🛠️

Whiz Tools

Calculadora de volum de mostra d'absorció BCA per a protocols de laboratori

Calculeu volums de mostra precisos basats en les lectures d'absorció de l'assaig BCA i la massa de proteïna desitjada. Essencial per a una càrrega de proteïna consistent en blots occidentals i altres aplicacions de laboratori.

Calculadora de Volum de Mostra d'Absorbància BCA

Aquesta eina calcula el volum de mostra necessari en funció dels resultats d'absorbància BCA i la massa de la mostra. Introduïu el valor d'absorbància i la massa de la mostra per a cada mostra per calcular el volum de mostra corresponent.

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

Entrades de Mostra

Mostra 1

Copy
N/A μL

Fórmula de Càlcul

El volum de la mostra es calcula utilitzant la següent fórmula:

Volum de la Mostra (μL) = Massa de la Mostra (μg) / Concentració de Proteïna (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Documentació

Calculador de Volum de Mostra d'Absorbància BCA

Introducció

El Calculador de Volum de Mostra d'Absorbància BCA és una eina especialitzada dissenyada per ajudar investigadors i tècnics de laboratori a determinar amb precisió el volum de mostra apropiat per a experiments basats en els resultats de l'assaig BCA (àcid bicinchoninic). Aquest calculador pren les lectures d'absorbància del vostre assaig BCA i la massa de mostra desitjada per calcular el volum precís necessari per a una càrrega de proteïna consistent en aplicacions com la transferència western, assaigs enzimàtics i altres tècniques d'anàlisi de proteïnes.

L'assaig BCA és un dels mètodes més utilitzats per a la quantificació de proteïnes en laboratoris de bioquímica i biologia molecular. Mesurant l'absorbància de les vostres mostres de proteïna i comparant-les amb una corba estàndard, podeu determinar la concentració de proteïna amb alta precisió. El nostre calculador simplifica aquest procés convertint automàticament les lectures d'absorbància en els volums exactes de mostra necessaris per als vostres experiments.

Comprendre l'Assaig BCA i el Càlcul del Volum de Mostra

Què és un Assaig BCA?

L'assaig d'Àcid Bicinchoninic (BCA) és un assaig bioquímic per determinar la concentració total de proteïnes en una solució. El principi d'aquest assaig es basa en la formació d'un complex Cu²⁺-proteïna en condicions alcalines, seguit de la reducció de Cu²⁺ a Cu¹⁺. La quantitat de reducció és proporcional a la proteïna present. El BCA forma un complex de color morat amb Cu¹⁺ en entorns alcalins, proporcionant una base per monitorar la reducció del coure per les proteïnes.

La intensitat del color morat augmenta proporcionalment amb la concentració de proteïna, la qual es pot mesurar mitjançant un espectrofotòmetre a aproximadament 562 nm. Les lectures d'absorbància es comparen amb una corba estàndard per determinar la concentració de proteïna en mostres desconegudes.

La Fórmula per al Càlcul del Volum de Mostra

La fórmula fonamental per calcular el volum de mostra a partir dels resultats d'absorbància BCA és:

Volum de Mostra (μL)=Massa de Mostra (μg)Concentracioˊ de Proteı¨na (μg/μL)\text{Volum de Mostra (μL)} = \frac{\text{Massa de Mostra (μg)}}{\text{Concentració de Proteïna (μg/μL)}}

On:

  • Volum de Mostra és el volum de mostra necessari (en microlitres, μL)
  • Massa de Mostra és la quantitat desitjada de proteïna a utilitzar (en micrograms, μg)
  • Concentració de Proteïna es deriva de la lectura d'absorbància de l'assaig BCA (en μg/μL)

La concentració de proteïna es calcula a partir de la lectura d'absorbància mitjançant l'equació de la corba estàndard:

Concentracioˊ de Proteı¨na (μg/μL)=Pendents×Absorbaˋncia+Interceptacioˊ\text{Concentració de Proteïna (μg/μL)} = \text{Pendents} \times \text{Absorbància} + \text{Interceptació}

Per a un assaig BCA estàndard, la pendent típica és aproximadament 2.0, i la interceptació sovint és a prop de zero, tot i que aquests valors poden variar en funció de les condicions específiques del vostre assaig i la corba estàndard.

Com Utilitzar el Calculador de Volum de Mostra d'Absorbància BCA

El nostre calculador simplifica el procés de determinació dels volums de mostra a partir dels resultats de l'assaig BCA. Seguiu aquests passos per obtenir càlculs precisos:

  1. Introduïu la Informació de la Mostra:

    • Proporcioneu un nom per a la vostra mostra (opcional però útil per fer un seguiment de diverses mostres)
    • Introduïu la lectura d'absorbància BCA del vostre espectrofotòmetre
    • Introduïu la vostra massa de mostra desitjada (l'import de proteïna que voleu utilitzar en μg)

  2. Seleccioneu el Tipus de Corba Estàndard:

    • Estàndard (per defecte): Utilitza els paràmetres de corba estàndard BCA típics
    • Millorat: Per a un protocol de sensibilitat millorada
    • Micro: Per a protocol de microplaca
    • Personalitzat: Permet introduir els vostres propis valors de pendent i interceptació

  3. Veure Resultats:

    • El calculador mostrarà instantàniament el volum de mostra requerit en microlitres
    • Els resultats també es presenten en una taula resum per a una fàcil referència
    • Per a múltiples mostres, podeu afegir més entrades i comparar resultats

  4. Copiar o Exportar Resultats:

    • Utilitzeu el botó de còpia per transferir els resultats al vostre quadern de laboratori o altres aplicacions
    • Tots els càlculs es poden desar per a futures referències

Exemple Pas a Pas

Fem un exemple pràctic:

  1. Heu realitzat un assaig BCA i obtingut una lectura d'absorbància de 0.75 per a la vostra mostra de proteïna.
  2. Voleu carregar 20 μg de proteïna per a la vostra transferència western.
  3. Utilitzant la corba estàndard (pendent = 2.0, interceptació = 0):
    • Concentració de proteïna = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • Volum de mostra requerit = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Això significa que heu de carregar 13.33 μL de la vostra mostra per obtenir 20 μg de proteïna.

Comprendre els Resultats

El calculador proporciona diverses peces d'informació importants:

  1. Concentració de Proteïna: Aquesta es calcula a partir de la vostra lectura d'absorbància utilitzant la corba estàndard seleccionada. Representa la quantitat de proteïna per unitat de volum en la vostra mostra (μg/μL).

  2. Volum de Mostra: Aquest és el volum de la vostra mostra que conté la quantitat desitjada de proteïna. Aquest valor és el que utilitzareu quan prepareu els vostres experiments.

  3. Advertències i Recomanacions: El calculador pot proporcionar advertències per:

    • Lectures d'absorbància molt altes (>3.0) que poden estar fora de l'abast lineal de l'assaig
    • Lectures d'absorbància molt baixes (<0.1) que poden estar a prop del límit de detecció
    • Volums calculats que són impràcticament grans (>1000 μL) o petits (<1 μL)

Aplicacions i Casos d'Ús

Preparació de Mostres per a Transferència Western

Una de les aplicacions més comunes per a aquest calculador és la preparació de mostres per a la transferència western. La càrrega consistent de proteïna és crucial per a resultats fiables en la transferència western, i aquest calculador assegura que carregueu la mateixa quantitat de proteïna per a cada mostra, fins i tot quan les seves concentracions difereixen.

Flux de treball d'exemple:

  1. Realitzeu l'assaig BCA en totes les vostres mostres de proteïna
  2. Decidiu una quantitat de proteïna consistent a carregar (normalment 10-50 μg)
  3. Utilitzeu el calculador per determinar el volum necessari per a cada mostra
  4. Afegiu volums apropiats de tampó de mostra i agent reductor
  5. Carregueu els volums calculats al vostre gel

Assaigs Enzimàtics

Per als assaigs enzimàtics, sovint és necessari utilitzar una quantitat específica de proteïna per estandarditzar les condicions de reacció entre diferents mostres o experiments.

Flux de treball d'exemple:

  1. Determineu la concentració de proteïna utilitzant l'assaig BCA
  2. Calculeu el volum necessari per obtenir la quantitat de proteïna desitjada
  3. Afegiu aquest volum a la vostra mescla de reacció
  4. Procediu amb el vostre assaig enzimàtic

Experiments d'Immunoprecipitació

En experiments d'immunoprecipitació (IP), començar amb una quantitat consistent de proteïna és important per comparar resultats entre diferents condicions.

Flux de treball d'exemple:

  1. Mesureu la concentració de proteïna de lisats cel·lulars o tissulars utilitzant l'assaig BCA
  2. Calculeu els volums necessaris per obtenir quantitats iguals de proteïna (normalment 500-1000 μg)
  3. Ajusteu totes les mostres al mateix volum amb tampó de lisi
  4. Procediu amb la incubació d'anticossos i precipitació

Purificació de Proteïnes

Durant la purificació de proteïnes, sovint és necessari fer un seguiment de la concentració de proteïna i calcular els rendiments en diferents passos.

Flux de treball d'exemple:

  1. Recolliu fraccions durant la purificació
  2. Realitzeu l'assaig BCA en fraccions seleccionades
  3. Calculeu la concentració de proteïna i la quantitat total de proteïna
  4. Determineu els volums necessaris per a les aplicacions posteriors

Funcions Avançades i Consideracions

Corbes Estàndard Personalitzades

Si bé el calculador proporciona paràmetres predeterminats per a assaigs BCA estàndard, també podeu introduir valors personalitzats si heu generat la vostra pròpia corba estàndard. Això és particularment útil quan:

  • Treballeu amb mostres de proteïna no estàndard
  • Utilitzeu protocols BCA modificats
  • Treballeu en presència de substàncies que podrien interferir amb l'assaig

Per utilitzar una corba estàndard personalitzada:

  1. Seleccioneu "Personalitzat" entre les opcions de corba estàndard
  2. Introduïu els vostres valors de pendent i interceptació
  3. El calculador utilitzarà aquests valors per a tots els càlculs posteriors

Maneig de Múltiples Mostres

El calculador us permet afegir múltiples mostres i calcular els seus volums simultàniament. Això és especialment útil quan es preparen mostres per a experiments que requereixen una càrrega de proteïna consistent entre diverses condicions.

Beneficis del processament en massa:

  • Estalvieu temps calculant tots els volums a la vegada
  • Assegureu la consistència entre totes les vostres mostres
  • Compareu fàcilment les concentracions de proteïna entre mostres
  • Identifiqueu valors atípics o possibles errors de mesura

Tractar Casos Límit

Lectures d'Absorbància Molt Altes

Si la vostra lectura d'absorbància és superior a 2.0, pot estar fora de l'abast lineal de l'assaig BCA. En aquests casos:

  1. Dilueu la vostra mostra i repetiu l'assaig BCA
  2. Alternativament, utilitzeu el sistema d'advertència del calculador, que marcarà lectures potencialment problemàtiques

Lectures d'Absorbància Molt Baixes

Per a lectures d'absorbància per sota de 0.1, podeu estar a prop del límit de detecció de l'assaig, la qual cosa podria afectar l'exactitud. Considereu:

  1. Concentrar la vostra mostra si és possible
  2. Utilitzar un mètode de quantificació de proteïnes més sensible
  3. Ajustar el vostre disseny experimental per acomodar quantitats de proteïna més baixes

Volums Calculats Impràcticament Grans

Si el calculador suggereix un volum que és massa gran per a la vostra aplicació:

  1. Considereu concentrar la vostra mostra de proteïna
  2. Ajusteu la vostra quantitat de proteïna desitjada cap avall si el vostre experiment ho permet
  3. Utilitzeu el volum màxim pràctic i anoteu la quantitat real de proteïna utilitzada

Història de la Quantificació de Proteïnes i Assaig BCA

La quantificació precisa de proteïnes ha estat un requisit fonamental en bioquímica i biologia molecular des que van emergir aquests camps. Els primers mètodes es basaven en la determinació del contingut de nitrogen, que era laboriós i requerien equipament especialitzat.

Evolució dels Mètodes de Quantificació de Proteïnes

  1. Mètode Kjeldahl (1883): Un dels primers mètodes per a la quantificació de proteïnes, basat en la mesura del contingut de nitrogen.

  2. Test de Biuret (Principis del 1900): Aquest mètode es basa en la reacció entre els enllaços peptídics i els ions de coure en una solució alcalina, produint un color violeta.

  3. Assaig de Lowry (1951): Desenvolupat per Oliver Lowry, aquest mètode combinava la reacció de Biuret amb el reactiu de Folin-Ciocalteu, augmentant la sensibilitat.

  4. Assaig de Bradford (1976): Marion Bradford va desenvolupar aquest mètode utilitzant el colorant Coomassie Brilliant Blue G-250, que s'uneix a les proteïnes i desplaça el màxim d'absorció.

  5. Assaig BCA (1985): Desenvolupat per Paul Smith i col·legues de Pierce Chemical Company, aquest mètode combinava la reacció de biuret amb la detecció BCA, oferint una sensibilitat millorada i compatibilitat amb detergents.

Desenvolupament de l'Assaig BCA

L'assaig BCA es va descriure per primera vegada en un article de 1985 de Smith et al. titulat "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Es va desenvolupar per abordar les limitacions dels mètodes existents, particularment la interferència de diverses substàncies químiques que s'utilitzaven comunament en l'extracció i purificació de proteïnes.

La clau de la innovació va ser l'ús de l'àcid bicinchoninic per detectar els ions Cu¹⁺ produïts per la reducció de Cu²⁺ mediada per proteïnes, formant un complex de color morat que es podia mesurar espectrofotomètricament. Això va proporcionar diversos avantatges:

  1. Major sensibilitat que el mètode Biuret
  2. Menys susceptibilitat a la interferència de substàncies no proteiques en comparació amb el mètode de Lowry
  3. Millor compatibilitat amb detergents que l'assaig de Bradford
  4. Protocol més senzill amb menys reactius i passos

Des de la seva introducció, l'assaig BCA s'ha convertit en un dels mètodes de quantificació de proteïnes més utilitzats en laboratoris de bioquímica i biologia molecular de tot el món.

Exemple de Codi per Calcular el Volum de Mostra

Fórmula d'Excel

1=IF(B2<=0,"Error: Absorbància no vàlida",IF(C2<=0,"Error: Massa de mostra no vàlida",C2/(2*B2)))
2
3' On:
4' B2 conté la lectura d'absorbància
5' C2 conté la massa de mostra desitjada en μg
6' La fórmula retorna el volum de mostra requerit en μL
7

Implementació en Python

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Calcular la concentració de proteïna a partir de l'absorbància utilitzant la corba estàndard."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("L'absorbància no pot ser negativa")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Calcular el volum de mostra requerit en funció de l'absorbància i la massa desitjada."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("La massa de mostra ha de ser positiva")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("La concentració de proteïna calculada ha de ser positiva")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Exemple d'ús
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Per a l'absorbància {absorbance} i la massa de proteïna desitjada {sample_mass} μg:")
31    print(f"Concentració de proteïna: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Volum de mostra requerit: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Error: {e}")
35

Codi en R per a l'Anàlisi

1# Funció per calcular la concentració de proteïna a partir de l'absorbància
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("L'absorbància no pot ser negativa")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funció per calcular el volum de mostra
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("La massa de mostra ha de ser positiva")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("La concentració de proteïna calculada ha de ser positiva")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Exemple d'ús
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Per a l'absorbància %.2f i la massa de proteïna desitjada %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Concentració de proteïna: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Volum de mostra requerit: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Error: %s\n", e$message))
39})
40

Implementació en JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("L'absorbància no pot ser negativa");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("La massa de mostra ha de ser positiva");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("La concentració de proteïna calculada ha de ser positiva");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Exemple d'ús
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Per a l'absorbància ${absorbance} i la massa de proteïna desitjada ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Concentració de proteïna: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Volum de mostra requerit: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Error: ${error.message}`);
37}
38

Visualització de la Corba Estàndard

La relació entre l'absorbància i la concentració de proteïna és típicament lineal dins d'un cert rang. A continuació es presenta una visualització d'una corba estàndard BCA:

Corba Estàndard BCA per a la Quantificació de Proteïnes Visualització de la relació lineal entre l'absorbància i la concentració de proteïna en un assaig BCA 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbància (562 nm) Concentració de Proteïna (μg/μL)

Corba Estàndard Mostres Estàndard

Corba Estàndard BCA

Comparació amb Altres Mètodes de Quantificació de Proteïnes

Els diferents mètodes de quantificació de proteïnes tenen diverses avantatges i limitacions. Aquí teniu com l'assaig BCA es compara amb altres mètodes comuns:

MètodeRang de SensibilitatAvantatgesLimitacionsMillor per
Assaig BCA5-2000 μg/mL• Compatible amb detergents
• Menys variació entre proteïnes
• Desenvolupament de color estable		• Interferit per agents reductors
• Afectat per alguns agents quelants		• Quantificació general de proteïnes
• Mostres que contenen detergents
Assaig Bradford1-1500 μg/mL• Ràpid (2-5 min)
• Pocs substàncies interferents		• Alta variació entre proteïnes
• Incompatible amb detergents		• Mesures ràpides
• Mostres sense detergents
Mètode de Lowry1-1500 μg/mL• Ben establert
• Bona sensibilitat		• Moltes substàncies interferents
• Múltiples passos		• Consistència històrica
• Mostres de proteïna pura
Absorbància UV (280 nm)20-3000 μg/mL• No destructiu
• Molt ràpid
• Sense reactius necessaris		• Afectat per àcids nucleics
• Requereix mostres pures		• Solucions de proteïna pura
• Comprovacions ràpides durant la purificació
Fluoromètric0.1-500 μg/mL• La sensibilitat més alta
• Ampli rang dinàmic		• Reactius cars
• Requereix fluoròmetre		• Mostres molt diluïdes
• Volum de mostra limitat

Preguntes Freqüents

Per a què s'utilitza l'assaig BCA?

L'assaig BCA (àcid bicinchoninic) s'utilitza principalment per quantificar la concentració total de proteïnes en una mostra. S'utilitza àmpliament en bioquímica, biologia cel·lular i biologia molecular per a aplicacions com la transferència western, assaigs enzimàtics, immunoprecipitació i purificació de proteïnes.

Quina precisió té l'assaig BCA?

L'assaig BCA és generalment precís dins del 5-10% quan es realitza correctament. La seva precisió depèn de diversos factors, incloent la qualitat de la corba estàndard, l'absència de substàncies interferents i si la composició de la proteïna desconeguda és similar a la proteïna estàndard utilitzada.

Què pot interferir amb els resultats de l'assaig BCA?

Diverses substàncies poden interferir amb els resultats de l'assaig BCA, incloent:

  • Agents reductors (DTT, β-mercaptoetanol, glutatió)
  • Agents quelants (EDTA, EGTA)
  • Altes concentracions de sucres simples
  • Lípids
  • Alguns detergents a altes concentracions
  • Compostos d'amoni

Quina és la diferència entre els assaigs BCA i Bradford?

Les principals diferències són:

  • L'assaig BCA és més compatible amb detergents i surfactants
  • L'assaig Bradford és més ràpid (2-5 minuts vs. 30+ minuts per a BCA)
  • BCA té menys variació entre proteïnes
  • Bradford és més sensible als aminoàcids bàsics
  • BCA és afectat per agents reductors, mentre que Bradford no ho és

Per què el meu volum de mostra calculat és massa gran?

Si el vostre calculador mostra un volum de mostra molt gran, normalment indica una baixa concentració de proteïna a la vostra mostra. Això podria ser degut a:

  1. Contingut real de proteïna baix a la vostra mostra original
  2. Pèrdua de proteïna durant la preparació
  3. Errors en el procediment de l'assaig BCA
  4. Lectura d'absorbància inexacta

Considereu concentrar la vostra mostra o ajustar el vostre disseny experimental per acomodar la concentració de proteïna més baixa.

Puc utilitzar aquest calculador per a altres mètodes de quantificació de proteïnes?

Aquest calculador està dissenyat específicament per als resultats de l'assaig BCA. Si bé el principi bàsic (convertir concentració a volum) s'aplica a altres mètodes, la relació entre l'absorbància i la concentració de proteïna varia entre diferents assaigs. Per a altres mètodes com Bradford o Lowry, hauríeu d'utilitzar diferents paràmetres de corba estàndard.

Com tractar mostres amb absorbància fora de l'abast lineal?

Per a lectures d'absorbància fora de l'abast lineal (normalment >2.0):

  1. Dilueu la vostra mostra i repetiu l'assaig BCA
  2. Utilitzeu un mètode de quantificació de proteïnes diferent
  3. Ajusteu la corba estàndard per incloure estàndards de concentració més alta

Quina proteïna hauria d'utilitzar com a estàndard?

L'albumina del sèrum boví (BSA) és el estàndard més utilitzat per als assaigs BCA perquè és:

  • Fàcilment disponible i econòmica
  • Altament soluble
  • Estable en solució
  • Ben caracteritzada

Tanmateix, si les vostres mostres contenen una proteïna predominant que difereix significativament de la BSA, considereu utilitzar aquesta proteïna com a estàndard per a resultats més precisos.

Quant de temps és estable la reacció BCA?

El color morat desenvolupat en la reacció BCA és estable durant diverses hores a temperatura ambient i es pot mesurar en qualsevol moment dins d'aquest període. No obstant això, per a millors resultats, es recomana mesurar tots els estàndards i mostres aproximadament al mateix temps després del desenvolupament del color.

Puc reutilitzar la corba estàndard d'un experiment anterior?

Si bé és tècnicament possible reutilitzar una corba estàndard, no es recomana per a una quantificació precisa. Les variacions en reactius, condicions d'incubació i calibratge d'instruments poden afectar la relació entre l'absorbància i la concentració de proteïna. Per a resultats fiables, genereu una nova corba estàndard cada vegada que realitzeu l'assaig.

Referències

  1. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Instruccions. Disponible a: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Proveu el Nostre Calculador de Volum de Mostra d'Absorbància BCA Avui!

Ara que enteneu els principis darrere de la quantificació de proteïnes BCA i el càlcul del volum de mostra, proveu el nostre calculador per agilitzar el vostre flux de treball de laboratori. Simplement introduïu les vostres lectures d'absorbància i la massa de mostra desitjada per obtenir càlculs instantanis i precisos del volum de mostra.

Ja sigui que esteu preparant mostres per a transferències western, assaigs enzimàtics o qualsevol altre experiment basat en proteïnes, el nostre calculador ajudarà a garantir resultats consistents i fiables. Estalvieu temps, reduïu errors i milloreu la reproductibilitat dels vostres experiments amb el Calculador de Volum de Mostra d'Absorbància BCA.

🔗

Eines Relacionades

Descobreix més eines que podrien ser útils per al teu flux de treball

Calculadora de volum de tancs per a tancs cilíndrics, esfèrics i rectangulars

Prova aquesta eina

Calculadora de volum a àrea per a cobertura líquida

Prova aquesta eina

Calculadora de Volum de Forats: Excavacions Cilíndriques i Rectangulars

Prova aquesta eina

Calculadora de Volum de Forats: Mesura Volums d'Excavacions Cilíndriques

Prova aquesta eina

Calculadora de volum de cèl·lula cúbica: Troba el volum a partir de la longitud de l'aresta

Prova aquesta eina

Calculadora de Factor de Dilucció Simple per a Solucions de Laboratori

Prova aquesta eina

Calculadora de volum de sorra: Estima el material per a qualsevol projecte

Prova aquesta eina

Calculadora del Coeficient d'Absorció de Dos Fotons

Prova aquesta eina

Calculadora de Molaritat: Eina de Concentració de Solucions

Prova aquesta eina