ವಿಷಯಕ್ಕೆ ಹೋಗಿ
🛠️
Whiz Tools

BCA ಮಾದರಿ ಆಕೃತಿ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ | ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಉಪಕರಣ

BCA ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದುಗಳಿಂದ ಮಾದರಿ ಆಕೃತಿಗಳನ್ನು ಕೂಡಲೇ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟ್ ಮಾಡಿ. ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್, ಎಂಜೈಮ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ಮತ್ತು IP ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ನಿಖಾಳಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಆಕೃತಿಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ.

ಬಿಸಿಎ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್

ಬಿಸಿಎ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಕೆಗಳಿಂದ ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿಖಯವಾಗಿ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಿ. ಪ್ರೊಟೀನ್ ಮಾಸ್ ಮತ್ತು ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ಗಾಗಿ ನಿಖಯ ಸಾಂದ್ರತೆ ಪಡೆಯಿರಿ.

ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖಾ ಸಂರಚನೆ

ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖಾ ಪ್ರಕಾರ
BCA ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರ
BCA ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರ ದೃಶ್ಯೀಕರಣ0.0000.5001.0001.5002.0002.500ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)00.511.522.5ಶೋಷಣ (A562)

ಮಾದರಿ ಇನ್‌ಪುಟ್‌ಗಳು

ಮಾದರಿ 1

ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆ
—μL

ಫಲಿತಾಂಶ ಸಾರಾಂಶ

ಮಾದರಿ ಹೆಸರುಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ಮಾದರಿ ಮಾಸ್ (μg)ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆ (μL)
ಮಾದರಿ 1————

ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಸೂತ್ರ

ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸೂತ್ರದಿಂದ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆ (μL) = ಮಾದರಿ ಮಾಸ್ (μg) / ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)
ಬಳಕೆ ಸಲಹೆಗಳು

• ನಿಖಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಾಗಿ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಅನ್ನು 0.1-2.0 ನಡುವೆ ಇಡಿ

• ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಾಸ್: ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್‌ಗಳಿಗೆ 20-50 μg, ಇಮ್ಯೂನೋಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಶನ್‌ಗಾಗಿ 500-1000 μg

• 1000 μL ಮೇಲಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಕಡಿಮೆ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ - ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಾಂದ್ರಗೊಳಿಸಲು ಪರಿಗಣಿಸಿ

• ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನ್ವಯಗಳಿಗೆ ಮಾನಕ ಬಿಸಿಎ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ (20-2000 μg/mL). ಸಾಂದ್ರ ಮಾದರಿಗಳಿಗಾಗಿ (5-250 μg/mL) ವರ್ಧಿತ ಬಿಸಿಎಯನ್ನು ಬಳಸಿ

ಲೋಡಿಂಗ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕ್ಯುಲೇಟರ್...
📚

ದಸ್ತಾವೇಜನೆಯು

ಬಿಸಿಎ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹೊಂದಿಕೆ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್

ನೀವು ಬಿಸಿಎ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಮುಗಿಸಿದ ನಂತರ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ಗಾಗಿ ಎಷ್ಟು ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹಾಕಬೇಕೆಂಬುದನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬೇಕಾಗಿದ್ದರೆ, ಇದು ಸಿದ್ಧಾಂತದಲ್ಲಿ ಸರಳ ಆದರೆ ಕಷ್ಟಕರ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರವಾಗಿದೆ. 562 ನಮೋ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಅನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ, ನಿಮ್ಮ ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಜೊತೆ ಹೋಲಿಸಿ, ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡಿ, ನಂತರ ನಿಮ್ಮ ಬಯಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕೆ ಬೇಕಾಗುವ ಹೊಂದಿಕೆ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಿರಿ.

ಈ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಆ ಗಣಿತವನ್ನು ಕೂಡಲೇ ಮಾಡಿಬಿಡುತ್ತದೆ. ನಿಮ್ಮ ಬಿಸಿಎ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಕೆಯನ್ನು ಮತ್ತು ಗುರಿ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ—ನಿಮಗೆ ಸೂ�ক್ಷ್ಮ ಲೀಟರ್ಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹೊಂದಿಕೆಯ ಸರಿಯಾದ ಪ್ರಮಾಣ ಸಿಗುತ್ತದೆ. ಬಿಸಿಎ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ಮಾಡುವ ಕಾರಣ ಏನೆಂದರೆ ಅವು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ಗಳಿಗೆ ಮತ್ತು ಸರ್ಫ್ಯಾಕ್ಟೆಂಟ್ಗಳಿಗೆ ಸಹಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ, ಇವು ಬ್ರಾಡ್ಫೋರ್ಡ್ ಅಥವಾ ಲೋರಿ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಅಡಚಣೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಅಂಶಗಳಾಗಿವೆ. ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್ಗಳಲ್ಲಿ ಎಸ್ಡಿಎಸ್ ಅಥವಾ ಟ್ರೈಟನ್ X-100 ಇರುವಾಗ, ಬಿಸಿಎ ಸಂಪೂರ್ಣ ನಿಖರವಾಗಿ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ ಇತರ ವಿಧಾನಗಳು ವಿಫಲಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.

ಬಿಸಿಎ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಹೇಗೆ ಕಾಮ್ಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ

ಬಿಸಿಎ ಪರೀಕ್ಷಾ ಸಿದ್ಧಾಂತ

ಬಿಸಿಎ (ಬಿಸಿನ್ಕಿನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ) ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ಒಂದು ಎರಡು-ಹಂತದ ತಾಮ್ರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮೂಲಕ ಕಾಮ್ಯ ಮಾಡುತ್ತವೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಕ್ಷಾರೀಯ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ Cu²⁺ ಅನ್ನು Cu¹⁺ ಗೆ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತವೆ—ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಪ್ರಮಾಣ ನೇಸರಿಗಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಜೊತೆ ನೇರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ. ಇಲ್ಲಿ ಬಿಸಿನ್ಕಿನೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ: ಇದು Cu¹⁺ ಜೊತೆ ಬಂಧಿಸಿ ಒಂದು ಗಾಢ ನೇರಳೆ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ ಯಾವುದು 562 nm ನಲ್ಲಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ನೀವು ಈ ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಮೂಲಕ ಅಳೆಯುತ್ತೀರಿ. ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣ ಗಾಢವಾಗಿದ್ದಲ್ಲಿ, ನಿಮ್ಮ ಬಳಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಇರುತ್ತದೆ. ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯ ಬೆಳಕ ಹೀರಿಕೆಯನ್ನು ಒಂದು ಮಾನ್ಯ ವಕ್ರರೇಖೆ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ BSA ಮಾನ್ಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ) ಜೊತೆ ಹೋಲಿಸಿ, ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಬಳಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಇರುತ್ತದೆ. ಬಿಸಿಎ ಅಳವಡಿಕೆಯ ಸೌಂದರ್ಯ ಏನೆಂದರೆ ಇದು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್, ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಸಕ್ಕರೆಗಳು ಅಥವಾ ಇತರ ಸಾಮಾನ್ಯ ಬಫರ್ ಘಟಕಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಾಮ್ಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ—ಇಂಥ ಪದಾರ್ಥಗಳು ಬ್ರಾಡ್ಫೋರ್ಡ್ ಅಥವಾ ಲೋರಿ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಕೆಡಿಸಬಹುದಾಗಿವೆ.

ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ ಅಳೆಯಲು ಸೂತ್ರ

ಬಿಸಿಎ ಬೆಳಕ ಹೀರಿಕೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಂದ ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ ಅಳೆಯಲು ಮೂಲಭೂತ ಸೂತ್ರ:

ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ (μL)=ಮಾದರಿ ದ್ರವ್ಯಮಾನ (μg)ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)\text{ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ (μL)} = \frac{\text{ಮಾದರಿ ದ್ರವ್ಯಮಾನ (μg)}}{\text{ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)}}

ಎಲ್ಲಿ:

  • ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ (ಮೈಕ್ರೋಲಿಟರ್, μL)
  • ಮಾದರಿ ದ್ರವ್ಯಮಾನ ಬಳಸಲು ಬಯಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ (ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಮ್, μg)
  • ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಬಿಸಿಎ ಬೆಳಕ ಹೀರಿಕೆ ಓದಿನಿಂದ ಪಡೆಯಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ (μg/μL)

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಬೆಳಕ ಹೀರಿಕೆ ಓದಿನಿಂದ ಮಾನ್ಯ ವಕ್ರರೇಖೆ ಸಮೀಕರಣ ಮೂಲಕ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)=ಓಚೆ×ಬೆಳಕ ಹೀರಿಕೆ+ಅಂಚೆ\text{ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ (μg/μL)} = \text{ಓಚೆ} \times \text{ಬೆಳಕ ಹೀರಿಕೆ} + \text{ಅಂಚೆ}

ಒಂದು ಮಾನ್ಯ ಬಿಸಿಎ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ, ಸಾಮಾನ್ಯ ಓಚೆ ಸರಾಸರಿ 2.0 ಆಗಿರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಅಂಚೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಶೂನ್ಯಕ್ಕೆ ಹತ್ತಿರ ಇರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಈ ಮೌಲ್ಯಗಳು ನಿಮ್ಮ ನಿರ್ಧಿಷ್ಟ ಪರೀಕ್ಷಾ ಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಮಾನ್ಯ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಬದಲಾಗಬಹುದು. ಎಂಜೈಮೊಲಜಿ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಕನಿಷ್ಠ 5-6 ಅಂಕಗಳ ಮಾನ್ಯ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ರಚಿಸಿ, ನಿಮ್ಮ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಸಾಂದ್ರತಾ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿಸಿ, ವಿವಿಧ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಮೇಲೆ ನಿಖರ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

BCA ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಬಳಸುವುದು

ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಪ್ರತಿ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಾಗಿ ಮ್ಯಾನ್ಯುಯಲ್ ಗಣಿತವನ್ನು ಸರಳಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ:

  1. ನಿಮ್ಮ ಅಳತೆಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ:

    • ನಿಮ್ಮ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗೆ ಲೇಬಲ್ ಹಾಕಿ (ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಹು ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಳ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕ ಹಾಕಲು ಸಹಾಯಕ)
    • ನಿಮ್ಮ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ನಿಂದ 562 nm ರಲ್ಲಿ ಅವಶೋಷಣ ಓದಿಕೆಯನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ
    • ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಂಗಳಲ್ಲಿ ನಿಮಗೆ ಬೇಕಾಗಿರುವ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸಿ (ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್‌ಗಾಗಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 10-50 μg, ಇಮ್ಯೂನೋಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಷನ್‌ಗಾಗಿ 500-1000 μg)

  2. ನಿಮ್ಮ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ:

    • ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ BCA: ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರೊಟೋಕಾಲ್, 20-2000 μg/mL ವ್ಯಾಪ್ತಿಗೆ ಕಾಮ್ಯಾಡುತ್ತದೆ
    • ಎನ್ಹ್ಯಾನ್ಸ್ಡ್ BCA: ತಣ್ಣ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನಶೀಲತೆ (5-250 μg/mL)
    • ಮೈಕ್ರೋ BCA: ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿರುವಾಗ ಮೈಕ್ರೋಪ್ಲೇಟ್ ಫಾರ್ಮ್ಯಾಟ್
    • ಕಸ್ಟಮ್: ನೀವು ಭಿನ್ನ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ರಚಿಸಿದ್ದಲ್ಲಿ ನಿಮ್ಮ ಸ್ವಂತ ಓರಿಯಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಸೆಪ್ಟ್ ನಮೂದಿಸಿ

  3. ನಿಮ್ಮ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ:

    • ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಕೂಡಲೇ ನೀವು ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡಬೇಕಾಗಿರುವ ಮೈಕ್ರೋಲಿಟರ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ
    • ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಹು ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕ ಹಾಕಲು ಸೇರಿಸಿ
    • ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ನಿಮ್ಮ ಲ್ಯಾಬ್ ನೋಟ್‌ಬುಕ್ ಅಥವಾ LIMS ಗೆ ನಕಲಿಸಿ

ವಾಸ್ತವಿಕ ಉದಾಹರಣೆ

ಆರು ಸೆಲ್ ಲೈನ್‌ಗಳ ಮಧ್ಯೆ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವಾಗ. ನೀವು ನಿಮ್ಮ BCA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಿ ಒಂದು ಸ್ಯಾಂಪಲ್ 0.75 ಅವಶೋಷಣ ಓದಿಕೆಯನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿ ಲೇನ್‌ಗೆ 20 μg ಪ್ರೊಟೀನ್ ಬೇಕಾಗಿದೆ.

ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ (ಓರಿಯಿಂಗ್ = 2.0, ಇಂಟರ್ಸೆಪ್ಟ್ = 0):

  • ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
  • ಅಗತ್ಯ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

ಈ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ನಿಂದ 13.33 μL ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡಿ, ನಿಮ್ಮ ಲೋಡಿಂಗ್ ಬಫರ್ ಸೇರಿಸಿ, ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಬಳಿ ನಿಖಟವಾಗಿ 20 μg ಪ್ರೊಟೀನ್ ಇರುತ್ತದೆ. ಇದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, 1.2 ಅವಶೋಷಣ ಓದಿಕೆಯ ನಿಮ್ಮ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗೆ ಅದೇ 20 μg ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಾಗಿ ಕೇವಲ 8.33 μL ಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ. ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಪ್ರತಿ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಾಗಿ ಈ ಗಣಿತವನ್ನು ಮಾಡಲು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ - ಕೇವಲ ನಿಮ್ಮ ಓದಿಕೆಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗಳನ್ನು ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಿರಿ.

ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು

ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಕೆಲವು ಮಹತ್ವಪೂರ್ಣ ಮಾಹಿತಿಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ:

  1. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ: ಇದನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿದ ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ ನಿಮ್ಮ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿನಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರತಿ ಘನಾಕಾರ (μg/μL) ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.

  2. ಮಾದರಿ ಆವೃತ್ತಿ: ಇದು ನಿಮ್ಮ ಬಯಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯ ಆವೃತ್ತಿಯಾಗಿದೆ. ಈ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನಿಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

  3. ಎಚ್ಚರಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಶಿಫಾರಸುಗಳು: ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಎಚ್ಚರಿಕೆಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು:

    • ಬಹಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಗಳು (>3.0) ಅಳೆಯೆಯ ರೇಖಾಚಿತ್ರ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯ ಹೊರಗಿರಬಹುದು
    • ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಗಳು (<0.1) ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವ ಮಿತಿಯ ಹತ್ತಿರ ಇರಬಹುದು
    • ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾದ ಆವೃತ್ತಿಗಳು ಅಸಾಧ್ಯ ಪ್ರಮಾಣಗಳಲ್ಲಿ (>1000 μL) ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ (<1 μL) ಇರಬಹುದು

ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ವ್ಯಾವಹಾರಿಕ ಅನ್ವಯಗಳು

ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ಮಾದರಿ ಸಿದ್ಧತೆ

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಸ್ಥಿರವಾಗಿಲ್ಲದಿರುವುದು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್‌ಗಳು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡಲು ಕಾರಣವಾಗುವ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳಲ್ಲೊಂದಾಗಿದೆ. ನೀವು ಒಂದು ಲೇನ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಲವಾದ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನೂ ಮತ್ತೊಂದು ಲೇನ್‌ನಲ್ಲಿ ಮಂಕಾದ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನೂ ನೋಡಬಹುದು—ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು ಭಿನ್ನವಾಗಿರುವಂಥ ಕಾರಣಕ್ಕಲ್ಲ, ಆದರೆ ನೀವು ಭಿನ್ನ ಪ್ರಮಾಣದ ಒಟ್ಟು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲೋಡ್ ಮಾಡಿರುವಂಥ ಕಾರಣಕ್ಕೆ.

ಪರಿಹಾರ ಸರಳವಾಗಿದ್ದರೂ ನಾಚಿಕ್ಯಾಸಕ್ತ ಕ್ಷೇತ್ರ ಕಾಲ್ಕುಲೇಷನ್‌ಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ BCA ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಕೆಗಳನ್ನು ಪಡೆದ ನಂತರ, ಪ್ರತಿ ಲೇನ್‌ಗೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಬೇಕಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರಚುರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಗೆ 20-30 μg, ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಚುರ ಗುರಿಗಳಿಗೆ 50 μg ವರೆಗೆ ಬಳಸುತ್ತೇನೆ). ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕ್ಷೇತ್ರ ಕಾಲ್ಕುಲೇಷನ್ ಮಾಡಿ, ನಂತರ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಒಂದೇ ಅಂತಿಮ ಕ್ಷೇತ್ರಕ್ಕೆ ಸಮಾನಗೊಳಿಸಿ ಲಾಮ್ಮಿ ಬಫರ್ ಸೇರಿಸಿ.

ಸಾಮಾನ್ಯ ತಪ್ಪು: ಲೋಡಿಂಗ್ ಬಫರ್ ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಮಾದರಿ ಕ್ಷೇತ್ರ ಬದಲಾಗುವುದನ್ನು ಮರೆಯುವುದು. ನೀವು ಒಟ್ಟು 15 μL ಲೋಡ್ ಮಾಡುತ್ತಿದ್ದರೆ ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಲೋಡಿಂಗ್ ಬಫರ್ 4x ಆಗಿದ್ದರೆ, ನಿಮಗೆ 3.75 μL ಬಫರ್ ಮತ್ತು 11.25 μL ಮಾದರಿ ಡೈಲ್ಯೂಷನ್ ಅಗತ್ಯ. ನಿಮ್ಮ ಡೈಲ್ಯೂಷನ್‌ಗಳನ್ನು ಅನುಸಾರವಾಗಿ ಯೋಜಿಸಿ.

ಎಂಜೈಮಿಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು

ಎಂಜೈಮ್ ಕೈನೆಟಿಕ್ಸ್ ಅಳೆಯೆಗಳಿಗೆ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರತಿಕೃತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ವಿಭಿನ್ನ ಸೆಲ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳ ಅಥವಾ ಟಿಶ್ಯೂ ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಎಂಜೈಮ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೋಲಿಸಿದಾಗ, ನೀವು ಒಟ್ಟು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ ಒಂದೇ ಆಗಿರುವ ಬಗ್ಗೆ ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು—ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಭಿನ್ನತೆಗಳು ಕೇವಲ ಎಂಜೈಮ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಭಿನ್ನತೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸಬಹುದು.

ಎಂಜೈಮ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಿಗೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡುತ್ತೇನೆ—ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರಚುರ ಎಂಜೈಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ 5-10 μg. ಮುಖ್ಯ ಅಂಶ ಎಲ್ಲಾ ನಿಮ್ಮ ಸ್ಥಿತಿಗಳ ಮತ್ತು ಸಮಯ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದಾಗಿದೆ.

ಇಮ್ಯೂನೊಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಷನ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳು

IP ಪ್ರಯೋಗಗಳು ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು—ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರತಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ 500-1000 μg ಒಟ್ಟು ಲೈಸೇಟ್. ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಥವಾ ಹಲವಾರು ಆಂಟಿಬಾಡಿಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸುವಾಗ, ನೀವು ಒಂದೇ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಹನ್ನೆರಡಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು IP ಗಳನ್ನು ಸಂಸ್ಕರಿಸಬಹುದು.

ಅಸಮಾನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದರೆ ನಿಮ್ಮ ಇಡೀ ಪ್ರಯೋಗ ಕೆಟ್ಟಾಗಿ ಹೋಗಬಹುದು. ಒಂದು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ 800 μg ಇನ್‌ಪುಟ್ ಇದ್ದರೆ ಮತ್ತೊಂದು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ 1200 μg ಇದ್ದರೆ, ನೀವು ಸಹ-ಪ್ರೆಸಿಪಿಟೇಟ್ ಮಾಡಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅರ್ಥಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಹೋಲಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಪ್ರತಿ ಲೈಸೇಟ್‌ಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಕ್ಷೇತ್ರವನ್ನು ಕಾಲ್ಕುಲೇಟ್ ಮಾಡಿ, ಲೈಸಿಸ್

ಉನ್ನತ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಗಣನೆಗಳು

ಕಸ್ಟಮ್ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಗಳು

ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಸಾಮಾನ್ಯ BCA ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಿಗೆ ಡೀಫಾಲ್ಟ್ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ, ನೀವು ನಿಮ್ಮ ಸ್ವಂತ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ರಚಿಸಿದ್ದಲ್ಲಿ ಕಸ್ಟಮ್ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಬಹುದು. ಇದು ಈ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಉಪಯೋಗಿಯಾಗುತ್ತದೆ:

  • ಅಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಮಾದರಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಕೆಲಸ ಮಾಡಲು
  • ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ BCA ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಲು
  • ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಅಡಚಣೆ ಮಾಡಬಹುದಾದ ಪದಾರ್ಥಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡಲು

ಕಸ್ಟಮ್ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಬಳಸಲು:

  1. ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆ ಆಯ್ಕೆಗಳಿಂದ "ಕಸ್ಟಮ್" ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ
  2. ನಿಮ್ಮ ಓಚೆ ಮತ್ತು ಅಂತರ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ
  3. ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಎಲ್ಲಾ ನಂತರದ ಲೆಕ್ಕಾಚಾರಗಳಿಗೆ ಈ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ

ಬಹು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ನಿಭಾಯಿಸಲು

ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ನಿಮಗೆ ಬಹು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಮತ್ತು ಅವರ ಕೊಳಳಗಳನ್ನು ಏಕಕಾಲಕ್ಕೆ ಲೆಕ್ಕಿಸಲು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಮಾನ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಉಪಯೋಗಿಯಾಗುತ್ತದೆ.

ಬ್ಯಾಚ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು:

  • ಎಲ್ಲಾ ಕೊಳಳಗಳನ್ನು ಏಕಕಾಲಕ್ಕೆ ಲೆಕ್ಕಿಸಿ ಸಮಯ ಉಳಿಸಿ
  • ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಂಜಸ್ಯತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿ
  • ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸುಲಭವಾಗಿ ಹೋಲಿಸಿ
  • ಹೊರಗುಳಿಗಳನ್ನು ಅಥವಾ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅಳತಾ ದೋಷಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಿ

ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಗೆ ಪರಿಹಾರ

ರೇಖೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯ ಮೇಲಿನ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್

2.0 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಕೆಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ BCA ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ರೇಖೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯ ಹೊರಗಿರುತ್ತವೆ. ಶುದ್ಧ ಪ್ರೊಟೀನ್, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಎಕ್ಸ್ಟ್ರಾಕ್ಟ್‌ಗಳ ಅಥವಾ ಸರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿಲ್ಲದ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ ಇದನ್ನು ನೋಡಬಹುದು.

ಪರಿಹಾರ ಸರಳ: ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಯನ್ನು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ 1:5 ಅಥವಾ 1:10 ರಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ, BCA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಮರುಪ್ರಯೋಗಿಸಿ, ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಲೆಕ್ಕಿಸಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದ ಅಂಕಿನಿಂದ ಗುಣಿಸಿ. ನಿಮ್ಮ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ರೇಖೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯ ಹೊರಗೆ ಅಂಚಿನ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಡಿ - ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಕುಸಿಯುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಮಟ್ಟಗಳ ಅಂದಾಜಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಮೌಲ್ಯಗಳಾಗುತ್ತವೆ.

ಅಳತಾ ಮಿತಿಯ ಕೆಳಗಿನ ಕಡಿಮೆ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್

ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ 0.1 ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಇರಲಾಗಿ, ಅಳತಾ ನಿಖರತೆ ಸಮಸ್ಯಾತ್ಮಕ ಆಗಿರುತ್ತದೆ. ನೀವು ಅಳತಾ ಮಿತಿಯ ಕೆಳಗಿನ ಭಾಗದಲ್ಲಿ ಇರುವಿರಿ, ಇಲ್ಲಿ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಕೆಯ ಸಣ್ಣ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಲೆಕ್ಕಿಸಿದ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ.

ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನಶೀಲತೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ವರ್ಧಿತ ಅಥವಾ ಮೈಕ್ರೋ BCA ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಲು ಪರಿಗಣಿಸಿ. ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ, ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜಲ್ ಫಿಲ್ಟರ್‌ಗಳ (

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳ ವಿಕಾಸ

ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವು 1883ರ ಕ್ಜೆಲ್ಡಾಹಲ್ ವಿಧಾನದಿಂದ ಬಹಳ ದೂರ ಬಂದಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ನೈಟ್ರೋಜನ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಉರಿಯುವ ಸಲ್ಫ್ಯೂರಿಕ್ ಆಮ್ಲದಲ್ಲಿ ಪಾಚಿಸಬೇಕಾಗಿತ್ತು. ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಿಗೆ ವಿಶೇಷ ಸಲಕರಣೆಗಳು ಮತ್ತು ಗಣನೀಯ ಪ್ರಾಜ್ಞತೆ ಬೇಕಾಗಿತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅಂದಾಜು ಮಾಡಲು.

ಆಧುನಿಕ BCA ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಿಗೆ ನಾವು ಹೇಗೆ ಬಂದೆವು

ಬಿಯೂರೆಟ್ ಪರೀಕ್ಷೆ (ಆರಂಭಿಕ 1900ಗಳಲ್ಲಿ) ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ವರ್ಣಮಾಪಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ತಂದಿತ್ತು. ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಬಂಧಗಳು ಕ್ಷಾರೀಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ತಾಮ್ರ ಯೋನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ನಾ�غಿ ನಿಲುಕಡಿ ಬಣ್ಣ ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ. ಸರಳ, ಆದರೆ ವಿಶೇಷ ಸಂವೇದಿಯಾಗಿಲ್ಲ.

ಓಲಿವರ್ ಲೋವ್ರಿ 1951ರಲ್ಲಿ ಬಿಯೂರೆಟ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಫೋಲಿನ್-ಸಿಯೋಕಾಲ್ಟೆಉ ರಿಯಾಜೆಂಟ್ ಜೊತೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿ ಇದನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿದರು. ಲೋವ್ರಿ ಪರೀಕ್ಷೆ ದಶಕಗಳ ಕಾಲ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಆಳಿಸಿತ್ತು, ಆದರೆ ಒಂದು ಮಹತ್ವಪೂರ್ಣ ಅಸಮರ್ಥತೆ ಇತ್ತು: ಹಲವಾರು ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಿದವು—ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್, EDTA, ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯೂ ನಿಮ್ಮ ಅಳೆಯುವಿಕೆಗಳನ್ನು ಕೆಡಿಸಬಹುದಾಗಿತ್ತು.

ಮೇರಿಯನ್ ಬ್ರಾಡ್ಫರ್ಡ್ ರ 1976ರ ವಿಧಾನ ಕೂಮಾಸಿ ಬ್ರಿಲಿಯಂಟ್ ನೀಲಿ G-250 ಬಳಸಿ ವೇಗವನ್ನು ನೀಡಿತ್ಯಾಗಿ—5 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಬದಲಾಗಿ—ಆದರೆ ಸ್ವಂತ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನೂ ಪರಿಚಯಿಸಿತ್ತು. ಬಣ್ಣವು ಮೂಲಭೂತ ಅಮಿನೋ ಆಮ್ಲಗಳಿಗೆ ಆದ್ಯತಾ ಬಂಧನ ಮಾಡುತ್ತಿದ್ದ ಕಾರಣ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಓದುಗಳನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಪ್ರಭಾವಿಸಿತ್ತು. ಇನ್ನಷ್ಟು ಮಹತ್ವಪೂರ್ಣವಾಗಿ, ಸೆಲ್ ಲೈಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದ ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು ಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಿದವು.

1985ರಲ್ಲಿ BCA ಪರೀಕ್ಷೆ ಪ್ರವೇಶಿಸಿತ್ತು. ಪಿಯರ್ಸ್ ಕೆಮಿಕಲ್ ಕಂಪನಿಯ ಪಾಲ್ ಸ್ಮಿತ್ ಮತ್ತು ಸಹಯೋಗಿಗಳು ಬಿಸಿನ್ಕಿನ್ಕೊನಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಬಿಯೂರೆಟ್ ರಿಯಾಜೆಂಟ್‌ಗಳಿಗಿಂತ Cu¹⁺ ಯೋನಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದ್ಯತೆಯಿಂದ �keಡಬಹುದೆಂದು ಗುರ್ತಿಸಿದರು. ಅವರ ನವೀಕೃತಿಯು ಬಿಯೂರೆಟ್ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಹನಶೀಲತೆಯನ್ನು ವಿವಿಧ ಬಫರ್ ಘಟಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದ್ಯತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿ, ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್, ಕಡಿಮೆ ಸಕ್ಕರೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಪದಾರ್ಥಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲೂ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಾಮ ಮಾಡುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಿತ್ತು. ಇದೇ ಕಾರಣಕ್ಕಾಗಿ BCA ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಮಾನಕ ಆಯಿತ್ತು—ಇದು ವಾಸ್ತವಿಕ ಮಾದರಿ ಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಾಮ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆ ಕೊಳಪನ್ನು ಕಲಿಸಲು ಕೋಡ್ ಉದಾಹರಣೆಗಳು

ಎಕ್ಸೆಲ್ ಫಾರ್ಮ್ಯೂಲಾ

1=IF(B2<=0,"ದೋಷ: ಅಮಾನ್ಯ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್",IF(C2<=0,"ದೋಷ: ಅಮಾನ್ಯ ಮಾದರಿ ಭಾರ",C2/(2*B2)))
2
3' ಎಲ್ಲಿ:
4' B2 ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಓದಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿಸುತ್ತದೆ
5' C2 ಬಯಸಿದ ಮಾದರಿ ಭಾರವನ್ನು μg ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿಸುತ್ತದೆ
6' ಫಾರ್ಮ್ಯೂಲಾ ಅಗತ್ಯ ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆಯನ್ನು μL ನಲ್ಲಿ ಹಿಂತಿರುಗಿಸುತ್ತದೆ
7

ಪೈಥಾನ್ ಅನ್ವಯ

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖೆಯಿಂದ ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮೂಲಕ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಲಿಸಿ."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಋಣ ಆಗಿರಬಾರದು")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಬಯಸಿದ ಭಾರದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಅಗತ್ಯ ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆಯನ್ನು ಕಲಿಸಿ."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("ಮಾದರಿ ಭಾರ ಧನಾತ್ಮಕ ಇರಬೇಕು")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("ಕಲಿಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಧನಾತ್ಮಕ ಇರಬೇಕು")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# ಉದಾಹರಣಾ ಬಳಕೆ
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ {absorbance} ಮತ್ತು ಬಯಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಭಾರ {sample_mass} μg ಗಾಗಿ:")
31    print(f"ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"ಅಗತ್ಯ ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆ: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"ದೋಷ: {e}")
35

R ಕೋಡ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ

1# ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮೂಲಕ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಲಿಸಲು ಕ್ರಮ
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಋಣ ಆಗಿರಬಾರದು")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆಯನ್ನು ಕಲಿಸಲು ಕ್ರಮ
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("ಮಾದರಿ ಭಾರ ಧನಾತ್ಮಕ ಇರಬೇಕು")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("ಕಲಿಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಧನಾತ್ಮಕ ಇರಬೇಕು")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# ಉದಾಹರಣಾ ಬಳಕೆ
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ %.2f ಮತ್ತು ಬಯಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಭಾರ %.2f μg ಗಾಗಿ:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("ಅಗತ್ಯ ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆ: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("ದೋಷ: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript ಅನ್ವಯ

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ಋಣ ಆಗಿರಬಾರದು");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("ಮಾದರಿ ಭಾರ ಧನಾತ್ಮಕ ಇರಬೇಕು");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("ಕಲಿಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಧನಾತ್ಮಕ ಇರಬೇಕು");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// ಉದಾಹರಣಾ ಬಳಕೆ
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ ${absorbance} ಮತ್ತು ಬಯಸಿದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಭಾರ ${sampleMass} μg ಗಾಗಿ:`);
33  console.log(`ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`ಅಗತ್ಯ ಮಾದರಿ ಹೊಂದಿಕೆ: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`ದೋಷ: ${error.message}`);
37}
38

ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖಾ ಚಿತ್ರೀಕರಣ

ಅಬ್ಸೋರ್ಬೆನ್ಸ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವ್ಯಾಪಿಯಲ್ಲಿ ರೇಖೀಯ ಆಗಿರುತ್ತದೆ. ಕೆಳಗಿನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಮಾನಕ BCA ವಕ್ರರೇಖಾ ಚಿತ್ರೀಕರಣ ಇದೆ:

[ಇಲ್ಲಿ SVG ಚಿತ್ರ ಅದೇ ಇರಬೇಕು]

ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ ನಿರ್ಧಾರಣ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಕೆ

ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ ನಿರ್ಧಾರಣ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ವಿವಿಧ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು ಮತ್ತು ಮಿತಿಗಳಿವೆ. BCA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಇತರ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೀಗೆ ಹೋಲಿಸಬಹುದು:

ವಿಧಾನಸಂವೇದನಾ ವ್ಯಾಪಿಪ್ರಯೋಜನಗಳುಮಿತಿಗಳುಯಾವ ಸಲಹೆ
BCA ಪರೀಕ್ಷೆ5-2000 μg/mL• ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯಾಗುವ
• ಕಡಿಮೆ ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸ
• ಸ್ಥಿರ ಬಣ್ಣ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ		• ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಿಂದ ಅಡ್ಡಿ
• ಕೆಲವು ಕೆಲೇಟಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತ		• ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ ನಿರ್ಧಾರಣ
• ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳು
ಬ್ರಾಡ್‌ಫೋರ್ಡ್ ಪರೀಕ್ಷೆ1-1500 μg/mL• ವೇಗವಾಗಿ (2-5 ನಿಮಿಷ)
• ಕಡಿಮೆ ಅಡ್ಡಿ ಮಾಡುವ ಪದಾರ್ಥಗಳು		• ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರೋಟೀನ್-ಪ್ರೋಟೀನ್ ವ್ಯತ್ಯಾಸ
• ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯಾಗದ		• ವೇಗವಾಗಿ ಅಳತೆಗಳು
• ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ ಇಲ್ಲದ ಮಾದರಿಗಳು
ಲೋರಿ ವಿಧಾನ1-1500 μg/mL• ಸ್ಥಾಪಿತ
• ಒಳ್ಳೆಯ ಸಂವೇದನೆ		• ಹಲವಾರು ಅಡ್ಡಿ ಮಾಡುವ ಪದಾರ್ಥಗಳು
• ಬಹು ಹಂತಗಳು		• ಐತಿಹಾಸಿಕ ಸಾಮರಸ್ಯ
• ಶುದ್ಧ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾದರಿಗಳು
UV ಅಬ್ಸಾರ್ಬೆನ್ಸ್ (280 nm)20-3000 μg/mL• ಅಕೃಷ್ಟಕಾರಕ
• ಬಹಳ ವೇಗವಾಗಿ
• ಯಾವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಸಾಮಗ್ರಿಗಳಿಲ್ಲ		• ನ್ಯೂಕ್ಲಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತ
• ಶುದ್ಧ ಮಾದರಿಗಳ ಅಗತ್ಯ		• ಶುದ್ಧ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕರಗಳು
• ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವೇಗವಾಗಿ ಪರಿಶೀಲನೆ
ಫ್ಲೋರೋಮೆಟ್ರಿಕ್0.1-500 μg/mL• ಅತ್ಯಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆ
• ವಿಶಾಲ ಡೈನಾಮಿಕ್ ವ್ಯಾಪಿ		• ದುಬಾರಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಸಾಮಗ್ರಿಗಳು
• ಫ್ಲೋರೋಮೀಟರ್ ಅಗತ್ಯ		• ಬಹಳ ಸಾಂದ್ರ ಮಾದರಿಗಳು
• ಸೀಮಿತ ಮಾದರಿ ಸಂಪುಟ

ಅಕಸ್ಮಾತ್ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು

BCA ಪರೀಕ್ಷೆ ಯಾಕೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ?

BCA ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತವೆ. ನಿಮಗೆ ಎಷ್ಟು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಇದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತಿಳಿಯಬೇಕಾಗಿ ಬಂದಾಗೆಲ್ಲಾ ನೀವಿದನ್ನು ಬಳಸುವಿರಿ—ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಮೊದಲು ಸಮಾನ ಲೋಡಿಂಗ್ ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ಎಂಜೈಮ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳ ಮೊದಲು ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸಮಾನಗೊಳಿಸಲು, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಹಿಂಬಾಲಿಸಲು, ಅಥವಾ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಗಾಗಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲು. ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಣು ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ರಸಾಯನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಡೀಫಾಲ್ಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಳತಾ ವಿಧಾನವಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್ ಗಳಲ್ಲಿನ ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ ಮತ್ತು ಬಫರ್ ಘಟಕಗಳನ್ನು ನಿಭಾಯಿಸಬಲ್ಲದು.

BCA ಪರೀಕ್ಷೆ ಎಷ್ಟು ನಿಖಾರವಾಗಿದೆ?

ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, 5-10% ನಿಖಾರತೆಯನ್ನು ನಿರೀಕ್ಷಿಸಿ. ಅದು ಸರಿಯಾದ ಮಾನಕ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಓಡಿಸುವ (ಕನಿಷ್ಠ 5-6 ಬಿಂದುಗಳನ್ನು ನಿಮ್ಮ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಸಾಂದ್ರತಾ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ), ಹೊಸ ರಿಯಾಜೆಂಟ್ ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ, ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಅಡಚಣೆ ಮಾಡುವ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಲ್ಲ ಎಂಬುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಯೋಜನೆ ಮಹತ್ವಪೂರ್ಣವಾಗಿದೆ—ಕೊಲಾಜನ್ ಮತ್ತು ಜಿಲಾಟಿನ್ ಅಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಓದುವಿಕೆಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ ಅವರ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಕಾರಣ, ಮತ್ತು ಹಿಸ್ಟೋನ್ ಗಳು ಕಡಿಮೆ ಓದುವಿಕೆಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನ್ವಯಗಳಿಗೆ, 5-10% ದೋಷ ಸ್ವೀಕಾರಾರ್ಹವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಅಳತೆ ಇಲ್ಲದೆ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಲೋಡ್ ಮಾಡುವುದಕ್ಕಿಂತ ಬಹಳ ಉತ್ತಮ.

(ಅನುವಾದ ಮುಂದುವರಿಯುತ್ತದೆ...)

ಉಲ್ಲೇಖಗಳು

  1. ಸ್ಮಿತ್ ಪಿಕೆ, ಕ್ರೋನ್ ಆರ್ಐ, ಹರ್ಮನ್ಸನ್ ಜಿಟಿ, ಇತರರು. "ಬಿಸಿನ್ಕೊನಿನಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಬಳಕೆಯಿಂದ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಳತೆ." ಅನಾಲಿಟಿಕಲ್ ಬಯೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. ಥರ್ಮೋ ಸಯಂಟಿಫಿಕ್. "ಪಿಯರ್ಸ್ ಬಿಸಿಎ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಸೇ ಕಿಟ್." ಸೂಚನೆಗಳು. ಲಭ್ಯವಿದೆ: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. ವಾಕರ್ ಜೆಎಂ. "ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಬಿಸಿನ್ಕೊನಿನಿಕ್ ಆಮ್ಲ (ಬಿಸಿಎ) ಅಸೇ." ಇನ್: ವಾಕರ್ ಜೆಎಂ, ಸಂಪಾದಕ. ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರೊಟೊಕಾಲ್ ಹ್ಯಾಂಡ್ಬುಕ್. ಸ್ಪ್ರಿಂಗರ್; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. ಒಲ್ಸನ್ ಬಿಜೆ, ಮಾರ್ಕ್ವೆಲ್ ಜೆ. "ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ನಿರ್ಧಾರಣೆಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು." ಪ್ರಸಿಹ್ಯಾಂಡ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಯಂಸ್. 2007;ಅಧ್ಯಾಯ 3:ಘಟಕ 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. ನೋಬಲ್ ಜೆಇ, ಬೈಲಿ ಎಂಜೆ. "ಪ್ರೊಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ." ಎಂಜೈಮೊಲಜಿ ವಿಧಾನಗಳು. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

ನಿಮ್ಮ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣ ನಿರ್ಧಾರಣಾ ಕಾರ್ಯಪ್ರವಾಹವನ್ನು ಸರಳಗೊಳಿಸಿ

BCA ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು ನಿಮಗೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ನಿಮ್ಮ ವಾಸ್ತವಿಕ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಆ ಸಂಖ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ. ಈ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಆ ಪರಿವರ್ತನೆಯನ್ನು ಕೂಡಲೇ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ನೀವು ಒಂದೇ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುತ್ತಿದ್ದೀರಾ ಅಥವಾ 96 ಮಾದರಿಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುತ್ತಿದ್ದೀರಾ. ನಿಮ್ಮ ಅವಶೋಷಣ ಓದುಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ, ಗುರಿಯ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸಿ, ಮತ್ತು ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಪ್ರಯೋಗ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಾಗಿ ನಖರವಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಿರಿ.