Kalkulator koncentracije DNK

Uvod

Kalkulator koncentracije DNK je neophodan alat za molekularne biologe, genetičare i laboratorijske tehničare koji treba da precizno odrede koncentraciju DNK u svojim uzorcima. Merenje koncentracije DNK je osnovna procedura u laboratorijama molekularne biologije, koja služi kao kritična kontrola kvaliteta pre nego što se pređe na dalju primenu kao što su PCR, sekvenciranje, kloniranje i druge molekularne tehnike. Ovaj kalkulator koristi spektrofotometrijske principe za izračunavanje koncentracije DNK na osnovu UV apsorbancije na 260nm (A260), primenjujući standardni konverzioni faktor i uzimajući u obzir svaku razređivanje originalnog uzorka.

Naš korisnički kalkulator pojednostavljuje proces određivanja i koncentracije (ng/μL) i ukupne količine DNK u vašem uzorku, eliminišući potrebu za ručnim proračunima i smanjujući rizik od matematičkih grešaka. Bilo da pripremate uzorke za sekvenciranje nove generacije, kvantifikujete plasmidne pripreme ili procenjujete prinose ekstrakcije genomske DNK, ovaj alat pruža brze i pouzdane rezultate koji podržavaju vaše istraživačke i dijagnostičke radne tokove.

Kako se izračunava koncentracija DNK

Osnovni princip

Izračunavanje koncentracije DNK oslanja se na Beer-Lambertov zakon, koji kaže da je apsorbancija rastvora direktno proporcionalna koncentraciji apsorbujuće vrste u rastvoru i dužini svetlosnog puta kroz rastvor. Za dvostruku DNK, apsorbancija od 1.0 na 260nm (A260) u cuvetu dužine 1cm odgovara koncentraciji od približno 50 ng/μL.

Formula

Koncentracija DNK se izračunava pomoću sledeće formule:

$\text{Koncentracija DNK (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{Faktor razređenja}$

Gde:

• A260 je očitavanje apsorbancije na 260nm
• 50 je standardni konverzioni faktor za dvostruku DNK (50 ng/μL za A260 = 1.0)
• Faktor razređenja je faktor po kojem je originalni uzorak razređen za merenje

Ukupna količina DNK u uzorku se može izračunati pomoću:

$\text{Ukupna DNK (μg)} = \frac{\text{Koncentracija (ng/μL)} \times \text{Zapremina (μL)}}{1000}$

Razumevanje varijabli

1. Apsorbancija na 260nm (A260):

   • Ovo je merenje koliko UV svetlosti na talasnoj dužini od 260nm apsorbuje DNK uzorak
   • DNK nukleotidi (posebno azotne baze) apsorbuju UV svetlost sa maksimalnom apsorbancijom na 260nm
   • Što je veća apsorbancija, to je više DNK prisutno u rastvoru

2. Konverzioni faktor (50):

   • Standardni konverzioni faktor od 50 ng/μL je specifičan za dvostruku DNK
   • Za jednolančanu DNK, faktor je 33 ng/μL
   • Za RNK, faktor je 40 ng/μL
   • Za oligonukleotide, faktor varira u zavisnosti od sekvence

3. Faktor razređenja:

   • Ako je uzorak razređen pre merenja (npr. 1 deo uzorka na 9 delova pufera = faktor razređenja od 10)
   • Izračunava se kao: (Zapremina uzorka + Zapremina razređivača) ÷ Zapremina uzorka
   • Koristi se za određivanje koncentracije u originalnom, nerazređenom uzorku

4. Zapremina:

   • Ukupna zapremina vašeg DNK rastvora u mikrolitrima (μL)
   • Koristi se za izračunavanje ukupne količine DNK u uzorku

Kako koristiti ovaj kalkulator

Pratite ove korake da biste precizno odredili koncentraciju vaše DNK:

1. Pripremite svoj uzorak:

   • Osigurajte da je vaš DNK uzorak pravilno rastvoren i pomešan
   • Ako je očekivana koncentracija visoka, pripremite razređenje da biste osigurali da očitavanje bude u okviru linearne oblasti (tipično A260 između 0.1 i 1.0)

2. Izmerite apsorbanciju:

   • Koristite spektrofotometar ili nanodrop uređaj da izmerite apsorbanciju na 260nm
   • Takođe izmerite apsorbanciju na 280nm da procenite čistoću (A260/A280 odnos)
   • Koristite isti pufer koji je korišćen za rastvaranje/razređivanje vaše DNK kao referentnu prazninu

3. Unesite vrednosti u kalkulator:

   • Unesite izmerenu A260 vrednost u polje "Apsorbancija na 260nm"
   • Unesite ukupnu zapreminu vašeg DNK rastvora u mikrolitrima
   • Unesite faktor razređenja (koristite 1 ako nije bilo razređenja)

4. Tumačite rezultate:

   • Kalkulator će prikazati koncentraciju DNK u ng/μL
   • Ukupna količina DNK u uzorku biće prikazana u μg
   • Koristite ove vrednosti da odredite odgovarajuću zapreminu potrebnu za dalju primenu

5. Procena čistoće DNK (ako je A280 izmerena):

   • A260/A280 odnos od ~1.8 ukazuje na čistu DNK
   • Niži odnosi mogu ukazivati na kontaminaciju proteinima
   • Viši odnosi mogu sugerisati kontaminaciju RNK

Upotrebe

Merenje koncentracije DNK je ključno u brojnim aplikacijama molekularne biologije i biotehnologije:

Molekularno kloniranje

Pre nego što se ligiraju DNK fragmenti u vektore, poznavanje tačne koncentracije omogućava istraživačima da izračunaju optimalan odnos umetka i vektora, maksimizirajući efikasnost transformacije. Na primer, odnos od 3:1 između umetka i vektora često daje najbolje rezultate, što zahteva precizna merenja koncentracije oba komponenta.

PCR i qPCR

PCR reakcije obično zahtevaju 1-10 ng DNK uzorka za optimalnu amplifikaciju. Premalo DNK može rezultirati neuspehom amplifikacije, dok previše može inhibirati reakciju. Za kvantitativni PCR (qPCR), potrebna su još preciznija merenja DNK da bi se osigurale tačne standardne krive i pouzdana kvantifikacija.

Sekvenciranje nove generacije (NGS)

Protokoli pripreme NGS biblioteka preciziraju tačne količine DNK ulaza, često u rasponu od 1-500 ng, u zavisnosti od platforme i primene. Precizno merenje koncentracije je ključno za uspešnu pripremu biblioteka i uravnoteženo predstavljanje uzoraka u multiplex sekvenciranju.

Eksperimenti transfezije

Kada se DNK uvodi u eukariotske ćelije, optimalna količina DNK varira u zavisnosti od tipa ćelije i metode transfezije. Tipično se koristi 0.5-5 μg plasmidne DNK po epruveti u formatu 6-epruvete, što zahteva precizna merenja koncentracije za standardizaciju eksperimenata.

Forenzička DNK analiza

U forenzičkim aplikacijama, DNK uzorci su često ograničeni i dragoceni. Precizna kvantifikacija omogućava forenzičkim naučnicima da odrede da li je prisutna dovoljna DNK za profilisanje i da standardizuju količinu DNK korišćenu u daljim analizama.

Digestion enzimom restrikcije

Restrikcioni enzimi imaju specifične jedinice aktivnosti definisane po μg DNK. Poznavanje tačne koncentracije DNK omogućava pravilne odnose enzima i DNK, osiguravajući potpunu digestiju bez "zvezdaste" aktivnosti (nespecifičnog sečenja).

Alternative spektrofotometrijskom merenju

Iako je UV spektrofotometrija najčešća metoda za kvantifikaciju DNK, postoji nekoliko alternativa:

1. Fluorometrijske metode:

   • Fluorescentne boje kao što su PicoGreen, Qubit i SYBR Green specifično se vezuju za dvostruku DNK
   • Osetljivije su od spektrofotometrije (mogu detektovati čak 25 pg/mL)
   • Manje su pogođene kontaminantima poput proteina, RNK ili slobodnih nukleotida
   • Zahteva fluorometar i specifične reagens

2. Agarozna gel elektroforeza:

   • DNK se može kvantifikovati poređenjem intenziteta traka sa standardima poznate koncentracije
   • Pruža informacije o veličini i integritetu DNK istovremeno
   • Manje precizna od spektrofotometrijskih ili fluorometrijskih metoda
   • Vremenski zahtevna, ali korisna za vizuelnu potvrdu

3. Real-time PCR:

   • Veoma osetljiva metoda za kvantifikaciju specifičnih DNK sekvenci
   • Može detektovati ekstremno niske koncentracije (do nekoliko kopija)
   • Zahteva specifične primere i složeniju opremu
   • Koristi se kada je potrebna kvantifikacija specifičnih sekvenci

4. Digital PCR:

   • Apsolutna kvantifikacija bez standardnih krivulja
   • Ekstremno precizna za ciljeve sa niskim abundancijama
   • Skupa i zahteva specijalizovanu opremu
   • Koristi se za detekciju retkih mutacija i analizu varijacija broja kopija

Istorija merenja koncentracije DNK

Sposobnost preciznog merenja koncentracije DNK značajno se razvijala zajedno sa napretkom u molekularnoj biologiji:

Rane metode (1950-ih-1960-ih)

Nakon otkrića strukture DNK od strane Votsona i Krika 1953. godine, naučnici su počeli da razvijaju metode za izolaciju i kvantifikaciju DNK. Rane pristupe su se oslanjale na kolorimetrijske analize poput diphenylamine reakcije, koja je proizvodila plavu boju kada je reagovala sa deoksiriboza šećerima u DNK. Ove metode su bile relativno neosetljive i podložne smetnjama.

Era spektrofotometrije (1970-ih)

Primena UV spektrofotometrije za kvantifikaciju nukleinskih kiselina postala je široko rasprostranjena 1970-ih. Naučnici su otkrili da DNK apsorbuje UV svetlost sa maksimumom na 260nm, i da je odnos između apsorbancije i koncentracije linearni unutar određenog opsega. Konverzioni faktor od 50 ng/μL za dvostruku DNK na A260 = 1.0 uspostavljen je tokom ovog perioda.

Revolucija fluorometrije (1980-ih-1990-ih)

Razvoj fluorescentnih boja specifičnih za DNK u 1980-im i 1990-im revolucionisao je kvantifikaciju DNK, posebno za razređene uzorke. Hoechst boje i kasnije PicoGreen omogućili su mnogo osetljivije detekcije nego što je to bilo moguće sa spektrofotometrijom. Ove metode postale su posebno važne sa pojavom PCR-a, koji je često zahtevao preciznu kvantifikaciju malih količina DNK.

Moderna era (2000-ih-danas)

Uvođenje mikrovremenskih spektrofotometara kao što je NanoDrop početkom 2000-ih transformisalo je rutinsku kvantifikaciju DNK zahtevajući samo 0.5-2 μL uzorka. Ova tehnologija je eliminisala potrebu za razređenjima i cuvetima, čineći proces bržim i pogodnijim.

Danas, napredne tehnike poput digitalnog PCR-a i sekvenciranja nove generacije pomerile su granice kvantifikacije DNK još dalje, omogućavajući apsolutnu kvantifikaciju specifičnih sekvenci i detekciju pojedinačnih molekula. Međutim, osnovni spektrofotometrijski principi uspostavljeni pre decenijama ostaju osnova rutinskog merenja koncentracije DNK u laboratorijama širom sveta.

Praktični primeri

Hajde da prođemo kroz neke praktične primere izračunavanja koncentracije DNK:

Primer 1: Standardna plasmidna priprema

Istraživač je pročistio plasmid i dobio sledeća merenja:

• A260 očitavanje: 0.75
• Razređenje: 1:10 (faktor razređenja = 10)
• Zapremina DNK rastvora: 50 μL

Proračun:

• Koncentracija = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• Ukupna DNK = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

Primer 2: Ekstrakcija genomske DNK

Nakon ekstrakcije genomske DNK iz krvi:

• A260 očitavanje: 0.15
• Nema razređenja (faktor razređenja = 1)
• Zapremina DNK rastvora: 200 μL

Proračun:

• Koncentracija = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• Ukupna DNK = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

Primer 3: Priprema DNK za sekvenciranje

Protokol za sekvenciranje zahteva tačno 500 ng DNK:

• Koncentracija DNK: 125 ng/μL
• Potrebna količina: 500 ng

Potrebna zapremina = 500 ÷ 125 = 4 μL DNK rastvora

Primeri koda

Evo primera kako izračunati koncentraciju DNK u raznim programskim jezicima:

1' Excel formula za koncentraciju DNK
2=A260*50*FaktorRazređenja
3
4' Excel formula za ukupnu količinu DNK u μg
5=(A260*50*FaktorRazređenja*Zapremina)/1000
6
7' Primer u ćeliji sa A260=0.5, FaktorRazređenja=2, Zapremina=100
8=0.5*50*2*100/1000
9' Rezultat: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    Izračunavanje koncentracije DNK u ng/μL
4    
5    Parametri:
6    absorbance (float): Očitavanje apsorbancije na 260nm
7    
8    Vraća:
9    float: Koncentracija DNK u ng/μL
10    """
11    return absorbance * 50 * dilution_factor
12
13def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
14    """
15    Izračunavanje ukupne količine DNK u μg
16    
17    Parametri:
18    concentration (float): Koncentracija DNK u ng/μL
19    volume_ul (float): Zapremina DNK rastvora u μL
20    
21    Vraća:
22    float: Ukupna količina DNK u μg
23    """
24    return (concentration * volume_ul) / 1000
25
26# Primer korišćenja
27absorbance = 0.8
28dilution_factor = 5
29volume = 75
30
31concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
32total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
33
34print(f"Koncentracija DNK: {concentration:.2f} ng/μL")
35print(f"Ukupna DNK: {total_dna:.2f} μg")
36

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // Vraća koncentraciju DNK u ng/μL
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // Vraća ukupnu količinu DNK u μg
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// Primer korišćenja
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`Koncentracija DNK: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`Ukupna DNK: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * Izračunavanje koncentracije DNK u ng/μL
4     * 
5     * @param absorbance Očitavanje apsorbancije na 260nm
6     * @param dilutionFactor Faktor razređenja uzorka
7     * @return Koncentracija DNK u ng/μL
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * Izračunavanje ukupne količine DNK u μg
15     * 
16     * @param concentration Koncentracija DNK u ng/μL
17     * @param volumeUL Zapremina DNK rastvora u μL
18     * @return Ukupna količina DNK u μg
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("Koncentracija DNK: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("Ukupna DNK: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# R funkcija za izračunavanje koncentracije DNK
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # Vraća koncentraciju DNK u ng/μL
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # Vraća ukupnu količinu DNK u μg
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# Primer korišćenja
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("Koncentracija DNK: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("Ukupna DNK: %.2f μg\n", total_dna))
23

Često postavljana pitanja

Koja je razlika između koncentracije DNK i čistoće DNK?

Koncentracija DNK se odnosi na količinu DNK prisutnu u rastvoru, obično mereno u ng/μL ili μg/mL. To vam govori koliko DNK imate, ali ne ukazuje na njen kvalitet. Čistoća DNK procenjuje prisustvo kontaminanata u vašem DNK uzorku, obično mereno odnosima apsorbancije kao što su A260/A280 (za kontaminaciju proteinima) i A260/A230 (za kontaminaciju organskim jedinjenjima). Čista DNK obično ima A260/A280 odnos od ~1.8 i A260/A230 odnos od 2.0-2.2.

Zašto su konverzioni faktori različiti za DNK, RNK i proteine?

Konverzioni faktori se razlikuju jer svaka biomolekula ima jedinstveni koeficijent ekstinkcije (sposobnost apsorpcije svetlosti) zbog svojih različitih hemijskih sastava. Dvostruka DNK ima konverzioni faktor od 50 ng/μL pri A260=1.0, dok je za jednolančanu DNK 33 ng/μL, za RNK 40 ng/μL, a za proteine (mereni na 280nm) variraju u velikoj meri, ali prosečno su oko 1 mg/mL pri A280=1.0. Ove razlike proizlaze iz različitih sastava nukleotida ili aminokiselina i njihovih svojstava apsorbancije.

Koliko je tačno spektrofotometrijsko merenje DNK kvantifikacije?

Spektrofotometrijska kvantifikacija DNK je generalno tačna unutar linearne oblasti (tipično A260 između 0.1 i 1.0), sa preciznošću od približno ±3-5%. Međutim, tačnost opada pri veoma niskim koncentracijama (ispod 5 ng/μL) i može biti pogođena kontaminantima poput proteina, RNK, slobodnih nukleotida ili određenih pufera. Za veoma tačna merenja razređenih uzoraka ili kada je potrebna visoka čistoća, preporučuju se fluorometrijske metode poput Qubit-a ili PicoGreen-a, koje su specifičnije za dvostruku DNK.

Kako da protumačim A260/A280 odnos?

A260/A280 odnos ukazuje na čistoću vašeg DNK uzorka u odnosu na kontaminaciju proteinima:

• Odnos od ~1.8 se generalno smatra "čistim" za DNK
• Odnosi ispod 1.8 sugerišu kontaminaciju proteinima
• Odnosi iznad 2.0 mogu ukazivati na kontaminaciju RNK
• pH i ionska snaga rastvora takođe mogu uticati na ovaj odnos

Iako je koristan kao provera kvaliteta, A260/A280 odnos ne garantuje funkcionalnu DNK, jer drugi kontaminanti ili degradacija DNK možda neće uticati na ovaj odnos.

Mogu li da merim koncentraciju DNK u obojenim rastvorima?

Merenje koncentracije DNK u obojenim rastvorima pomoću spektrofotometrije može biti izazovno jer boja može apsorbovati na ili blizu 260nm, ometajući merenje DNK. U takvim slučajevima:

1. Izvršite skeniranje talasnih dužina (220-320nm) da biste proverili abnormalne obrasce apsorbancije
2. Koristite fluorometrijsku metodu poput Qubit-a, koja je manje pogođena bojom uzorka
3. Dalje pročistite DNK da biste uklonili obojene jedinjenja
4. Primijenite matematičke korekcije ako je spektar apsorbancije ometajuće jedinjenja poznat

Koja je minimalna zapremina potrebna za merenje koncentracije DNK?

Minimalna zapremina zavisi od korišćenog instrumenta:

• Tradicionalni spektrofotometri sa cuvetama obično zahtevaju 50-100 μL
• Mikrovremenski spektrofotometri poput NanoDrop-a zahtevaju samo 0.5-2 μL
• Fluorometrijske metode obično zahtevaju 1-20 μL uzorka plus zapreminu reagens
• Mikrotalasni čitači obično koriste 100-200 μL po epruveti

Mikrovremenski spektrofotometri su revolucionisali kvantifikaciju DNK omogućivši merenja dragocenih uzoraka sa minimalnim zahtevima za zapreminu.

Kako da izračunam faktor razređenja?

Faktor razređenja se izračunava kao:

$\text{Faktor razređenja} = \frac{\text{Ukupna zapremina (Uzorak + Razređivač)}}{\text{Zapremina uzorka}}$

Na primer:

• Ako dodate 1 μL DNK u 99 μL pufera, faktor razređenja je 100
• Ako dodate 5 μL DNK u 45 μL pufera, faktor razređenja je 10
• Ako koristite nerazređenu DNK, faktor razređenja je 1

Uvek koristite isti pufer za razređenje kao što je korišćen za blankiranje spektrofotometra.

Kako da konvertujem između različitih jedinica koncentracije?

Uobičajene konverzije jedinica koncentracije DNK:

• 1 ng/μL = 1 μg/mL
• 1 μg/mL = 0.001 mg/mL
• 1 ng/μL = 1000 pg/μL
• 1 μM DNK fragmenta od 1000 bp ≈ 660 ng/μL

Da biste konvertovali iz masene koncentracije (ng/μL) u molarnu koncentraciju (nM) za DNK fragment:

$\text{Koncentracija (nM)} = \frac{\text{Koncentracija (ng/μL)} \times 10^6}{\text{Dužina DNK (bp)} \times 660}$

Šta može uzrokovati netačna merenja koncentracije DNK?

Nekoliko faktora može dovesti do netačnih merenja koncentracije DNK:

1. Kontaminacija: Proteini, fenol, guanidin ili drugi reagensi za ekstrakciju mogu uticati na apsorbanciju
2. Mehurici: Mehurici vazduha u svetlosnom putu mogu izazvati netačna očitavanja
3. Degradacija DNK: Fragmentirana DNK može imati izmenjena svojstva apsorbancije
4. Nepravilno blankiranje: Korišćenje različitog pufera za prazninu nego što je DNK rastvoren
5. Ne-homogeni rastvor: Nedovoljno pomešani DNK rastvori daju dosledna očitavanja
6. Kalibracija instrumenta: Nekalibrisani ili prljavi spektrofotometri proizvode nepouzdane rezultate
7. Merenja van linearne oblasti: Veoma visoke ili veoma niske vrednosti apsorbancije možda neće biti tačne

Mogu li koristiti ovaj kalkulator za koncentraciju RNK?

Iako je ovaj kalkulator optimizovan za dvostruku DNK (koristeći 50 ng/μL konverzioni faktor), možete ga prilagoditi za RNK tako što ćete:

1. Izmeriti A260 kao obično
2. Množiti sa 40 umesto 50 (specifični konverzioni faktor za RNK)
3. Primijeniti odgovarajući faktor razređenja

Formula za RNK bi bila: $\text{Koncentracija RNK (ng/μL)} = A_{260} \times 40 \times \text{Faktor razređenja}$

Reference

1. Gallagher, S. R., & Desjardins, P. R. (2006). Kvantifikacija DNK i RNK sa apsorpcionom i fluorescencijom spektroskopijom. Current Protocols in Molecular Biology, 76(1), A-3D.

2. Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molekularno kloniranje: laboratorijski priručnik (3. izd.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.

3. Manchester, K. L. (1995). Vrednost A260/A280 odnosa za merenje čistoće nukleinskih kiselina. BioTechniques, 19(2), 208-210.

4. Wilfinger, W. W., Mackey, K., & Chomczynski, P. (1997). Uticaj pH i ionske snage na spektrofotometrijsku procenu čistoće nukleinskih kiselina. BioTechniques, 22(3), 474-481.

5. Desjardins, P., & Conklin, D. (2010). NanoDrop mikrovolumenska kvantifikacija nukleinskih kiselina. Journal of Visualized Experiments, (45), e2565.

6. Nakayama, Y., Yamaguchi, H., Einaga, N., & Esumi, M. (2016). Problemi kvantifikacije DNK korišćenjem fluorescentnih boja i predložena rešenja. PLOS ONE, 11(3), e0150528.

7. Thermo Fisher Scientific. (2010). Procena čistoće nukleinskih kiselina. T042-Tehnička brošura.

8. Huberman, J. A. (1995). Važnost merenja apsorbancije nukleinskih kiselina na 240 nm kao i na 260 i 280 nm. BioTechniques, 18(4), 636.

9. Warburg, O., & Christian, W. (1942). Izolacija i kristalizacija enolaze. Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.

10. Glasel, J. A. (1995). Validnost čistoće nukleinskih kiselina praćenih odnosima 260nm/280nm apsorbancije. BioTechniques, 18(1), 62-63.

Spremni ste da izračunate svoju koncentraciju DNK? Koristite naš kalkulator iznad da odmah dobijete tačne rezultate. Jednostavno unesite svoje očitavanje apsorbancije, zapreminu i faktor razređenja da biste odredili i koncentraciju i ukupnu količinu DNK u vašem uzorku.