ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ

ਪਰੀਚਯ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨੀ, ਜੈਨੇਟਿਸਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਤਕਨੀਕੀ ਵਿਦਿਆਰਥੀਆਂ ਲਈ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਉਪਕਰਣ ਹੈ ਜੋ ਆਪਣੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਜਰੂਰਤ ਹੈ। ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ, ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ, ਕਲੋਨਿੰਗ ਅਤੇ ਹੋਰ ਮੌਲਿਕ ਤਕਨੀਕਾਂ ਵਰਗੇ ਨਿਮਰਤਾਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਕਦਮ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ 260nm (A260) 'ਤੇ ਯੂਵੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੇਟ੍ਰਿਕ ਸਿਧਾਂਤਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਮਿਆਰੀ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮੂਲ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪਾਤਲਤਾ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।

ਸਾਡਾ ਉਪਯੋਗਕਰਤਾ-ਮਿੱਤਰ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ (ng/μL) ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਆਸਾਨ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਮੈਨੂਅਲ ਗਣਨਾ ਦੀ ਲੋੜ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਗਣਿਤ ਗਲਤੀਆਂ ਦੇ ਖਤਰੇ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਚਾਹੇ ਤੁਸੀਂ ਅਗਲੇ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੀ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਤਿਆਰ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ, ਪਲਾਸਮਿਡ ਤਿਆਰੀਆਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ, ਜਾਂ ਜੈਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨਿਕਾਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਲੈ ਰਹੇ ਹੋ, ਇਹ ਟੂਲ ਤੁਹਾਡੇ ਖੋਜ ਅਤੇ ਨਿਦਾਨ ਕਾਰਜਪ੍ਰਵਾਹਾਂ ਨੂੰ ਸਮਰਥਨ ਦੇਣ ਲਈ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਕਿਵੇਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ

ਬੁਨਿਆਦੀ ਸਿਧਾਂਤ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਬੀਅਰ-ਲੈਂਬਰਟ ਕਾਨੂੰਨ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹੈ, ਜੋ ਕਹਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇੱਕ ਹੱਲ ਦੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਉਸ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਅਬਜ਼ਾਰਬਿੰਗ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਅਤੇ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਲਾਈਟ ਦੇ ਰਸਤੇ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨਾਲ ਸਿੱਧੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ। ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ, 1.0 'ਤੇ 260nm (A260) ਦੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ 1cm ਪਾਥ ਲੰਬਾਈ ਕੂਵੇਟ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 50 ng/μL ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ।

ਫਾਰਮੂਲਾ

ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:

$\text{ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ}$

ਜਿੱਥੇ:

• A260 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਪੜ੍ਹਾਈ ਹੈ
• 50 ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ ਹੈ (A260 = 1.0 ਲਈ 50 ng/μL)
• ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਉਹ ਕਾਰਕ ਹੈ ਜਿਸ ਨਾਲ ਮੂਲ ਨਮੂਨਾ ਮਾਪਣ ਲਈ ਪਾਤਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ

ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਫਿਰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੁਆਰਾ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ:

$\text{ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ (μg)} = \frac{\text{ਸੰਕੇਦਰਤਾ (ng/μL)} \times \text{ਵੋਲਿਊਮ (μL)}}{1000}$

ਚਰਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ

1. 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ (A260):

   • ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਦੁਆਰਾ ਅਬਜ਼ੋਰਬ ਕੀਤੀ ਗਈ ਯੂਵੀ ਲਾਈਟ ਦੀ ਮਾਪ ਹੈ
   • ਡੀਐਨਏ ਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡ (ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨਸ ਬੇਸ) 260nm 'ਤੇ ਯੂਵੀ ਲਾਈਟ ਨੂੰ ਅਬਜ਼ੋਰਬ ਕਰਦੇ ਹਨ
   • ਜਿੰਨਾ ਵੱਧ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ, ਉਨਾ ਵੱਧ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੈ

2. ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ (50):

   • ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ 50 ng/μL ਹੈ
   • ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ, ਕਾਰਕ 33 ng/μL ਹੈ
   • ਆਰਐਨਏ ਲਈ, ਕਾਰਕ 40 ng/μL ਹੈ
   • ਓਲਿਗੋਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡ ਲਈ, ਕਾਰਕ ਲੜੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ

3. ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ:

   • ਜੇਕਰ ਨਮੂਨਾ ਮਾਪਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪਾਤਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਜਿਵੇਂ 1 ਭਾਗ ਨਮੂਨਾ ਅਤੇ 9 ਭਾਗ ਬਫਰ = ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ 10)
   • ਇਹ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ: (ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ + ਪੈਰਾਈ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ) ÷ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ
   • ਮੂਲ, ਅਣਪਾਤਲਿਤ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ

4. ਵੋਲਿਊਮ:

   • ਤੁਹਾਡੇ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਕੁੱਲ ਵੋਲਿਊਮ ਮਾਈਕ੍ਰੋਲੀਟਰ (μL) ਵਿੱਚ
   • ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ

ਇਸ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਦਾ ਉਪਯੋਗ ਕਿਵੇਂ ਕਰਨਾ ਹੈ

ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਕਦਮਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ:

1. ਆਪਣਾ ਨਮੂਨਾ ਤਿਆਰ ਕਰੋ:

   • ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਤੁਹਾਡਾ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਾ ਸਹੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਘੋਲਿਆ ਅਤੇ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ
   • ਜੇਕਰ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਉੱਚ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਪਾਤਲਤਾ ਤਿਆਰ ਕਰੋ ਕਿ ਪੜ੍ਹਾਈ ਲੀਨੀਅਰ ਰੇਂਜ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ A260 0.1 ਅਤੇ 1.0 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ) ਵਿੱਚ ਆਉਂਦੀ ਹੈ

2. ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਮਾਪੋ:

   • 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਇੱਕ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਜਾਂ ਨੈਨੋਡ੍ਰੌਪ ਡਿਵਾਈਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ
   • ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਲੈਣ ਲਈ 280nm 'ਤੇ ਵੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਮਾਪੋ (A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ)
   • ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਘੋਲਣ/ਪਾਤਲ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਬਫਰ ਨੂੰ ਬਲੈਂਕ ਰੈਫਰੈਂਸ ਵਜੋਂ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ

3. ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਵਿੱਚ ਮੁੱਲ ਦਰਜ ਕਰੋ:

   • "260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ" ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਮਾਪੀ ਗਈ A260 ਮੁੱਲ ਦਰਜ ਕਰੋ
   • ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਕੁੱਲ ਵੋਲਿਊਮ ਮਾਈਕ੍ਰੋਲੀਟਰ ਵਿੱਚ ਦਰਜ ਕਰੋ
   • ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਦਰਜ ਕਰੋ (ਜੇਕਰ ਕੋਈ ਪਾਤਲਤਾ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਤਾਂ 1 ਵਰਤੋਂ)

4. ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰੋ:

   • ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ng/μL ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏਗਾ
   • ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ μg ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਜਾਵੇਗੀ
   • ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀਆਂ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇਹ ਮੁੱਲ ਵਰਤੋਂ

5. ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਮੂਲਾਂਕਣ ਕਰੋ (ਜੇਕਰ A280 ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ):

   • A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ~1.8 ਸ਼ੁੱਧ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ
   • ਘੱਟ ਅਨੁਪਾਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ
   • ਵੱਧ ਅਨੁਪਾਤ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ

ਉਪਯੋਗ ਕੇਸ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਕਈ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟੈਕਨੋਲੋਜੀ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ:

ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ

ਡੀਐਨਏ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਈਗੇਟ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਸਹੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਜਾਣਣਾ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਇੰਸਰਟ-ਟੂ-ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫੋਰਮੇਸ਼ਨ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਵਧਦੀ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ, 3:1 ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਇੰਸਰਟ ਅਤੇ ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਦੋਹਾਂ ਘਟਕਾਂ ਦੀ ਸਹੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਕਿਊਪੀਸੀਐਰ

ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1-10 ng ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਵਧੀਆ ਵਧਾਉਣ ਲਈ। ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਡੀਐਨਏ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਅਸਫਲਤਾ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਮਾਤਰਕ ਪੀਸੀਆਰ (ਕਿਊਪੀਸੀਐਰ) ਲਈ, ਹੋਰ ਵੀ ਵੱਧ ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਸਹੀ ਮਿਆਰੀ ਵਕਰਾਂ ਅਤੇ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।

ਅਗਲੇ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੀ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ (ਐਨਜੀਐਸ)

ਐਨਜੀਐਸ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਇੰਪੁੱਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਜੋ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ 1-500 ng ਦੇ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਸਫਲ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸਡ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਦੌਰਾਨ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਸੰਤੁਲਿਤ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਲਈ ਸਹੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।

ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਯੋਗ

ਯੂਕੈਰੀਓਟਿਕ ਕੋਸ਼ਿਕਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਨ ਵੇਲੇ, ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਕਿਸਮ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 6-ਵੈੱਲ ਪਲੇਟ ਫਾਰਮੈਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਵੈੱਲ 0.5-5 μg ਪਲਾਸਮਿਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਸਟੈਂਡਰਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਸਹੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਡੀਐਨਏ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ

ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੀਮਤ ਅਤੇ ਕੀਮਤੀ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਸਹੀ ਮਾਪਣ ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਵਿਗਿਆਨੀਆਂ ਨੂੰ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਿੰਗ ਲਈ ਯੋਗ ਡੀਐਨਏ ਮੌਜੂਦ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਸਟੈਂਡਰਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ।

ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਡਾਈਜੈਸ਼ਨ

ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਇਕਾਈਆਂ μg ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀ ਵੱਖਰੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਜਾਣਨ ਨਾਲ ਸਹੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ-ਟੂ-ਡੀਐਨਏ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਲਈ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਡਾਈਜੈਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਸਟਾਰ ਐਕਟਿਵਿਟੀ (ਗੈਰ-ਸਪਸ਼ਟ ਕੱਟਣਾ) ਦੇ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੇਟ੍ਰਿਕ ਮਾਪਣ ਦੇ ਵਿਕਲਪ

ਜਦੋਂ ਕਿ ਯੂਵੀ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੇਟਰੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਤਰੀਕਾ ਹੈ, ਕਈ ਵਿਕਲਪ ਮੌਜੂਦ ਹਨ:

1. ਫਲੋਰੋਮੈਟਰਿਕ ਤਰੀਕੇ:

   • ਪੀਕੋਗ੍ਰੀਨ, ਕੁਬਿਟ, ਅਤੇ ਐਸਵਾਈਬੀਆਰ ਗ੍ਰੀਨ ਵਰਗੇ ਫਲੋਰੇਸੈਂਟ ਡਾਈਆਂ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬੰਨ੍ਹਦੇ ਹਨ
   • ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਿੱਚ ਵੱਧ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ (25 pg/mL ਤੱਕ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦੇ ਹਨ)
   • ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਆਰਐਨਏ ਜਾਂ ਮੁਕਤ ਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡਸ ਵਰਗੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕਾਂ ਦੁਆਰਾ ਘੱਟ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ
   • ਫਲੋਰੋਮੀਟਰ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਰੀਏਜੈਂਟ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ

2. ਅਗਰੋਜ਼ ਜੈਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ:

   • ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਪਣ ਲਈ ਬੈਂਡ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦੇਣ ਵਾਲੇ ਮਿਆਰੀਆਂ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ
   • ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਅਖੰਡਤਾ ਬਾਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਇੱਕਸਾਥੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ
   • ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਜਾਂ ਫਲੋਰੋਮੈਟਰਿਕ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਸਹੀ
   • ਸਮੇਂ ਦੀ ਖਪਤ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਪਰ ਵਿਜ਼ੂਅਲ ਪੁਸ਼ਟੀ ਲਈ ਲਾਭਦਾਇਕ

3. ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ:

   • ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਡੀਐਨਏ ਲੜੀਆਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਮਾਪਣ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਤਰੀਕਾ
   • ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸੰਕੇਦਰਤਾਵਾਂ (ਕੁਝ ਨਕਲਾਂ ਤੱਕ) ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਦੀ ਸਮਰਥਾ
   • ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾ ਜਟਿਲ ਉਪਕਰਣ ਦੀ ਲੋੜ
   • ਜਦੋਂ ਲੜੀ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਵੇ

4. ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ:

   • ਬਿਨਾਂ ਮਿਆਰੀ ਵਕਰਾਂ ਦੇ ਅਬਸੋਲੂਟ ਮਾਪਣ
   • ਘੱਟ-ਅਬੰਧ ਟਾਰਗੇਟਾਂ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸਹੀ
   • ਮਹਿੰਗਾ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਉਪਕਰਣ ਦੀ ਲੋੜ
   • ਦੁਰਲਭ ਮਿਊਟੇਸ਼ਨ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਅਤੇ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਵੱਖਰੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦਾ ਇਤਿਹਾਸ

ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਮਾਪਣ ਦੀ ਸਮਰਥਾ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟੀ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਦਲ ਗਈ ਹੈ:

ਪਹਿਲੇ ਤਰੀਕੇ (1950-1960)

1953 ਵਿੱਚ ਵਾਟਸਨ ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਕ ਦੁਆਰਾ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਬਣਤਰ ਦੀ ਖੋਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਵਿਗਿਆਨੀ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਅਤੇ ਮਾਪਣ ਦੇ ਤਰੀਕੇ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਲੱਗੇ। ਪਹਿਲੇ ਤਰੀਕੇ ਰੰਗਦਾਰ ਅਸੈਸਮੈਂਟਾਂ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਸਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡਿਪਹੇਨਿਲਾਮੀਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ, ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਡੀਓਕਸੀਰਾਈਬੋਜ਼ ਸ਼ਰਾਬਾਂ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਕੇ ਨੀਲਾ ਰੰਗ ਉਤਪੰਨ ਕਰਦੀ ਸੀ। ਇਹ ਤਰੀਕੇ ਅਨੁਪਾਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਦਖਲ ਦੇ ਅਸਰ ਦੇ ਅਧੀਨ ਸਨ।

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਯੁੱਗ (1970)

1970 ਦੇ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਮਾਪਣ ਲਈ ਯੂਵੀ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵਿਸ਼ਾਲ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਹੋ ਗਈ। ਵਿਗਿਆਨੀ ਇਹ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਵਿੱਚ ਸਫਲ ਰਹੇ ਕਿ ਡੀਐਨਏ 260nm 'ਤੇ ਯੂਵੀ ਲਾਈਟ ਨੂੰ ਅਬਜ਼ੋਰਬ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਿ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਅਤੇ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸੰਬੰਧ ਇੱਕ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਰੇਂਜ ਦੇ ਅੰਦਰ ਲੀਨੀਅਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। A260 = 1.0 'ਤੇ 50 ng/μL ਲਈ 50 ng/μL ਦਾ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ ਇਸ ਦੌਰਾਨ ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।

ਫਲੋਰੋਮੈਟਰਿਕ ਕ੍ਰਾਂਤੀ (1980-1990)

1980 ਅਤੇ 1990 ਦੇ ਦਹਾਕਿਆਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਫਲੋਰੇਸੈਂਟ ਡਾਈਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੇ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਾਂਤੀ ਲਿਆਈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਪਾਤਲ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ। ਹੋਇਸਟ ਡਾਈਆਂ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਪੀਕੋਗ੍ਰੀਨ ਨੇ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਨਾਲੋਂ ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਦੀ ਸਮਰਥਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ। ਇਹ ਤਰੀਕੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਆਗਮਨ ਨਾਲ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੋ ਗਏ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸਹੀ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਆਧੁਨਿਕ ਯੁੱਗ (2000-ਵਰਤਮਾਨ)

2000 ਦੇ ਸ਼ੁਰੂ ਵਿੱਚ ਨੈਨੋਡ੍ਰੌਪ ਵਰਗੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੋਲਿਊਮ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟਰਾਂ ਦੀ ਪੇਸ਼ਕਸ਼ ਨੇ ਰੁਟੀਨ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਨੂੰ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਿਰਫ 0.5-2 μL ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਲੋੜ ਪਈ। ਇਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੇ ਪਾਤਲਤਾ ਅਤੇ ਕੂਵੇਟਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰ ਦਿੱਤਾ, ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਬਣਾਇਆ।

ਅੱਜ, ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੀ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਵਰਗੀਆਂ ਉੱਚ ਤਕਨੀਕਾਂ ਨੇ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਦੀਆਂ ਸੀਮਾਵਾਂ ਨੂੰ ਹੋਰ ਵੀ ਵਧਾਇਆ ਹੈ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲੜੀਆਂ ਦੇ ਅਬਸੋਲੂਟ ਮਾਪਣ ਅਤੇ ਇਕ-ਮੋਲੀਕਿਊਲ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਸਿਧਾਂਤ ਜੋ ਦਹਾਕਿਆਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਰੁਟੀਨ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦਾ ਪਿੱਛਾ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਹੈ।

ਪ੍ਰਯੋਗਿਕ ਉਦਾਹਰਣ

ਆਓ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਦੇ ਕੁਝ ਪ੍ਰਯੋਗਿਕ ਉਦਾਹਰਣਾਂ 'ਤੇ ਚੱਲੀਏ:

ਉਦਾਹਰਣ 1: ਮਿਆਰੀ ਪਲਾਸਮਿਡ ਤਿਆਰੀ

ਇੱਕ ਖੋਜਕਰਤਾ ਨੇ ਇੱਕ ਪਲਾਸਮਿਡ ਨੂੰ ਪੁਰਾਣਾ ਕੀਤਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀਆਂ ਮਾਪਾਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀਆਂ ਹਨ:

• A260 ਪੜ੍ਹਾਈ: 0.75
• ਪਾਤਲਤਾ: 1:10 (ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ = 10)
• ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ: 50 μL

ਗਣਨਾ:

• ਸੰਕੇਦਰਤਾ = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

ਉਦਾਹਰਣ 2: ਜੈਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨਿਕਾਸ

ਖੂਨ ਤੋਂ ਜੈਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨਿਕਾਸ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ:

• A260 ਪੜ੍ਹਾਈ: 0.15
• ਕੋਈ ਪਾਤਲਤਾ ਨਹੀਂ (ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ = 1)
• ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ: 200 μL

ਗਣਨਾ:

• ਸੰਕੇਦਰਤਾ = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

ਉਦਾਹਰਣ 3: ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਲਈ ਡੀਐਨਏ ਤਿਆਰ ਕਰਨਾ

ਇੱਕ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਨੂੰ ਬਿਲਕੁਲ 500 ng ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ:

• ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ: 125 ng/μL
• ਲੋੜੀਂਦੀ ਮਾਤਰਾ: 500 ng

ਲੋੜੀਂਦਾ ਵੋਲਿਊਮ = 500 ÷ 125 = 4 μL ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ

ਕੋਡ ਉਦਾਹਰਣ

ਇੱਥੇ ਕੁਝ ਪ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮਿੰਗ ਭਾਸ਼ਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੇ ਉਦਾਹਰਣ ਹਨ:

1' Excel ਫਾਰਮੂਲਾ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਲਈ
2=A260*50*ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ
3
4' Excel ਫਾਰਮੂਲਾ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ μg ਵਿੱਚ
5=(A260*50*ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ*ਵੋਲਿਊਮ)/1000
6
7' A260=0.5, ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ=2, ਵੋਲਿਊਮ=100 ਨਾਲ ਇੱਕ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਉਦਾਹਰਣ
8=0.5*50*2*100/1000
9' ਨਤੀਜਾ: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ng/μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
4    
5    ਪੈਰਾਮੀਟਰ:
6    absorbance (float): 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਪੜ੍ਹਾਈ
7    dilution_factor (float): ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ
8    
9    ਵਾਪਸੀ:
10    float: ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ
11    """
12    return absorbance * 50 * dilution_factor
13
14def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
15    """
16    μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
17    
18    ਪੈਰਾਮੀਟਰ:
19    concentration (float): ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ
20    volume_ul (float): μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ
21    
22    ਵਾਪਸੀ:
23    float: μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ
24    """
25    return (concentration * volume_ul) / 1000
26
27# ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
28absorbance = 0.8
29dilution_factor = 5
30volume = 75
31
32concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
33total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
34
35print(f"ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ: {concentration:.2f} ng/μL")
36print(f"ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ: {total_dna:.2f} μg")
37

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
4     * 
5     * @param absorbance 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਪੜ੍ਹਾਈ
6     * @param dilutionFactor ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ
7     * @return ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
15     * 
16     * @param concentration ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ
17     * @param volumeUL μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ
18     * @return μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# R ਫੰਕਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਲਈ
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ: %.2f μg\n", total_dna))
23

ਅਕਸਰ ਪੁੱਛੇ ਜਾਂਦੇ ਸਵਾਲ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਵਿੱਚ ਕੀ ਫਰਕ ਹੈ?

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਇੱਕ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ng/μL ਜਾਂ μg/mL ਵਿੱਚ ਮਾਪੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਤੁਹਾਨੂੰ ਦੱਸਦੀ ਹੈ ਕਿ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਕਿੰਨਾ ਡੀਐਨਏ ਹੈ ਪਰ ਇਸ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਨਹੀਂ। ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਤੁਹਾਡੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਲੈਂਦੀ ਹੈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ A260/A280 (ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਲਈ) ਅਤੇ A260/A230 (ਜੈਵਿਕ ਯੋਗਿਕਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਲਈ) ਦੇ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦੁਆਰਾ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਸ਼ੁੱਧ ਡੀਐਨਏ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ~1.8 ਅਤੇ A260/A230 ਅਨੁਪਾਤ 2.0-2.2 ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ ਡੀਐਨਏ, ਆਰਐਨਏ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲਈ ਵੱਖਰੇ ਕਿਉਂ ਹਨ?

ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ ਵੱਖਰੇ ਹਨ ਕਿਉਂਕਿ ਹਰ ਬਾਇਓਮੋਲਿਕਿਊਲ ਦੀ ਵਿਲੱਖਣ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਗੁਣਕ (ਲਾਈਟ ਨੂੰ ਅਬਜ਼ੋਰਬ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰਥਾ) ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜਿਸ ਦੇ ਕਾਰਨ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵੱਖਰੇ ਰਸਾਇਣਕ ਸੰਰਚਨਾ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ A260=1.0 'ਤੇ 50 ng/μL ਹੈ, ਜਦਕਿ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ 33 ng/μL ਹੈ, ਆਰਐਨਏ 40 ng/μL ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (280nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ) ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ 1 mg/mL ਦੇ ਆਸ-ਪਾਸ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਫਰਕ ਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡ ਜਾਂ ਐਮੀਨੋ ਐਸਿਡਾਂ ਦੇ ਵੱਖਰੇ ਸੰਰਚਨਾ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਗੁਣਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਦੀ ਸਹੀਤਾ ਕਿੰਨੀ ਹੈ?

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲੀਨੀਅਰ ਰੇਂਜ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸਹੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ A260 0.1 ਅਤੇ 1.0 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ), ਜਿਸ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਲਗਭਗ ±3-5% ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸੰਕੇਦਰਤਾਵਾਂ (5 ng/μL ਤੋਂ ਘੱਟ) 'ਤੇ ਸਹੀਤਾ ਘਟਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕਾਂ ਜਿਵੇਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਆਰਐਨਏ, ਮੁਕਤ ਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡ ਜਾਂ ਕੁਝ ਬਫਰਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਬਹੁਤ ਪਾਤਲ ਨਮੂਨਿਆਂ ਜਾਂ ਜਦੋਂ ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਫਲੋਰੋਮੈਟਰਿਕ ਤਰੀਕੇ ਜਿਵੇਂ ਕੁਬਿਟ ਜਾਂ ਪੀਕੋਗ੍ਰੀਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।

ਮੈਂ A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਾਂ?

A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ਤੁਹਾਡੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਹੈ:

• ~1.8 ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਲਈ "ਸ਼ੁੱਧ" ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ
• 1.8 ਤੋਂ ਘੱਟ ਅਨੁਪਾਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ
• 2.0 ਤੋਂ ਵੱਧ ਅਨੁਪਾਤ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ
• ਹੱਲ ਦਾ pH ਅਤੇ ਆਇਓਨਿਕ ਸ਼ਕਤੀ ਵੀ ਇਸ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ

ਇਹ ਅਨੁਪਾਤ ਇੱਕ ਗੁਣਵੱਤਾ ਜਾਂਚ ਵਜੋਂ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਫੰਕਸ਼ਨਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਗਾਰੰਟੀ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ, ਕਿਉਂਕਿ ਹੋਰ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕ ਜਾਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਵਿਘਟਨ ਇਹ ਅਨੁਪਾਤ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ।

ਕੀ ਮੈਂ ਰੰਗੀਨ ਹੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪ ਸਕਦਾ ਹਾਂ?

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਰੰਗੀਨ ਹੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਰੰਗ 260nm 'ਤੇ ਜਾਂ ਇਸ ਦੇ ਨੇੜੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਵਿੱਚ ਦਖਲ ਦੇ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਐਸੇ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ:

1. ਅਸਮਾਨ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਪੈਟਰਨਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵੇਵਲੈਂਥ ਸਕੈਨ ਕਰੋ (220-320nm)
2. ਫਲੋਰੋਮੈਟਰਿਕ ਤਰੀਕੇ ਵਰਤੋਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕੁਬਿਟ, ਜੋ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਰੰਗ ਤੋਂ ਘੱਟ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ
3. ਰੰਗੀ ਯੋਗਿਕਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਹੋਰ ਪੁਰਾਣਾ ਕਰੋ
4. ਜੇਕਰ ਦਖਲ ਦੇਣ ਵਾਲੇ ਯੋਗਿਕ ਦੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਗਣਿਤੀ ਸੁਧਾਰਾਂ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰੋ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਵੋਲਿਊਮ ਕੀ ਹੈ?

ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਵੋਲਿਊਮ ਉਪਕਰਨ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ:

• ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰਾਂ ਨਾਲ ਕੂਵੇਟਾਂ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 50-100 μL ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
• ਮਾਈਕ੍ਰੋ-ਵੋਲਿਊਮ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟਰਾਂ ਜਿਵੇਂ ਨੈਨੋਡ੍ਰੌਪ ਨੂੰ ਸਿਰਫ 0.5-2 μL ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
• ਫਲੋਰੋਮੈਟਰਿਕ ਤਰੀਕੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1-20 μL ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਨਾਲ ਰੀਏਜੈਂਟ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
• ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਪੜ੍ਹਨ ਵਾਲੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਵੈੱਲ 100-200 μL ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ

ਮਾਈਕ੍ਰੋ-ਵੋਲਿਊਮ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟਰਾਂ ਨੇ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਨੂੰ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਹੈ, ਕੀਮਤੀ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਲੋੜ ਨਾਲ ਮਾਪਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ।

ਮੈਂ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਕਿਵੇਂ ਗਣਨਾ ਕਰਾਂ?

ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਦੀ ਗਣਨਾ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:

$\text{ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ} = \frac{\text{ਕੁੱਲ ਵੋਲਿਊਮ (ਨਮੂਨਾ + ਪੈਰਾਈ)}}{\text{ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ}}$

ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ:

• ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ 1 μL ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ 99 μL ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ 100 ਹੁੰਦਾ ਹੈ
• ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ 5 μL ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ 45 μL ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ 10 ਹੁੰਦਾ ਹੈ
• ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ ਅਣਪਾਤਲਿਤ ਡੀਐਨਏ ਵਰਤਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ 1 ਹੁੰਦਾ ਹੈ

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਨੂੰ ਬਲੈਂਕ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਬਫਰ ਨਾਲ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਨੂੰ ਹਮੇਸ਼ਾ ਇੱਕੋ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।

ਮੈਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਯੂਨਿਟਾਂ ਵਿਚ ਕਿਵੇਂ ਬਦਲਾਂ?

ਡਿਏਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਯੂਨਿਟਾਂ ਦੇ ਆਮ ਬਦਲਾਅ:

• 1 ng/μL = 1 μg/mL
• 1 μg/mL = 0.001 mg/mL
• 1 ng/μL = 1000 pg/μL
• 1 μM ਦਾ 1000 bp ਡੀਐਨਏ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ≈ 660 ng/μL

ਡਿਏਨਏ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਲਈ ਮਾਸ ਸੰਕੇਦਰਤਾ (ng/μL) ਨੂੰ ਮੋਲਰ ਸੰਕੇਦਰਤਾ (nM) ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਲਈ:

$\text{ਸੰਕੇਦਰਤਾ (nM)} = \frac{\text{ਸੰਕੇਦਰਤਾ (ng/μL)} \times 10^6}{\text{ਡੀਐਨਏ ਲੰਬਾਈ (bp)} \times 660}$

ਕੀ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਵਿੱਚ ਗਲਤੀਆਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ?

ਕਈ ਕਾਰਨ ਹਨ ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਮਾਪਣ ਵਿੱਚ ਗਲਤੀਆਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ:

1. ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ: ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਫੇਨੋਲ, ਗੁਆਨਿਡਾਈਨ ਜਾਂ ਹੋਰ ਨਿਕਾਸ ਰੀਏਜੈਂਟਾਂ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ
2. ਬੁੱਬਲ: ਲਾਈਟ ਪਾਥ ਵਿੱਚ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁੱਬਲ ਗਲਤ ਪੜ੍ਹਾਈ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ
3. ਡੀਐਨਏ ਦਾ ਵਿਘਟਨ: ਟੁੱਟੇ ਹੋਏ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਗੁਣਾਂ ਨੂੰ ਬਦਲ ਸਕਦੀ ਹੈ
4. ਗਲਤ ਬਲੈਂਕਿੰਗ: ਬਲੈਂਕ ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਬਫਰ ਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਘੋਲਣ ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਬਫਰ ਨਾਲ ਵੱਖਰਾ ਕਰਨ
5. ਗੈਰ-ਹੋਮੋਜੀਨੀਅਸ ਹੱਲ: ਅਣਹੋਮੋਜੀਨੀਅਸ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲਾਂ ਨੂੰ ਅਸਮਾਨ ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ ਦਿੰਦੇ ਹਨ
6. ਉਪਕਰਣ ਦੀ ਕੈਲਿਬਰੇਸ਼ਨ: ਅਣਕੈਲਿਬਰੇਟ ਜਾਂ ਗੰਦੇ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟਰ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ
7. ਲੀਨੀਅਰ ਰੇਂਜ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਮਾਪਣ: ਬਹੁਤ ਉੱਚ ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਮੁੜ ਸਹੀ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੀ

ਕੀ ਮੈਂ ਇਸ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਨੂੰ ਆਰਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਲਈ ਵਰਤ ਸਕਦਾ ਹਾਂ?

ਜਦੋਂ ਕਿ ਇਹ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ (50 ng/μL ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ) ਲਈ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਹੈ, ਤੁਸੀਂ ਇਸਨੂੰ ਆਰਐਨਏ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ:

1. A260 ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਪੋ
2. 50 ਦੀ ਬਜਾਏ 40 ਨਾਲ ਗਣਨਾ ਕਰੋ (ਆਰਐਨਏ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਕਾਰਕ)
3. ਸਹੀ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਲਗੂ ਕਰੋ

ਆਰਐਨਏ ਲਈ ਫਾਰਮੂਲਾ ਹੋਵੇਗਾ: $\text{ਆਰਐਨਏ ਸੰਕੇਦਰਤਾ (ng/μL)} = A_{260} \times 40 \times \text{ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ}$

ਹਵਾਲੇ

1. ਗੈਲਾਘਰ, ਐਸ. ਆਰ., ਅਤੇ ਡੇਸਜਾਰਡਿਨਸ, ਪੀ. ਆਰ. (2006). ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਮਾਪਣ. ਕਰੰਟ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲਜ਼ ਇਨ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜੀ, 76(1), A-3D.

2. ਸੈਂਬਰੂਕ, ਜੇ., ਅਤੇ ਰੱਸਲ, ਡੀ. ਡਬਲਯੂ. (2001). ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਮੈਨੁਅਲ (3ਵੀਂ ਸੰਸਕਰਣ). ਕੋਲਡ ਸਪ੍ਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ।

3. ਮੈਨਚੈਸਟਰ, ਕੇ. ਐਲ. (1995). ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਮਾਪਣ ਲਈ A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਕੀਮਤ. ਬਾਇਓਟੈਕਨੀਕਸ, 19(2), 208-210.

4. ਸੈਂਬਰੂਕ, ਜੇ., ਅਤੇ ਰੱਸਲ, ਡੀ. ਡਬਲਯੂ. (2001). ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਮੈਨੁਅਲ (3ਵੀਂ ਸੰਸਕਰਣ). ਕੋਲਡ ਸਪ੍ਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ।

5. ਡੇਸਜਾਰਡਿਨਸ, ਪੀ., ਅਤੇ ਕੋਨਕਲਿਨ, ਡੀ. (2010). ਨੈਨੋਡ੍ਰੌਪ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੋਲਿਊਮ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਮਾਪਣ. ਜਰਨਲ ਆਫ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ਡ ਐਕਸਪੇਰੀਮੈਂਟਸ, (45), e2565.

6. ਨਕਾਇਆਮਾ, ਯ., ਯਾਮਾਗੁਚੀ, ਐਚ., ਐਨਾਗਾ, ਐਨ., ਅਤੇ ਐਸੂਮੀ, ਐਮ. (2016). ਡੀਐਨਏ-ਬਾਇਡਿੰਗ ਫਲੋਰੇਸੈਂਟ ਡਾਈਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਪਣ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਗਲਤੀਆਂ ਅਤੇ ਸੁਝਾਅ. PLOS ONE, 11(3), e0150528.

7. ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ. (2010). ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਮਾਪਣ. T042-ਟੈਕਨੀਕਲ ਬੁਲਟਿਨ.

8. ਹਿਊਬਰਮੈਨ, ਜੇ. ਏ. (1995). 240 nm 'ਤੇ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡਾਂ ਦੀ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਮਾਪਣ ਦੀ ਮਹੱਤਤਾ. ਬਾਇਓਟੈਕਨੀਕਸ, 18(4), 636.

9. ਵਾਰਬੁਰਗ, ਓ., ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਸਟੀਅਨ, ਡਬਲਯੂ. (1942). ਐਨੋਲਾਸ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ. ਬਾਇਓਕੈਮਿਸ਼ੀ ਜਰਨਲ, 310, 384-421.

10. ਗਲੇਸਲ, ਜੇ. ਏ. (1995). ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਮਾਨਤਾ. ਬਾਇਓਟੈਕਨੀਕਸ, 18(1), 62-63.

ਕੀ ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਹੋ? ਉਪਰ ਦਿੱਤੇ ਕੈਲਕੂਲੇਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ ਤਾਂ ਜੋ ਤੁਰੰਤ ਸਹੀ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਣ। ਸਿਰਫ ਆਪਣੇ ਅਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਪੜ੍ਹਾਈ, ਵੋਲਿਊਮ ਅਤੇ ਪਾਤਲਤਾ ਕਾਰਕ ਨੂੰ ਦਰਜ ਕਰੋ ਤਾਂ ਜੋ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸੰਕੇਦਰਤਾ ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ।