Kalkulator koncentracije DNA

Uvod

Kalkulator koncentracije DNA je osnovni alat za molekularne biologe, genetičare i laboratorijske tehničare koji trebaju tačno odrediti koncentraciju DNA u svojim uzorcima. Mjerenje koncentracije DNA je osnovna procedura u laboratorijama molekularne biologije, koja služi kao kritična kontrola kvaliteta prije nego što se pređe na daljnje aplikacije kao što su PCR, sekvenciranje, kloniranje i druge molekularne tehnike. Ovaj kalkulator koristi spektrofotometrijske principe za izračunavanje koncentracije DNA na osnovu UV apsorbancije na 260nm (A260), primjenjujući standardni faktor konverzije i uzimajući u obzir bilo kakvo razblaživanje originalnog uzorka.

Naš korisnički kalkulator pojednostavljuje proces određivanja i koncentracije (ng/μL) i ukupne količine DNA u vašem uzorku, eliminišući potrebu za ručnim proračunima i smanjujući rizik od matematičkih grešaka. Bilo da pripremate uzorke za sekvenciranje nove generacije, kvantifikujete plasmidne pripreme ili procjenjujete prinos ekstrakcije genomske DNA, ovaj alat pruža brze i pouzdane rezultate kako bi podržao vaše istraživačke i dijagnostičke tokove rada.

Kako se izračunava koncentracija DNA

Osnovni princip

Izračunavanje koncentracije DNA oslanja se na Beer-Lambertov zakon, koji navodi da je apsorbancija otopine direktno proporcionalna koncentraciji apsorbujuće supstance u otopini i dužini puta svjetlosti kroz otopinu. Za dvostruko uvrštenu DNA, apsorbancija od 1.0 na 260nm (A260) u cuveti dužine 1cm odgovara koncentraciji od približno 50 ng/μL.

Formula

Koncentracija DNA se izračunava pomoću sljedeće formule:

$\text{Koncentracija DNA (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{Faktor razblaživanja}$

Gdje:

• A260 je očitana apsorbancija na 260nm
• 50 je standardni faktor konverzije za dvostruko uvrštenu DNA (50 ng/μL za A260 = 1.0)
• Faktor razblaživanja je faktor prema kojem je originalni uzorak razblažen za mjerenje

Ukupna količina DNA u uzorku se tada može izračunati pomoću:

$\text{Ukupna DNA (μg)} = \frac{\text{Koncentracija (ng/μL)} \times \text{Zapremina (μL)}}{1000}$

Razumijevanje varijabli

1. Apsorbancija na 260nm (A260):

   • Ovo je mjerenje koliko UV svjetlosti na talasnoj dužini od 260nm apsorbira uzorak DNA
   • DNK nukleotidi (posebno dušične baze) apsorbuju UV svjetlost sa maksimalnom apsorbancijom na 260nm
   • Što je viša apsorbancija, to je više DNA prisutne u otopini

2. Faktor konverzije (50):

   • Standardni faktor konverzije od 50 ng/μL je specifičan za dvostruko uvrštenu DNA
   • Za jednostruko uvrštenu DNA, faktor je 33 ng/μL
   • Za RNA, faktor je 40 ng/μL
   • Za oligonukleotide, faktor varira na osnovu sekvence

3. Faktor razblaživanja:

   • Ako je uzorak razblažen prije mjerenja (npr. 1 deo uzorka na 9 delova pufera = faktor razblaživanja od 10)
   • Izračunava se kao: (Zapremina uzorka + Zapremina razređivača) ÷ Zapremina uzorka
   • Koristi se za određivanje koncentracije u originalnom, nerazblaženom uzorku

4. Zapremina:

   • Ukupna zapremina vaše DNA otopine u mikrolitrima (μL)
   • Koristi se za izračunavanje ukupne količine DNA u uzorku

Kako koristiti ovaj kalkulator

Slijedite ove korake da biste tačno odredili koncentraciju vaše DNA:

1. Pripremite svoj uzorak:

   • Osigurajte da je vaš uzorak DNA pravilno rastvoren i pomiješan
   • Ako je očekivana koncentracija visoka, pripremite razblaženje kako biste osigurali da očitavanje bude unutar linearnog opsega (tipično A260 između 0.1 i 1.0)

2. Izmjerite apsorbanciju:

   • Koristite spektrofotometar ili nanodrop uređaj za mjerenje apsorbancije na 260nm
   • Također izmjerite apsorbanciju na 280nm da biste procijenili čistoću (A260/A280 odnos)
   • Koristite isti pufer koji je korišten za rastvaranje/razblaživanje vaše DNA kao referentni blank

3. Unesite vrijednosti u kalkulator:

   • Unesite izmjerenu A260 vrijednost u polje "Apsorbancija na 260nm"
   • Unesite ukupnu zapreminu vaše DNA otopine u mikrolitrima
   • Unesite faktor razblaživanja (koristite 1 ako nije došlo do razblaživanja)

4. Tumačite rezultate:

   • Kalkulator će prikazati koncentraciju DNA u ng/μL
   • Ukupna količina DNA u uzorku će biti prikazana u μg
   • Koristite ove vrijednosti da odredite odgovarajuću zapreminu potrebnu za daljnje aplikacije

5. Procijenite čistoću DNA (ako je A280 izmjerena):

   • A260/A280 odnos od ~1.8 ukazuje na čistu DNA
   • Niži odnosi mogu ukazivati na kontaminaciju proteinima
   • Viši odnosi mogu sugerisati kontaminaciju RNA

Primjene

Mjerenje koncentracije DNA je ključno u brojnim aplikacijama molekularne biologije i biotehnologije:

Molekularno kloniranje

Prije ligiranja DNA fragmenata u vektore, poznavanje tačne koncentracije omogućava istraživačima da izračunaju optimalan odnos umetanja i vektora, maksimizirajući efikasnost transformacije. Na primjer, odnos 3:1 između umetanja i vektora često daje najbolje rezultate, što zahtijeva precizna mjerenja koncentracije oba sastojka.

PCR i qPCR

PCR reakcije obično zahtijevaju 1-10 ng uzorka DNA za optimalnu amplifikaciju. Premalo DNA može rezultirati neuspjehom amplifikacije, dok previše može inhibirati reakciju. Za kvantitativni PCR (qPCR), potrebna je još preciznija kvantifikacija DNA kako bi se osigurale tačne standardne krive i pouzdana kvantifikacija.

Sekvenciranje nove generacije (NGS)

Protokoli pripreme NGS biblioteka specificiraju tačne količine DNA ulaza, često u rasponu od 1-500 ng, u zavisnosti od platforme i aplikacije. Tačno mjerenje koncentracije je ključno za uspješnu pripremu biblioteka i uravnoteženu reprezentaciju uzoraka u multiplex sekvenciranim serijama.

Eksperimenti transfezije

Kada se DNA unosi u eukariotske ćelije, optimalna količina DNA varira u zavisnosti od tipa ćelije i metode transfezije. Obično se koristi 0.5-5 μg plasmidne DNA po jažici u formatu 6-jažica, što zahtijeva precizno mjerenje koncentracije za standardizaciju eksperimenata.

Forenzička analiza DNA

U forenzičkim aplikacijama, uzorci DNA su često ograničeni i dragoceni. Tačna kvantifikacija omogućava forenzičkim naučnicima da utvrde da li je prisutna dovoljna količina DNA za profilisanje i da standardizuju količinu DNA koja se koristi u kasnijim analizama.

Digestija restrikcionim enzimima

Restrikcioni enzimi imaju specifične jedinice aktivnosti definisane po μg DNA. Poznavanje tačne koncentracije DNA omogućava pravilne odnose enzima i DNA, osiguravajući potpunu digestiju bez "zvjezdaste aktivnosti" (nespecifično rezanje).

Alternativne metode mjerenja spektrofotometrom

Iako je UV spektrofotometrija najčešća metoda za kvantifikaciju DNA, postoje nekoliko alternativnih metoda:

1. Fluorometrijske metode:

   • Fluorescentne boje poput PicoGreen, Qubit i SYBR Green se specifično vezuju za dvostruko uvrštenu DNA
   • Osjetljivije od spektrofotometrije (mogu detektovati čak i 25 pg/mL)
   • Manje podložne uticaju kontaminanata poput proteina, RNA ili slobodnih nukleotida
   • Potrebna je fluorometar i specifični reagensi

2. Agarozna gel elektroforeza:

   • DNA se može kvantifikovati poređenjem intenziteta trake sa standardima poznate koncentracije
   • Pruža informacije o veličini i integritetu DNA istovremeno
   • Manje precizna od spektrofotometrijskih ili fluorometrijskih metoda
   • Vremenski zahtjevna, ali korisna za vizualnu potvrdu

3. Real-time PCR:

   • Visoko osjetljiva metoda za kvantifikaciju specifičnih DNA sekvenci
   • Može detektovati ekstremno niske koncentracije (do nekoliko kopija)
   • Potrebni su specifični primeri i složenija oprema
   • Koristi se kada je potrebna kvantifikacija specifičnih sekvenci

4. Digitalna PCR:

   • Apsolutna kvantifikacija bez standardnih krivulja
   • Izuzetno precizna za ciljeve niske abundancije
   • Skupa i zahtijeva specijalizovanu opremu
   • Koristi se za detekciju rijetkih mutacija i analizu varijacija broja kopija

Istorija mjerenja koncentracije DNA

Sposobnost tačnog mjerenja koncentracije DNA značajno je evoluirala uz napredovanje molekularne biologije:

Rane metode (1950-e-1960-e)

Nakon otkrića strukture DNA od strane Watsona i Cricka 1953. godine, naučnici su počeli razvijati metode za izolaciju i kvantifikaciju DNA. Rani pristupi oslanjali su se na kolorimetrijske testove poput reakcije diphenylamine, koja je proizvodila plavu boju kada se reagovala sa deoksiriboznim šećerima u DNA. Ove metode su bile relativno neosjetljive i podložne smetnjama.

Era spektrofotometrije (1970-e)

Primjena UV spektrofotometrije za kvantifikaciju nukleinskih kiselina postala je široko rasprostranjena 1970-ih. Naučnici su otkrili da DNA apsorbuje UV svjetlost sa maksimumom na 260nm, i da je odnos između apsorbancije i koncentracije linearni unutar određenog opsega. Faktor konverzije od 50 ng/μL za dvostruko uvrštenu DNA na A260 = 1.0 uspostavljen je tokom ovog perioda.

Revolucija fluorometrije (1980-e-1990-e)

Razvoj fluorescentnih boja specifičnih za DNA u 1980-im i 1990-im revolucionirao je kvantifikaciju DNA, posebno za razblažene uzorke. Hoechst boje i kasnije PicoGreen omogućile su mnogo osjetljivije detekcije nego što je to bilo moguće sa spektrofotometrijom. Ove metode postale su posebno važne sa pojavom PCR-a, koji je često zahtijevao preciznu kvantifikaciju sitnih količina DNA.

Moderna era (2000-e-danas)

Uvođenje mikrovolumenskih spektrofotometara poput NanoDrop-a u ranim 2000-im transformisalo je rutinsku kvantifikaciju DNA zahtijevajući samo 0.5-2 μL uzorka. Ova tehnologija eliminisala je potrebu za razblaživanjem i cuvetama, čineći proces bržim i praktičnijim.

Danas, napredne tehnike poput digitalnog PCR-a i sekvenciranja nove generacije pomjerile su granice kvantifikacije DNA još dalje, omogućavajući apsolutnu kvantifikaciju specifičnih sekvenci i detekciju pojedinačnih molekula. Međutim, osnovni spektrofotometrijski princip uspostavljen prije decenijama ostaje osnova rutinske mjerenja koncentracije DNA u laboratorijama širom svijeta.

Praktični primjeri

Hajde da prođemo kroz neke praktične primjere izračunavanja koncentracije DNA:

Primjer 1: Standardna priprema plasmida

Istraživač je pročistio plasmid i dobio sljedeće mjerenja:

• A260 očitavanje: 0.75
• Razblaženje: 1:10 (faktor razblaživanja = 10)
• Zapremina DNA otopine: 50 μL

Izračun:

• Koncentracija = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• Ukupna DNA = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

Primjer 2: Ekstrakcija genomske DNA

Nakon ekstrakcije genomske DNA iz krvi:

• A260 očitavanje: 0.15
• Nema razblaživanja (faktor razblaživanja = 1)
• Zapremina DNA otopine: 200 μL

Izračun:

• Koncentracija = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• Ukupna DNA = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

Primjer 3: Priprema DNA za sekvenciranje

Protokol za sekvenciranje zahtijeva tačno 500 ng DNA:

• Koncentracija DNA: 125 ng/μL
• Potrebna količina: 500 ng

Potrebna zapremina = 500 ÷ 125 = 4 μL DNA otopine

Primjeri koda

Evo primjera kako izračunati koncentraciju DNA u raznim programskim jezicima:

1' Excel formula za koncentraciju DNA
2=A260*50*FaktorRazblaživanja
3
4' Excel formula za ukupnu količinu DNA u μg
5=(A260*50*FaktorRazblaživanja*Zapremina)/1000
6
7' Primjer u ćeliji sa A260=0.5, FaktorRazblaživanja=2, Zapremina=100
8=0.5*50*2*100/1000
9' Rezultat: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    Izračunaj koncentraciju DNA u ng/μL
4    
5    Parametri:
6    absorbance (float): Očitavanje apsorbancije na 260nm
7    
8    Vraća:
9    float: Koncentracija DNA u ng/μL
10    """
11    return absorbance * 50 * dilution_factor
12
13def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
14    """
15    Izračunaj ukupnu količinu DNA u μg
16    
17    Parametri:
18    concentration (float): Koncentracija DNA u ng/μL
19    volume_ul (float): Zapremina DNA otopine u μL
20    
21    Vraća:
22    float: Ukupna količina DNA u μg
23    """
24    return (concentration * volume_ul) / 1000
25
26# Primjer korištenja
27absorbance = 0.8
28dilution_factor = 5
29volume = 75
30
31concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
32total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
33
34print(f"Koncentracija DNA: {concentration:.2f} ng/μL")
35print(f"Ukupna DNA: {total_dna:.2f} μg")
36

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // Vraća koncentraciju DNA u ng/μL
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // Vraća ukupnu količinu DNA u μg
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// Primjer korištenja
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`Koncentracija DNA: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`Ukupna DNA: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * Izračunaj koncentraciju DNA u ng/μL
4     * 
5     * @param absorbance Očitavanje apsorbancije na 260nm
6     * @param dilutionFactor Faktor razblaživanja uzorka
7     * @return Koncentracija DNA u ng/μL
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * Izračunaj ukupnu količinu DNA u μg
15     * 
16     * @param concentration Koncentracija DNA u ng/μL
17     * @param volumeUL Zapremina DNA otopine u μL
18     * @return Ukupna količina DNA u μg
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("Koncentracija DNA: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("Ukupna DNA: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# R funkcija za izračunavanje koncentracije DNA
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # Vraća koncentraciju DNA u ng/μL
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # Vraća ukupnu količinu DNA u μg
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# Primjer korištenja
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("Koncentracija DNA: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("Ukupna DNA: %.2f μg\n", total_dna))
23

Često postavljana pitanja

Koja je razlika između koncentracije DNA i čistoće DNA?

Koncentracija DNA se odnosi na količinu DNA prisutnu u otopini, obično mjerenu u ng/μL ili μg/mL. To vam govori koliko DNA imate, ali ne ukazuje na njen kvalitet. Čistoća DNA procjenjuje prisutnost kontaminanata u vašem uzorku DNA, obično mjerenjem odnosa apsorbancije kao što su A260/A280 (za kontaminaciju proteinima) i A260/A230 (za kontaminaciju organskim spojima). Čista DNA obično ima A260/A280 odnos od ~1.8 i A260/A230 odnos od 2.0-2.2.

Zašto je faktor konverzije različit za DNA, RNA i proteine?

Faktori konverzije se razlikuju jer svaka biomolekula ima jedinstveni koeficijent apsorpcije (sposobnost apsorpcije svjetlosti) zbog svojih različitih hemijskih sastava. Dvostruko uvrštena DNA ima faktor konverzije od 50 ng/μL na A260=1.0, dok je za jednostruko uvrštenu DNA 33 ng/μL, RNA 40 ng/μL, a proteini (mjereni na 280nm) variraju, ali u prosjeku iznose oko 1 mg/mL na A280=1.0. Ove razlike proizlaze iz varijabilnog sastava nukleotida ili aminokiselina i njihovih odgovarajućih apsorbancijskih svojstava.

Koliko je tačno mjerenje koncentracije DNA spektrofotometrijom?

Spektrofotometrijska kvantifikacija DNA je obično tačna unutar linearne oblasti (tipično A260 između 0.1 i 1.0), sa preciznošću od približno ±3-5%. Međutim, tačnost opada pri vrlo niskim koncentracijama (ispod 5 ng/μL) i može biti pogođena kontaminantima poput proteina, RNA, slobodnih nukleotida ili određenih pufera. Za visoko tačna mjerenja razblaženih uzoraka ili kada je potrebna visoka čistoća, preporučuju se fluorometrijske metode poput Qubit-a ili PicoGreen-a, koje su specifičnije za dvostruko uvrštenu DNA.

Kako interpretirati A260/A280 odnos?

A260/A280 odnos ukazuje na čistoću vašeg uzorka DNA u odnosu na kontaminaciju proteinima:

• Odnos od ~1.8 se obično prihvata kao "čist" za DNA
• Odnosi ispod 1.8 sugeriraju kontaminaciju proteinima
• Odnosi iznad 2.0 mogu ukazivati na kontaminaciju RNA
• pH i ionska snaga otopine takođe mogu uticati na ovaj odnos

Iako je koristan kao kontrola kvaliteta, A260/A280 odnos ne garantuje funkcionalnu DNA, jer drugi kontaminanti ili degradacija DNA možda neće uticati na ovaj odnos.

Mogu li mjeriti koncentraciju DNA u obojenim otopinama?

Mjerenje koncentracije DNA u obojenim otopinama korištenjem spektrofotometrije može biti izazovno jer boja može apsorbovati na ili blizu 260nm, ometajući mjerenje DNA. U takvim slučajevima:

1. Izvedite skeniranje talasnih dužina (220-320nm) da biste provjerili abnormalne obrasce apsorbancije
2. Koristite fluorometrijsku metodu poput Qubit-a, koja je manje pogođena bojom uzorka
3. Dalje pročistite DNA kako biste uklonili obojene spojeve
4. Primijenite matematičke korekcije ako je apsorbancijski spektar ometajuće supstance poznat

Koja je minimalna zapremina potrebna za mjerenje koncentracije DNA?

Minimalna zapremina zavisi od korištenog instrumenta:

• Tradicionalni spektrofotometri sa cuvetama obično zahtijevaju 50-100 μL
• Mikrovolumenski spektrofotometri poput NanoDrop-a zahtijevaju samo 0.5-2 μL
• Fluorometrijske metode obično zahtijevaju 1-20 μL uzorka plus zapreminu reagensa
• Mikroploče obično koriste 100-200 μL po jažici

Mikrovolumenski spektrofotometri su revolucionirali kvantifikaciju DNA omogućavajući mjerenja dragocenih uzoraka sa minimalnim zahtjevima za zapreminu.

Kako izračunati faktor razblaživanja?

Faktor razblaživanja se izračunava kao:

$\text{Faktor razblaživanja} = \frac{\text{Ukupna zapremina (uzorak + razređivač)}}{\text{Zapremina uzorka}}$

Na primjer:

• Ako dodate 1 μL DNA u 99 μL pufera, faktor razblaživanja je 100
• Ako dodate 5 μL DNA u 45 μL pufera, faktor razblaživanja je 10
• Ako koristite nerazblaženu DNA, faktor razblaživanja je 1

Uvijek koristite isti pufer za razblaživanje kao što je korišten za blankiranje spektrofotometra.

Kako konvertovati između različitih jedinica koncentracije?

Uobičajene konverzije jedinica koncentracije DNA:

• 1 ng/μL = 1 μg/mL
• 1 μg/mL = 0.001 mg/mL
• 1 ng/μL = 1000 pg/μL
• 1 μM fragmenta DNA od 1000 bp ≈ 660 ng/μL

Da biste konvertovali iz masene koncentracije (ng/μL) u molarnu koncentraciju (nM) za fragment DNA:

$\text{Koncentracija (nM)} = \frac{\text{Koncentracija (ng/μL)} \times 10^6}{\text{Dužina DNA (bp)} \times 660}$

Šta može uzrokovati netačna mjerenja koncentracije DNA?

Nekoliko faktora može dovesti do netačnih mjerenja koncentracije DNA:

1. Kontaminacija: Proteini, fenol, guanidin ili drugi reagensi za ekstrakciju mogu uticati na apsorbanciju
2. Mjehurići: Zračne mjehuriće u putu svjetlosti mogu uzrokovati pogrešna očitavanja
3. Degradacija DNA: Fragmentirana DNA može imati promijenjena apsorbancijska svojstva
4. Nepravilno blankiranje: Korištenje različitog pufera za blank nego što je korišten za rastvaranje DNA
5. Ne-homogena otopina: Nedovoljno pomiješane DNA otopine daju nekonzistentna očitavanja
6. Kalibracija instrumenta: Nekalibrirani ili prljavi spektrofotometri proizvode nepouzdane rezultate
7. Mjerenja izvan linearne oblasti: Veoma visoke ili veoma niske apsorbancijske vrijednosti možda nisu tačne

Mogu li koristiti ovaj kalkulator za koncentraciju RNA?

Iako je ovaj kalkulator optimizovan za dvostruko uvrštenu DNA (koristeći 50 ng/μL faktor konverzije), možete ga prilagoditi za RNA tako što ćete:

1. Mjeriti A260 kao i obično
2. Množiti sa 40 umjesto 50 (faktor specifičan za RNA)
3. Primijeniti odgovarajući faktor razblaživanja

Formula za RNA bi bila: $\text{Koncentracija RNA (ng/μL)} = A_{260} \times 40 \times \text{Faktor razblaživanja}$

Reference

1. Gallagher, S. R., & Desjardins, P. R. (2006). Kvantifikacija DNA i RNA sa apsorpcijom i fluorescencijom. Current Protocols in Molecular Biology, 76(1), A-3D.

2. Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molekularno kloniranje: laboratorijski priručnik (3. izd.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.

3. Manchester, K. L. (1995). Vrijednost A260/A280 odnosa za mjerenje čistoće nukleinskih kiselina. BioTechniques, 19(2), 208-210.

4. Wilfinger, W. W., Mackey, K., & Chomczynski, P. (1997). Uticaj pH i ionske snage na spektrofotometrijsku procjenu čistoće nukleinskih kiselina. BioTechniques, 22(3), 474-481.

5. Desjardins, P., & Conklin, D. (2010). NanoDrop mikrovolumenska kvantifikacija nukleinskih kiselina. Journal of Visualized Experiments, (45), e2565.

6. Nakayama, Y., Yamaguchi, H., Einaga, N., & Esumi, M. (2016). Problemi kvantifikacije DNA koristeći fluorescentne boje i predložena rješenja. PLOS ONE, 11(3), e0150528.

7. Thermo Fisher Scientific. (2010). Procjena čistoće nukleinskih kiselina. T042-Tehnička brošura.

8. Huberman, J. A. (1995). Važnost mjerenja apsorbancije nukleinskih kiselina na 240 nm kao i na 260 i 280 nm. BioTechniques, 18(4), 636.

9. Warburg, O., & Christian, W. (1942). Izolacija i kristalizacija enolaze. Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.

10. Glasel, J. A. (1995). Validnost čistoće nukleinskih kiselina praćenih odnosima 260nm/280nm apsorbancije. BioTechniques, 18(1), 62-63.

Spremni za izračunavanje vaše koncentracije DNA? Koristite naš kalkulator iznad da biste odmah dobili tačne rezultate. Jednostavno unesite svoje očitavanje apsorbancije, zapreminu i faktor razblaživanja da biste odredili i koncentraciju i ukupnu količinu DNA u vašem uzorku.