Калькулятор температури анулювання ДНК для проєктування ПЦР праймерів

Розрахунок оптимальних температур анулювання для ДНК праймерів на основі довжини послідовності та вмісту GC. Необхідно для оптимізації ПЦР та успішного ампліфікації.

Калькулятор температури анулювання ДНК

Послідовність праймера ДНК

Введіть дійсну послідовність ДНК, щоб побачити результати

Про температуру анулювання

Температура анулювання - це оптимальна температура для зв'язування праймерів з шаблонною ДНК під час ПЦР. Вона розраховується на основі вмісту GC та довжини праймера. Вищий вміст GC, як правило, призводить до вищих температур анулювання через сильніше водне зв'язування між парами основ G-C у порівнянні з парами A-T.

📚

Документація

Калькулятор температури анулювання ДНК

Вступ до температури анулювання ДНК

Калькулятор температури анулювання ДНК є важливим інструментом для молекулярних біологів, генетиків та дослідників, які працюють з реакцією полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Температура анулювання відноситься до оптимальної температури, при якій ДНК праймери зв'язуються з їхніми комплементарними послідовностями під час ПЛР. Цей критичний параметр значно впливає на специфічність і ефективність реакцій ПЛР, тому точний розрахунок є життєво важливим для успішних експериментів.

Наш калькулятор температури анулювання ДНК надає простий, але потужний спосіб визначити оптимальну температуру анулювання для ваших ДНК праймерів на основі їхніх характеристик послідовності. Аналізуючи такі фактори, як вміст GC, довжина послідовності та склад нуклеотидів, цей калькулятор надає точні рекомендації щодо температури для оптимізації ваших протоколів ПЛР.

Чи ви розробляєте праймери для ампліфікації генів, виявлення мутацій або секвенування ДНК, розуміння та правильне встановлення температури анулювання є критично важливими для успіху експериментів. Цей калькулятор усуває невизначеність і допомагає вам досягти більш послідовних і надійних результатів ПЛР.

Наука про температуру анулювання

Розуміння анулювання ДНК праймерів

Анулювання ДНК — це процес, коли однониткові ДНК праймери зв'язуються з їхніми комплементарними послідовностями на шаблонній ДНК. Цей етап гібридизації відбувається під час другого етапу кожного циклу ПЛР, між етапами денатурації (розділення ниток) та подовження (синтез ДНК).

Температура анулювання безпосередньо впливає на:

Специфічність: Занадто низькі температури дозволяють неспецифічному зв'язуванню, що призводить до небажаних продуктів
Ефективність: Занадто високі температури заважають правильному зв'язуванню праймерів, знижуючи вихід
Відтворюваність: Послідовні температури анулювання забезпечують надійні результати в різних експериментах

Оптимальна температура анулювання залежить в основному від складу нуклеотидів праймера, з особливим акцентом на пропорцію гуаніну (G) та цитозину (C), відомих як вміст GC.

ДНК нитки розділяються Праймери зв'язуються з шаблоном ДНК полімераза подовжує

Праймер

Роль вмісту GC

Вміст GC формує три водневі зв'язки, тоді як аденін (A) та тимін (T) пари формують лише два. Ця різниця робить послідовності, багаті на GC, більш термостабільними, що вимагає вищих температур для денатурації та анулювання. Основні моменти про вміст GC:

Вищий вміст GC = сильніше зв'язування = вища температура анулювання
Нижчий вміст GC = слабше зв'язування = нижча температура анулювання
Більшість праймерів мають вміст GC між 40-60% для оптимальної продуктивності
Екстремальний вміст GC (нижче 30% або вище 70%) може вимагати спеціальних умов ПЛР

Розгляд довжини праймерів

Довжина праймера також значно впливає на температуру анулювання:

Коротші праймери (15-20 нуклеотидів) зазвичай вимагають нижчих температур анулювання
Довші праймери (25-35 нуклеотидів) зазвичай потребують вищих температур анулювання
Більшість стандартних праймерів ПЛР має довжину від 18 до 30 нуклеотидів
Дуже короткі праймери (<15 нуклеотидів) можуть не мати специфічності незалежно від температури анулювання

Формула розрахунку температури анулювання

Наш калькулятор використовує широко визнану формулу для оцінки температури анулювання (Tm) ДНК праймерів:

$Tm = 64.9 + 41 \times \frac{(GC\% - 16.4)}{N}$

Де:

Tm = Температура анулювання в градусах Цельсія (°C)
GC% = Відсоток G і C нуклеотидів у послідовності праймера
N = Загальна довжина послідовності праймера (кількість нуклеотидів)

Ця формула, основана на термодинамічній моделі найближчого сусіда, надає надійну апроксимацію для праймерів між 18-30 нуклеотидами зі стандартним вмістом GC (40-60%).

Приклад розрахунку

Для праймера з послідовністю ATGCTAGCTAGCTGCTAGC:

Довжина (N) = 19 нуклеотидів
Кількість GC = 9 (нуклеотидів G або C)
GC% = (9/19) × 100 = 47.4%
Tm = 64.9 + 41 × (47.4 - 16.4) / 19
Tm = 64.9 + 41 × 31 / 19
Tm = 64.9 + 41 × 1.63
Tm = 64.9 + 66.83
Tm = 66.83°C

Однак для практичних застосувань ПЛР фактична температура анулювання, що використовується, зазвичай на 5-10°C нижча за розраховану Tm, щоб забезпечити ефективне зв'язування праймерів. Для нашого прикладу з розрахованою Tm 66.83°C рекомендована температура анулювання для ПЛР буде приблизно 56.8-61.8°C.

Як використовувати калькулятор температури анулювання ДНК

Використання нашого калькулятора температури анулювання ДНК є простим:

Введіть вашу послідовність ДНК праймера у поле введення (дозволені лише символи A, T, G і C)
Калькулятор автоматично перевірить вашу послідовність, щоб переконатися, що вона містить лише дійсні нуклеотиди ДНК
Після введення дійсної послідовності калькулятор негайно відобразить:
- Довжину послідовності
- Відсоток вмісту GC
- Розраховану температуру анулювання
Ви можете скопіювати результати за допомогою кнопки копіювання для зручного посилання
Для нового розрахунку просто введіть іншу послідовність праймера

Калькулятор надає зворотний зв'язок у реальному часі, дозволяючи вам швидко тестувати різні дизайни праймерів і порівнювати їхні температури анулювання.

Поради для оптимальних результатів

Введіть повну послідовність праймера без пробілів або спеціальних символів
Для пар праймерів розрахуйте кожен праймер окремо та використовуйте нижчу температуру
Розгляньте можливість використання розрахованої температури як стартової точки, а потім оптимізуйте через експериментальне тестування
Для дегеративних праймерів розрахуйте, використовуючи найбільш GC-багатий можливий варіант

Практичні застосування

Оптимізація ПЛР

Основним застосуванням розрахунку температури анулювання є оптимізація ПЛР. Правильний вибір температури анулювання допомагає:

Збільшити специфічність ампліфікації
Зменшити утворення димерів праймерів
Мінімізувати неспецифічну ампліфікацію
Поліпшити вихід бажаних продуктів
Підвищити відтворюваність експериментів

Багато невдач ПЛР можна віднести до невідповідних температур анулювання, що робить цей розрахунок важливим етапом у проектуванні експериментів.

Дизайн праймерів

При проектуванні праймерів температура анулювання є критичним фактором:

Спробуйте, щоб пари праймерів мали схожі температури анулювання (в межах 5°C один від одного)
Проектуйте праймери з помірним вмістом GC (40-60%) для передбачуваної поведінки анулювання
Уникайте екстремального вмісту GC на 3' кінці праймерів
Розгляньте можливість додавання GC затискачів (нуклеотиди G або C) на 3' кінці для підвищення стабільності зв'язування

Спеціалізовані техніки ПЛР

Різні варіації ПЛР можуть вимагати специфічних підходів до температури анулювання:

Техніка ПЛР	Розгляд температури анулювання
Техніка з поступовим зниженням	Почніть з високої температури та поступово знижуйте
Нестед ПЛР	Внутрішні та зовнішні праймери можуть вимагати різних температур
Мультиплексна ПЛР	Усі праймери повинні мати схожі температури анулювання
Гаряча ПЛР	Вища початкова температура анулювання для зменшення неспецифічного зв'язування
Реальний час ПЛР	Точний контроль температури для послідовної кількісної оцінки

Альтернативні методи розрахунку

Хоча наш калькулятор використовує широко визнану формулу, існує кілька альтернативних методів для розрахунку температури анулювання:

