Koncentráció (ng/μL)} \times 10^6}{\text{DNS hossz (bp)} \times 660}$

Mi okozhat pontatlan DNS koncentrációs méréseket?

Számos tényező vezethet pontatlan DNS koncentrációs mérésekhez:

1. Szennyeződés: Fehérjék, fenol, guanidin vagy más extrakciós reagens befolyásolhatja az abszorbanciát
2. Buborékok: A fényútban lévő levegőbuborékok hibás olvasásokat okozhatnak
3. DNS degradáció: A fragmentált DNS megváltoztathatja az abszorbancia tulajdonságait
4. Nem megfelelő üres referenciák: Ha a DNS feloldásához használt puffert másként használják üres referenciaként
5. Nem homogén oldat: Rosszul kevert DNS oldatok következetlen olvasásokat adhatnak
6. Eszköz kalibrálása: Kalibrálatlan vagy piszkos spektrofotométerek megbízhatatlan eredményeket produkálnak
7. Mérések a lineáris tartományon kívül: Nagyon magas vagy nagyon alacsony abszorbancia értékek nem lehetnek pontosak

Használhatom ezt a számítót RNS koncentrációra is?

Bár ez a számító a kétláncú DNS-re van optimalizálva (a 50 ng/μL átváltási tényezőt használva), alkalmazhatja RNS-re is az alábbi módon:

1. Mérje meg az A260-at a szokásos módon
2. Szorozza meg 40-nel a 50 helyett (az RNS-specifikus átváltási tényező)
3. Alkalmazza a megfelelő hígítási tényezőt

Az RNS képlete a következő lenne: $\text{RNS Koncentráció (ng/μL)} = A_{260} \times 40 \times \text{Hígítási Tényező}$

Hivatkozások

1. Gallagher, S. R., & Desjardins, P. R. (2006). Nukleinsavak abszorbancia és fluoreszcencia spektroszkópiával történő kvantifikálása. Current Protocols in Molecular Biology, 76(1), A-3D.

2. Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molekuláris klónozás: laboratóriumi kézikönyv (3. kiadás). Cold Spring Harbor Laboratory Press.

3. Manchester, K. L. (1995). Az A260/A280 arányok értéke a nukleinsavak tisztaságának ellenőrzésében. BioTechniques, 19(2), 208-210.

4. Wilfinger, W. W., Mackey, K., & Chomczynski, P. (1997). A pH és az ionerősség hatása a nukleinsav abszorbancia tisztaságának értékelésére. BioTechniques, 22(3), 474-481.

5. Desjardins, P., & Conklin, D. (2010). NanoDrop mikrovolumen kvantifikálása nukleinsavak esetén. Journal of Visualized Experiments, (45), e2565.

6. Nakayama, Y., Yamaguchi, H., Einaga, N., & Esumi, M. (2016). A DNS-kvantifikálás csapdái DNS-kötő fluoreszcens festékek használatakor és javasolt megoldások. PLOS ONE, 11(3), e0150528.

7. Thermo Fisher Scientific. (2010). Nukleinsav tisztaságának értékelése. T042-Technikai Tájékoztató.

8. Huberman, J. A. (1995). A nukleinsavak 240 nm-nél történő abszorbancia mérésének fontossága a 260 és 280 nm-nél. BioTechniques, 18(4), 636.

9. Warburg, O., & Christian, W. (1942). Az enoláz izolálása és kristályosítása. Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.

10. Glasel, J. A. (1995). A nukleinsav tisztaságának monitorozásának érvényessége a 260nm/280nm abszorbancia arányok segítségével. BioTechniques, 18(1), 62-63.

Készen áll a DNS koncentráció kiszámítására? Használja a fenti számítót, hogy azonnal pontos eredményeket kapjon. Egyszerűen adja meg az absorbancia olvasását, a térfogatot és a hígítási tényezőt, hogy meghatározza a minta DNS koncentrációját és teljes mennyiségét.