ਬੀਸੀਏ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ | ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਉਪਕਰਣ

Q: BCA ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਿਸ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ?

BCA ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਦਾ ਮਾਪ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਤੁਸੀਂ ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋਗੇ ਜਦੋਂ ਤੁਹਾਨੂੰ ਪਤਾ ਕਰਨਾ ਹੋਵੇ ਕਿ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਕਿੰਨਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ—ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟਿੰਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਮਾਨ ਲੋਡਿੰਗ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਏਂਜਾਈਮ ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਗਤੀਵਿਧੀ ਮਾਪਾਂ ਨੂੰ ਸੰਤੁਲਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਣ ਦੌਰਾਨ ਉਪਜ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, ਜਾਂ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਤਿਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ। ਇਹ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਮੋਲੇਕੂਲਰ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਜੈਵ ਰਸਾਇਣ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡਿਫ਼ੌਲਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਪ ਵਿਧੀ ਬਣ ਗਈ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਆਮ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੇਟ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਡिटरਜੈਂਟ ਅਤੇ ਬਫਰ ਘਟਕਾਂ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲ ਸਕਦੀ ਹੈ।

Q: BCA ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਕਿੰਨੀ ਸਟੀਕ ਹੈ?

ਚੰਗੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਵਿੱਚ, 5-10% ਸਟੀਕਤਾ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕਰੋ। ਇਹ ਇਸ ਗੱਲ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਸਹੀ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ (ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 5-6 ਬਿੰਦੂ ਜੋ ਤੁਹਾਡੀ �अਪੇਖਿਤ ਸਾਂਦਰਤਾ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਕਵਰ ਕਰਦੇ ਹਨ), ਤਾਜ਼ਾ ਰੀਏਜੈਂਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ, ਅਤੇ ਇਹ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰਨਾ ਕਿ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਸਾਂਦਰਤਾ ਵਿੱਚ ਹਸਤਖੇਪ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਵਸਤਾਂ ਨਾ ਹੋਣ। ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੰਰਚਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ—ਕੋਲਾਜਨ ਅਤੇ ਜੈਲੇਟਿਨ ਅਸਧਾਰਨ ਰੂਪ ਤੋਂ ਉੱਚੀਆਂ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਅਮਿਨੋ ਐਸਿਡ ਸੰਯੋਜਨ ਕਾਰਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਹਿਸਟੋਨ ਘੱਟ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦਿੰਦੇ ਹਨ। ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਅਨੁਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ, 5-10% ਤ੍ਰੁਟੀ ਸਵੀਕਾਰ ਯੋਗ ਹੈ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਕਿਸੇ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਲੋਡ ਕਰਨ ਨਾਲੋਂ ਬਹੁਤ ਬਿਹਤਰ ਹੈ। [ਅਨੁਵਾਦ ਜਾਰੀ ਰਹੇਗਾ...]

ਬੀਸੀਏ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਤੋਂ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਤੁਰੰਤ ਗਣਨਾ ਕਰੋ। ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟ, ਏਂਜਾਈਮ ਪਰਖ ਅਤੇ ਆਈਪੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਸਟੀਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲੋਡਿੰਗ ਵੋਲਿਊਮ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ।

ਬੀਸੀਏ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ

ਬੀਸੀਏ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਅਤੇ ਟਾਰਗਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਸ ਤੋਂ ਸਟੀਕ ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ। ਸਟੀਕ ਲੋਡਿੰਗ ਲਈ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਮੁੱਲ ਅਤੇ ਚਾਹੀਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਦਾਖਲ ਕਰੋ।

ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਸੰਰਚਨਾ

ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਪ੍ਰਕਾਰ

BCA ਸਧਾਰਨ ਵਕਰ

ਸੈਂਪਲ ਇਨਪੁਟ

ਸੈਂਪਲ 1

ਸੈਂਪਲ ਨਾਮ

ਬੀਸੀਏ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ

ਸੈਂਪਲ ਮਾਸ (μg)

ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ

—μL

ਨਤੀਜਾ ਸਾਰ

ਸੈਂਪਲ ਨਾਮ	ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ	ਸੈਂਪਲ ਮਾਸ (μg)	ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ (μg/μL)	ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ (μL)
ਸੈਂਪਲ 1	—	—	—	—

ਗਣਨਾ ਫਾਰਮੂਲਾ

ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ ਹੇਠ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ:

ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ (μL) = ਸੈਂਪਲ ਮਾਸ (μg) / ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ (μg/μL)

ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਸੁਝਾਅ

• ਸਟੀਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਨੂੰ 0.1-2.0 ਦੇ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ

• ਆਮ ਮਾਤਰਾਵਾਂ: ਵੈਸਟਰਨ ਬਲਾਟ ਲਈ 20-50 μg, ਇਮਿਊਨੋਪ੍ਰੈਸਿਪਿਟੇਸ਼ਨ ਲਈ 500-1000 μg

• 1000 μL ਤੋਂ ਵੱਧ ਵੋਲਿਊਮ ਘੱਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ—ਆਪਣੇ ਸੈਂਪਲ ਨੂੰ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤ ਕਰਨ 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਕਰੋ

• ਮਾਨਕ ਬੀਸੀਏ ਅਧਿਕਾਂਸ਼ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ (20-2000 μg/mL)। ਤਨੁ ਸੈਂਪਲਾਂ ਲਈ (5-250 μg/mL) ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਬੀਸੀਏ ਵਰਤੋ

ਲੋਡਿੰਗ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ...

📚

ਦਸਤਾਵੇਜ਼ੀਕਰਣ

ਤੁਰੰਤ BCA ਨਮੂਨਾ ਵੋਲੀਅਮ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਲਈ

ਜਦੋਂ ਤੁਸੀਂ ਹੁਣ ਹੁਣੇ BCA ਪਰੀਖਣ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟ ਲਈ ਕਿੰਨਾ ਨਮੂਨਾ ਲੋਡ ਕਰਨਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਗਣਨਾ ਦਾ ਸਾਹਮਣਾ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ ਜੋ ਸਿਧਾਂਤ ਵਿੱਚ ਸਰਲ ਹੈ ਪਰ ਅਮਲ ਵਿੱਚ ਥਕਾਊ ਹੈ। 562 nm 'ਤੇ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਮਾਪੋ, ਆਪਣੇ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕਰੋ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ, ਫਿਰ ਆਪਣੀ ਇੱਛਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਵੋਲੀਅਮ ਦਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਕਰੋ।

ਇਹ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਉਸ ਗਣਿਤ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਹੱਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਆਪਣੀ BCA ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗ ਅਤੇ ਲੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਦਾਖਲ ਕਰੋ—ਤੁਹਾਨੂੰ ਮਾਈਕਰੋਲਿਟਰ ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲੀਅਮ ਮਿਲ ਜਾਵੇਗਾ। BCA ਪਰੀਖਣਾਂ ਨੂੰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਉਨ੍ਹਾਂ ਡਿਟਰਜੈਂਟਾਂ ਅਤੇ ਸਰਫੈਕਟੈਂਟਾਂ ਦੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਜੋ Bradford ਜਾਂ Lowry ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਰੁਕਾਵਟ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਜਦੋਂ ਤੁਸੀਂ SDS ਜਾਂ Triton X-100 ਵਾਲੇ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੇਟਸ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ, BCA ਸਹੀ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਹੋਰ ਵਿਧੀਆਂ ਅਸਫਲ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।

ਬੀਸੀਏ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਕਿਵੇਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ

ਬੀਸੀਏ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦਾ ਸਿਧਾਂਤ

ਬੀਸੀਏ (ਬਾਈਸਿਨਕੋਨਿਨਿਕ ਐਸਿਡ) ਪ੍ਰਯੋਗ ਇੱਕ ਦੋ-ਪੜਾਅ ਵਾਲੀ ਤਾਂਬਾ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੁਆਰਾ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕ੍ਾਰੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ Cu²⁺ ਨੂੰ Cu¹⁺ ਵਿੱਚ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ—ਘਟਾਅ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ। ਇੱਥੇ ਬਾਈਸਿਨਕੋਨਿਨਿਕ ਐਸਿਡ ਆਉਂਦਾ ਹੈ: ਇਹ Cu¹⁺ ਨਾਲ ਬੰਧ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇੱਕ ਤੀਬਰ ਬੈਂਗਨੀ ਕੰਪਲੈਕਸ ਬਣੇ ਜੋ 562 ਐਨਐਮ 'ਤੇ ਰੋਸ਼ਨੀ ਨੂੰ ਸੋਖਦਾ ਹੈ।

ਤੁਸੀਂ ਇਸ ਬੈਂਗਨੀ ਰੰਗ ਨੂੰ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਨਾਲ ਮਾਪਦੇ ਹੋ। ਬੈਂਗਨੀ ਰੰਗ ਜਿੰਨਾ ਗੂੜ੍ਹਾ, ਉਨਾ ਹੀ ਵੱਧ ਪ੍ਰੋਟੀਨ। ਆਪਣੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਨੂੰ ਇੱਕ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ BSA ਮਾਨਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ) ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਤੁਹਾਡੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਹੈ। ਬੀਸੀਏ ਦੀ ਸੁੰਦਰਤਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਡिटरजेंट, ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸ਼ੱਕਰ, ਜਾਂ ਹੋਰ ਆਮ ਬਫਰ ਘਟਕਾਂ ਦੇ ਮੌਜੂਦ ਹੋਣ 'ਤੇ ਵੀ ਵਿਸ਼ਵਾਸਯੋਗ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ—ਅਜਿਹੀਆਂ ਵਸਤੂਆਂ ਜੋ ਬ੍ਰੈਡਫੋਰਡ ਜਾਂ ਲੌਰੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਭਟਕਾ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ।

ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਗਣਨਾ ਲਈ ਫਾਰਮੂਲਾ

ਬੀਸੀਏ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਨਤੀਜਿਆਂ ਤੋਂ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਲਈ ਮੂਲ ਫਾਰਮੂਲਾ ਹੈ:

$\text{ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ (μL)} = \frac{\text{ਨਮੂਨਾ ਮਾਸ (μg)}}{\text{ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ (μg/μL)}}$

ਜਿੱਥੇ:

ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਲੋੜੀਂਦਾ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਹੈ (ਮਾਈਕ੍ਰੋਲਿਟਰ, μL ਵਿੱਚ)
ਨਮੂਨਾ ਮਾਸ ਵਰਤਣ ਲਈ ਇੱਛਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਹੈ (ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮ, μg ਵਿੱਚ)
ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਬੀਸੀਏ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਰੀਡਿੰਗ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (μg/μL ਵਿੱਚ)

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਨੂੰ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਰੀਡਿੰਗ ਤੋਂ ਇੱਕ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਸਮੀਕਰਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:

$\text{ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ (μg/μL)} = \text{ਢਾਲ} \times \text{ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ} + \text{ਇੰਟਰਸੈਪਟ}$

ਇੱਕ ਮਾਨਕ ਬੀਸੀਏ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਢਾਲ ਲਗਭਗ 2.0 ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇੰਟਰਸੈਪਟ ਅਕਸਰ ਸੂਨ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਮੁੱਲ ਤੁਹਾਡੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਯੋਗ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਤੇ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਐਨਜਾਈਮੋਲੋਜੀ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 5-6 ਬਿੰਦੂਆਂ ਵਾਲਾ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਬਣਾਉਣਾ ਜੋ ਤੁਹਾਡੀ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਸਾਂਦਰਤਾ ਰੇਂਜ ਨੂੰ ਕਵਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪ੍ਰਕਾਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।

BCA ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ

ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਉਹ ਗਣਨਾ ਨੂੰ ਸਰਲ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਹੱਥ ਨਾਲ ਹਰੇਕ ਸੈਂਪਲ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਵੇਗੀ:

ਆਪਣੀਆਂ ਮਾਪਾਂ ਦਾਖਲ ਕਰੋ:
- ਆਪਣੇ ਸੈਂਪਲ ਨੂੰ ਲੇਬਲ ਕਰੋ (ਇਕੋ ਸਮੇਂ ਕਈ ਸੈਂਪਲਾਂ ਦੇ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਸਹਾਇਕ)
- 562 nm 'ਤੇ ਆਪਣੇ ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਤੋਂ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
- ਮਾਈਕਰੋਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ ਤੁਹਾਨੂੰ ਕਿੰਨੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ ਦਿਓ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟ ਲਈ 10-50 μg, ਇਮਿਊਨੋਪ੍ਰੇਸਿਪਿਟੇਸ਼ਨ ਲਈ 500-1000 μg)
ਆਪਣੀ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਟਾਈਪ ਚੁਣੋ:
- ਸਟੈਂਡਰਡ BCA: ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ, 20-2000 μg/mL ਰੇਂਜ ਲਈ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ
- ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ BCA: ਤਨੁ ਸੈਂਪਲਾਂ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ (5-250 μg/mL)
- ਮਾਈਕਰੋ BCA: ਸੀਮਤ ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਫਾਰਮੈਟ
- ਕਸਟਮ: ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਵੱਖਰੀ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਬਣਾਈ ਹੈ ਤਾਂ ਆਪਣੀ ਢਾਲ ਅਤੇ ਇੰਟਰਸੈਪਟ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
ਆਪਣਾ ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ:
- ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਤੁਰੰਤ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਤੁਹਾਨੂੰ ਕਿੰਨੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਲਿਟਰ ਪਾਈਪੇਟ ਕਰਨੇ ਹਨ
- ਇਕੋ ਸਮੇਂ ਕਈ ਸੈਂਪਲ ਜੋੜ ਕੇ ਪੂਰੀ ਪਲੇਟ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
- ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਸਿੱਧਾ ਆਪਣੀ ਲੈਬ ਨੋਟਬੁੱਕ ਜਾਂ LIMS ਵਿੱਚ ਕਾਪੀ ਕਰੋ

ਵਾਸਤਵਿਕ ਉਦਾਹਰਣ

ਮੰਨ ਲਓ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਛੇ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਭਿਵਿਅਕਤੀ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸੈਂਪਲ ਤਿਆਰ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ। ਤੁਸੀਂ ਆਪਣਾ BCA ਅਸੇਅ ਚਲਾਉਂਦੇ ਹੋ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸੈਂਪਲ ਵਿੱਚ 0.75 ਦੀ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗ ਆਉਂਦੀ ਹੈ। ਤੁਹਾਨੂੰ ਹਰ ਲੇਨ ਲਈ 20 μg ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।

ਇੱਕ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ (ਢਾਲ = 2.0, ਇੰਟਰਸੈਪਟ = 0) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ:

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
ਲੋੜੀਂਦਾ ਸੈਂਪਲ ਵੋਲਿਊਮ = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

ਇਸ ਸੈਂਪਲ ਤੋਂ 13.33 μL ਪਾਈਪੇਟ ਕਰੋ, ਆਪਣਾ ਲੋਡਿੰਗ ਬਫਰ ਜੋੜੋ, ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਬਿਲਕੁਲ 20 μg ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ। ਇਸ ਦੌਰਾਨ, 1.2 ਦੀ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਵਾਲਾ ਤੁਹਾਡਾ ਸੈਂਪਲ ਉਸੇ 20 μg ਲਈ ਸਿਰਫ 8.33 μL ਦੀ ਲੋੜ ਰੱਖੇਗਾ। ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਹਰ ਸੈਂਪਲ ਲਈ ਇਸ ਗਣਨਾ ਨੂੰ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ - ਬੱਸ ਆਪਣੀਆਂ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦਾਖਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਇਕੋ ਸਮੇਂ ਸਾਰੇ ਵੋਲਿਊਮ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ।

ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ

ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਕਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ:

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ: ਇਹ ਚੁਣੇ ਗਏ ਮਾਨਕ ਵੱਢ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਤੁਹਾਡੀ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗ ਤੋਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ (μg/μL)।
ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ: ਇਹ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਤੁਹਾਡੀ ਚਾਹੀਦੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਹੈ। ਇਹ ਮੁੱਲ ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਵਰਤੋਗੇ।
ਚੇਤਾਵਨੀਆਂ ਅਤੇ ਸਿਫਾਰਸ਼ਾਂ: ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਹੇਠ ਲਈ ਚੇਤਾਵਨੀਆਂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ:
- ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗਾਂ (>3.0) ਜੋ ਅਸਾਈ ਦੀ ਰੈਖਿਕ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ
- ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗਾਂ (<0.1) ਜੋ ਪਛਾਣ ਸੀਮਾ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ
- ਗਣਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਵੋਲਿਊਮ ਜੋ ਅਵਾਸਤਵਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਡੇ (>1000 μL) ਜਾਂ ਛੋਟੇ (<1 μL) ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ

ਲੈਬ ਵਿੱਚ ਵਾਸਤਵਿਕ ਅਨੁਪ੍ਰਯੋਗ

ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟ ਨਮੂਨਾ ਤਿਆਰੀ

ਅਸਮਾਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲੋਡਿੰਗ ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟ ਦੇ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਨਤੀਜੇ ਨਾ ਦੇਣ ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਕਾਰਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ। ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਲੇਨ ਵਿੱਚ ਮਜਬੂਤ ਬੈਂਡ ਅਤੇ ਦੂਜੇ ਵਿੱਚ ਹਲਕੇ ਬੈਂਡ ਦੇਖ ਸਕਦੇ ਹੋ - ਇਸ ਲਈ ਨਹੀਂ ਕਿ ਅਭਿਵਿਅਕਤੀ ਦੇ ਪੱਧਰ ਵੱਖ ਹਨ, ਬਲਕਿ ਇਸ ਲਈ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲੋਡ ਕੀਤਾ ਹੈ।

ਸੁਧਾਰ ਸਰਲ ਹੈ ਪਰ ਇਸ ਲਈ ਸਟੀਕ ਵੋਲਿਊਮ ਗਣਨਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ BCA ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਹੋਣ, ਹਰ ਲੇਨ ਲਈ ਕਿੰਨਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲੋਡ ਕਰਨਾ ਹੈ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ (ਮੈਂ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਚੁਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਲਈ 20-30 μg, ਘੱਟ ਮੌਜੂਦ ਟੀਚਿਆਂ ਲਈ 50 μg ਤੱਕ ਵਰਤਦਾ ਹਾਂ)। ਹਰ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਵੋਲਿਊਮ ਗਣਨਾ ਕਰੋ, ਫਿਰ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਨਾਲ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਅੰਤਮ ਵੋਲਿਊਮ ਤੱਕ ਨਾਮਲ ਕਰੋ ਲਾਏਮਲੀ ਬਫਰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ।

ਇੱਕ ਆਮ ਗਲਤੀ: ਲੋਡਿੰਗ ਬਫਰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਆਪਣੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਵੋਲਿਊਮ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਵ ਭੁੱਲ ਜਾਣਾ। ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ 15 μL ਕੁੱਲ ਲੋਡ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ ਅਤੇ ਤੁਹਾਡਾ ਲੋਡਿੰਗ ਬਫਰ 4x ਹੈ, ਤਾਂ ਤੁਹਾਨੂੰ 3.75 μL ਬਫਰ ਅਤੇ 11.25 μL ਆਪਣੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਵਿਲਾਏਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ। ਆਪਣੇ ਵਿਲਾਏਣ ਦੀ ਯੋਜਨਾ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।

[ਬਾਕੀ ਅਨੁਵਾਦ ਜਾਰੀ ਰਹੇਗਾ...]

ਉੱਨਤ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਵਿਚਾਰ

ਕਸਟਮ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ

ਜਦੋਂਕਿ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਮੂਲ BCA ਪਰਖ ਲਈ ਡਿਫੌਲਟ ਮਾਪਦੰਡ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਤੁਸੀਂ ਆਪਣਾ ਖੁਦ ਦਾ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਬਣਾਇਆ ਹੈ ਤਾਂ ਕਸਟਮ ਮੁੱਲ ਵੀ ਦਾਖਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ। ਇਹ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਪਯੋਗੀ ਹੈ ਜਦੋਂ:

ਗੈਰ-ਮਾਨਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹੋ
ਸੋਧੇ ਗਏ BCA ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦਾ ਉਪਯੋਗ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ
ਅਜਿਹੀਆਂ ਵਸਤੂਆਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਕੰਮ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ ਜੋ ਪਰਖ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ

ਕਸਟਮ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਲਈ:

ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੇ ਵਿਕਲਪਾਂ ਵਿੱਚੋਂ "ਕਸਟਮ" ਚੁਣੋ
ਆਪਣੇ ਢਾਅ ਅਤੇ ਇੰਟਰਸੈਪਟ ਮੁੱਲ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇਹਨਾਂ ਮੁੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਾਰੀਆਂ ਬਾਅਦ ਦੀਆਂ ਗਣਨਾਵਾਂ ਲਈ ਕਰੇਗਾ

ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਨਿਪਟਾਉਣਾ

ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨੇ ਜੋੜਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਪਯੋਗੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਬੈਚ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਦੇ ਲਾਭ:

ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਸਾਰੇ ਵੋਲਿਊਮ ਗਣਨਾ ਕਰਕੇ ਸਮਾਂ ਬਚਾਓ
ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰਤਾ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰੋ
ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ ਦੀ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕਰੋ
ਬਾਹਰ ਨਿਕਲਣ ਵਾਲੇ ਜਾਂ ਸੰਭਾਵਿਤ ਮਾਪ ਦੀਆਂ ਗਲਤੀਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰੋ

ਆਮ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕਰਨਾ

ਰੈਖਿਕ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਉੱਪਰ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ

2.0 ਤੋਂ ਉੱਪਰ ਦੀਆਂ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ BCA ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਰੈਖਿਕ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਤੁਸੀਂ ਇਹ ਬਹੁਤ ਸਾਂਦ੍ਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨਾਲ ਵੇਖ ਸਕਦੇ ਹੋ - ਸ਼ੁੱਧ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਨਾਭਿਕੀ ਐਕਸਟ੍ਰੈਕਟ, ਜਾਂ ਗਲਤ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਤਨੁ ਕੀਤੇ ਲਾਈਸੇਟ।

ਹੱਲ ਸਧਾਰਨ ਹੈ: ਆਪਣੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਾਣੀ ਜਾਂ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਵਿੱਚ 1:5 ਜਾਂ 1:10 ਤਨੁ ਕਰੋ, BCA ਪਰਖ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਚਲਾਓ, ਅਤੇ ਆਪਣੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ ਨੂੰ ਤਨੁਕਰਨ ਦੇ ਕਾਰਕ ਨਾਲ ਗੁਣਾ ਕਰੋ। ਆਪਣੇ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਰੈਖਿਕ ਸੀਮਾ ਤੋਂ ਪਰੇ ਵਧਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਨਾ ਕਰੋ - ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਅਤੇ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਟੁੱਟ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਘੱਟ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।

ਪਛਾਣ ਸੀਮਾ ਦੇ ਨੇੜੇ ਘੱਟ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ

ਜਦੋਂ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ 0.1 ਤੋਂ ਹੇਠਾਂ ਡਿੱਗ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਮਾਪ ਦੀ ਸਟੀਕਤਾ ਸਮੱਸਿਆਗ੍ਰਸਤ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਤੁਸੀਂ ਉਸ ਨਿਚਲੇ ਪਛਾਣ ਪੱਧਰ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹੋ ਜਿੱਥੇ ਅਬਸੋਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗ ਵਿੱਚ ਛੋਟੇ ਵੇਰਵੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਸਾਂਦ੍ਰਤਾ ਵਿੱਚ ਵੱਡੇ ਵੇਰਵਿਆਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।

ਤਨੁ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ, ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਐਨਹੈਂਸਡ ਜਾਂ ਮਾਈਕਰੋ BCA ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਕਰੋ। ਵਿਕਲਪਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਸੈਂਟ੍ਰੀਫਿਊਜਲ ਫਿਲਟਰ (ਅਮਿਕੋਨ ਜਾਂ ਇਸ ਵਰਗੇ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਵਿਧੀਆਂ ਦਾ ਵਿਕਾਸ

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ 1883 ਦੀ ਕਜੈਲਡਾਹਲ ਵਿਧੀ ਤੋਂ ਬਹੁਤ ਅੱਗੇ ਵੱਧ ਚੁੱਕਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਮਾਪਣ ਲਈ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਉਬਲਦੇ ਸਲਫਿਊਰਿਕ ਐਸਿਡ ਵਿੱਚ ਪਕਾਉਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਸੀ। ਲੈਬਾਂ ਨੂੰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਉਪਕਰਣਾਂ ਅਤੇ ਕਾਫੀ ਮਹਾਰਤ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਸੀ ਬੱਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਏਕਾਗਰਤਾ ਦਾ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਉਣ ਲਈ।

ਅਧੁਨਿਕ BCA ਪਰਖ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ

ਬਾਇਊਰੇਟ ਟੈਸਟ (ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ 1900 ਦੇ ਦਹਾਕੇ) ਨੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਵਿੱਚ ਰੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਲਿਆਂਦਾ। ਪੈਪਟਾਈਡ ਬੰਧ ਕ੍ਾਰੀ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਤਾਂਬੇ ਦੇ ਆਇਨਾਂ ਨਾਲ ਜਟਿਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇੱਕ ਬੈਂਗਨੀ ਰੰਗ ਬਣਦਾ ਹੈ। ਸਰਲ, ਪਰ ਬਹੁਤ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਨਹੀਂ।

ਓਲੀਵਰ ਲੋਵਰੀ ਨੇ 1951 ਵਿੱਚ ਬਾਇਊਰੇਟ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਫੋਲਿਨ-ਸਿਓਕਾਲਟੇਊ ਰੀਏਜੈਂਟ ਨਾਲ ਜੋੜ ਕੇ ਇਸ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਿਆ। ਲੋਵਰੀ ਪਰਖ ਦਹਾਕਿਆਂ ਤੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਉੱਤੇ ਰਾਜ ਕਰਦੀ ਰਹੀ, ਪਰ ਇਸ ਦੀ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਮਜ਼ੋਰੀ ਸੀ: ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਆਮ ਲੈਬ ਰਸਾਇਣ - ਡिटरजेंट, EDTA, ਯਾ ਉੱਚ ਲੂਣ ਏਕਾਗਰਤਾ - ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਸਨ।

ਮੈਰੀਅਨ ਬ੍ਰੈਡਫੋਰਡ ਦੀ 1976 ਦੀ ਵਿਧੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਕੂਮਾਸੀ ਬ੍ਰਿਲੀਅੰਟ ਬਲੂ ਜੀ-250 ਦਾ ਉਪਯੋਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਨੇ ਗਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ - 30 ਦੀ ਬਜਾਏ 5 ਮਿੰਟ ਵਿੱਚ ਨਤੀਜੇ - ਪਰ ਆਪਣੀਆਂ ਖੁਦ ਦੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀਆਂ। ਰੰਗ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬੇਸਿਕ ਅਮਿਨੋ ਐਸਿਡਾਂ ਨਾਲ ਬੰਧ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾ ਪੜਾਵਾਂ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਹੋਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਸੈੱਲ ਲਾਇਸਿਸ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਡिਟਰਜੈਂਟ ਏਕਾਗਰਤਾਵਾਂ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪਰਖ ਨੂੰ ਭੰਗ ਕਰ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ।

1985 ਵਿੱਚ BCA ਪਰਖ ਦਾ ਆਗਮਨ ਹੋਇਆ। ਪੌਲ ਸਮਿਥ ਅਤੇ ਪੀਅਰਸ ਕੈਮੀਕਲ ਕੰਪਨੀ ਦੇ ਸਹਿਯੋਗੀਆਂ ਨੇ ਪਛਾਣਿਆ ਕਿ ਬਾਇਸਿਨਕੋਨਿਨਿਕ ਐਸਿਡ ਪਾਰੰਪਰਿਕ ਬਾਇਊਰੇਟ ਰੀਏਜੈਂਟਾਂ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ Cu¹⁺ ਆਇਨਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਨਵੀਨੀਕਰਣ ਨੇ ਬਾਇਊਰੇਟ ਰਸਾਇਨ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਫਰ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇੱਕ ਅਜਿਹੀ ਵਿਧੀ ਬਣੀ ਜੋ ਡिਟਰਜੈਂਟ, ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸ਼ੱਕਰ ਅਤੇ ਹੋਰ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਵੀ ਵਿਸ਼ਵਸਨੀਯ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਬ੍ਰੈਡਫੋਰਡ ਜਾਂ ਲੋਵਰੀ ਪਰਖ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਹੀ ਕਾਰਣ ਹੈ ਕਿ BCA ਸੈੱਲ ਲਾਇਸੇਟ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਦਾ ਮਾਨਕ ਬਣ ਗਿਆ - ਇਹ ਵਾਸਤਵਿਕ ਨਮੂਨਾ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਲਈ ਕੋਡ ਉਦਾਹਰਣਾਂ

Excel ਫਾਰਮੂਲਾ

1=IF(B2<=0,"ਗਲਤੀ: ਅਵੈਲਡ ਅਬਸਰਬੈਂਸ",IF(C2<=0,"ਗਲਤੀ: ਅਵੈਲਡ ਨਮੂਨਾ ਭਾਰ",C2/(2*B2)))
2
3' ਜਿੱਥੇ:
4' B2 ਵਿੱਚ ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਰੀਡਿੰਗ ਹੈ
5' C2 ਵਿੱਚ ਇੱਛਤ ਨਮੂਨਾ ਭਾਰ ਹੈ μg ਵਿੱਚ
6' ਫਾਰਮੂਲਾ ਲੋੜੀਂਦਾ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ μL ਵਿੱਚ
7

Python ਲਾਗੂਕਰਨ

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ।"""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਅਤੇ ਇੱਛਤ ਭਾਰ ਦੇ ਅਧਾਰ 'ਤੇ ਲੋੜੀਂਦਾ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਗਣਨਾ ਕਰੋ।"""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("ਨਮੂਨਾ ਭਾਰ ਧਨਾਤਮਕ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਧਨਾਤਮਕ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# ਉਦਾਹਰਨ ਵਰਤੋਂ
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"ਅਬਸਰਬੈਂਸ {absorbance} ਅਤੇ ਇੱਛਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਭਾਰ {sample_mass} μg ਲਈ:")
31    print(f"ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"ਲੋੜੀਂਦਾ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"ਗਲਤੀ: {e}")
35

R ਕੋਡ ਲਈ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ

1# ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਲਈ ਫੰਕਸ਼ਨ
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਲਈ ਫੰਕਸ਼ਨ
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("ਨਮੂਨਾ ਭਾਰ ਧਨਾਤਮਕ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਧਨਾਤਮਕ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# ਉਦਾਹਰਨ ਵਰਤੋਂ
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("ਅਬਸਰਬੈਂਸ %.2f ਅਤੇ ਇੱਛਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਭਾਰ %.2f μg ਲਈ:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("ਲੋੜੀਂਦਾ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("ਗਲਤੀ: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript ਲਾਗੂਕਰਨ

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("ਨਮੂਨਾ ਭਾਰ ਧਨਾਤਮਕ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਧਨਾਤਮਕ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// ਉਦਾਹਰਨ ਵਰਤੋਂ
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`ਅਬਸਰਬੈਂਸ ${absorbance} ਅਤੇ ਇੱਛਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਭਾਰ ${sampleMass} μg ਲਈ:`);
33  console.log(`ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`ਲੋੜੀਂਦਾ ਨਮੂਨਾ ਵੋਲਿਊਮ: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`ਗਲਤੀ: ${error.message}`);
37}
38

ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ ਦਾ ਦਸਤਾਵੇਜ਼ੀਕਰਨ

ਅਬਸਰਬੈਂਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਸੀਮਾ ਦੇ ਅੰਦਰ ਰੈਖਿਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਹੇਠਾਂ ਇੱਕ ਮਾਨਕ BCA ਵੱਕਰ ਦਾ ਦਸਤਾਵੇਜ਼ੀਕਰਨ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ:

[ਬਾਕੀ SVG ਕੋਡ ਉਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਹੇਗਾ ਜਿਵੇਂ ਮੂਲ ਵਿੱਚ ਸੀ]

ਹੋਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਵਿਧੀਆਂ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ

ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਫਾਇਦੇ ਅਤੇ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ। ਇੱਥੇ BCA ਪ੍ਰੀਖਣ ਹੋਰ ਆਮ ਵਿਧੀਆਂ ਨਾਲ ਕਿਵੇਂ ਤੁਲਨਾ ਕਰਦਾ ਹੈ:

ਵਿਧੀ	ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਸੀਮਾ	ਫਾਇਦੇ	ਸੀਮਾਵਾਂ	ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਲਈ
BCA ਪ੍ਰੀਖਣ	5-2000 μg/mL	• ਡिटरजेंਟਾਂ ਨਾਲ ਅਨੁਕੂਲ • ਘੱਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ-ਤੋਂ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵੇਰਵਾ • ਸਥਿਰ ਰੰਗ ਵਿਕਾਸ	• ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਏਜੰਟਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ • ਕੁਝ ਚੇਲੇਟਿੰਗ ਏਜੰਟਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ	• ਆਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ • ਡਿਟਰਜੈਂਟ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ
ਬ੍ਰੈਡਫੋਰਡ ਪ੍ਰੀਖਣ	1-1500 μg/mL	• ਤੇਜ਼ (2-5 ਮਿੰਟ) • ਘੱਟ ਹਸਤਖੇਪ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਵਸਤੂਆਂ	• ਉੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ-ਤੋਂ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵੇਰਵਾ • ਡਿਟਰਜੈਂਟਾਂ ਨਾਲ ਅਸੰਗਤ	• ਤੇਜ਼ ਮਾਪ • ਡਿਟਰਜੈਂਟ-ਮੁਕਤ ਨਮੂਨੇ
ਲੋਰੀ ਵਿਧੀ	1-1500 μg/mL	• ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਥਾਪਤ • ਚੰਗੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ	• ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਹਸਤਖੇਪ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਵਸਤੂਆਂ • ਕਈ ਚਰਣ	• ਇਤਿਹਾਸਕ ਸੰਗਤਤਾ • ਸ਼ੁੱਧ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਮੂਨੇ
UV ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ (280 nm)	20-3000 μg/mL	• ਗੈਰ-ਨਾਸ਼ਕ • ਬਹੁਤ ਤੇਜ਼ • ਕੋਈ ਰੀਏਜੈਂਟ ਨਹੀਂ ਲੋੜੀਂਦਾ	• ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ • ਸ਼ੁੱਧ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਲੋੜ	• ਸ਼ੁੱਧ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਘੋਲ • ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਣ ਦੌਰਾਨ ਤੇਜ਼ ਜਾਂਚ
ਫਲੋਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ	0.1-500 μg/mL	• ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ • ਵਿਆਪਕ ਡਾਇਨੇਮਿਕ ਰੇਂਜ	• ਮਹਿੰਗੇ ਰੀਏਜੈਂਟ • ਫਲੋਰੋਮੀਟਰ ਦੀ ਲੋੜ	• ਬਹੁਤ ਪਤਲੇ ਨਮੂਨੇ • ਸੀਮਿਤ ਨਮੂਨਾ ਮਾਤਰਾ

ਅਕਸਰ ਪੁੱਛੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸਵਾਲ

BCA ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਿਸ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ?

BCA ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਦਾ ਮਾਪ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਤੁਸੀਂ ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋਗੇ ਜਦੋਂ ਤੁਹਾਨੂੰ ਪਤਾ ਕਰਨਾ ਹੋਵੇ ਕਿ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਕਿੰਨਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ—ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟਿੰਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਮਾਨ ਲੋਡਿੰਗ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਏਂਜਾਈਮ ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਗਤੀਵਿਧੀ ਮਾਪਾਂ ਨੂੰ ਸੰਤੁਲਿਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਣ ਦੌਰਾਨ ਉਪਜ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, ਜਾਂ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ ਲਈ ਨਮੂਨੇ ਤਿਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ। ਇਹ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਮੋਲੇਕੂਲਰ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਜੈਵ ਰਸਾਇਣ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡਿਫ਼ੌਲਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਪ ਵਿਧੀ ਬਣ ਗਈ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਆਮ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੇਟ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਡिटरਜੈਂਟ ਅਤੇ ਬਫਰ ਘਟਕਾਂ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲ ਸਕਦੀ ਹੈ।

BCA ਅਸੇਸਮੈਂਟ ਕਿੰਨੀ ਸਟੀਕ ਹੈ?

ਚੰਗੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਵਿੱਚ, 5-10% ਸਟੀਕਤਾ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕਰੋ। ਇਹ ਇਸ ਗੱਲ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਸਹੀ ਮਾਨਕ ਵੱਕਰ (ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 5-6 ਬਿੰਦੂ ਜੋ ਤੁਹਾਡੀ �अਪੇਖਿਤ ਸਾਂਦਰਤਾ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਕਵਰ ਕਰਦੇ ਹਨ), ਤਾਜ਼ਾ ਰੀਏਜੈਂਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ, ਅਤੇ ਇਹ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰਨਾ ਕਿ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਸਾਂਦਰਤਾ ਵਿੱਚ ਹਸਤਖੇਪ ਕਰਨ ਵਾਲੀਆਂ ਵਸਤਾਂ ਨਾ ਹੋਣ। ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੰਰਚਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ—ਕੋਲਾਜਨ ਅਤੇ ਜੈਲੇਟਿਨ ਅਸਧਾਰਨ ਰੂਪ ਤੋਂ ਉੱਚੀਆਂ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਅਮਿਨੋ ਐਸਿਡ ਸੰਯੋਜਨ ਕਾਰਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਹਿਸਟੋਨ ਘੱਟ ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਦਿੰਦੇ ਹਨ। ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਅਨੁਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ, 5-10% ਤ੍ਰੁਟੀ ਸਵੀਕਾਰ ਯੋਗ ਹੈ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਕਿਸੇ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਣ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਲੋਡ ਕਰਨ ਨਾਲੋਂ ਬਹੁਤ ਬਿਹਤਰ ਹੈ।

[ਅਨੁਵਾਦ ਜਾਰੀ ਰਹੇਗਾ...]

ਹਵਾਲੇ

ਸਮਿਥ ਪੀਕੇ, ਕ੍ਰੋਨ ਆਰਆਈ, ਹਰਮੈਨਸਨ ਜੀਟੀ, ਆਦਿ। "ਬਾਈਸਿਨਕੋਨਿਨਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਮਾਪ।" ਐਨਾਲਿਟਿਕਲ ਬਾਇਓਕੈਮਿਸਟਰੀ। 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ। "ਪਿਅਰਸ ਬੀਸੀਏ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਸੈਅ ਕਿੱਟ।" ਨਿਰਦੇਸ਼। ਉਪਲਬਧ ਹੈ: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
ਵਾਕਰ ਜੇਐਮ। "ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਲਈ ਬਾਈਸਿਨਕੋਨਿਨਿਕ ਐਸਿਡ (ਬੀਸੀਏ) ਅਸੈਅ।" ਵਿੱਚ: ਵਾਕਰ ਜੇਐਮ, ਸੰਪਾਦਕ। ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਹੈਂਡਬੁੱਕ। ਸਪ੍ਰਿੰਗਰ; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
ਓਲਸਨ ਬੀਜੇ, ਮਾਰਕਵੈਲ ਜੇ। "ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਂਦਰਤਾ ਦੇ ਨਿਰਧਾਰਣ ਲਈ ਅਸੈਅ।" ਕਰੰਟ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲਸ ਇਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਾਇੰਸ। 2007;ਅਧਿਆਏ 3:ਯੂਨਿਟ 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
ਨੋਬਲ ਜੇਈ, ਬੇਲੀ ਐਮਜੇ। "ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ।" ਐਨਜਾਈਮੋਲੋਜੀ ਦੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ। 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

ਆਪਣੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਸਰਲ ਬਣਾਓ

BCA ਪ੍ਰੀਖਣ ਤੁਹਾਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਏਕਾਂਤਰਤਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਅਜੇ ਵੀ ਉਹਨਾਂ ਨੰਬਰਾਂ ਨੂੰ ਆਪਣੇ ਵਾਸਤਵਿਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਪਾਈਪੇਟਿੰਗ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ। ਇਹ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਉਸ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਸੰਭਾਲਦਾ ਹੈ, ਭਾਵੇਂ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਇਕੱਲੇ ਵੈਸਟਰਨ ਬਲੌਟ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ ਜਾਂ 96 ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ। ਆਪਣੀ ਅਵਸ਼ੋਸ਼ਣ ਰੀਡਿੰਗ ਦਾਖਲ ਕਰੋ, ਆਪਣੀ ਲੱਖਿਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਸੰਗਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ।