ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್

ಪರಿಚಯ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಎಂಬುದು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಬಯೋಲಾಜಿಸ್ಟ್‌ಗಳು, ಜೆನೆಟಿಸ್ಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ತಂತ್ರಜ್ಞರು ತಮ್ಮ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಪ್ರಮುಖ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ. ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮಾಪನವು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಬಯೋಲಾಜಿ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಮೂಲಭೂತ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ, ಪಿಸಿಆರ್, ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆ, ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು ಹಂತದ ಮುನ್ನದ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧ ಗುಣಮಟ್ಟದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಹಂತವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ 260nm (A260) ನಲ್ಲಿ ಯುವಿ ಶೋಷಣೆಯ ಆಧಾರದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೂಲ ಮಾದರಿಯ ಯಾವುದೇ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯನ್ನು ಗಮನದಲ್ಲಿಟ್ಟುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ನಮ್ಮ ಬಳಕೆದಾರ ಸ್ನೇಹಿ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL) ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸರಳಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಕೈಗೊಳ್ಳುವ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆ ಮತ್ತು ಗಣಿತದ ತಪ್ಪುಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ನೀವು ಮುಂದಿನ ತಲೆಮಾರಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆ ಮಾಡಲು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸುತ್ತಿದ್ದೀರಾ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ತಯಾರಣೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುತ್ತಿದ್ದೀರಾ ಅಥವಾ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ನಿರ್ಗಮನವನ್ನು ಅಂದಾಜಿಸುತ್ತಿದ್ದೀರಾ, ಈ ಸಾಧನವು ನಿಮ್ಮ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ಧಾರಾತ್ಮಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಬೆಂಬಲ ನೀಡಲು ತ್ವರಿತ ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಹೇಗೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ

ಮೂಲ ತತ್ವ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವಿಕೆ ಬೀರ್-ಲ್ಯಾಂಬರ್ಟ್ ಕಾನೂನಿನ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ, ಇದು ಒಂದು ದ್ರಾವಣದ ಶೋಷಣೆ ಬೆಳಕು ಮೂಲಕ ದ್ರಾವಣದ ಮೂಲಕ ಸಾಗುವ ದಾರಿಯ ಉದ್ದಕ್ಕೆ ಮತ್ತು ಶೋಷಣೆಯ ಶ್ರೇಣಿಗೆ ನೇರವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ ಎಂದು ಹೇಳುತ್ತದೆ. ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ, 1.0 ರ ಶೋಷಣೆಯ 260nm (A260) ನಲ್ಲಿ 1cm ದಾರಿ ಉದ್ದದ ಕುವೆಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 50 ng/μL ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಸೂತ್ರ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ:

$\text{ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ}$

ಅಲ್ಲಿ:

• A260 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯ ಓದು
• 50 ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶ (A260 = 1.0 ಗೆ 50 ng/μL)
• ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ ಮಾದರಿಯ ಮೂಲ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು

ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಂತರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಬಹುದು:

$\text{ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ (μg)} = \frac{\text{ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL)} \times \text{ಆಯತ (μL)}}{1000}$

ಚರಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು

1. 260nm (A260) ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆ:

   • ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಯಿಂದ ಯುವಿ ಬೆಳಕಿನ 260nm ಅಲೆ ಉದ್ದದಲ್ಲಿ ಎಷ್ಟು ಶೋಷಣೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ
   • ಡಿಎನ್‌ಎ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು (ವಿಶೇಷವಾಗಿ ನೈಟ್ರೋಜನ್ ಆಧಾರಗಳು) 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯ ಶ್ರೇಣಿಯ ಶ್ರೇಣಿಯಲ್ಲಿರುವ ಯುವಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಶೋಷಿಸುತ್ತವೆ
   • ಶೋಷಣೆ ಹೆಚ್ಚು ಇದ್ದರೆ, ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದೆ

2. ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶ (50):

   • 50 ng/μL ನ ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶವು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ
   • ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ, ಅಂಶ 33 ng/μL
   • ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಾಗಿ, ಅಂಶ 40 ng/μL
   • ಓಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ, ಅಂಶವು ಕ್ರಮವನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ

3. ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ:

   • ಮಾದರಿ ಅಳೆಯುವ ಮೊದಲು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆಯಾದರೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 1 ಭಾಗ ಮಾದರಿ 9 ಭಾಗ ಬಫರ್ = ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ 10)
   • ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವುದು: (ಮಾದರಿಯ ಆಯತ + ದ್ರಾವಕದ ಆಯತ) ÷ ಮಾದರಿಯ ಆಯತ
   • ಮೂಲ, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳ್ಳದ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ

4. ಆಯತ:

   • ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ ಒಟ್ಟು ಆಯತ ಮೈಕ್ರೋಲಿಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (μL)
   • ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ

ಈ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಬಳಸುವುದು

ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಈ ಹಂತಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ:

1. ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ:

   • ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿ ಸರಿಯಾಗಿ ಕರಗಿದ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಿತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ
   • ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಹೆಚ್ಚು ಇದ್ದರೆ, ಓದುವಿಕೆ ರೇಖೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯೊಳಗೆ ಬರುವಂತೆ ಮಾಡಲು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳಿಸುವುದನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ A260 0.1 ಮತ್ತು 1.0 ನಡುವಿನ)

2. ಶೋಷಣೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ:

   • 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟರ್ ಅಥವಾ ನಾನ್‌ಡ್ರಾಪ್ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಿರಿ
   • ಶುದ್ಧತೆ (A260/A280 ಅನುಪಾತ) ಅನ್ನು ಅಂದಾಜಿಸಲು 280nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯನ್ನು ಕೂಡ ಅಳೆಯಿರಿ
   • ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಕರಗಿಸಲು/ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳಿಸಲು ಬಳಸಿದ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಖಾಲಿ ಉಲ್ಲೇಖವಾಗಿ ಬಳಸಿರಿ

3. ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಂಶಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ:

   • "260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆ" ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲ್ಪಟ್ಟ A260 ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ
   • ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ ಒಟ್ಟು ಆಯತವನ್ನು ಮೈಕ್ರೋಲಿಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ನಮೂದಿಸಿ
   • ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ (ಯಾವುದೇ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆ ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ 1 ಅನ್ನು ಬಳಸಿರಿ)

4. ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಿ:

   • ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ng/μL ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ
   • ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವು μg ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ
   • ಹಂತದ ಮುಂದಿನ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಸೂಕ್ತ ಆಯತವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಈ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿರಿ

5. ಡಿಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಅಂದಾಜಿಸಿ (ಯಾವುದೇ A280 ಅಳೆಯಲ್ಪಟ್ಟರೆ):

   • ~1.8 A260/A280 ಅನುಪಾತವು ಶುದ್ಧ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ
   • ಕಡಿಮೆ ಅನುಪಾತಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ
   • ಹೆಚ್ಚು ಅನುಪಾತಗಳು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ

ಬಳಕೆದಾರ ಪ್ರಕರಣಗಳು

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮಾಪನವು ಹಲವಾರು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಬಯೋಲಾಜಿ ಮತ್ತು ಬಯೋತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ:

ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್

ಡಿಎನ್‌ಎ ಭಾಗಗಳನ್ನು ವೆಕ್ಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಲೈಗೇಟಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯನ್ನು ತಿಳಿಯುವುದು ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಉತ್ತಮ ಇನ್ಸರ್ಟ್-ಟು-ವೆಕ್ಟರ್ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಪರಿವರ್ತನೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಇನ್ಸರ್ಟ್ ಮತ್ತು ವೆಕ್ಟರ್‌ಗಳ 3:1 ಮೋಲರ್ ಅನುಪಾತವು ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಎರಡೂ ಘಟಕಗಳ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಶುದ್ಧ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧಾರಗೊಳಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಉತ್ತಮ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ 1-10 ng ಮಾದರಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಕಡಿಮೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದ್ದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವಿಫಲವಾಗಬಹುದು, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚು ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದ್ದರೆ, ಅದು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರೋಧಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪಿಸಿಆರ್ (qPCR) ಗೆ, ಇನ್ನಷ್ಟು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಇದು ಖಚಿತವಾದ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರಗಳು ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು.

ಮುಂದಿನ ತಲೆಮಾರಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆ (ಎನ್‌ಜಿಎಸ್)

ಎನ್‌ಜಿಎಸ್ ಲೈಬ್ರರಿ ತಯಾರಣೆ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಡಿಎನ್‌ಎ ಇನ್ಪುಟ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 1-500 ng ವರೆಗೆ, ವೇದಿಕೆ ಮತ್ತು ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಆಧಾರಿತವಾಗಿದೆ. ಯಶಸ್ವಿ ಲೈಬ್ರರಿ ತಯಾರಣೆ ಮತ್ತು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆ ಓಟಗಳಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಗಳ ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸಮಾನವಾಗಿ ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಲು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಶುದ್ಧ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುವುದು ಅತ್ಯಂತ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.

ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳು

ಯೂಕ್ಯಾರಿಯೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುವಾಗ, ಉತ್ತಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವು ಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರ ಮತ್ತು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ವೆಲ್ಲಿಗೆ 0.5-5 μg ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮಾನದಂಡಗೊಳಿಸಲು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಶುದ್ಧ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧಾರಗೊಳಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಫಾರೆನ್ಸಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ

ಫಾರೆನ್ಸಿಕ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸೀಮಿತ ಮತ್ತು ಅಮೂಲ್ಯವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುವುದು ಫಾರೆನ್ಸಿಕ್ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಿಗೆ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ ಸಾಕಷ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದ್ದರೆ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಮಾನದಂಡಗೊಳಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ನಿರ್ಬಂಧಕ ಎನ್ಜೈಮ್ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ

ನಿರ್ಬಂಧಕ ಎನ್ಜೈಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರತಿ μg ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಘಟಕಗಳಿವೆ. ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಶುದ್ಧ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತಿಳಿಯುವುದು ಸೂಕ್ತ ಎನ್ಜೈಮ್-ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನುಪಾತಗಳನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು, ಸಂಪೂರ್ಣ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಸ್ಟಾರ್ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು (ಅನಿಯಮಿತ ಕತ್ತರಿಸುವಿಕೆ) ತಪ್ಪಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಮಾಪನದ ಪರ್ಯಾಯಗಳು

ಯುವಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನವಾಗಿದ್ದರೂ, ಹಲವು ಪರ್ಯಾಯಗಳು ಇವೆ:

1. ಫ್ಲುೊರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳು:

   • ಪಿಕೋಗ್ರೀನ್, ಕ್ಯೂಬಿಟ್ ಮತ್ತು ಎಸ್‌ವಿಐಬಿಆರ್ ಗ್ರೀನ್ಂತಹ ಫ್ಲುೋರೆಸೆಂಟ್ ಡೈಗಳು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ
   • ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಯಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧವಾಗಿದೆ (25 pg/mL ವರೆಗೆ ಶೋಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯ)
   • ಪ್ರೋಟೀನ್, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಥವಾ ಮುಕ್ತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳಂತಹ ಮಾಲಿನ್ಯಗಳಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮಿತವಾಗಿದೆ
   • ಫ್ಲುೊರೋಮೀಟರ್ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ

2. ಆಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್:

   • ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಶ್ರೇಣಿಯೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬಹುದು
   • ಡಿಎನ್‌ಎ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಅಖಂಡತೆಯ ಬಗ್ಗೆ ಮಾಹಿತಿ ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ
   • ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಅಥವಾ ಫ್ಲುೊರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧವಾಗಿದೆ
   • ದೃಶ್ಯ ದೃಢೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತ ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚು ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ

3. ರಿಯಲ್-ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್:

   • ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಅತ್ಯಂತ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧವಾದ ವಿಧಾನ
   • ಅತ್ಯಂತ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣಗಳನ್ನು (ಕೆಲವು ನಕಲುಗಳಿಗೆ) ಶೋಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯ
   • ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ
   • ಕ್ರಮ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಅಗತ್ಯವಿರುವಾಗ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

4. ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್:

   • ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರಗಳನ್ನು ಇಲ್ಲದೆ ನಿರ್ಧಾರಾತ್ಮಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ
   • ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯ
   • ದುಬಾರಿ ಮತ್ತು ವಿಶೇಷ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ
   • ಅಪರೂಪದ ಪರಿವರ್ತನೆ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ನಕಲ ಸಂಖ್ಯೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮಾಪನದ ಇತಿಹಾಸ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧವಾಗಿ ಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಬಯೋಲಾಜಿಯ ಮುಂದುವರಿಯುವಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಹಳಷ್ಟು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಾಗಿರುತ್ತದೆ:

ಪ್ರಾರಂಭದ ವಿಧಾನಗಳು (1950-1960)

1953 ರಲ್ಲಿ ವಾಟ್ಸನ್ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಕ್ ಅವರಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ರಚನೆಯ ಪತ್ತೆಯ ನಂತರ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದರು. ಪ್ರಾರಂಭದ ವಿಧಾನಗಳು ಡಿಪ್ಫೆನೈಲ್ಎಮೈನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಂತಹ ಬಣ್ಣದ ಅಸೆಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದ್ದು, ಡಿಎನ್‌ಎ ಯಲ್ಲಿ ಡಿಯೋಕ್ಸಿರೈಬೋಸ್ ಸಕ್ಕರೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸುವಾಗ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ. ಈ ವಿಧಾನಗಳು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಅಸ್ಪಷ್ಟ ಮತ್ತು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಕ್ಕೆ ಒಳಪಟ್ಟವು.

ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಯುಗ (1970)

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಯುವಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಯ ಬಳಸುವಿಕೆ 1970 ರಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ವ್ಯಾಪಾರೀಕರಾಯಿತು. ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು 260nm ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಯು ಯುವಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಶೋಷಿಸುತ್ತಿದೆ ಮತ್ತು ಶೋಷಣೆ ಮತ್ತು ಶ್ರೇಣಿಯ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಶ್ರೇಣಿಯೊಳಗೆ ರೇಖೀಯವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು. A260 = 1.0 ನಲ್ಲಿ 50 ng/μL ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶವು ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಾಪಿತವಾಗಿತ್ತು.

ಫ್ಲುೊರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕ್ರಾಂತಿ (1980-1990)

1980 ಮತ್ತು 1990 ರಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ-ವಿಶೇಷ ಫ್ಲುೋರೆಸೆಂಟ್ ಡೈಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಕ್ರಾಂತಿಕಾರಿಯಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳಿಸಿತು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧ ಮಾದರಿಗಳಿಗಾಗಿ. ಹೋಚೆಸ್ಟ್ ಡೈಗಳು ಮತ್ತು ನಂತರ ಪಿಕೋಗ್ರೀನ್ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧ ಮಾಪನಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯನ್ನು ಶೋಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಉದ್ಭವದೊಂದಿಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಮುಖ್ಯವಾದವು, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಲ್ಪ ಪ್ರಮಾಣದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಆಧುನಿಕ ಯುಗ (2000-ಪ್ರಸ್ತುತ)

2000 ರ ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ನಾನೋಡ್ರಾಪ್‌ನಂತಹ ಮೈಕ್ರೋವಾಲ್ಯೂಮ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ಗಳ ಪರಿಚಯವು 0.5-2 μL ಮಾದರಿಯ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ರೂಪಾಂತರಗೊಳಿಸಿತು. ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಕುವೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆ, ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ವೇಗವಾಗಿ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಇಂದು, ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ತಲೆಮಾರಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆ (ಎನ್‌ಜಿಎಸ್)ಂತಹ ಉನ್ನತ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಇನ್ನಷ್ಟು ಮುಂದುವರಿಸುತ್ತವೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕ್ರಮಗಳ ಮತ್ತು ಏಕಕೋಶದ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ನಿರ್ಧಾರಾತ್ಮಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತವೆ. ಆದರೆ, ದಶಕಗಳ ಹಿಂದೆ ಸ್ಥಾಪಿತವಾದ ಮೂಲ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ತತ್ವವು ವಿಶ್ವಾದ್ಯಾಂತ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮಾಪನದ ಹೃದಯವಾಗಿದೆ.

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಉದಾಹರಣೆಗಳು

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವಿಕೆಗಳ ಕೆಲವು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಉದಾಹರಣೆಗಳನ್ನು ನೋಡೋಣ:

ಉದಾಹರಣೆ 1: ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ತಯಾರಣೆ

ಒಬ್ಬ ಸಂಶೋಧಕವು ಶುದ್ಧೀಕೃತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ಈ ಕೆಳಗಿನ ಅಳೆಯುವಿಕೆಗಳನ್ನು ಪಡೆದಿದ್ದಾರೆ:

• A260 ಓದು: 0.75
• ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆ: 1:10 (ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ = 10)
• ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ ಆಯತ: 50 μL

ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವುದು:

• ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

ಉದಾಹರಣೆ 2: ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ನಿರ್ಗಮನ

ರಕ್ತದಿಂದ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎವನ್ನು ನಿರ್ಗಮಿಸಿದ ನಂತರ:

• A260 ಓದು: 0.15
• ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆ ಇಲ್ಲ (ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ = 1)
• ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ ಆಯತ: 200 μL

ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವುದು:

• ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

ಉದಾಹರಣೆ 3: ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆಗಾಗಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ತಯಾರಿಸುತ್ತಿರುವುದು

ಅನುಕ್ರಮಣಿಕೆ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ 500 ng ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಖಚಿತವಾಗಿ ಅಗತ್ಯವಿದೆ:

• ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್: 125 ng/μL
• ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಪ್ರಮಾಣ: 500 ng

ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಆಯತ = 500 ÷ 125 = 4 μL ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ

ಕೋಡ್ ಉದಾಹರಣೆಗಳು

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ವಿವಿಧ ಪ್ರೋಗ್ರಾಮಿಂಗ್ ಭಾಷೆಗಳಲ್ಲಿ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವಿಕೆಗಳ ಉದಾಹರಣೆಗಳು ಇಲ್ಲಿವೆ:

1' ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್‌ಗಾಗಿ ಎಕ್ಸೆಲ್ ಸೂತ್ರ
2=A260*50*ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ
3
4' μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣದ ಎಕ್ಸೆಲ್ ಸೂತ್ರ
5=(A260*50*ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ*ಆಯತ)/1000
6
7' A260=0.5, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ=2, ಆಯತ=100 ಇರುವ ಕೋಶದಲ್ಲಿ ಉದಾಹರಣೆ
8=0.5*50*2*100/1000
9' ಫಲಿತಾಂಶ: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ng/μL ನಲ್ಲಿ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ
4    
5    ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ಗಳು:
6    absorbance (float): 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯ ಓದು
7    
8    ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ:
9    float: ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್
10    """
11    return absorbance * 50 * dilution_factor
12
13def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
14    """
15    μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ
16    
17    ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ಗಳು:
18    concentration (float): ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್
19    volume_ul (float): ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ ಆಯತ μL ನಲ್ಲಿ
20    
21    ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ:
22    float: μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣ
23    """
24    return (concentration * volume_ul) / 1000
25
26# ಉದಾಹರಣೆ ಬಳಕೆ
27absorbance = 0.8
28dilution_factor = 5
29volume = 75
30
31concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
32total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
33
34print(f"ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್: {concentration:.2f} ng/μL")
35print(f"ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ: {total_dna:.2f} μg")
36

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// ಉದಾಹರಣೆ ಬಳಕೆ
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ
4     * 
5     * @param absorbance 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯ ಓದು
6     * @param dilutionFactor ಮಾದರಿಯ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ
7     * @return ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ
15     * 
16     * @param concentration ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್
17     * @param volumeUL ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣದ ಆಯತ μL ನಲ್ಲಿ
18     * @return μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣ
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವಿಕೆಗಾಗಿ R ಕಾರ್ಯ
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# ಉದಾಹರಣೆ ಬಳಕೆ
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ: %.2f μg\n", total_dna))
23

ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕೇಳುವ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧತೆಯಲ್ಲಿ ಏನು ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿದೆ?

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಎಂದರೆ ಒಂದು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇರುವ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ng/μL ಅಥವಾ μg/mL ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ನಿಮಗೆ ಎಷ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತಿಳಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಅದರ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಸೂಚಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಡಿಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧತೆ ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಮಾಲಿನ್ಯಗಳ ಹಾಜರಾತಿಯನ್ನು ಅಂದಾಜಿಸುತ್ತದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ A260/A280 (ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯಕ್ಕಾಗಿ) ಮತ್ತು A260/A230 (ಆರ್ಗಾನಿಕ್ ಸಂಯೋಜನೆ ಮಾಲಿನ್ಯಕ್ಕಾಗಿ) ಶೋಷಣೆಯ ಅನುಪಾತಗಳ ಮೂಲಕ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಶುದ್ಧ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ~1.8 A260/A280 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು A260/A230 ಅನುಪಾತವು 2.0-2.2.

ಡಿಎನ್‌ಎ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳಿಗಾಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿರುವುದೇ?

ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿರುವುದಕ್ಕೆ ಕಾರಣವೆಂದರೆ ಪ್ರತಿ ಜೀವಕೋಶವು ತನ್ನದೇ ಆದ ವಿಭಿನ್ನ ಶೋಷಣಾ коэффициентವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (ಬೆಳಕನ್ನು ಶೋಷಿಸಲು ಸಾಮರ್ಥ್ಯ) ಮತ್ತು ಇದು ಅವರ ವಿಭಿನ್ನ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಯೋಜನೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ A260=1.0 ನಲ್ಲಿ 50 ng/μL ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ 33 ng/μL, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ 40 ng/μL, ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (280nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲ್ಪಟ್ಟ) ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬದಲಾಗುತ್ತವೆ ಆದರೆ A280=1.0 ನಲ್ಲಿ 1 mg/mL ಸುತ್ತಲೂ ಸರಾಸರಿ. ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳ ಅಥವಾ ಅಮಿನೋ ಆಮ್ಲಗಳ ವಿಭಿನ್ನ ಸಂಯೋಜನೆಗಳು ಮತ್ತು ಅವರ ಶೋಷಣಾ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತವೆ.

ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವು ಎಷ್ಟು ಶುದ್ಧ?

ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಶ್ರೇಣೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯೊಳಗೆ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ A260 0.1 ಮತ್ತು 1.0) ಶುದ್ಧವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಸುಮಾರು ±3-5% ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಆದರೆ, 5 ng/μL ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಶುದ್ಧತೆ ಕಡಿಮೆ ಆಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ಮುಕ್ತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಕೆಲವು ಬಫರ್‌ಗಳು ಹಾನಿಯುಂಟುಮಾಡಬಹುದು. ಹೆಚ್ಚು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದ್ದಾಗ ಅಥವಾ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಶುದ್ಧತೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವಾಗ, Qubit ಅಥವಾ PicoGreenಂತಹ ಫ್ಲುೊರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅವು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಿತವಾಗಿವೆ.

A260/A280 ಅನುಪಾತವನ್ನು ನಾನು ಹೇಗೆ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು?

A260/A280 ಅನುಪಾತವು ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಯ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ:

• ~1.8 ಅನುಪಾತವು ಡಿಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಒಪ್ಪಿಗೆಯಾಗಿದೆ
• 1.8 ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಅನುಪಾತಗಳು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ
• 2.0 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅನುಪಾತಗಳು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ
• ದ್ರಾವಣದ pH ಮತ್ತು ಐಯಾನಿಕ್ ಶಕ್ತಿ ಈ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಕೂಡ ಪರಿಣಾಮಿತಗೊಳಿಸಬಹುದು

ಈದು ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪರಿಶೀಲನೆಯಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದ್ದರೂ, A260/A280 ಅನುಪಾತವು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣಾ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ ಇತರ ಮಾಲಿನ್ಯಗಳು ಅಥವಾ ಡಿಎನ್‌ಎ ಹಾನಿಯು ಈ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಿತಗೊಳಿಸದಿರಬಹುದು.

ನಾನು ಬಣ್ಣದ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಅಳೆಯಬಹುದೇ?

ಬಣ್ಣದ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿ ಬಳಸಿ ಅಳೆಯುವುದು ಕಷ್ಟಕರವಾಗಬಹುದು ಏಕೆಂದರೆ ಬಣ್ಣವು 260nm ನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಅದರ ಹತ್ತಿರ ಶೋಷಣೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾಪನವನ್ನು ಹಾನಿಯುಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ:

1. ಅಸಾಧಾರಣ ಶೋಷಣಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು (220-320nm) ಅಲೆ ಉದ್ದವನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಿ
2. ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಿತವಾಗಿರುವ ಫ್ಲುೊರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿರಿ
3. ಬಣ್ಣದ ಸಂಯೋಜನೆಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಶುದ್ಧಗೊಳಿಸಿ
4. ಹಾನಿಯುಂಟುಮಾಡುವ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಶೋಷಣಾ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರಮ್ ತಿಳಿದಿದ್ದರೆ ಗಣಿತೀಯ ತಿದ್ದುಪಡಿ ಅನ್ವಯಿಸಿ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕನಿಷ್ಠ ಆಯತ ಎಷ್ಟು?

ಕನಿಷ್ಠ ಆಯತ ಸಾಧನವನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ:

• ಪರಂಪರागत ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ಗಳು ಕುವೆಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 50-100 μL ಅಗತ್ಯವಿದೆ
• ಮೈಕ್ರೋ-ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ಗಳು, ನಾನೋಡ್ರಾಪ್, ಕೇವಲ 0.5-2 μL ಅಗತ್ಯವಿದೆ
• ಫ್ಲುೊರೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 1-20 μL ಮಾದರಿ ಮತ್ತು ರಾಸಾಯನಿಕ ಆಯತವನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ
• ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ಓದುಗರಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 100-200 μL ಪ್ರತಿ ವೆಲ್ಲಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

ಮೈಕ್ರೋ-ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ಗಳು ಅಮೂಲ್ಯ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಆಯತದ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ.

ನಾನು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ಹೇಗೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಬಹುದು?

ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಬಹುದು:

$\text{ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ} = \frac{\text{ಒಟ್ಟು ಆಯತ (ಮಾದರಿ + ದ್ರಾವಕ)}}{\text{ಮಾದರಿ ಆಯತ}}$

ಉದಾಹರಣೆಗೆ:

• ನೀವು 1 μL ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು 99 μL ಬಫರ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ 100
• ನೀವು 5 μL ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು 45 μL ಬಫರ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸುತ್ತಿದ್ದರೆ, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ 10
• ನೀವು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳ್ಳದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬಳಸಿದರೆ, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ 1

ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವಾಗ, ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನ್ನು ಖಾಲಿ ಮಾಡಲು ಬಳಸಿದ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿರಿ.

ನಾನು ವಿಭಿನ್ನ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಯೂನಿಟ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಪರಿವರ್ತನೆಗಳನ್ನು ಹೇಗೆ ಮಾಡಬಹುದು?

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಯೂನಿಟ್ ಪರಿವರ್ತನೆಗಳು:

• 1 ng/μL = 1 μg/mL
• 1 μg/mL = 0.001 mg/mL
• 1 ng/μL = 1000 pg/μL
• 1 μM 1000 bp ಡಿಎನ್‌ಎ ಭಾಗ ≈ 660 ng/μL

ಡಿಎನ್‌ಎ ಭಾಗಕ್ಕಾಗಿ ಮಾಸ್ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL) ಅನ್ನು ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (nM) ಗೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಲು:

$\text{ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (nM)} = \frac{\text{ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL)} \times 10^6}{\text{ಡಿಎನ್‌ಎ ಉದ್ದ (bp)} \times 660}$

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮಾಪನದಲ್ಲಿ ಅಸತ್ಯವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಏನು?

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮಾಪನದಲ್ಲಿ ಅಸತ್ಯವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳಿವೆ:

1. ಮಾಲಿನ್ಯ: ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಫೆನೋಲ್, ಗುವಾನಿಡೈನ್ ಅಥವಾ ಇತರ ನಿರ್ಗಮನದ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳು ಶೋಷಣೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಿತಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ
2. ಬಬ್ಬಲಗಳು: ಬೆಳಕು ಮಾರ್ಗದಲ್ಲಿ ಗಾಳಿಯ ಬಬ್ಬಲಗಳು ತಪ್ಪು ಓದುಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು
3. ಡಿಎನ್‌ಎ ಹಾನಿಯು: ತುಂಡುಗಳಾದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಶೋಷಣೆಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು
4. ತಪ್ಪಾದ ಖಾಲಿ: ಡಿಎನ್‌ಎ ಕರಗಿಸಲು ಬಳಸಿದ ಬಫರ್‌ಗಿಂತ ಬೇರೆ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಖಾಲಿಯಾಗಿ ಬಳಸುವುದು
5. ಅಸಮಾನ ದ್ರಾವಣ: ಸರಿಯಾಗಿ ಮಿಶ್ರಿತ ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣವು ಅಸಂಗತ ಓದುಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ
6. ಉಪಕರಣದ ಕ್ಯಾಲಿಬ್ರೇಶನ್: ಕ್ಯಾಲಿಬ್ರೇಟು ಮಾಡದ ಅಥವಾ ಕುದಿಯುವ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ಗಳು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ
7. ರೇಖೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯ ಹೊರಗೆ ಅಳೆಯುವಿಕೆಗಳು: ಬಹಳ ಹೆಚ್ಚು ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಶೋಷಣಾ ಮೌಲ್ಯಗಳು ಶುದ್ಧವಾಗಿರಬಹುದು

ನಾನು ಈ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಅನ್ನು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್‌ಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದೇ?

ಈ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ (50 ng/μL ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶವನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ) ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ನೀವು ಇದನ್ನು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗೆ ಹೊಂದಿಸಲು:

1. A260 ಅನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅಳೆಯಿರಿ
2. 50 ಬದಲು 40 ಅನ್ನು ಗುಣಿಸಿ (ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ-ನ ವಿಶೇಷ ಪರಿವರ್ತನೆ ಅಂಶ)
3. ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ಬಳಸಿರಿ

ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗೆ ಸೂತ್ರವು ಈ ರೀತಿಯಾಗಿದೆ: $\text{ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL)} = A_{260} \times 40 \times \text{ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶ}$

ಉಲ್ಲೇಖಗಳು

1. ಗ್ಯಾಲಘರ್, ಎಸ್. ಆರ್., ಮತ್ತು ಡೆಸ್‌ಜಾರ್ಡಿನ್ಸ್, ಪಿ. ಆರ್. (2006). ಶೋಷಣೆ ಮತ್ತು ಫ್ಲುೊರೆಸನ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮೂಲಕ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ. ಕರಂಟ್ ಪ್ರೋಟೋಕೋಲ್ಸ್ ಇನ್ ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಬಯೋಲಾಜಿ, 76(1), A-3D.

