Kalkulátor objemu vzorku BCA pro laboratorní protokoly

Vypočítejte přesné objemy vzorků na základě měření absorbance BCA testu a požadované hmotnosti proteinu. Nezbytné pro konzistentní zatížení proteinů v western blotech a dalších laboratorních aplikacích.

BCA Kalkulátor objemu vzorku na základě absorbance

Tento nástroj vypočítá požadovaný objem vzorku na základě výsledků absorbance BCA a hmotnosti vzorku. Zadejte hodnotu absorbance a hmotnost vzorku pro každý vzorek, abyste vypočítali odpovídající objem vzorku.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Vstupy vzorku

Vzorek 1

Název vzorku

BCA Absorbance*

Hmotnost vzorku (μg)*

Objem vzorku

Copy

N/A μL

Výpočetní vzorec

Objem vzorku se vypočítá pomocí následujícího vzorce:

Objem vzorku (μL) = Hmotnost vzorku (μg) / Koncentrace proteinu (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Dokumentace

Kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance

Úvod

Kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance je specializovaný nástroj navržený pro pomoc výzkumníkům a laborantům přesně určit vhodný objem vzorku pro experimenty na základě výsledků BCA (bicinchoninské kyseliny) assay. Tento kalkulátor bere absorbance naměřené ve vaší BCA assay a požadovanou hmotnost vzorku, aby vypočítal přesný objem potřebný pro konzistentní zatížení proteinu v aplikacích, jako je western blotting, enzymatické assay a další techniky analýzy proteinů.

BCA assay je jednou z nejpoužívanějších metod pro kvantifikaci proteinů v biochemických a molekulárně biologických laboratořích. Měření absorbance vašich proteinových vzorků a jejich porovnání se standardní křivkou vám umožňuje určit koncentraci proteinu s vysokou přesností. Náš kalkulátor tento proces zjednodušuje tím, že automaticky převádí absorbance na přesné objemy vzorků potřebné pro vaše experimenty.

Pochopení BCA assay a výpočtu objemu vzorku

Co je BCA assay?

Bicinchoninská kyselina (BCA) assay je biochemická metoda pro určení celkové koncentrace proteinu v roztoku. Princip této assay spočívá ve vytváření komplexu Cu²⁺-protein za alkalických podmínek, následovaném redukcí Cu²⁺ na Cu¹⁺. Množství redukce je úměrné přítomnému proteinu. BCA vytváří purpurový komplex s Cu¹⁺ v alkalických prostředích, což poskytuje základ pro sledování redukce mědi proteiny.

Intenzita purpurové barvy se zvyšuje úměrně s koncentrací proteinu, což lze měřit pomocí spektrofotometru při přibližně 562 nm. Naměřené absorbance se poté porovnávají se standardní křivkou pro určení koncentrace proteinu v neznámých vzorcích.

Vzorec pro výpočet objemu vzorku

Základní vzorec pro výpočet objemu vzorku z výsledků BCA absorbance je:

$\text{Objem vzorku (μL)} = \frac{\text{Hmotnost vzorku (μg)}}{\text{Koncentrace proteinu (μg/μL)}}$

Kde:

Objem vzorku je objem potřebný (v mikrolitrech, μL)
Hmotnost vzorku je požadované množství proteinu k použití (v mikrogramech, μg)
Koncentrace proteinu je odvozena z naměřené absorbance BCA (v μg/μL)

Koncentrace proteinu se vypočítá z naměřené absorbance pomocí rovnice standardní křivky:

$\text{Koncentrace proteinu (μg/μL)} = \text{Sklon} \times \text{Absorbance} + \text{Průsečík}$

Pro standardní BCA assay je typický sklon přibližně 2.0 a průsečík je často blízko nuly, ačkoliv tyto hodnoty se mohou lišit v závislosti na vašich konkrétních podmínkách assay a standardní křivce.

Jak používat kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance

Náš kalkulátor zjednodušuje proces určování objemů vzorků z výsledků BCA assay. Postupujte podle těchto kroků pro přesné výpočty:

Zadejte informace o vzorku:
- Uveďte název svého vzorku (volitelné, ale užitečné pro sledování více vzorků)
- Zadejte naměřenou absorbanci z vašeho spektrofotometru
- Zadejte požadovanou hmotnost vzorku (množství proteinu, které chcete použít v μg)
Vyberte typ standardní křivky:
- Standardní (výchozí): Používá typické parametry standardní křivky BCA
- Vylepšené: Pro protokol s vylepšenou citlivostí
- Mikro: Pro protokol mikrodesky
- Vlastní: Umožňuje zadat vlastní hodnoty sklonu a průsečíku
Zobrazit výsledky:
- Kalkulátor okamžitě zobrazí požadovaný objem vzorku v mikrolitrech
- Výsledky jsou také prezentovány v souhrnné tabulce pro snadnou referenci
- Pro více vzorků můžete přidat další položky a porovnat výsledky
Kopírovat nebo exportovat výsledky:
- Použijte tlačítko pro kopírování, abyste přenesli výsledky do svého laboratorního zápisníku nebo jiných aplikací
- Všechny výpočty lze uložit pro budoucí použití

Příklad krok za krokem

Pojďme projít praktickým příkladem:

Provedli jste BCA assay a získali jste naměřenou absorbanci 0.75 pro váš proteinový vzorek.
Chcete naložit 20 μg proteinu pro váš western blot.
Použitím standardní křivky (sklon = 2.0, průsečík = 0):
- Koncentrace proteinu = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Požadovaný objem vzorku = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

To znamená, že byste měli naložit 13.33 μL vašeho vzorku, abyste získali 20 μg proteinu.

Pochopení výsledků

Kalkulátor poskytuje několik důležitých informací:

Koncentrace proteinu: Tato hodnota se vypočítá z vaší naměřené absorbance pomocí vybrané standardní křivky. Představuje množství proteinu na jednotkový objem ve vašem vzorku (μg/μL).
Objem vzorku: Toto je objem vašeho vzorku, který obsahuje požadované množství proteinu. Tato hodnota je to, co použijete při přípravě vašich experimentů.
Varování a doporučení: Kalkulátor může poskytnout varování pro:
- Velmi vysoké naměřené absorbance (>3.0), které mohou být mimo lineární rozsah assay
- Velmi nízké naměřené absorbance (<0.1), které mohou být blízko limita detekce
- Vypočítané objemy, které jsou neprakticky velké (>1000 μL) nebo malé (<1 μL)

Aplikace a případy použití

Příprava vzorků pro western blot

Jednou z nejběžnějších aplikací tohoto kalkulátoru je příprava vzorků pro western blotting. Konzistentní zatížení proteinu je klíčové pro spolehlivé výsledky western blotu, a tento kalkulátor zajišťuje, že naložíte stejné množství proteinu pro každý vzorek, i když se jejich koncentrace liší.

Příklad pracovního postupu:

Proveďte BCA assay na všech vašich proteinových vzorcích
Rozhodněte se o konzistentním množství proteinu k naložení (typicky 10-50 μg)
Použijte kalkulátor k určení objemu potřebného pro každý vzorek
Přidejte odpovídající objemy pufru vzorku a redukčního činidla
Naložte vypočítané objemy na váš gel

Enzymatické assay

Pro enzymatické assay je často nutné použít specifické množství proteinu k standardizaci podmínek reakce napříč různými vzorky nebo experimenty.

Příklad pracovního postupu:

Určete koncentraci proteinu pomocí BCA assay
Vypočítejte objem potřebný k získání požadovaného množství proteinu
Přidejte tento objem do vaší reakční směsi
Pokračujte s vaším enzymatickým assay

Experimenty s imunoprecipitací

V experimentech s imunoprecipitací je důležité začít s konzistentním množstvím proteinu pro porovnání výsledků napříč různými podmínkami.

Příklad pracovního postupu:

Změřte koncentraci proteinu buněčných nebo tkáňových lyzátů pomocí BCA assay
Vypočítejte objemy potřebné k získání stejných množství proteinu (typicky 500-1000 μg)
Upravte všechny vzorky na stejný objem s lysis pufrem
Pokračujte s inkubací protilátek a precipitací

Purifikace proteinů

Během purifikace proteinů je často nutné sledovat koncentraci proteinu a vypočítat výtěžky v různých krocích.

Příklad pracovního postupu:

Sbírejte frakce během purifikace
Proveďte BCA assay na vybraných frakcích
Vypočítejte koncentraci proteinu a celkové množství proteinu
Určte objemy potřebné pro následné aplikace

Pokročilé funkce a úvahy

Vlastní standardní křivky

Zatímco kalkulátor poskytuje výchozí parametry pro standardní BCA assay, můžete také zadat vlastní hodnoty, pokud jste vytvořili svou vlastní standardní křivku. To je obzvlášť užitečné, když:

Pracujete s nestandardními proteinovými vzorky
Používáte modifikované protokoly BCA
Pracujete v přítomnosti látek, které by mohly interferovat s assay

Chcete-li použít vlastní standardní křivku:

Vyberte "Vlastní" z možností standardní křivky
Zadejte své hodnoty sklonu a průsečíku
Kalkulátor použije tyto hodnoty pro všechny následné výpočty

Zpracování více vzorků

Kalkulátor vám umožňuje přidat více vzorků a vypočítat jejich objemy současně. To je obzvlášť užitečné při přípravě vzorků pro experimenty, které vyžadují konzistentní zatížení proteinu napříč různými podmínkami.

Výhody hromadného zpracování:

Ušetřete čas tím, že vypočítáte všechny objemy najednou
Zajistěte konzistenci napříč všemi vašimi vzorky
Snadno porovnejte koncentrace proteinů mezi vzorky
Identifikujte odlehlé hodnoty nebo potenciální chyby měření

Řešení okrajových případů

Velmi vysoké naměřené absorbance

Pokud je vaše naměřená absorbance nad 2.0, může být mimo lineární rozsah BCA assay. V takových případech:

Zřeďte svůj vzorek a opakujte BCA assay
Alternativně použijte varovný systém kalkulátoru, který označí potenciálně problematické naměřené hodnoty

Velmi nízké naměřené absorbance

Pro naměřené absorbance pod 0.1 můžete být blízko limita detekce assay, což může ovlivnit přesnost. Zvažte:

Koncentraci vašeho vzorku, pokud je to možné
Použití citlivější metody kvantifikace proteinu
Úpravu vašeho experimentálního designu, aby vyhovoval nižším množstvím proteinu

Neprakticky velké vypočítané objemy

Pokud kalkulátor navrhuje objem, který je příliš velký pro vaši aplikaci:

Zvažte koncentraci vašeho proteinového vzorku
Snižte požadované množství proteinu, pokud to váš experiment umožňuje
Použijte maximální praktický objem a poznamenejte si skutečné množství proteinu použité

Historie kvantifikace proteinů a BCA assay

Přesná kvantifikace proteinů byla základním požadavkem v biochemii a molekulární biologii od vzniku těchto oborů. Rané metody se spoléhaly na určení obsahu dusíku, což bylo časově náročné a vyžadovalo specializované vybavení.

Vývoj metod kvantifikace proteinů

Kjeldahlova metoda (1883): Jedna z nejranějších metod pro kvantifikaci proteinů, založená na měření obsahu dusíku.
Biuretův test (začátek 1900): Tato metoda se spoléhá na reakci mezi peptidovými vazbami a ionty mědi v alkalickém roztoku, což produkuje fialovou barvu.
Lowryho assay (1951): Vyvinuta Oliverem Lowrym, tato metoda kombinovala biuretovu reakci s Folin-Ciocalteuovým činidlem, což zvyšuje citlivost.
Bradfordova assay (1976): Marion Bradford vyvinula tuto metodu pomocí barviva Coomassie Brilliant Blue G-250, které se váže na proteiny a posouvá maximální absorpci.
BCA assay (1985): Vyvinuta Paulem Smithem a kolegy z Pierce Chemical Company, tato metoda kombinovala biuretovu reakci s detekcí BCA, nabízející zvýšenou citlivost a kompatibilitu s detergenty.

Vývoj BCA assay

BCA assay byla poprvé popsána v roce 1985 v článku Smitha a kol. s názvem "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Byla vyvinuta, aby překonala omezení stávajících metod, zejména interferenci s různými chemikáliemi běžně používanými při extrakci a purifikaci proteinů.

Klíčovou inovací bylo použití bicinchoninské kyseliny k detekci iontů Cu¹⁺ produkovaných redukcí Cu²⁺ proteiny, což vytváří purpurový komplex, který lze měřit spektrofotometricky. To poskytlo několik výhod:

Vyšší citlivost než biuretova metoda
Menší náchylnost k interferenci od neproteinových látek ve srovnání s Lowryho metodou
Lepší kompatibilita s detergenty než Bradfordova assay
Jednodušší protokol s méně činidly a kroky

Od svého zavedení se BCA assay stala jednou z nejpoužívanějších metod kvantifikace proteinů v biochemických a molekulárně biologických laboratořích po celém světě.

Příklady kódu pro výpočet objemu vzorku

Excel vzorec

1=IF(B2<=0,"Chyba: Neplatná absorbance",IF(C2<=0,"Chyba: Neplatná hmotnost vzorku",C2/(2*B2)))
2
3' Kde:
4' B2 obsahuje naměřenou absorbanci
5' C2 obsahuje požadovanou hmotnost vzorku v μg
6' Vzorec vrací požadovaný objem vzorku v μL
7

Implementace v Pythonu

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Vypočítá koncentraci proteinu z absorbance pomocí standardní křivky."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbance nemůže být záporná")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Vypočítá požadovaný objem vzorku na základě absorbance a požadované hmotnosti."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Hmotnost vzorku musí být kladná")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Vypočítaná koncentrace proteinu musí být kladná")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Příklad použití
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Pro absorbanci {absorbance} a požadovanou hmotnost proteinu {sample_mass} μg:")
31    print(f"Koncentrace proteinu: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Požadovaný objem vzorku: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Chyba: {e}")
35

Kód v R pro analýzu

1# Funkce pro výpočet koncentrace proteinu z absorbance
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbance nemůže být záporná")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funkce pro výpočet objemu vzorku
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Hmotnost vzorku musí být kladná")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Vypočítaná koncentrace proteinu musí být kladná")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Příklad použití
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Pro absorbanci %.2f a požadovanou hmotnost proteinu %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Koncentrace proteinu: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Požadovaný objem vzorku: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Chyba: %s\n", e$message))
39})
40

Implementace v JavaScriptu

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbance nemůže být záporná");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Hmotnost vzorku musí být kladná");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Vypočítaná koncentrace proteinu musí být kladná");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Příklad použití
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Pro absorbanci ${absorbance} a požadovanou hmotnost ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Koncentrace proteinu: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Požadovaný objem vzorku: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Chyba: ${error.message}`);
37}
38

Vizualizace standardní křivky

Vztah mezi absorbancí a koncentrací proteinu je obvykle lineární v určitém rozsahu. Níže je vizualizace standardní křivky BCA:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbance (562 nm) Koncentrace proteinu (μg/μL)

Standardní křivka Standardní vzorky

Standardní křivka BCA

Srovnání s jinými metodami kvantifikace proteinů

Různé metody kvantifikace proteinů mají různé výhody a omezení. Zde je, jak se BCA assay srovnává s jinými běžnými metodami:

Metoda	Rozsah citlivosti	Výhody	Omezení	Nejlepší pro
BCA Assay	5-2000 μg/mL	• Kompatibilní s detergenty • Menší variabilita mezi proteiny • Stabilní vývoj barvy	• Rušeny redukčními činidly • Ovlivněny některými chelatačními činidly	• Obecná kvantifikace proteinů • Vzorky obsahující detergenty
Bradford Assay	1-1500 μg/mL	• Rychlá (2-5 min) • Málo rušivých látek	• Vysoká variabilita mezi proteiny • Ne kompatibilní s detergenty	• Rychlé měření • Vzorky bez detergentů
Lowryho metoda	1-1500 μg/mL	• Dobře zavedená • Dobrá citlivost	• Mnoho rušivých látek • Více kroků	• Historická konzistence • Čisté proteinové vzorky
UV absorbance (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Neničící • Velmi rychlé • Žádné činidla potřebná	• Ovlivněny nukleovými kyselinami • Vyžaduje čisté vzorky	• Čisté proteinové roztoky • Rychlé kontroly během purifikace
Fluorometrické	0.1-500 μg/mL	• Nejvyšší citlivost • Široký dynamický rozsah	• Drahá činidla • Vyžaduje fluorometr	• Velmi zředěné vzorky • Omezený objem vzorku

Často kladené otázky

K čemu se používá BCA assay?

BCA (bicinchoninská kyselina) assay se primárně používá pro kvantifikaci celkové koncentrace proteinu ve vzorku. Je široce používána v biochemii, buněčné biologii a molekulární biologii pro aplikace, jako je western blotting, enzymatické assay, imunoprecipitace a purifikace proteinů.

Jak přesná je BCA assay?

BCA assay je obecně přesná v rozmezí 5-10%, pokud je provedena správně. Její přesnost závisí na několika faktorech, včetně kvality standardní křivky, absence rušivých látek a zda je složení neznámého proteinu podobné standardnímu proteinu použitému.

Co může ovlivnit výsledky BCA assay?

S několika látkami může interferovat s výsledky BCA assay, včetně:

Redukčních činidel (DTT, β-merkapt ethanol, glutathion)
Chelatačních činidel (EDTA, EGTA)
Vysoké koncentrace jednoduchých cukrů
Lipidů
Některých detergentů ve vysokých koncentracích
Ammoniových sloučenin

Jaký je rozdíl mezi BCA a Bradford assay?

Hlavní rozdíly jsou:

BCA assay je více kompatibilní s detergenty a surfaktanty
Bradford assay je rychlejší (2-5 minut vs. 30+ minut pro BCA)
BCA má menší variabilitu mezi proteiny
Bradford je citlivější na zásadní aminokyseliny
BCA je ovlivněna redukčními činidly, zatímco Bradford není

Proč je můj vypočítaný objem vzorku příliš velký?

Pokud váš kalkulátor ukazuje velmi velký objem vzorku, obvykle to naznačuje nízkou koncentraci proteinu ve vašem vzorku. To může být způsobeno:

Skutečně nízkým obsahem proteinu ve vašem původním vzorku
Ztrátou proteinu během přípravy
Chybami v postupu BCA assay
Nepřesným měřením absorbance

Zvažte koncentraci vašeho vzorku nebo úpravu vašeho experimentálního designu, aby vyhovoval nižším koncentracím proteinu.

Mohu tento kalkulátor použít pro jiné metody kvantifikace proteinů?

Tento kalkulátor je speciálně navržen pro výsledky BCA assay. Ačkoliv základní princip (převod koncentrace na objem) platí i pro jiné metody, vztah mezi absorbancí a koncentrací proteinu se liší mezi různými assay. Pro jiné metody, jako je Bradford nebo Lowry, byste museli použít různé parametry standardní křivky.

Jak se vypořádat se vzorky s absorbancí mimo lineární rozsah?

Pro naměřené absorbance mimo lineární rozsah (typicky >2.0):

Zřeďte svůj vzorek a opakujte BCA assay
Použijte jinou metodu kvantifikace proteinu
Upravte standardní křivku tak, aby zahrnovala standardy vyšších koncentrací

Jaký protein bych měl použít jako standard?

Bovinný sérový albumin (BSA) je nejčastěji používaný standard pro BCA assay, protože je:

Snadno dostupný a levný
Vysoce rozpustný
Stabilní v roztoku
Dobře charakterizovaný

Pokud však vaše vzorky obsahují převládající protein, který se výrazně liší od BSA, zvažte použití tohoto proteinu jako vašeho standardu pro přesnější výsledky.

Jak dlouho je reakce BCA stabilní?

Purpurová barva vyvinutá v reakci BCA je stabilní několik hodin při pokojové teplotě a může být měřena kdykoliv v tomto období. Pro nejlepší výsledky se však doporučuje měřit všechny standardy a vzorky přibližně ve stejnou dobu po vývoji barvy.

Mohu znovu použít standardní křivku z předchozího experimentu?

Ačkoliv je technicky možné znovu použít standardní křivku, pro přesnou kvantifikaci to není doporučeno. Variace v činidlech, podmínkách inkubace a kalibraci přístroje mohou ovlivnit vztah mezi absorbancí a koncentrací proteinu. Pro spolehlivé výsledky generujte čerstvou standardní křivku pokaždé, když provedete assay.

Reference

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Pokyny. Dostupné na: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Vyzkoušejte náš kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance ještě dnes!

Nyní, když rozumíte principům kvantifikace proteinu BCA a výpočtu objemu vzorku, vyzkoušejte náš kalkulátor, abyste zjednodušili svůj laboratorní pracovní postup. Jednoduše zadejte své naměřené absorbance a požadovanou hmotnost vzorku a získejte okamžité, přesné výpočty objemu vzorku.

Ať už připravujete vzorky pro western blotting, enzymatické assay nebo jakýkoli jiný experiment založený na proteinech, náš kalkulátor pomůže zajistit konzistentní a spolehlivé výsledky. Ušetřete čas, snižte chyby a zlepšete reprodukovatelnost svých experimentů s kalkulátorem objemu vzorku BCA absorbance.

🔗

Související nástroje

Objevte další nástroje, které by mohly být užitečné pro vaši pracovní postup.

Kalkulátor objemu vzorku BCA pro laboratorní protokoly

BCA Kalkulátor objemu vzorku na základě absorbance

standardCurveTitle

Vstupy vzorku

Vzorek 1

Výpočetní vzorec

Dokumentace

Kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance

Úvod

Pochopení BCA assay a výpočtu objemu vzorku

Co je BCA assay?

Vzorec pro výpočet objemu vzorku

Jak používat kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance

Příklad krok za krokem

Pochopení výsledků

Aplikace a případy použití

Příprava vzorků pro western blot

Enzymatické assay

Experimenty s imunoprecipitací

Purifikace proteinů

Pokročilé funkce a úvahy

Vlastní standardní křivky

Zpracování více vzorků

Řešení okrajových případů

Velmi vysoké naměřené absorbance

Velmi nízké naměřené absorbance

Neprakticky velké vypočítané objemy

Historie kvantifikace proteinů a BCA assay

Vývoj metod kvantifikace proteinů

Vývoj BCA assay

Příklady kódu pro výpočet objemu vzorku

Excel vzorec

Implementace v Pythonu

Kód v R pro analýzu

Implementace v JavaScriptu

Vizualizace standardní křivky

Srovnání s jinými metodami kvantifikace proteinů

Často kladené otázky

K čemu se používá BCA assay?

Jak přesná je BCA assay?

Co může ovlivnit výsledky BCA assay?

Jaký je rozdíl mezi BCA a Bradford assay?

Proč je můj vypočítaný objem vzorku příliš velký?

Mohu tento kalkulátor použít pro jiné metody kvantifikace proteinů?

Jak se vypořádat se vzorky s absorbancí mimo lineární rozsah?

Jaký protein bych měl použít jako standard?

Jak dlouho je reakce BCA stabilní?

Mohu znovu použít standardní křivku z předchozího experimentu?

Reference

Vyzkoušejte náš kalkulátor objemu vzorku BCA absorbance ještě dnes!

Související nástroje

Kalkulátor objemu nádrže pro válcové, kulové a obdélníkové

Kalkulátor objemu na plochu pro pokrytí kapalinou

Kalkulátor objemu děr: válcové a obdélníkové výkopy

Kalkulátor objemu děr: Měření objemů válcových výkopů

Kalkulátor objemu kubické buňky: Najděte objem podle délky hrany

Jednoduchý kalkulátor ředicího faktoru pro laboratorní roztoky

Kalkulačka objemu písku: Odhadněte materiál pro jakýkoli projekt

Kalkulátor koeficientu absorpce dvou fotonů

Kalkulačka molarity: Nástroj pro koncentraci roztoků