Основна формула: Tm = 2(A+T) + 4(G+C)
- Проста, але менш точна для довгих праймерів
- Підходить для швидких оцінок з короткими праймерами
Правило Уоллеса: Tm = 64.9 + 41 × (GC% - 16.4) / N
- Формула, що використовується в нашому калькуляторі
- Добре поєднання простоти та точності
Метод найближчого сусіда: Використовує термодинамічні параметри
- Найбільш точний метод прогнозування
- Розглядає контекст послідовності, а не лише склад
- Вимагає складних розрахунків або спеціалізованого програмного забезпечення
Формула з урахуванням солі: Включає впливи концентрації солі
- Tm = 81.5 + 16.6 × log10[Na+] + 0.41 × (GC%) - 600/N
- Корисно для нестандартних умов буферизації

Кожен метод має свої переваги та обмеження, але правило Уоллеса забезпечує хороше поєднання точності та простоти для більшості стандартних застосувань ПЛР.

Фактори, що впливають на температуру анулювання

Склад буфера

Іонна сила буфера ПЛР значно впливає на температуру анулювання:

Вищі концентрації солі стабілізують ДНК дуплекси, ефективно підвищуючи температуру анулювання
Концентрація магнію особливо впливає на зв'язування праймерів
Спеціалізовані буфери для шаблонів, багатих на GC, можуть змінювати оптимальні температури анулювання

Складність шаблону ДНК

Природа шаблонної ДНК може впливати на поведінку анулювання:

Геномна ДНК може вимагати вищої строгості (вищої температури анулювання)
Плазмідна або очищена ДНК зазвичай добре працює з стандартними розрахованими температурами
Багаті на GC області можуть вимагати вищих температур денатурації, але нижчих температур анулювання

Добавки для ПЛР

Різні добавки можуть модифікувати поведінку анулювання:

DMSO та бетаїн допомагають зменшити вторинні структури, потенційно знижуючи ефективну температуру анулювання
Формамід знижує температуру плавлення
BSA та інші стабілізуючі агенти можуть вимагати корекцій температури

Історичний контекст

Еволюція ПЛР та розуміння температури анулювання

Концепція температури анулювання ДНК стала критично важливою з розвитком ПЛР Кері Муллісом у 1983 році. Ранні протоколи ПЛР використовували емпіричні підходи для визначення температур анулювання, часто через проби та помилки.

Ключові етапи в розрахунку температури анулювання:

1960-ті: Основи гібридизаційної кінетики ДНК встановлені
1970-ті: Розробка простих формул на основі вмісту GC
1980-ті: Введення ПЛР та визнання важливості температури анулювання
1990-ті: Розробка моделей термодинаміки найближчого сусіда
2000-ті: Обчислювальні інструменти для точного прогнозування температури анулювання
Сьогодення: Інтеграція підходів машинного навчання для прогнозування складних шаблонів

Точність прогнозування температури анулювання значно покращилася з часом, що сприяло широкому впровадженню та успіху технік ПЛР у молекулярній біології.

Приклади коду для розрахунку температури анулювання

Реалізація на Python

1def calculate_gc_content(sequence):
2    """Розрахунок відсотка вмісту GC у послідовності ДНК."""
3    sequence = sequence.upper()
4    gc_count = sequence.count('G') + sequence.count('C')
5    return (gc_count / len(sequence)) * 100 if len(sequence) > 0 else 0
6
7def calculate_annealing_temperature(sequence):
8    """Розрахунок температури анулювання за правилом Уоллеса."""
9    sequence = sequence.upper()
10    if not sequence or not all(base in 'ATGC' for base in sequence):
11        return 0
12        
13    gc_content = calculate_gc_content(sequence)
14    length = len(sequence)
15    
16    # Формула правила Уоллеса
17    tm = 64.9 + 41 * (gc_content - 16.4) / length
18    
19    return round(tm * 10) / 10  # Округлення до 1 знака після коми
20
21# Приклад використання
22primer_sequence = "ATGCTAGCTAGCTGCTAGC"
23gc_content = calculate_gc_content(primer_sequence)
24tm = calculate_annealing_temperature(primer_sequence)
25
26print(f"Послідовність: {primer_sequence}")
27print(f"Довжина: {len(primer_sequence)}")
28print(f"Вміст GC: {gc_content:.1f}%")
29print(f"Температура анулювання: {tm:.1f}°C")
30

Реалізація на JavaScript

1function calculateGCContent(sequence) {
2  if (!sequence) return 0;
3  
4  const upperSequence = sequence.toUpperCase();
5  const gcCount = (upperSequence.match(/[GC]/g) || []).length;
6  return (gcCount / upperSequence.length) * 100;
7}
8
9function calculateAnnealingTemperature(sequence) {
10  if (!sequence) return 0;
11  
12  const upperSequence = sequence.toUpperCase();
13  // Перевірка дійсності послідовності ДНК (дозволені лише A, T, G, C)
14  if (!/^[ATGC]+$/.test(upperSequence)) return 0;
15  
16  const length = upperSequence.length;
17  const gcContent = calculateGCContent(upperSequence);
18  
19  // Формула правила Уоллеса
20  const annealingTemp = 64.9 + (41 * (gcContent - 16.4)) / length;
21  
22  // Округлення до 1 знака після коми
23  return Math.round(annealingTemp * 10) / 10;
24}
25
26// Приклад використання
27const primerSequence = "ATGCTAGCTAGCTGCTAGC";
28const gcContent = calculateGCContent(primerSequence);
29const tm = calculateAnnealingTemperature(primerSequence);
30
31console.log(`Послідовність: ${primerSequence}`);
32console.log(`Довжина: ${primerSequence.length}`);
33console.log(`Вміст GC: ${gcContent.toFixed(1)}%`);
34console.log(`Температура анулювання: ${tm.toFixed(1)}°C`);
35

Реалізація на R

1calculate_gc_content <- function(sequence) {
2  if (nchar(sequence) == 0) return(0)
3  
4  sequence <- toupper(sequence)
5  gc_count <- sum(strsplit(sequence, "")[[1]] %in% c("G", "C"))
6  return((gc_count / nchar(sequence)) * 100)
7}
8
9calculate_annealing_temperature <- function(sequence) {
10  if (nchar(sequence) == 0) return(0)
11  
12  sequence <- toupper(sequence)
13  # Перевірка дійсності послідовності ДНК
14  if (!all(strsplit(sequence, "")[[1]] %in% c("A", "T", "G", "C"))) return(0)
15  
16  gc_content <- calculate_gc_content(sequence)
17  length <- nchar(sequence)
18  
19  # Формула правила Уоллеса
20  tm <- 64.9 + 41 * (gc_content - 16.4) / length
21  
22  return(round(tm, 1))
23}
24
25# Приклад використання
26primer_sequence <- "ATGCTAGCTAGCTGCTAGC"
27gc_content <- calculate_gc_content(primer_sequence)
28tm <- calculate_annealing_temperature(primer_sequence)
29
30cat(sprintf("Послідовність: %s\n", primer_sequence))
31cat(sprintf("Довжина: %d\n", nchar(primer_sequence)))
32cat(sprintf("Вміст GC: %.1f%%\n", gc_content))
33cat(sprintf("Температура анулювання: %.1f°C\n", tm))
34

Формула для Excel

1' Розрахунок вмісту GC в клітинці A1
2=SUM(LEN(A1)-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"G",""))-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"C","")))/LEN(A1)*100
3
4' Розрахунок температури анулювання за правилом Уоллеса
5=64.9+41*((SUM(LEN(A1)-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"G",""))-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"C","")))/LEN(A1)*100)-16.4)/LEN(A1)
6

Часті запитання (FAQ)

Що таке температура анулювання ДНК?

Температура анулювання ДНК — це оптимальна температура, при якій праймери ДНК специфічно зв'язуються зі своїми комплементарними послідовностями під час ПЛР. Це критичний параметр, який впливає на специфічність і ефективність реакцій ПЛР. Ідеальна температура анулювання дозволяє праймерам зв'язуватися лише з їхніми цільовими послідовностями, мінімізуючи неспецифічну ампліфікацію.

Як вміст GC впливає на температуру анулювання?

Вміст GC значно впливає на температуру анулювання, оскільки пари основ G-C формують три водневі зв'язки, тоді як пари A-T формують лише два. Вищий вміст GC призводить до сильнішого зв'язування і вимагає вищих температур анулювання. Кожен 1% збільшення вмісту GC зазвичай підвищує температуру плавлення приблизно на 0.4°C, що, в свою чергу, впливає на оптимальну температуру анулювання.

Що станеться, якщо я використаю неправильну температуру анулювання?

Використання неправильної температури анулювання може призвести до кількох проблем ПЛР:

Занадто низька: неспецифічне зв'язування, кілька смуг, димери праймерів та фонове ампліфікування
Занадто висока: погане або відсутнє ампліфікування через неефективне зв'язування праймерів
Оптимальна: чисте, специфічне ампліфікування цільової послідовності

Чи слід використовувати точну розраховану температуру анулювання?

Розрахована температура анулювання слугує як відправна точка. На практиці оптимальна температура анулювання зазвичай на 5-10°C нижча за розраховану температуру плавлення (Tm). Для складних шаблонів або праймерів часто корисно провести ПЛР з градієнтом температури, щоб емпірично визначити найкращу температуру анулювання.

Як я можу розрахувати температуру анулювання для пар праймерів?

Для пар праймерів розрахуйте Tm для кожного праймера окремо. Як правило, використовуйте температуру анулювання на основі праймера з нижчою Tm, щоб забезпечити ефективне зв'язування обох праймерів. Ідеально, щоб пари праймерів мали схожі значення Tm (в межах 5°C один від одного) для оптимальної продуктивності ПЛР.

Чи можу я використовувати цей калькулятор для дегеративних праймерів?

Цей калькулятор розроблений для стандартних ДНК праймерів, що містять лише нуклеотиди A, T, G і C. Для дегеративних праймерів, що містять неоднозначні основи (наприклад, R, Y, N), калькулятор може не надавати точних результатів. У таких випадках розгляньте можливість розрахунку Tm для найбільш GC-багатих і AT-багатих можливих комбінацій, щоб встановити діапазон температур.

Як довжина праймера впливає на температуру анулювання?

Довжина праймера обернено впливає на вплив вмісту GC на температуру анулювання. У довших праймерах вплив вмісту GC розподіляється на більшу кількість нуклеотидів. Формула враховує це, ділячи фактор вмісту GC на довжину праймера. Загалом, довші праймери мають більш стабільне зв'язування і можуть терпіти вищі температури анулювання.

Чому різні калькулятори дають різні температури анулювання?

Різні калькулятори температури анулювання використовують різні формули та алгоритми, включаючи:

Основні формули вмісту GC
Правило Уоллеса (використовується в цьому калькуляторі)
Моделі термодинаміки найближчого сусіда
Розрахунки з урахуванням солі

Ці різні підходи можуть призвести до варіацій температури на 5-10°C для однієї й тієї ж послідовності праймера. Правило Уоллеса забезпечує хороше поєднання простоти та точності для більшості стандартних застосувань ПЛР.

Як добавки для ПЛР впливають на температуру анулювання?

Звичайні добавки для ПЛР можуть значно змінювати ефективну температуру анулювання:

DMSO: Зазвичай знижує Tm на 5.5-6.0°C на кожні 10% DMSO
Бетаїн: Знижує Tm, вирівнюючи внесок GC і AT пар основ
Формамід: Знижує Tm приблизно на 2.4-2.9°C на кожні 10% формаміду
Гліцерин: Може або підвищувати, або знижувати Tm залежно від концентрації

При використанні цих добавок вам, можливо, доведеться відповідно коригувати температуру анулювання.

Чи можу я використовувати цей калькулятор для qPCR/реального часу ПЛР?

Так, цей калькулятор можна використовувати для дизайну праймерів qPCR. Однак реальний час ПЛР часто використовує коротші амплікони і може вимагати більш суворих критеріїв дизайну праймерів. Для оптимальних результатів qPCR розгляньте додаткові фактори, такі як довжина амплікона (ідеально 70-150 бп) та утворення вторинних структур.

Джерела

Rychlik W, Spencer WJ, Rhoads RE. Оптимізація температури анулювання для ампліфікації ДНК in vitro. Nucleic Acids Res. 1990;18(21):6409-6412. doi:10.1093/nar/18.21.6409
SantaLucia J Jr. Єдине уявлення про термодинаміку найближчого сусіда для полімерів, дуплексів і олігонуклеотидів ДНК. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998;95(4):1460-1465. doi:10.1073/pnas.95.4.1460
Lorenz TC. Полімеразна ланцюгова реакція: базовий протокол плюс стратегії усунення неполадок та оптимізації. J Vis Exp. 2012;(63):e3998. doi:10.3791/3998
Innis MA, Gelfand DH, Sninsky JJ, White TJ, eds. Протоколи ПЛР: Посібник з методів та застосувань. Academic Press; 1990.
Mullis KB. Незвичайне походження полімеразної ланцюгової реакції. Sci Am. 1990;262(4):56-65. doi:10.1038/scientificamerican0490-56
Wallace RB, Shaffer J, Murphy RF, Bonner J, Hirose T, Itakura K. Гібридизація синтетичних олігодезоксирибонуклеотидів до ДНК phi chi 174: вплив однієї пари основ. Nucleic Acids Res. 1979;6(11):3543-3557. doi:10.1093/nar/6.11.3543
Owczarzy R, Moreira BG, You Y, Behlke MA, Walder JA. Прогнозування стабільності дуплексів ДНК у розчинах, що містять магній та моновалентні катіони. Biochemistry. 2008;47(19):5336-5353. doi:10.1021/bi702363u
Dieffenbach CW, Lowe TM, Dveksler GS. Загальні концепції для дизайну праймерів ПЛР. PCR Methods Appl. 1993;3(3):S30-S37. doi:10.1101/gr.3.3.s30

Висновок

Калькулятор температури анулювання ДНК надає цінний інструмент для молекулярних біологів та дослідників, які працюють з ПЛР. Точно визначаючи оптимальну температуру анулювання для ДНК праймерів, ви можете значно покращити специфічність, ефективність і відтворюваність ваших експериментів ПЛР.

Пам'ятайте, що хоча калькулятор надає науково обґрунтовану відправну точку, оптимізація ПЛР часто вимагає експериментального тестування. Розглядайте розраховану температуру анулювання як орієнтир і будьте готові до корекцій на основі експериментальних результатів.

Для складних шаблонів, складних ампліфікацій або спеціалізованих застосувань ПЛР вам, можливо, доведеться провести ПЛР з градієнтом температури або дослідити альтернативні методи розрахунку. Однак для більшості стандартних застосувань ПЛР цей калькулятор пропонує надійну основу для успішних експериментів.

Спробуйте наш калькулятор температури анулювання ДНК сьогодні, щоб покращити ваші протоколи ПЛР і досягти більш послідовних, специфічних результатів ампліфікації у вашому дослідженні молекулярної біології.

💬

Зворотній зв'язок

💬

Клацніть на спливаюче вікно зворотного зв'язку, щоб почати надавати відгуки про цей інструмент

🔗

Пов'язані Інструменти

Відкрийте більше інструментів, які можуть бути корисними для вашого робочого процесу

Калькулятор температури анулювання ДНК для проєктування ПЦР праймерів

Калькулятор температури анулювання ДНК

Про температуру анулювання

Документація

Калькулятор температури анулювання ДНК

Вступ до температури анулювання ДНК

Наука про температуру анулювання

Розуміння анулювання ДНК праймерів

Роль вмісту GC

Розгляд довжини праймерів

Формула розрахунку температури анулювання

Приклад розрахунку

Як використовувати калькулятор температури анулювання ДНК

Поради для оптимальних результатів

Практичні застосування

Оптимізація ПЛР

Дизайн праймерів

Спеціалізовані техніки ПЛР

Альтернативні методи розрахунку

Фактори, що впливають на температуру анулювання

Склад буфера

Складність шаблону ДНК

Добавки для ПЛР

Історичний контекст

Еволюція ПЛР та розуміння температури анулювання

Приклади коду для розрахунку температури анулювання

Реалізація на Python

Реалізація на JavaScript

Реалізація на R

Формула для Excel

Часті запитання (FAQ)

Що таке температура анулювання ДНК?

Як вміст GC впливає на температуру анулювання?

Що станеться, якщо я використаю неправильну температуру анулювання?

Чи слід використовувати точну розраховану температуру анулювання?

Як я можу розрахувати температуру анулювання для пар праймерів?

Чи можу я використовувати цей калькулятор для дегеративних праймерів?

Як довжина праймера впливає на температуру анулювання?

Чому різні калькулятори дають різні температури анулювання?

Як добавки для ПЛР впливають на температуру анулювання?

Чи можу я використовувати цей калькулятор для qPCR/реального часу ПЛР?

Джерела

Висновок

Зворотній зв'язок

Пов'язані Інструменти

Калькулятор концентрації ДНК: Перетворення A260 на нг/μL

Калькулятор лігації ДНК для експериментів з молекулярного клонування

Трекер генетичних варіацій: Розрахунок частот алелів у популяціях

Калькулятор гамма-розподілу для статистичного аналізу