ബിസിഎ സാംപിൾ വോളിയം കാൽക്കുലേറ്റർ | പ്രൊട്ടീൻ അളവ് കണക്കാക്കൽ ഉപകരണം

Q: ബിസിഎ പരിശോധന എന്തിനാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്?

ബിസിഎ പരിശോധനകൾ നിങ്ങളുടെ സാംപിളുകളിലെ മൊത്തം പ്രൊട്ടീൻ സാന്ദ്രത അളക്കുന്നു. വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിന് മുൻപ് സമനിലയിൽ ലോഡ് ചെയ്യുന്നതിന്, എൻസൈം പരിശോധനകളിൽ പ്രവർത്തനം സാധാരണഗതിയിലാക്കുന്നതിന്, പ്രൊട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണ സമയത്ത് വിളവ് നിരീക്ഷിക്കുന്നതിന്, അല്ലെങ്കിൽ മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രിക്കിനായി സാംപിളുകൾ തയ്യാറാക്കുന്നതിന് നിങ്ങൾ ഇത് ഉപയോഗിക്കും. ഇത് മൊലിക്യുലർ ബയോളജിയിലെയും ബയോകെമിസ്ട്രിയിലെയും മിക്സ്ട് ലാബുകളിൽ സ്ഥിരം പ്രൊട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയ രീതിയായി മാറിയിരിക്കുന്നു കാരണം ഇത് സാധാരണ സെൽ ലൈസേറ്റുകളിലെ ഡിറ്റർജന്റുകളെയും ബഫർ ഘടകങ്ങളെയും കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നു.

Q: ബിസിഎ പരിശോധന എത്ര കൃത്യമാണ്?

നല്ല സാഹചര്യങ്ങളിൽ, 5-10% കൃത്യത പ്രതീക്ഷിക്കാം. അത് ഒരു ശരിയായ സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് (കുറഞ്ഞത് 5-6 പോയിന്റുകൾ നിങ്ങൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന സാന്ദ്രത പരിധിയിൽ), പുതിയ റീഏജന്റുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിലൂടെയും, നിങ്ങളുടെ സാംപിളുകളിൽ ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയിൽ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന പദാർത്ഥങ്ങൾ ഇല്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കുന്നതിലൂടെയും നിർഭരമാണ്. പ്രൊട്ടീൻ സംഘടന പ്രധാനമാണ്—കൊളാജൻ, ജെലാറ്റിൻ അവരുടെ അമിനോ ആസിഡ് സംഘടനമൂലം അസാധാരണമായി ഉയർന്ന റിഡിംഗുകൾ നൽകുന്നു, മറുവശത്ത് ഹിസ്റ്റോണുകൾ കുറഞ്ഞ റിഡിംഗുകൾ നൽകുന്നു. മിക്സ്ട് പ്രയോഗങ്ങൾക്ക്, 5-10% പിഴവ് സ്വീകാര്യമാണ്, ഏതെങ്കിലും അളവ് ഇല്ലാതെ സാംപിളുകൾ ലോഡ് ചെയ്യുന്നതിനേക്കാൾ വളരെ മെച്ചപ്പെട്ടതാണ്. (ബാക്കി ഭാഗം തുടരുന്നു...)

ബിസിഎ അഭിദീപ്തി റീഡിംഗുകളിൽ നിന്ന് സാംപിൾ വോളിയങ്ങൾ തൽക്ഷണം കണക്കാക്കുക. വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ, എൻസൈം പരിശോധനകൾ, ഐപി പരീക്ഷണങ്ങൾ എന്നിവയ്ക്കുള്ള പ്രൊട്ടീൻ ലോഡിംഗ് വോളിയങ്ങൾ കൃത്യമായി നിർണ്ണയിക്കുക.

ബിസിഎ അവശോഷണ സാംപിൾ വോല്യം കണക്കുകൂട്ടി

ബിസിഎ അവശോഷണ റീഡിംഗുകളിൽ നിന്ന് കൃത്യമായ സാംപിൾ വോല്യങ്ങൾ കണക്കുകൂട്ടുക. ലക്ഷ്യ പ്രോട്ടീൻ മാസ്സ് നിലവിൽ. സ്ഥിരമായ ലോഡിംഗിനായി അവശോഷണ മൂല്യങ്ങളും വാഞ്ഛിത പ്രോട്ടീൻ അളവുകളും നൽകുക.

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് കോൺഫിഗറേഷൻ

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് തരം

BCA സ്ഥിര വക്രം

സാംപിൾ ഇൻപുട്ടുകൾ

സാംപിൾ 1

സാംപിൾ പേര്

ബിസിഎ അവശോഷണം

സാംപിൾ മാസ്സ് (μg)

സാംപിൾ വോല്യം

—μL

ഫലങ്ങളുടെ സംഗ്രഹം

സാംപിൾ പേര്	അവശോഷണം	സാംപിൾ മാസ്സ് (μg)	പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രാവസ്ഥ (μg/μL)	സാംപിൾ വോല്യം (μL)
സാംപിൾ 1	—	—	—	—

കണക്കുകൂട്ടൽ സൂത്രം

സാംപിൾ വോല്യം കണക്കുകൂട്ടുന്നത് ഈ സൂത്രം ഉപയോഗിച്ചാണ്:

സാംപിൾ വോല്യം (μL) = സാംപിൾ മാസ്സ് (μg) / പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രാവസ്ഥ (μg/μL)

ഉപയോഗ നുറുങ്ങുകൾ

• കൃത്യമായ ഫലങ്ങൾക്കായി അവശോഷണം 0.1-2.0 പരിധിയിൽ നിലനിർത്തുക

• സാധാരണ അളവുകൾ: വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾക്ക് 20-50 μg, ഇമ്മ്യൂനോപ്രെസിപിറ്റേഷനിൽ 500-1000 μg

• 1000 μL കഴിഞ്ഞുള്ള വോല്യങ്ങൾ കുറഞ്ഞ പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രാവസ്ഥയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു—നിങ്ങളുടെ സാംപിൾ കേന്ദ്രീകരിക്കുന്നതിനെക്കുറിച്ച് പരിഗണിക്കുക

• സ്റ്റാൻഡേർഡ് ബിസിഎ മിക്ക അപ്ലിക്കേഷനുകൾക്കും ഉപയോഗിക്കാം (20-2000 μg/mL). കുറഞ്ഞ സാംപിൾ കേന്ദ്രാവസ്ഥയ്ക്ക് (5-250 μg/mL) വർദ്ധിത ബിസിഎ ഉപയോഗിക്കുക

ലോഡിംഗ് കാൽക്യുലേറ്റർ...

📚

വിവരണം

ബിസിഎ സാംപിൾ വോളിയം കാൽക്കുലേറ്റർ പ്രൊട്ടീൻ അളവ് കണക്കാക്കുന്നതിനുള്ള മിനിട്ട് മാർഗ്ഗം

നിങ്ങൾ ഒരു ബിസിഎ പരിശോധന പൂർത്തിയാക്കിയ ശേഷം വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിൽ എത്ര സാംപിൾ ഇടണം എന്ന് കണക്കാക്കേണ്ട സമയത്ത്, ഒരു കണക്കുകൂട്ടൽ നടത്തുകയാണ്. സിദ്ധാന്തത്തിൽ എളുപ്പമെങ്കിലും പ്രാക്ടിസിൽ വളരെ കഠിനം. 562 nm-ൽ അബ്സോർബൻസ് അളക്കുക, സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവിയുമായി താരതമ്യം ചെയ്യുക, പ്രൊട്ടീൻ കോൺസൻട്രേഷൻ കണക്കാക്കുക, തുടർന്ന് നിങ്ങൾ ആവശ്യപ്പെടുന്ന പ്രൊട്ടീൻ അളവിനുള്ള വോളിയം നിർണ്ണയിക്കുക.

ഈ കാൽക്കുലേറ്റർ ഉടനടി ഈ കണക്കുകൂട്ടൽ നടത്തുന്നു. നിങ്ങളുടെ ബിസിഎ അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗും ലക്ഷ്യമിടുന്ന പ്രൊട്ടീൻ അളവും നൽകുക—മൈക്രോലിറ്ററിൽ കൃത്യമായ സാംപിൾ വോളിയം നിങ്ങൾക്ക് ലഭിക്കും. ബിസിഎ പരിശോധനകൾ പ്രത്യേകം വിശ്വാസയോഗ്യമാണ്, കാരണം ഇവ ബ്രാഡ്ഫോർഡ് അല്ലെങ്കിൽ ലൗറി മാർഗ്ഗങ്ങളെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന ഡിറ്റർജൻറ്റുകളെയും സർഫാക്ടൻറ്റുകളെയും സഹിക്കുന്നു. SDS അല്ലെങ്കിൽ ട്രിറ്റൺ X-100 അടങ്ങിയ സെൽ ലൈസേറ്റുകളുമായി പ്രവർത്തിക്കുമ്പോൾ, മറ്റ് മാർഗ്ഗങ്ങൾ പരാജയപ്പെടുമ്പോൾ ബിസിഎ കൃത്യമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു.

ബിസിഎ പ്രോട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയം എങ്ങനെ പ്രവർത്തിക്കുന്നു

ബിസിഎ പരിശോധനയുടെ തത്വം

ബിസിഎ (ബിസിൻഷിനോനിക് ആസിഡ്) പരിശോധനകൾ രണ്ട് ഘട്ടത്തിലുള്ള കോപ്പർ പ്രതിക്രിയ വഴി പ്രവർത്തിക്കുന്നു. ക്ഷാരീയ സാഹചര്യത്തിൽ പ്രോട്ടീനുകൾ Cu²⁺ നെ Cu¹⁺ വലിയിലേക്ക് കുറയ്ക്കുന്നു—കുറയ്ക്കുന്ന അളവ് പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രതയുമായി നേരിട്ട് ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഇവിടെയാണ് ബിസിൻഷിനോനിക് ആസിഡ് വരുന്നത്: ഇത് Cu¹⁺ മായി ബന്ധപ്പെട്ട് 562 nm-ൽ പ്രകാശം അവശോഷിപ്പിക്കുന്ന ഒരു തീവ്ര ഊതാനിറമുള്ള സമുച്ചയം രൂപപ്പെടുത്തുന്നു.

നിങ്ങൾ ഈ ഊതാനിറം സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററിൽ അളക്കുന്നു. ഊതാനിറം കൂടുതൽ കറുത്തിരിക്കുന്നുവെങ്കിൽ, നിങ്ങൾക്ക് കൂടുതൽ പ്രോട്ടീൻ ഉണ്ട്. നിങ്ങളുടെ സാംപിളിന്റെ അവശോഷണത്തെ ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് വക്രത്തിനൊപ്പം (സാധാരണയായി ബിഎസ്എ സ്റ്റാൻഡേർഡുകൾ ഉപയോഗിച്ച്) താരതമ്യം ചെയ്യുക, അപ്പോൾ നിങ്ങൾക്ക് നിങ്ങളുടെ പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത ലഭിക്കും. ബിസിഎ യുടെ സവിശേഷത എന്നത് ഡിറ്റർജന്റുകൾ, കുറയ്ക്കുന്ന ഷുഗറുകൾ, അല്ലെങ്കിൽ മറ്റ് സാധാരണ ബഫർ ഘടകങ്ങൾ സാന്നിദ്ധ്യമുണ്ടെങ്കിലും ഇത് വിശ്വസനീയമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു—ബ്രാഡ്ഫോർഡ് അല്ലെങ്കിൽ ലൗറി പരിശോധനകളെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന വസ്തുക്കൾ.

സാംപിൾ വോളിയം കണക്കാക്കുന്നതിനുള്ള സൂത്രം

ബിസിഎ അവശോഷണ ഫലങ്ങളിൽ നിന്ന് സാംപിൾ വോളിയം കണക്കാക്കുന്നതിനുള്ള അടിസ്ഥാന സൂത്രം:

$\text{സാംപിൾ വോളിയം (μL)} = \frac{\text{സാംപിൾ മാസ്സ് (μg)}}{\text{പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത (μg/μL)}}$

എവിടെ:

സാംപിൾ വോളിയം വേണ്ട സാംപിളിന്റെ വോളിയം (മൈക്രോലിറ്ററിൽ, μL)
സാംപിൾ മാസ്സ് ഉപയോഗിക്കാൻ ഉദ്ദേശിക്കുന്ന പ്രോട്ടീൻ അളവ് (മൈക്രോഗ്രാമിൽ, μg)
പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത ബിസിഎ അവശോഷണ റീഡിംഗിൽ നിന്ന് കണ്ടെത്തിയത് (μg/μL)

പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത അവശോഷണ റീഡിംഗിൽ നിന്ന് കണക്കാക്കുന്നത് ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് വക്ര സമവാക്യം ഉപയോഗിച്ച്:

$\text{പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത (μg/μL)} = \text{ഫ്ലക്ക്} \times \text{അവശോഷണം} + \text{ഇന്റർസെപ്റ്റ്}$

ഒരു സാധാരണ ബിസിഎ പരിശോധനയ്ക്ക്, സാധാരണ ഫ്ലക്ക് ഏകദേശം 2.0 ആണ്, ഇന്റർസെപ്റ്റ് പതിവായി പൂജ്യത്തിനു സമീപം ഇരിക്കും, എന്നാൽ ഈ മൂല്യങ്ങൾ നിങ്ങളുടെ പ്രത്യേക പരിശോധനാ സാഹചര്യങ്ങൾ, സ്റ്റാൻഡേർഡ് വക്രത്തിന് അനുസരിച്ച് വ്യത്യാസപ്പെടാം. മെഥഡ്സ് ഇൻ എൻസൈമോളജി പ്രോട്ടോകോളുകൾ പ്രകാരം, 5-6 പോയിന്റുകൾ ഉൾക്കൊള്ളുന്ന ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് വക്ര സൃഷ്ടിക്കുന്നത് വ്യത്യസ്ത പ്രോട്ടീൻ തരങ്ങളിൽ കൃത്യമായ അളവ് നിർണ്ണയം ഉറപ്പാക്കുന്നു.

ബിസിഎ സാംപിൾ വോളിയം കാൽക്കുലേറ്റർ ഉപയോഗിക്കുന്നത്

കാൽക്കുലേറ്റർ ഓരോ സാംപിളിനും മാനുവൽ കണക്കുകൂട്ടൽ ആവശ്യമെന്നതിനെ ലഘൂകരിക്കുന്നു:

നിങ്ങളുടെ അളവുകൾ നൽകുക:
- നിങ്ങളുടെ സാംപിളിനെ ലേബൽ ചെയ്യുക (ഒന്നിലധികം സാംപിളുകളുടെ വോളിയം കണക്കാക്കുന്നതിൽ സഹായകരം)
- നിങ്ങളുടെ സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററിൽ 562 nm-ൽ അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗ് നൽകുക
- മൈക്രോഗ്രാമിൽ നിങ്ങൾക്ക് വേണ്ട പ്രോട്ടീൻ അളവ് വ്യക്തമാക്കുക (പതിവായി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾക്ക് 10-50 μg, ഇമ്മ്യൂനോപ്രെസിപിറ്റേഷനു 500-1000 μg)
നിങ്ങളുടെ സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് തരം തിരഞ്ഞെടുക്കുക:
- സ്റ്റാൻഡേർഡ് ബിസിഎ: ഏറ്റവും സാധാരണ പ്രോട്ടോകോൾ, 20-2000 μg/mL പരിധിക്ക് പ്രവർത്തിക്കുന്നു
- എൻഹാൻസ്ഡ് ബിസിഎ: കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയുള്ള സാംപിളുകൾക്ക് കൂടുതൽ സംവേദനശീലത (5-250 μg/mL)
- മൈക്രോ ബിസിഎ: സാംപിൾ വോളിയം പരിമിതമായിരിക്കുമ്പോൾ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് ഫോർമാറ്റ്
- കസ്റ്റം: വ്യത്യസ്ത സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ഉണ്ടാക്കിയിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ നിങ്ങളുടെ സ്വന്തം ഫ്ലാറ്റ്നസ്സ് (slope) കൂടി നൽകുക
നിങ്ങളുടെ സാംപിൾ വോളിയം നേടുക:
- കാൽക്കുലേറ്റർ ഉടനെ നിങ്ങൾ പിപ്പറ്റ് ചെയ്യേണ്ട മൈക്രോലിറ്ററുകൾ കാണിക്കുന്നു
- ഒരു പ്ലേറ്റ് മുഴുവനും കണക്കാക്കാൻ ഒന്നിലധികം സാംപിളുകൾ ചേർക്കുക
- ഫലങ്ങൾ നേരിട്ട് നിങ്ങളുടെ ലാബ് നോട്ട്ബുക്കിലേക്കോ LIMS-ലേക്കോ കോപ്പി ചെയ്യുക

യഥാർഥ ലോക വ്യവഹാരം

ആറ് സെൽ വകഭേദങ്ങളിലെ പ്രോട്ടീൻ പ്രകടനം തുലനം ചെയ്യുന്ന വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ട് തയ്യാറാക്കുന്ന സന്ദർഭം കരുതുക. നിങ്ങൾ നിങ്ങളുടെ ബിസിഎ പരിശോധന നടത്തി, ഒരു സാംപിൾ 0.75 അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗ് നൽകുന്നു. ഓരോ വരിക്കും 20 μg പ്രോട്ടീൻ വേണം.

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് ഉപയോഗിച്ച് (ഫ്ലാറ്റ്നസ്സ് = 2.0, ഇന്റർസെപ്റ്റ് = 0):

പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
ആവശ്യമായ സാംപിൾ വോളിയം = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

ഈ സാംപിളിൽ 13.33 μL പിപ്പറ്റ് ചെയ്യുക, നിങ്ങളുടെ ലോഡിംഗ് ബഫർ ചേർക്കുക, അങ്ങനെ 20 μg പ്രോട്ടീൻ ലഭിക്കും. അതേസമയം, 1.2 അബ്സോർബൻസ് ഉള്ള നിങ്ങളുടെ സാംപിളിന് 8.33 μL മാത്രം വേണ്ടിവരും. കാൽക്കുലേറ്റർ ഓരോ സാംപിളിനും ഈ കണക്ക് ചെയ്യേണ്ട ആവശ്യം ഒഴിവാക്കുന്നു - നിങ്ങളുടെ റീഡിംഗുകൾ നൽകുക, ഒന്നിനുശേഷം മറ്റൊന്ന് വോളിയം നേടുക.

ഫലങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കൽ

കാൽക്കുലേറ്റർ പല പ്രധാന വിവരങ്ങൾ നൽകുന്നു:

പ്രൊട്ടീൻ സാന്ദ്രത: തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെട്ട സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവിൽ നിന്ന് നിങ്ങളുടെ അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗിൽ നിന്ന് കണക്കാക്കുന്നു. ഇത് നിങ്ങളുടെ സാംപിളിലെ പ്രൊട്ടീൻ അളവിനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു (μg/μL).
സാംപിൾ വോളിയം: നിങ്ങൾ ആവശ്യപ്പെട്ട പ്രൊട്ടീൻ അളവുള്ള നിങ്ങളുടെ സാംപിളിന്റെ വോളിയം. നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണങ്ങൾ തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ ഈ മൂല്യം ഉപയോഗിക്കും.
മുന്നറിയിപ്പുകളും നിർദ്ദേശങ്ങളും: കാൽക്കുലേറ്റർ മുന്നറിയിപ്പുകൾ നൽകാം:
- വളരെ കൂടിയ അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗുകൾ (>3.0) അളവിന്റെ രൈഖിക പരിധിക്കു പുറത്തുള്ളവ
- വളരെ കുറഞ്ഞ അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗുകൾ (<0.1) കണ്ടെത്തൽ പരിധിക്കു സമീപം
- കണക്കാക്കപ്പെട്ട വോളിയങ്ങൾ അവ്യവഹാര്യമായ വലിപ്പത്തിൽ (>1000 μL) അല്ലെങ്കിൽ ചെറിയവ (<1 μL)

ലാബിലെ പ്രാക്ടിക്കൽ പ്രയോഗങ്ങൾ

വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ട് സാംപ്ൾ തയ്യാറാക്കൽ

പ്രൊട്ടീൻ ലോഡിംഗിൽ സ്ഥിരതക്കുറവ് വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ വിശ്വാസയോഗ്യമായ ഫലങ്ങൾ നൽകാൻ പരാജയപ്പെടുന്ന ഏറ്റവും സാധാരണ കാരണങ്ങളിലൊന്നാണ്. ഒരു വരിയിൽ കനത്ത ബാൻഡുകളും മറ്റൊന്നിൽ മങ്ങിയ ബാൻഡുകളും കാണാം - പ്രൊട്ടീൻ പ്രകടനത്തിൽ വ്യത്യാസം കാരണം അല്ല, മറിച്ച് മൊത്തം പ്രൊട്ടീൻ അളവിൽ വ്യത്യാസം കാരണം.

പരിഹാരം ലളിതമാണെങ്കിലും കൃത്യമായ വോളിയം കണക്കുകൾ ആവശ്യമാണ്. എല്ലാ സാംപ്ൾസിനും BCA അവശോഷണ റീഡിംഗ്സ് കിട്ടിയാൽ, ഓരോ വരിയിലേക്കും എത്ര പ്രൊട്ടീൻ ലോഡ് ചെയ്യണമെന്ന് നിർണ്ണയിക്കുക (സാധാരണയായി ഞാൻ സമ്പുഷ്ടമായ പ്രൊട്ടീനുകൾക്ക് 20-30 μg, കുറഞ്ഞ സമ്പുഷ്ടമായ ലക്ഷ്യങ്ങൾക്ക് 50 μg വരെ ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട്). ഓരോ സാംപ്ൾസിനും ആവശ്യമായ വോളിയം കണക്കാക്കി, ലൈസിസ് ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് എല്ലാ സാംപ്ൾസിനെയും ഒരേ അവസാന വോളിയത്തിലേക്ക് നോർമലൈസ് ചെയ്ത ശേഷം ലാംഡി ബഫർ ചേർക്കുക.

ഒരു സാധാരണ തെറ്റ്: ലോഡിംഗ് ബഫർ ചേർത്തതിനുശേഷം സാംപ്ൾ വോളിയം മാറുന്നത് മറന്നുപോകുക. നിങ്ങൾ 15 μL മൊത്തം ലോഡ് ചെയ്യുകയാണെങ്കിലും നിങ്ങളുടെ ലോഡിംഗ് ബഫർ 4x ആണെങ്കിൽ, നിങ്ങൾക്ക് 3.75 μL ബഫർ കൂടി 11.25 μL സാംപ്ൾ ഡിലൂഷൻ ആവശ്യമാണ്. നിങ്ങളുടെ ഡിലൂഷനുകൾ അനുസരിച്ച് പ്ലാൻ ചെയ്യുക.

എൻസൈമിക് പരിശോധനകൾ

എൻസൈം കൈനറ്റിക്സ് അളവുകൾ പ്രതിരൂപങ്ങൾക്കും സാഹചര്യങ്ങൾക്കും മുഴുവൻ സ്ഥിരമായ പ്രൊട്ടീൻ അളവുകൾ ആവശ്യമാണ്. വ്യത്യസ്ത സെൽ ചികിത്സകൾ അല്ലെങ്കിൽ ഊതക സാംപ്ൾസിനുമിടയിൽ എൻസൈം പ്രവർത്തനം തട്ടിപ്പോകുമ്പോൾ, നിങ്ങൾ മൊത്തം പ്രൊട്ടീൻ അളവിൽ തുടങ്ങുന്നുണ്ടെന്ന് അറിയണം - അല്ലാത്തപക്ഷം, പ്രവർത്തനത്തിലെ വ്യത്യാസങ്ങൾ കേവലം എൻസൈം സാന്നിധ്യത്തിലെ വ്യത്യാസങ്ങളെ പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം.

എൻസൈം പരിശോധനകൾക്ക്, ഞാൻ സാധാരണ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകളെക്കാൾ കുറഞ്ഞ പ്രൊട്ടീൻ അളവുകൾ ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട് - സാധാരണയായി സമ്പുഷ്ടമായ എൻസൈമുകൾക്ക് പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന് 5-10 μg. കാതൽ കാര്യം - നിങ്ങളുടെ എല്ലാ സാഹചര്യങ്ങളിലും സമയ പോയിന്റുകളിലും ഈ സ്ഥിരതയെ പരിപാലിക്കുക.

(ബാക്കി ഭാഗം തുടരും...)

വിപുലമായ സവിശേഷതകളും പരിഗണനകളും

കസ്റ്റം സ്റ്റാൻഡേഡ് കർവുകൾ

കാൽക്കുലേറ്റർ ബിസിഎ പരിശോധനയ്ക്കുള്ള സ്ഥിരസംഖ്യാ പാരാമീറ്ററുകൾ നൽകുന്നുണ്ടെങ്കിലും, നിങ്ങൾക്ക് സ്വന്തം സ്റ്റാൻഡേഡ് കർവ് ഉണ്ടാക്കിയിട്ടുണ്ടെങ്കിൽ കസ്റ്റം മൂല്യങ്ങൾ നൽകാനും കഴിയും. ഇത് പ്രത്യേകിച്ച് ഉപകാരപ്രദമാണ്:

സ്റ്റാൻഡേഡ് അല്ലാത്ത പ്രോട്ടീൻ സാംപിളുകളുമായി പ്രവർത്തിക്കുമ്പോൾ
മാറ്റം വരുത്തിയ ബിസിഎ പ്രോട്ടോകോളുകൾ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ
പരിശോധനയെ തടസ്സപ്പെടുത്തിയേക്കാവുന്ന പദാർഥങ്ങളുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ

കസ്റ്റം സ്റ്റാൻഡേഡ് കർവ് ഉപയോഗിക്കാൻ:

സ്റ്റാൻഡേഡ് കർവ് ഓപ്ഷനിൽ "കസ്റ്റം" തിരഞ്ഞെടുക്കുക
നിങ്ങളുടെ സ്ലോപ്പ് & ഇന്റർസെപ്റ്റ് മൂല്യങ്ങൾ നൽകുക
കാൽക്കുലേറ്റർ ഈ മൂല്യങ്ങൾ തുടർന്നുള്ള കണക്കുകൾക്ക് ഉപയോഗിക്കും

മൾട്ടിപ്പിൾ സാംപിളുകൾ കൈകാര്യം ചെയ്യൽ

കാൽക്കുലേറ്റർ നിങ്ങൾക്ക് മൾട്ടിപ്പിൾ സാംപിളുകൾ ചേർക്കാനും അവയുടെ വോളിയങ്ങൾ ഒരേ സമയം കണക്കാക്കാനും അനുവദിക്കുന്നു. വിവിധ സാഹചര്യങ്ങളിൽ സ്ഥിരമായ പ്രോട്ടീൻ ലോഡിംഗ് തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ ഇത് പ്രത്യേകിച്ച് ഉപകാരപ്രദമാണ്.

ബാച്ച് പ്രോസസ്സിംഗിന്റെ ഗുണങ്ങൾ:

ഒരേ സമയം എല്ലാ വോളിയങ്ങളും കണക്കാക്കി സമയം കുറയ്ക്കുക
എല്ലാ സാംപിളുകളിലും സ്ഥിരത ഉറപ്പാക്കുക
സാംപിളുകൾ തമ്മിലുള്ള പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം എളുപ്പത്തിൽ താരതമ്യം ചെയ്യുക
അസാധാരണ മൂല്യങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ സാധ്യമായ അളവ് പിഴവുകൾ തിരിച്ചറിയുക

സാധാരണ പ്രശ്നങ്ങൾ പരിഹരിക്കൽ

രേഖീയ പരിധിക്ക് മുകളിലുള്ള അഭ്യൂഹം

2.0 ഉൾപ്പെടെയുള്ള അഭ്യൂഹ റിഡിംഗുകൾ സാധാരണ ബിസിഎ സ്റ്റാൻഡേഡ് കർവിന്റെ രേഖീയ പരിധിക്ക് പുറത്തുള്ളവയാണ്. ഇത് ഏറ്റവും കേന്ദ്രീകൃത സാംപിളുകളിൽ കാണാം - ശുദ്ധീകരിച്ച പ്രോട്ടീനുകൾ, കേന്ദ്ര സ്രവങ്ങൾ, അല്ലെങ്കിൽ അനുചിതമായി കുറച്ച ലൈസേറ്റുകൾ.

പരിഹാരം വ്യക്തമാണ്: നിങ്ങളുടെ സാംപിൾ 1:5 അല്ലെങ്കിൽ 1:10 വീതം വെള്ളത്തിൽ അല്ലെങ്കിൽ ലൈസിസ് ബഫറിൽ കുറയ്ക്കുക, ബിസിഎ പരിശോധന വീണ്ടും നടത്തുക, കണക്കാക്കിയ കേന്ദ്രീകരണം കുറവ് ഘടകത്താൽ ഗുണിക്കുക. നിങ്ങളുടെ സ്റ്റാൻഡേഡ് കർവിന്റെ രേഖീയ പരിധിക്ക് അപ്പുറം വ്യാഖ്യാനിക്കരുത് - അഭ്യൂഹവും കേന്ദ്രീകരണവും തമ്മിലുള്ള ബന്ധം ഉയർന്ന കേന്ദ്രീകരണത്തിൽ തകരുന്നു, ഇത് പ്രോട്ടീൻ തലങ്ങൾ കുറഞ്ഞ് കാണിക്കുന്നു.

കണ്ടെടുക്കൽ പരിധിക്ക് സമീപമുള്ള കുറഞ്ഞ അഭ്യൂഹം

അഭ്യൂഹം 0.1 ൽ കുറവാകുമ്പോൾ, അളവ് കൃത്യത പ്രശ്നകരമാകുന്നു. നിങ്ങൾ കണ്ടെടുക്കൽ പരിധിക്ക് സമീപത്താണ്, അഭ്യൂഹ റിഡിംഗിലെ ചെറിയ വ്യതിയാനങ്ങൾ കണക്കാക്കിയ കേന്ദ്രീകരണത്തിൽ വലിയ വ്യതിയാനങ്ങളിലേക്ക് നയിക്കുന്നു.

കുറഞ്ഞ സാംപിളുകൾക്ക്, മെച്ചപ്പെട്ട അല്ലെങ്കിൽ മൈക്രോ ബിസിഎ പ്രോട്ടോകോളുകളിലേക്ക് മാറുക, ഇവ മെച്ചപ്പെട്ട സംവേദനശീലത നൽകുന്നു. മറ്റൊരു വഴിയായി, സെൻട്രിഫ്യൂജൽ ഫിൽട്ടറുകൾ (അമിക്കൺ അല്ലെങ്കിൽ സമാനം) ഉപയോഗിച്ച് നിങ്ങളുടെ സാംപിൾ കേന്ദ്രീകരിക്കുക. അവസാന മാർഗ്ഗമായി, നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണ രൂപകൽപ്പനയെ കുറഞ്ഞ പ്രോട്ടീൻ അളവിൽ പ്രവർത്തിക്കാൻ അനുകൂലമാക്കുക - നിങ്ങൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്നതിലും കുറഞ്ഞ ലോഡിംഗ് അളവുകൾ പല പ്രയോഗങ്ങളും സഹിക്കുന്നുണ്ട്.

യുക്തിവിഹീനമായ വോളിയം കണക്കുകൾ

കാൽക്കുലേറ്റർ 30 μL വരെ കഴിവുള്ള വെൽ കപാസിറ്റിയിൽ 150 μL പിപ്പെറ്റ് ചെയ്യാൻ പറയുന്നു. അല്ലെങ്കിൽ 0.8 μL നൽകുന്നു, ഇത് മിക്സ്ട്ട് മൈക്രോപിപ്പെറ്റുകളുടെ കൃത്യ പിപ്പെറ്റിംഗ് പരിധിക്ക് കീഴിലാണ്.

വലിയ വോളിയങ്ങൾക്ക്: സെൻട്രിഫ്യൂജൽ ഫിൽട്ടറുകൾ അല്ലെങ്കിൽ പ്രസിപ്പിറ്റേഷൻ രീതികൾ (ടിസിഎ അല്ലെങ്കിൽ അസിറ്റോൺ പ്രസിപ്പിറ്റേഷൻ) ഉപയോഗിച്ച് നിങ്ങളുടെ സാംപിൾ കേന്ദ്രീകരിക്കുക. ചെറിയ വോളിയങ്ങൾക്ക്: നിങ്ങളുടെ സാംപിൾ കുറയ്ക്കുക (പിന്നീട് അനുപാതത്തിൽ കൂടുതൽ വോളിയം ഉപയോഗിക്കുക) അല്ലെങ്കിൽ നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണം അനുവദിക്കുന്നെങ്കിൽ ലക്ഷ്യ പ്രോട്ടീൻ അളവ് കുറയ്ക്കുക.

പ്രോട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയ രീതികളുടെ വികാസം

1883-ലെ കെൽഡാൽ രീതി മുതൽ പ്രോട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയം വളരെ മുന്നേറിയിരിക്കുന്നു, അതിൽ നൈട്രജൻ ഉള്ളടക്കം അളക്കുന്നതിനായി സാംപിളുകളെ തിളയ്ക്കുന്ന സൾഫ്യൂറിക് ആസിഡിൽ ഉൾപ്പെടുത്തേണ്ടിയിരുന്നു. പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത അനുമാനിക്കുന്നതിനായി ലാബുകൾക്ക് പ്രത്യേക ഉപകരണങ്ങളും നിസ്തുല വിദഗ്ദ്ധതയും ആവശ്യമായിരുന്നു.

ആധുനിക BCA പരിശോധനകളിലേക്ക് നാം എങ്ങനെ എത്തി

ബിയുറെറ്റ് പരിശോധന (ആദ്യ 1900-കൾ) പ്രോട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയത്തിലേക്ക് വർണ്ണമാപനം കൊണ്ടുവന്നു. ക്ഷാരീയ ഘോളത്തിൽ പെപ്റ്റിഡ് ബന്ധങ്ങൾ കോപ്പർ അയനുകളുമായി സങ്കീർണ്ണമാകുകയും ഊതനിറമുള്ള നിറം സൃഷ്ടിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ലളിതം, പക്ഷേ വളരെ സംവേദനശീലമല്ല.

1951-ൽ ഓലിവർ ലൗറി ബിയുറെറ്റ് പ്രതിക്രിയയെ ഫോളിൻ-സിയോകാൾട്ടൌ റിഏജന്റുമായി സംയോജിപ്പിച്ചു. ലൗറി പരിശോധന പതിറ്റാണ്ടുകളോളം പ്രോട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയത്തെ നിയന്ത്രിച്ചു, പക്ഷേ ഒരു കാര്യമായ ദൗർബല്യം ഉണ്ടായിരുന്നു: പല സാധാരണ ലാബ് രാസവസ്തുക്കളും പ്രതിക്രിയയെ തടസ്സപ്പെടുത്തി—ഡിറ്റർജന്റുകൾ, EDTA, ഉയർന്ന ഉവണ സാന്ദ്രതകൾ പോലും നിങ്ങളുടെ അളവുകൾ തെറ്റിക്കാം.

1976-ലെ മാരിയൻ ബ്രാഡ്ഫഡ്ന്റെ കൂമാസി ബ്രിലിയന്റ് ബ്ലൂ ജി-250 രീതി വേഗത നൽകി—30 മിനിറ്റിനുപകരം 5 മിനിറ്റിൽ ഫലങ്ങൾ—പക്ഷേ സ്വന്തം പ്രശ്നങ്ങളും കൊണ്ടുവന്നു. വർണ്ണകം അടിസ്ഥാന അമിനോ അമ്ലങ്ങളിൽ വിശേഷാൽ ബന്ധപ്പെടുന്നതിനാൽ പ്രോട്ടീൻ സംഘടന വായനകളെ നാടകീയമായി സ്വാധീനിക്കുന്നു. കൂടുതൽ പ്രധാനമായി, സെൽ വിഘടനത്തിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഡിറ്റർജന്റുകൾ പരിശോധനയെ പൂർണ്ണമായി തകർക്കുന്നു.

1985-ൽ BCA പരിശോധന വന്നു. പിയർസ് കെമിക്കൽ കമ്പനിയിലെ പോൾ സ്മിത്തും സഹപ്രവർത്തകരും മനസ്സിലാക്കി കി ബിസിൻഷിനൊനിക് ആസിഡ് പരമ്പരാഗത ബിയുറെറ്റ് റിഏജന്റുകളെക്കാൾ Cu¹⁺ അയനുകളെ കൂടുതൽ സംവേദനശീലമായി കണ്ടെത്തുന്നു. അവരുടെ നവോത്ഥാനം വിവിധ ബഫർ ഘടകങ്ങൾക്ക് ബിയുറെറ്റ് രാസവിജ്ഞാനത്തിന്റെ സഹിഷ്ണുതയെയും വർദ്ധിച്ച സംവേദനശീലതയെയും സംയോജിപ്പിച്ചു, ഡിറ്റർജന്റുകൾ, കുറഞ്ഞ പഞ്ഞപ്പാടുകൾ, ബ്രാഡ്ഫഡ് അല്ലെങ്കിൽ ലൗറി പരിശോധനകളെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന മറ്റ് വസ്തുക്കളുടെ സാന്നിധ്യത്തിലും വിശ്വസനീയമായി പ്രവർത്തിക്കുന്ന ഒരു രീതി സൃഷ്ടിച്ചു. ഇതാണ് BCA സെൽ ലൈസേറ്റുകളിൽ നിന്നുള്ള പ്രോട്ടീനുകൾ അളക്കുന്നതിനുള്ള സ്റ്റാൻഡേർഡ് ആയത്—ഇത് യഥാർത്ഥ സാംപിൾ സാഹചര്യങ്ങളിൽ പ്രവർത്തിക്കുന്നു.

സാംപിൾ വോളിയം കണക്കാക്കുന്നതിനുള്ള കോഡ് ഉദാഹരണങ്ങൾ

എക്സൽ ഫോർമുല

1=IF(B2<=0,"പിഴവ്: അസംബ്ലി അസാധുവാണ്",IF(C2<=0,"പിഴവ്: സാംപിൾ മാസ്സ് അസാധുവാണ്",C2/(2*B2)))
2
3' എവിടെ:
4' B2 അസംബ്ലി റീഡിംഗ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു
5' C2 ഇഷ്ടപ്പെട്ട സാംപിൾ മാസ്സ് μg ൽ
6' ഫോർമുല തിരിച്ചറിഞ്ഞ സാംპിൾ വോളിയം μL ൽ തിരിച്ചറിയുന്നു
7

പൈത്തൺ നടപ്പിലാക്കൽ

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """അസംബ്ലിയിൽ നിന്ന് പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം കണക്കാക്കുക."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("അസംബ്ലി നെഗറ്റീവ് ആകാൻ പാടില്ല")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """അസംബ്ലി മാസ്സിനെ അടിസ്ഥാനമാക്കി ആവശ്യമായ സാംപിൾ വോളിയം കണക്കാക്കുക."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("സാംപിൾ മാസ്സ് പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കണം")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("കണക്കാക്കിയ പ്രോട്ടീൻ കേന्ദ്രീകരണം പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കണം")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# ഉദാഹരണ ഉപയോഗം
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"അസംബ്ലി {absorbance} മാസ്സ് {sample_mass} μg ൽ:")
31    print(f"പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"ആവശ്യമായ സാംപിൾ വോളിയം: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"പിഴവ്: {e}")
35

R കോഡ് വിശകലനത്തിന്

1# അസംബ്ലിയിൽ നിന്ന് പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം കണക്കാക്കുന്ന ഫംഗ്ഷൻ
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("അസംബ്ലി നെഗറ്റീവ് ആകാൻ പാടില്ല")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# സാംപിൾ വോളിയം കണക്കാക്കുന്ന ഫംഗ്ഷൻ
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("സാംപിൾ മാസ്സ് പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കണം")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("കണക്കാക്കിയ പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കണം")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# ഉദാഹരണ ഉപയോഗം
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("അസംബ്ലി %.2f മാസ്സ് %.2f μg ൽ:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("ആവശ്യമായ സാംപിൾ വോളിയം: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("പിഴവ്: %s\n", e$message))
39})
40

ജാവാസ്ക്രിപ്റ്റ് നടപ്പിലാക്കൽ

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("അസംബ്ലി നെഗറ്റീവ് ആകാൻ പാടില്ല");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("സാംപിൾ മാസ്സ് പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കണം");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("കണക്കാക്കിയ പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം പോസിറ്റീവ് ആയിരിക്കണം");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// ഉദാഹരണ ഉപയോഗം
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`അസംബ്ലി ${absorbance} മാസ്സ് ${sampleMass} μg ൽ:`);
33  console.log(`പ്രോട്ടീൻ കേന്ദ്രീകരണം: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`ആവശ്യമായ സാംപിൾ വോളിയം: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`പിഴവ്: ${error.message}`);
37}
38

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് വിഷുവലൈസേഷൻ

ഒരു നിശ്ചിത പരിധിക്കുള്ളിൽ അബ്സോർബൻസും പ്രൊട്ടീൻ കോൺസൻട്രേഷനും തമ്മിലുള്ള ബന്ധം സാധാരണഗതിയിൽ രൈഖിക ആയിരിക്കും. താഴെ ഒരു സ്റ്റാൻഡേർഡ് BCA കർവിന്റെ വിഷുവലൈസേഷൻ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

അബ്സോർബൻസ് (562 nm) പ്രൊട്ടീൻ കോൺസൻട്രേഷൻ (μg/μL)

സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് സ്റ്റാൻഡേർഡ് സാംപിളുകൾ

BCA സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ്

മറ്റ് പ്രൊട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയ രീതികളുമായുള്ള താരതമ്യം

വ്യത്യസ്ത പ്രൊട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയ രീതികൾക്ക് വ്യത്യസ്ത മേന്മകളും പരിമിതികളും ഉണ്ട്. ബിസിഎ പരിശോധനയുടെ താരതമ്യം മറ്റ് സാധാരണ രീതികളുമായി ഇവിടെ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു:

രീതി	സംവേദനശീലത നിലവാരം	മേന്മകൾ	പരിമിതികൾ	ഏറ്റവും അനുയോജ്യം
ബിസിഎ പരിശോധന	5-2000 μg/mL	• ഡിറ്റർജന്റുകൾക്ക് അനുയോജ്യം • കുറഞ്ഞ പ്രൊട്ടീൻ-മാറ്റിനുള്ള വ്യതിയാനം • സ്ഥിരമായ നിറ വികാസം	• കുറക്കുന്ന ഏജന്റുകൾ ഇടപെടൽ • ചിലർ കേളേറ്റിംഗ് ഏജന്റുകൾ ബാധിക്കുന്നു	• സാധാരണ പ്രൊട്ടീൻ അളവ് • ഡിറ്റർജന്റ് അടങ്ങിയ സാംപിളുകൾ
ബ്രാഡ്ഫോർഡ് പരിശോധന	1-1500 μg/mL	• വേഗം (2-5 മിനിറ്റ്) • കുറഞ്ഞ ഇടപെടൽ	• ഉയർന്ന പ്രൊട്ടീൻ-മാറ്റിനുള്ള വ്യതിയാനം • ഡിറ്റർജന്റുകൾക്ക് അനുയോജ്യമല്ല	• വേഗത്തിലുള്ള അളവുകൾ • ഡിറ്റർജന്റ് രഹിത സാംപിളുകൾ
ലൊവ്രി രീതി	1-1500 μg/mL	• നന്നായി സ്ഥാപിതം • നല്ല സംവേദനശീലത	• പല ഇടപെടൽ വസ്തുക്കൾ • അനേകം ഘട്ടങ്ങൾ	• ഐതിഹാസിക സംഗതത • ശുദ്ധ പ്രൊട്ടീൻ സാംപിളുകൾ
യുവി അബ്സോർബൻസ് (280 nm)	20-3000 μg/mL	• നശിപ്പിക്കാത്ത • വളരെ വേഗം • യാതൊരു രീഏജന്റും വേണ്ട	• ന്യൂക്ലിയിക് ആസിഡുകൾ ബാധിക്കുന്നു • ശുദ്ധ സാംപിളുകൾ ആവശ്യം	• ശുദ്ധ പ്രൊട്ടീൻ സോലൂഷനുകൾ • ശുദ്ധീകരണ സമയത്തെ വേഗ പരിശോധന
ഫ്ലൂറോമെട്രിക്	0.1-500 μg/mL	• ഏറ്റവും ഉയർന്ന സംവേദനശീലത • വിശാലമായ ഡൈനാമിക് പരിധി	• വിലകൂടിയ രീഏജന്റുകൾ • ഫ്ലൂറോമീറ്റർ ആവശ്യം	• വളരെ കുറഞ്ഞ സാംപിളുകൾ • പരിമിതമായ സാംപിൾ വോളിയം

വ്യക്തമാക്കിയ ചോദ്യങ്ങൾ

ബിസിഎ പരിശോധന എന്തിനാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്?