2. ಸ್ಯಾಂಬ್ರಾಕ್, ಜೆ., ಮತ್ತು ರಸ್ಸೆಲ್, ಡಬ್ಲ್ಯೂ. (2001). ಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್: ಲ್ಯಾಬೊರೇಟರಿ ಮ್ಯಾನ್‌ಯುಯಲ್ (3ನೇ ಆವೃತ್ತಿ). ಕೋಲ್ಡ್ ಸ್ಪ್ರಿಂಗ್ ಹಾರ್ಬರ್ ಲ್ಯಾಬೊರೇಟರಿ ಪ್ರೆಸ್.

3. ಮ್ಯಾಂಚೆಸ್ಟರ್, ಕೆ. ಎಲ್. (1995). ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಾಕ್ ಆಮ್ಲ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಅಳೆಯುವ A260/A280 ಅನುಪಾತದ ಮೌಲ್ಯ. BioTechniques, 19(2), 208-210.

4. ಸ್ಯಾಂಬ್ರಾಕ್, ಜೆ., ಮತ್ತು ರಸ್ಸೆಲ್, ಡಬ್ಲ್ಯೂ. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press.

5. ಡೆಸ್‌ಜಾರ್ಡಿನ್ಸ್, ಪಿ., ಮತ್ತು ಕಾಂಕ್ಲಿನ್, ಡಿ. (2010). ನಾನೋಡ್ರಾಪ್ ಮೈಕ್ರೋವಾಲ್ಯೂಮ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ. ಜರ್ನಲ್ ಆಫ್ ವಿಸುಲೈಜ್ಡ್ ಎಕ್ಸ್ಪೆರಿಮೆಂಟ್ಸ್, (45), e2565.

6. ನಕಾಯಾಮಾ, ವೈ., ಯಾಮಗುಚಿ, ಎಚ್., ಎೈನಾಗಾ, ಎನ್., ಮತ್ತು ಎಸುಮಿ, ಎಮ್. (2016). ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ-ಬಂಧಿತ ಫ್ಲುೋರೆಸೆಂಟ್ ಡೈಗಳ ಬಳಕೆಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಶಿಫಾರಸುಗಳು. PLOS ONE, 11(3), e0150528.

7. ಥರ್ಮೋ ಫಿಷರ್ ಸೈನ್ಟಿಫಿಕ್. (2010). ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಾಕ್ ಆಮ್ಲ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯುವುದು. T042-ತಾಂತ್ರಿಕ ಬುಲೆಟಿನ್.

8. ಹ್ಯೂಬರ್‌ಮನ್, ಜೆ. ಎ. (1995). ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಾಕ್ ಆಮ್ಲ ಶೋಷಣೆಯ 240 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯುವಿಕೆಗಳ ಮಹತ್ವ. BioTechniques, 18(4), 636.

9. ವಾರ್ಬರ್ಗ್, ಓ., ಮತ್ತು ಕ್ರಿಸ್ಟಿಯನ್, ಡಬ್ಲ್ಯೂ. (1942). ಎನೋಲೇಜ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವುದು ಮತ್ತು ಕ್ರಿಸ್ಟಲೈಜ್ ಮಾಡುವುದು. Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.

10. ಗ್ಲಾಸೆಲ್, ಜೆ. ಎ. (1995). ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಾಕ್ ಆಮ್ಲ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು A260nm/A280nm ಶೋಷಣೆಯ ಅನುಪಾತದಿಂದ ಮಾನ್ಯತೆ. BioTechniques, 18(1), 62-63.

ನೀವು ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಸಿದ್ಧವಾಗಿದ್ದೀರಾ? ಮೇಲಿನ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ತಕ್ಷಣ ನಿಖರವಾದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ. ನಿಮ್ಮ ಶೋಷಣೆಯ ಓದು, ಆಯತ ಮತ್ತು ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧತೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ, ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮತ್ತು ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು.