حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA لبروتوكولات المختبر

احسب أحجام العينات بدقة استنادًا إلى قراءات امتصاص اختبار BCA والكتلة البروتينية المرغوبة. أساسي لتحميل البروتين بشكل متسق في النقل الغربي وتطبيقات المختبر الأخرى.

حاسبة حجم عينة BCA لامتصاص الضوء

تقوم هذه الأداة بحساب حجم العينة المطلوب بناءً على نتائج امتصاص BCA وكتلة العينة. أدخل قيمة الامتصاص وكتلة العينة لكل عينة لحساب حجم العينة المقابل.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

مدخلات العينة

عينة 1

اسم العينة

امتصاص BCA*

كتلة العينة (ميكروغرام)*

حجم العينة

Copy

N/A μL

صيغة الحساب

يتم حساب حجم العينة باستخدام الصيغة التالية:

حجم العينة (ميكرولتر) = كتلة العينة (ميكروغرام) / تركيز البروتين (ميكروغرام/ميكرولتر)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

التوثيق

حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA

مقدمة

حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA هي أداة متخصصة مصممة لمساعدة الباحثين وتقنيي المختبرات على تحديد حجم العينة المناسب للتجارب بدقة بناءً على نتائج اختبار BCA (حمض البيكينشونيك). تأخذ هذه الحاسبة قراءات الامتصاص من اختبار BCA وكتلة العينة المطلوبة لحساب الحجم الدقيق المطلوب لتحميل البروتين بشكل متسق في تطبيقات مثل نقل البروتين، واختبارات الإنزيم، وتقنيات تحليل البروتين الأخرى.

يُعتبر اختبار BCA واحدًا من أكثر الطرق استخدامًا لتحديد كمية البروتين في مختبرات الكيمياء الحيوية وعلم الأحياء الجزيئي. من خلال قياس امتصاص عينات البروتين الخاصة بك ومقارنتها بمنحنى قياسي، يمكنك تحديد تركيز البروتين بدقة عالية. تعمل حاسبتنا على تبسيط هذه العملية من خلال تحويل قراءات الامتصاص تلقائيًا إلى أحجام عينات مطلوبة لتجاربك.

فهم اختبار BCA وحساب حجم العينة

ما هو اختبار BCA؟

اختبار الحمض البيكينشونيك (BCA) هو اختبار كيميائي حيوي لتحديد التركيز الكلي للبروتين في محلول. يعتمد مبدأ هذا الاختبار على تكوين معقد Cu²⁺-بروتين في ظروف قلوية، يلي ذلك تقليل Cu²⁺ إلى Cu¹⁺. كمية التخفيف تتناسب مع البروتين الموجود. يشكل BCA معقدًا ملونًا بنفسجي مع Cu¹⁺ في البيئات القلوية، مما يوفر أساسًا لمراقبة تقليل النحاس بواسطة البروتينات.

تزداد شدة اللون البنفسجي بشكل متناسب مع تركيز البروتين، والذي يمكن قياسه باستخدام مقياس الطيف الضوئي عند حوالي 562 نانومتر. ثم تتم مقارنة قراءات الامتصاص بمنحنى قياسي لتحديد تركيز البروتين في العينات غير المعروفة.

الصيغة لحساب حجم العينة

الصيغة الأساسية لحساب حجم العينة من نتائج امتصاص BCA هي:

$\text{حجم العينة (ميكرولتر)} = \frac{\text{كتلة العينة (ميكروغرام)}}{\text{تركيز البروتين (ميكروغرام/ميكرولتر)}}$

حيث:

حجم العينة هو حجم العينة المطلوبة (بالميكرولترات، μL)
كتلة العينة هي الكمية المطلوبة من البروتين للاستخدام (بالميكروغرام، μg)
تركيز البروتين يتم اشتقاقه من قراءة امتصاص BCA (بالميكروغرام/ميكرولتر)

يتم حساب تركيز البروتين من قراءة الامتصاص باستخدام معادلة منحنى قياسي:

$\text{تركيز البروتين (ميكروغرام/ميكرولتر)} = \text{ميل} \times \text{امتصاص} + \text{مقطع}$

بالنسبة لاختبار BCA القياسي، يكون الميل النموذجي حوالي 2.0، وغالبًا ما يكون المقطع قريبًا من الصفر، على الرغم من أن هذه القيم يمكن أن تتفاوت بناءً على ظروف الاختبار الخاصة بك ومنحنى القياس القياسي.

كيفية استخدام حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA

تعمل حاسبتنا على تبسيط عملية تحديد أحجام العينات من نتائج اختبار BCA. اتبع هذه الخطوات للحصول على حسابات دقيقة:

أدخل معلومات العينة:
- قدم اسمًا لعينة الخاصة بك (اختياري ولكنه مفيد لتتبع العينات المتعددة)
- أدخل قراءة الامتصاص من مقياس الطيف الضوئي الخاص بك
- أدخل كتلة العينة المطلوبة (كمية البروتين التي ترغب في استخدامها بالميكروغرام)
اختر نوع منحنى القياس القياسي:
- قياسي (افتراضي): يستخدم معلمات منحنى قياس BCA القياسية
- محسّن: لبروتوكول محسّن للحساسية
- ميكرو: لبروتوكول صفيحة الميكرو
- مخصص: يتيح لك إدخال قيم الميل والمقطع الخاصة بك
عرض النتائج:
- ستعرض الحاسبة على الفور حجم العينة المطلوب بالميكرولترات
- يتم تقديم النتائج أيضًا في جدول ملخص للرجوع السهل
- للعينات المتعددة، يمكنك إضافة المزيد من الإدخالات ومقارنة النتائج
نسخ أو تصدير النتائج:
- استخدم زر النسخ لنقل النتائج إلى دفتر ملاحظات المختبر أو تطبيقات أخرى
- يمكن حفظ جميع الحسابات للرجوع إليها في المستقبل

مثال خطوة بخطوة

دعنا نتناول مثالًا عمليًا:

لقد أجريت اختبار BCA وحصلت على قراءة امتصاص تبلغ 0.75 لعينة البروتين الخاصة بك.
تريد تحميل 20 ميكروغرام من البروتين لعملية النقل الخاصة بك.
باستخدام منحنى القياس القياسي (ميل = 2.0، مقطع = 0):
- تركيز البروتين = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 ميكروغرام/ميكرولتر
- حجم العينة المطلوب = 20 ميكروغرام ÷ 1.5 ميكروغرام/ميكرولتر = 13.33 ميكروغرام

هذا يعني أنه يجب عليك تحميل 13.33 ميكرولتر من عينتك للحصول على 20 ميكروغرام من البروتين.

فهم النتائج

توفر الحاسبة عدة معلومات مهمة:

تركيز البروتين: يتم حسابه من قراءة الامتصاص باستخدام منحنى القياس القياسي المحدد. يمثل كمية البروتين لكل وحدة حجم في عينتك (ميكروغرام/ميكرولتر).
حجم العينة: هو حجم عينتك الذي يحتوي على الكمية المطلوبة من البروتين. هذه القيمة هي ما ستستخدمه عند إعداد تجاربك.
تحذيرات وتوصيات: قد تقدم الحاسبة تحذيرات بشأن:
- قراءات امتصاص عالية جدًا (>3.0) قد تكون خارج النطاق الخطي للاختبار
- قراءات امتصاص منخفضة جدًا (<0.1) قد تكون قريبة من حد الكشف
- أحجام محسوبة قد تكون كبيرة جدًا (>1000 ميكرولتر) أو صغيرة جدًا (<1 ميكرولتر)

التطبيقات وحالات الاستخدام

إعداد عينات النقل

أحد التطبيقات الأكثر شيوعًا لهذه الحاسبة هو إعداد العينات لعمليات النقل. يعد تحميل البروتين بشكل متسق أمرًا حيويًا للحصول على نتائج موثوقة، وتضمن هذه الحاسبة تحميل نفس كمية البروتين لكل عينة، حتى عندما تختلف تركيزاتها.

سير العمل المثال:

قم بإجراء اختبار BCA على جميع عينات البروتين الخاصة بك
قرر على كمية بروتين متسقة لتحميلها (عادةً 10-50 ميكروغرام)
استخدم الحاسبة لتحديد الحجم المطلوب لكل عينة
أضف الأحجام المناسبة من محلول العينة ووكيل الاختزال
قم بتحميل الأحجام المحسوبة على الجل

اختبارات الإنزيم

بالنسبة لاختبارات الإنزيم، غالبًا ما يكون من الضروري استخدام كمية محددة من البروتين لتوحيد ظروف التفاعل عبر عينات أو تجارب مختلفة.

سير العمل المثال:

تحديد تركيز البروتين باستخدام اختبار BCA
حساب الحجم المطلوب للحصول على كمية البروتين المطلوبة
إضافة هذا الحجم إلى مزيج التفاعل
متابعة اختبار الإنزيم الخاص بك

تجارب الترسيب المناعي

في تجارب الترسيب المناعي (IP)، من المهم البدء بكمية متسقة من البروتين لمقارنة النتائج عبر ظروف مختلفة.

سير العمل المثال:

قياس تركيز البروتين لمستخلصات الخلايا أو الأنسجة باستخدام اختبار BCA
حساب الأحجام اللازمة للحصول على كميات متساوية من البروتين (عادةً 500-1000 ميكروغرام)
ضبط جميع العينات إلى نفس الحجم باستخدام محلول التحلل
متابعة مع حاضنات الأجسام المضادة والترسيب

تنقية البروتين

أثناء تنقية البروتين، غالبًا ما يكون من الضروري تتبع تركيز البروتين وحساب العوائد في خطوات مختلفة.

سير العمل المثال:

جمع الفقرات أثناء التنقية
إجراء اختبار BCA على الفقرات المختارة
حساب تركيز البروتين والمبلغ الإجمالي للبروتين
تحديد الأحجام اللازمة للتطبيقات التالية

الميزات المتقدمة والاعتبارات

منحنيات القياس القياسية المخصصة

بينما توفر الحاسبة معلمات افتراضية لاختبارات BCA القياسية، يمكنك أيضًا إدخال قيم مخصصة إذا كنت قد أنشأت منحنى قياسي خاص بك. هذا مفيد بشكل خاص عند:

العمل مع عينات بروتين غير قياسية
استخدام بروتوكولات BCA المعدلة
العمل في وجود مواد قد تتداخل مع الاختبار

لاستخدام منحنى قياسي مخصص:

اختر "مخصص" من خيارات منحنى القياس القياسي
أدخل قيم الميل والمقطع الخاصة بك
ستستخدم الحاسبة هذه القيم لجميع الحسابات التالية

التعامل مع عينات متعددة

تتيح لك الحاسبة إضافة عينات متعددة وحساب أحجامها في وقت واحد. هذا مفيد بشكل خاص عند إعداد عينات لتجارب تتطلب تحميل بروتين متسق عبر ظروف متعددة.

فوائد معالجة الدفعات:

توفير الوقت من خلال حساب جميع الأحجام دفعة واحدة
ضمان الاتساق عبر جميع عيناتك
مقارنة تركيزات البروتين بين العينات بسهولة
تحديد القيم الشاذة أو الأخطاء المحتملة في القياس

التعامل مع الحالات الحدية

قراءات امتصاص عالية جدًا

إذا كانت قراءة الامتصاص لديك تتجاوز 2.0، فقد تكون خارج النطاق الخطي للاختبار BCA. في هذه الحالات:

قم بتخفيف عينتك وأعد إجراء اختبار BCA
بدلاً من ذلك، استخدم نظام التحذير الخاص بالحاسبة، الذي سيشير إلى القراءات المحتملة للمشكلات

قراءات امتصاص منخفضة جدًا

بالنسبة لقراءات الامتصاص التي تقل عن 0.1، قد تكون بالقرب من حد الكشف للاختبار، مما قد يؤثر على الدقة. ضع في اعتبارك:

تركيز عينتك إذا كان ذلك ممكنًا
استخدام طريقة تحديد كمية البروتين الأكثر حساسية
ضبط تصميم تجاربك لاستيعاب كميات بروتين أقل

أحجام محسوبة كبيرة بشكل غير عملي

إذا اقترحت الحاسبة حجمًا كبيرًا جدًا لتطبيقك:

ضع في اعتبارك تركيز عينة البروتين الخاصة بك
اضبط كمية البروتين المطلوبة للأسفل إذا كان تصميم تجربتك يسمح بذلك
استخدم الحجم العملي الأقصى وسجل كمية البروتين الفعلية المستخدمة

تاريخ تحديد كمية البروتين واختبار BCA

كانت الكمية الدقيقة للبروتين مطلبًا أساسيًا في الكيمياء الحيوية وعلم الأحياء الجزيئي منذ ظهور هذه المجالات. اعتمدت الطرق المبكرة على تحديد محتوى النيتروجين، والتي كانت تستغرق وقتًا طويلاً وتتطلب معدات متخصصة.

تطور طرق تحديد كمية البروتين

طريقة كيلدال (1883): واحدة من أقدم الطرق لتحديد كمية البروتين، تعتمد على قياس محتوى النيتروجين.
اختبار البيوريت (أوائل القرن العشرين): تعتمد هذه الطريقة على تفاعل الروابط الببتيدية مع أيونات النحاس في محلول قلوي، مما ينتج لونًا بنفسجيًا.
اختبار لواري (1951): طوره أوليفر لواري، تجمع هذه الطريقة بين تفاعل البيوريت وكاشف فولين-سيكولتي، مما يزيد من الحساسية.
اختبار برادفورد (1976): طورت ماريون برادفورد هذه الطريقة باستخدام صبغة كواماسي برلينت الأزرق G-250، التي ترتبط بالبروتينات وتغير أقصى امتصاص.
اختبار BCA (1985): تم تطويره بواسطة بول سميث وزملائه في شركة بييرس الكيميائية، تم تصميم هذه الطريقة لتلبية قيود الطرق الموجودة، خاصةً التداخل من المواد الكيميائية المختلفة المستخدمة عادة في استخراج وتنقية البروتين.

كانت الابتكار الرئيسي هو استخدام الحمض البيكينشونيك لاكتشاف أيونات Cu¹⁺ الناتجة عن تقليل Cu²⁺ بواسطة البروتينات، مما يشكل معقدًا ملونًا بنفسجيًا يمكن قياسه طيفيًا. قدم هذا العديد من المزايا:

حساسية أعلى من طريقة البيوريت
أقل عرضة للتداخل من المواد غير البروتينية مقارنة بطريقة لواري
توافق أفضل مع المنظفات من اختبار برادفورد
بروتوكول أبسط مع عدد أقل من المواد والخطوات

منذ تقديمه، أصبح اختبار BCA واحدًا من أكثر طرق تحديد كمية البروتين استخدامًا في مختبرات الكيمياء الحيوية وعلم الأحياء الجزيئي في جميع أنحاء العالم.

أمثلة على التعليمات البرمجية لحساب حجم العينة

صيغة Excel

1=IF(B2<=0,"خطأ: امتصاص غير صالح",IF(C2<=0,"خطأ: كتلة عينة غير صالحة",C2/(2*B2)))
2
3' حيث:
4' B2 تحتوي على قراءة الامتصاص
5' C2 تحتوي على الكتلة المطلوبة للعينة بالميكروغرام
6' ترجع الصيغة حجم العينة المطلوب بالميكرولترات
7

تنفيذ Python

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """حساب تركيز البروتين من الامتصاص باستخدام منحنى القياس القياسي."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("لا يمكن أن يكون الامتصاص سالبًا")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """حساب حجم العينة المطلوب بناءً على الامتصاص وكتلة العينة المطلوبة."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("يجب أن تكون كتلة العينة إيجابية")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("يجب أن يكون تركيز البروتين المحسوب إيجابيًا")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# مثال للاستخدام
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # ميكروغرام
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"بالنسبة لقراءة الامتصاص {absorbance} وكتلة البروتين المطلوبة {sample_mass} ميكروغرام:")
31    print(f"تركيز البروتين: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} ميكروغرام/ميكرولتر")
32    print(f"حجم العينة المطلوب: {volume:.2f} ميكرولتر")
33except ValueError as e:
34    print(f"خطأ: {e}")
35

كود R للتحليل

1# وظيفة لحساب تركيز البروتين من الامتصاص
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("لا يمكن أن يكون الامتصاص سالبًا")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# وظيفة لحساب حجم العينة
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("يجب أن تكون كتلة العينة إيجابية")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("يجب أن يكون تركيز البروتين المحسوب إيجابيًا")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# مثال للاستخدام
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # ميكروغرام
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("بالنسبة لقراءة الامتصاص %.2f وكتلة البروتين المطلوبة %.2f ميكروغرام:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("تركيز البروتين: %.2f ميكروغرام/ميكرولتر\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("حجم العينة المطلوب: %.2f ميكرولتر\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("خطأ: %s\n", e$message))
39})
40

تنفيذ JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("لا يمكن أن يكون الامتصاص سالبًا");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("يجب أن تكون كتلة العينة إيجابية");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("يجب أن يكون تركيز البروتين المحسوب إيجابيًا");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// مثال للاستخدام
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // ميكروغرام
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`بالنسبة لقراءة الامتصاص ${absorbance} وكتلة البروتين المطلوبة ${sampleMass} ميكروغرام:`);
33  console.log(`تركيز البروتين: ${proteinConcentration.toFixed(2)} ميكروغرام/ميكرولتر`);
34  console.log(`حجم العينة المطلوب: ${volume.toFixed(2)} ميكرولتر`);
35} catch (error) {
36  console.error(`خطأ: ${error.message}`);
37}
38

تصور منحنى القياس القياسي

عادةً ما تكون العلاقة بين الامتصاص وتركيز البروتين خطية ضمن نطاق معين. أدناه هو تصور لمنحنى BCA القياسي:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

الامتصاص (562 نانومتر) تركيز البروتين (ميكروغرام/ميكرولتر)

منحنى القياس القياسي عينات قياسية

منحنى القياس القياسي BCA

مقارنة مع طرق تحديد كمية البروتين الأخرى

تتمتع طرق تحديد كمية البروتين المختلفة بمزايا وقيود مختلفة. إليك كيف يقارن اختبار BCA مع الطرق الشائعة الأخرى:

الطريقة	نطاق الحساسية	المزايا	القيود	الأفضل لـ
اختبار BCA	5-2000 ميكروغرام/مل	• متوافق مع المنظفات • أقل تباين بين البروتينات • استقرار في تطوير اللون	• يتداخل مع عوامل الاختزال • يتأثر ببعض عوامل التChelation	• تحديد كمية البروتين بشكل عام • عينات تحتوي على منظفات
اختبار برادفورد	1-1500 ميكروغرام/مل	• سريع (2-5 دقائق) • عدد قليل من المواد المتداخلة	• تباين عالي بين البروتينات • غير متوافق مع المنظفات	• قياسات سريعة • عينات خالية من المنظفات
طريقة لواري	1-1500 ميكروغرام/مل	• موثوق بها • حساسية جيدة	• العديد من المواد المتداخلة • خطوات متعددة	• الاتساق التاريخي • عينات بروتين نقية
الامتصاص فوق البنفسجي (280 نانومتر)	20-3000 ميكروغرام/مل	• غير مدمرة • سريعة جدًا • لا حاجة للمواد الكيميائية	• تتأثر بالأحماض النووية • تتطلب عينات نقية	• حلول بروتين نقية • فحوصات سريعة أثناء التنقية
الفلورية	0.1-500 ميكروغرام/مل	• أعلى حساسية • نطاق ديناميكي واسع	• مواد كيميائية باهظة الثمن • تتطلب مقياس الفلورية	• عينات رقيقة جدًا • حجم عينة محدود

الأسئلة الشائعة

ما هو استخدام اختبار BCA؟

يستخدم اختبار BCA (حمض البيكينشونيك) بشكل أساسي لتحديد تركيز البروتين الكلي في عينة. يُستخدم على نطاق واسع في الكيمياء الحيوية وعلم الأحياء الخلوي والجزيئي لتطبيقات مثل النقل، واختبارات الإنزيم، والترسيب المناعي، وتنقية البروتين.

ما مدى دقة اختبار BCA؟

يكون اختبار BCA عمومًا دقيقًا ضمن 5-10% عند إجرائه بشكل صحيح. تعتمد دقته على عدة عوامل بما في ذلك جودة منحنى القياس القياسي، وغياب المواد المتداخلة، وما إذا كانت تركيبة البروتين غير المعروفة مشابهة للبروتين القياسي المستخدم.

ما الذي يمكن أن يتداخل مع نتائج اختبار BCA؟

يمكن أن تتداخل العديد من المواد مع نتائج اختبار BCA، بما في ذلك:

عوامل الاختزال (DTT، β-ميركتوإيثانول، جلوثاثيون)
عوامل التChelation (EDTA، EGTA)
تركيزات عالية من السكريات البسيطة
الدهون
بعض المنظفات بتركيزات عالية
مركبات الأمونيا

ما الفرق بين اختبارات BCA واختبارات برادفورد؟

الاختلافات الرئيسية هي:

اختبار BCA أكثر توافقًا مع المنظفات والمواد السطحية
اختبار برادفورد أسرع (2-5 دقائق مقابل 30+ دقيقة لاختبار BCA)
BCA لديها تباين أقل بين البروتينات
برادفورد أكثر حساسية للأحماض الأمينية الأساسية
BCA تتأثر بعوامل الاختزال، بينما لا تتأثر برادفورد

لماذا حجم العينة المحسوب كبير جدًا؟

إذا أظهرت الحاسبة حجم عينة كبير جدًا، فإن ذلك يشير عادةً إلى تركيز بروتين منخفض في عينتك. قد يكون ذلك بسبب:

محتوى بروتين فعلي منخفض في عينتك الأصلية
فقدان البروتين أثناء التحضير
أخطاء في إجراء اختبار BCA
قراءة امتصاص غير دقيقة

فكر في تركيز عينتك أو ضبط تصميم تجربتك لاستيعاب تركيز البروتين المنخفض.

هل يمكنني استخدام هذه الحاسبة لطرق تحديد كمية البروتين الأخرى؟

تُصمم هذه الحاسبة خصيصًا لنتائج اختبار BCA. بينما ينطبق المبدأ الأساسي (تحويل التركيز إلى حجم) على طرق أخرى، فإن العلاقة بين الامتصاص وتركيز البروتين تختلف بين الاختبارات المختلفة. بالنسبة لطرق أخرى مثل برادفورد أو لواري، ستحتاج إلى استخدام معلمات منحنى قياس مختلفة.

كيف أتعامل مع العينات التي لديها امتصاص خارج النطاق الخطي؟

بالنسبة لقراءات الامتصاص التي تكون خارج النطاق الخطي (عادةً >2.0):

قم بتخفيف عينتك وأعد إجراء اختبار BCA
استخدم طريقة تحديد كمية البروتين المختلفة
اضبط منحنى القياس القياسي ليشمل معايير تركيز أعلى

ما البروتين الذي يجب أن أستخدمه كمعيار؟

يُعتبر الألبومين البقري (BSA) هو المعيار الأكثر استخدامًا لاختبارات BCA لأنه:

متاح بسهولة وغير مكلف
قابل للذوبان بشكل كبير
مستقر في المحلول
موصوف بشكل جيد

ومع ذلك، إذا كانت عيناتك تحتوي على بروتين مهيمن يختلف بشكل كبير عن BSA، فكر في استخدام ذلك البروتين كمعيار للحصول على نتائج أكثر دقة.

كم من الوقت يكون تفاعل BCA مستقرًا؟

يكون اللون البنفسجي الذي تم تطويره في تفاعل BCA مستقرًا لعدة ساعات عند درجة حرارة الغرفة ويمكن قياسه في أي وقت ضمن تلك الفترة. ومع ذلك، للحصول على أفضل النتائج، يُوصى بقياس جميع المعايير والعينات في نفس الوقت تقريبًا بعد تطوير اللون.

هل يمكنني إعادة استخدام منحنى القياس القياسي من تجربة سابقة؟

بينما من الممكن تقنيًا إعادة استخدام منحنى القياس القياسي، إلا أنه لا يُوصى بذلك للحصول على قياسات دقيقة. يمكن أن تؤثر التغيرات في المواد الكيميائية، وظروف الحضانة، ومعايرة الجهاز على العلاقة بين الامتصاص وتركيز البروتين. للحصول على نتائج موثوقة، قم بإنشاء منحنى قياسي جديد في كل مرة تقوم فيها بإجراء الاختبار.

المراجع

سميث PK، كروهن RI، هيرمانسون GT، وآخرون. "قياس البروتين باستخدام الحمض البيكينشونيك." الكيمياء الحيوية التحليلية. 1985؛150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
ثيرمو ساينتيفيك. "مجموعة اختبار BCA للبروتين من بييرس." التعليمات. متاحة على: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
ووكر JM. "اختبار الحمض البيكينشونيك (BCA) لتحديد كمية البروتين." في: ووكر JM، محرر. دليل بروتوكولات البروتين. سبرينغر؛ 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
أولسون BJ، ماركويل J. "اختبارات لتحديد كمية البروتين." بروتوكولات في علم البروتين. 2007؛الفصل 3:الوحدة 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
نوبل JE، بيلي MJ. "تحديد كمية البروتين." طرق في الإنزيمات. 2009؛463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

جرب حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA اليوم!

الآن بعد أن فهمت المبادئ وراء تحديد كمية البروتين باستخدام اختبار BCA وحساب حجم العينة، جرب حاسبتنا لتبسيط سير العمل في مختبرك. ببساطة أدخل قراءات الامتصاص وكتلة العينة المطلوبة للحصول على حسابات حجم العينة الدقيقة والفورية.

سواء كنت تعد عينات لعمليات النقل، أو اختبارات الإنزيم، أو أي تجربة تعتمد على البروتين، ستساعدك حاسبتنا على ضمان نتائج متسقة وموثوقة. وفر الوقت، وقلل الأخطاء، وحسن قابلية تكرار تجاربك مع حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA.

🔗

الأدوات ذات الصلة

اكتشف المزيد من الأدوات التي قد تكون مفيدة لسير عملك

حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA لبروتوكولات المختبر

حاسبة حجم عينة BCA لامتصاص الضوء

standardCurveTitle

مدخلات العينة

عينة 1

صيغة الحساب

التوثيق

حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA

مقدمة

فهم اختبار BCA وحساب حجم العينة

ما هو اختبار BCA؟

الصيغة لحساب حجم العينة

كيفية استخدام حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA

مثال خطوة بخطوة

فهم النتائج

التطبيقات وحالات الاستخدام

إعداد عينات النقل

اختبارات الإنزيم

تجارب الترسيب المناعي

تنقية البروتين

الميزات المتقدمة والاعتبارات

منحنيات القياس القياسية المخصصة

التعامل مع عينات متعددة

التعامل مع الحالات الحدية

قراءات امتصاص عالية جدًا

قراءات امتصاص منخفضة جدًا

أحجام محسوبة كبيرة بشكل غير عملي

تاريخ تحديد كمية البروتين واختبار BCA

تطور طرق تحديد كمية البروتين

أمثلة على التعليمات البرمجية لحساب حجم العينة

صيغة Excel

تنفيذ Python

كود R للتحليل

تنفيذ JavaScript

تصور منحنى القياس القياسي

مقارنة مع طرق تحديد كمية البروتين الأخرى

الأسئلة الشائعة

ما هو استخدام اختبار BCA؟

ما مدى دقة اختبار BCA؟

ما الذي يمكن أن يتداخل مع نتائج اختبار BCA؟

ما الفرق بين اختبارات BCA واختبارات برادفورد؟

لماذا حجم العينة المحسوب كبير جدًا؟

هل يمكنني استخدام هذه الحاسبة لطرق تحديد كمية البروتين الأخرى؟

كيف أتعامل مع العينات التي لديها امتصاص خارج النطاق الخطي؟

ما البروتين الذي يجب أن أستخدمه كمعيار؟

كم من الوقت يكون تفاعل BCA مستقرًا؟

هل يمكنني إعادة استخدام منحنى القياس القياسي من تجربة سابقة؟

المراجع

جرب حاسبة حجم العينة لامتصاص BCA اليوم!

الأدوات ذات الصلة

حاسبة حجم الخزان للأسطواني والكرات والمستطيل

حاسبة الحجم إلى المساحة لتغطية السوائل

حاسبة حجم الثقوب: الحفريات الأسطوانية والمستطيلة

حاسبة حجم الثقوب: قياس أحجام الحفر الأسطوانية

حاسبة حجم الخلية المكعبة: احسب الحجم من طول الحافة

حاسبة بسيطة لعامل التخفيف للسوائل المخبرية

حاسبة حجم الرمل: تقدير المواد لأي مشروع

حاسبة معامل امتصاص الفوتونين

حاسبة المولارية: أداة تركيز المحلول