ബിസിഎ പരിശോധനകൾ നിങ്ങളുടെ സാംപിളുകളിലെ മൊത്തം പ്രൊട്ടീൻ സാന്ദ്രത അളക്കുന്നു. വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിന് മുൻപ് സമനിലയിൽ ലോഡ് ചെയ്യുന്നതിന്, എൻസൈം പരിശോധനകളിൽ പ്രവർത്തനം സാധാരണഗതിയിലാക്കുന്നതിന്, പ്രൊട്ടീൻ ശുദ്ധീകരണ സമയത്ത് വിളവ് നിരീക്ഷിക്കുന്നതിന്, അല്ലെങ്കിൽ മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രിക്കിനായി സാംപിളുകൾ തയ്യാറാക്കുന്നതിന് നിങ്ങൾ ഇത് ഉപയോഗിക്കും. ഇത് മൊലിക്യുലർ ബയോളജിയിലെയും ബയോകെമിസ്ട്രിയിലെയും മിക്സ്ട് ലാബുകളിൽ സ്ഥിരം പ്രൊട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയ രീതിയായി മാറിയിരിക്കുന്നു കാരണം ഇത് സാധാരണ സെൽ ലൈസേറ്റുകളിലെ ഡിറ്റർജന്റുകളെയും ബഫർ ഘടകങ്ങളെയും കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നു.

ബിസിഎ പരിശോധന എത്ര കൃത്യമാണ്?

നല്ല സാഹചര്യങ്ങളിൽ, 5-10% കൃത്യത പ്രതീക്ഷിക്കാം. അത് ഒരു ശരിയായ സ്റ്റാൻഡേർഡ് കർവ് (കുറഞ്ഞത് 5-6 പോയിന്റുകൾ നിങ്ങൾ പ്രതീക്ഷിക്കുന്ന സാന്ദ്രത പരിധിയിൽ), പുതിയ റീഏജന്റുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നതിലൂടെയും, നിങ്ങളുടെ സാംപിളുകളിൽ ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയിൽ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന പദാർത്ഥങ്ങൾ ഇല്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കുന്നതിലൂടെയും നിർഭരമാണ്. പ്രൊട്ടീൻ സംഘടന പ്രധാനമാണ്—കൊളാജൻ, ജെലാറ്റിൻ അവരുടെ അമിനോ ആസിഡ് സംഘടനമൂലം അസാധാരണമായി ഉയർന്ന റിഡിംഗുകൾ നൽകുന്നു, മറുവശത്ത് ഹിസ്റ്റോണുകൾ കുറഞ്ഞ റിഡിംഗുകൾ നൽകുന്നു. മിക്സ്ട് പ്രയോഗങ്ങൾക്ക്, 5-10% പിഴവ് സ്വീകാര്യമാണ്, ഏതെങ്കിലും അളവ് ഇല്ലാതെ സാംപിളുകൾ ലോഡ് ചെയ്യുന്നതിനേക്കാൾ വളരെ മെച്ചപ്പെട്ടതാണ്.

(ബാക്കി ഭാഗം തുടരുന്നു...)

സന്ദർഭങ്ങൾ

സ്മിത്ത് പിഡി, ക്രോൺ ആർഐ, ഹെർമൻസൺ ജിടി, മറ്റുള്ളവർ. "ബിസിൻഷിനോണിക് അസിഡ് ഉപയോഗിച്ച് പ്രോട്ടീൻ അളവ്." അനലിറ്റിക്കൽ ബയോകെമിസ്ട്രി. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
തെർമോ സയന്റിഫിക്. "പിയർസ് ബിസിഎ പ്രോട്ടീൻ അളവ് കിറ്റ്." നിർദ്ദേശങ്ങൾ. ലഭ്യമാണ്: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
വാക്കർ ജെഎം. "പ്രോട്ടീൻ അളവിനുള്ള ബിസിൻഷിനോണിക് അസിഡ് (ബിസിഎ) പരിശോധന." വാക്കർ ജെഎം, എഡ്. ദ പ്രോട്ടീൻ പ്രോട്ടോകോൾ ഹാൻഡ്ബുക്ക്. സ്പ്രിംഗർ; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
ഒൾസൺ ബിജെ, മാർക്ക്‌വെൽ ജെ. "പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള പരിശോധനകൾ." കറന്റ് പ്രോട്ടോകോൾസ് ഇൻ പ്രോട്ടീൻ സയൻസ്. 2007;അധ്യായം 3:യൂണിറ്റ് 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
നോബിൽ ജെഇ, ബെയ്‌ലി എംജെ. "പ്രോട്ടീൻ അളവ്." മെത്തഡ്സ് ഇൻ എൻസൈമോളജി. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

പ്രൊട്ടീൻ അളവ് നിർണ്ണയ പ്രക്രിയ ലഘൂകരിക്കുക

BCA പരിശോധനകൾ നിങ്ങൾക്ക് പ്രൊട്ടീൻ സാന്ദ്രതകൾ നൽകുന്നു, പക്ഷേ നിങ്ങൾക്ക് ഇനിയും ഇവ യഥാർഥ പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി പിപ്പറ്റിംഗ് വോളിയങ്ങളിലേക്ക് പരിവർത്തനം ചെയ്യേണ്ടതുണ്ട്. ഈ കാൽക്കുലേറ്റർ ഉടനടി ആ പരിവർത്തനം നടത്തുന്നു, നിങ്ങൾ ഒരു വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ട് തയ്യാറാക്കുകയാണോ അതോ 96 സാംപിളുകൾക്കുള്ള വോളിയങ്ങൾ കണക്കാക്കുകയാണോ. നിങ്ങളുടെ അബ്സോർബൻസ് റീഡിംഗുകൾ നൽകുക, ലക്ഷ്യമിടുന്ന പ്രൊട്ടീൻ അളവുകൾ വ്യക്തമാക്കുക, സ്ഥിരമായ പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾക്കായി കൃത്യമായ വോളിയങ്ങൾ നേടുക.