BCA Absorbansprøvevolumenberegner til laboratorieprotokoller

Beregn præcise prøvevolumener baseret på BCA-assayets absorbansmålinger og ønsket proteinmasse. Uundgåelig for ensartet proteinbelastning i western blots og andre laboratorieapplikationer.

BCA Absorbans Prøvevolumen Beregner

Dette værktøj beregner den nødvendige prøvevolumen baseret på BCA absorbansresultater og prøvevægt. Indtast absorbansværdien og prøvevægten for hver prøve for at beregne den tilsvarende prøvevolumen.

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

Prøveindgange

Prøve 1

Copy
N/A μL

Beregning Formlen

Prøvevolumen beregnes ved hjælp af følgende formel:

Prøvevolumen (μL) = Prøvevægt (μg) / Protein Koncentration (μg/μL)
usageTipsTitle

tipAbsorbanceRange

tipSampleMass

tipSampleVolume

tipStandardCurve

📚

Dokumentation

BCA Absorbans Prøvevolumen Beregner

Introduktion

BCA Absorbans Prøvevolumen Beregneren er et specialiseret værktøj designet til at hjælpe forskere og laboratorieteknikere med nøjagtigt at bestemme det passende prøvevolumen til eksperimenter baseret på BCA (bicinchoninsyre) assays. Denne beregner tager absorbansmålingerne fra dit BCA assay og din ønskede prøvevægt for at beregne det præcise volumen, der er nødvendigt for ensartet proteinbelastning i applikationer såsom western blotting, enzymatiske assays og andre proteinanalyseteknikker.

BCA assayet er en af de mest anvendte metoder til proteinkvantificering i biokemi og molekylærbiologi laboratorier. Ved at måle absorbansen af dine proteinprøver og sammenligne dem med en standardkurve kan du bestemme protein koncentrationen med høj nøjagtighed. Vores beregner strømline denne proces ved automatisk at konvertere absorbansmålinger til de nøjagtige prøvevolumener, der kræves til dine eksperimenter.

Forståelse af BCA Assay og Prøvevolumen Beregning

Hvad er et BCA Assay?

Bicinchoninsyre (BCA) assayet er en biokemisk assay til bestemmelse af den samlede koncentration af protein i en opløsning. Princippet for denne assay er baseret på dannelsen af et Cu²⁺-protein kompleks under alkaliske forhold, efterfulgt af reduktion af Cu²⁺ til Cu¹⁺. Mængden af reduktion er proportional med det tilstedeværende protein. BCA danner et lilla farvet kompleks med Cu¹⁺ i alkaliske miljøer, hvilket giver en basis for at overvåge reduktionen af kobber af proteiner.

Intensiteten af den lilla farve stiger proportionalt med protein koncentrationen, som kan måles ved hjælp af en spektrofotometer ved cirka 562 nm. Absorbansmålingerne sammenlignes derefter med en standardkurve for at bestemme protein koncentrationen i ukendte prøver.

Formlen til Prøvevolumen Beregning

Den grundlæggende formel til beregning af prøvevolumen fra BCA absorbansresultater er:

Prøvevolumen (μL)=Prøvevægt (μg)Protein koncentration (μg/μL)\text{Prøvevolumen (μL)} = \frac{\text{Prøvevægt (μg)}}{\text{Protein koncentration (μg/μL)}}

Hvor:

  • Prøvevolumen er det nødvendige volumen af prøve (i mikroliter, μL)
  • Prøvevægt er den ønskede mængde protein, der skal bruges (i mikrogram, μg)
  • Protein koncentration er afledt fra BCA absorbansmålingen (i μg/μL)

Protein koncentrationen beregnes fra absorbansmålingen ved hjælp af en standardkurve ligning:

Protein koncentration (μg/μL)=Hældning×Absorbans+Intercept\text{Protein koncentration (μg/μL)} = \text{Hældning} \times \text{Absorbans} + \text{Intercept}

For et standard BCA assay er den typiske hældning cirka 2.0, og interceptet er ofte tæt på nul, selvom disse værdier kan variere baseret på dine specifikke assaybetingelser og standardkurve.

Sådan Bruger du BCA Absorbans Prøvevolumen Beregneren

Vores beregner forenkler processen med at bestemme prøvevolumener fra BCA assayresultater. Følg disse trin for at få nøjagtige beregninger:

  1. Indtast Prøveinformation:

    • Angiv et navn til din prøve (valgfrit, men nyttigt til sporing af flere prøver)
    • Indtast BCA absorbansmålingen fra din spektrofotometer
    • Indtast din ønskede prøvevægt (den mængde protein, du ønsker at bruge i μg)
  2. Vælg Standardkurvetype:

    • Standard (standard): Bruger de typiske BCA standardkurveparametre
    • Forstærket: Til forstærket følsomhedsprotokol
    • Mikro: Til mikropladeprotokol
    • Tilpasset: Giver dig mulighed for at indtaste dine egne hældnings- og interceptværdier
  3. Se Resultater:

    • Beregneren viser straks det krævede prøvevolumen i mikroliter
    • Resultaterne præsenteres også i en sammendragstabel til nem reference
    • For flere prøver kan du tilføje flere indtastninger og sammenligne resultater
  4. Kopier eller Eksporter Resultater:

    • Brug kopiknappen til at overføre resultater til din laboratoriejournal eller andre applikationer
    • Alle beregninger kan gemmes til fremtidig reference

Trin-for-Trin Eksempel

Lad os gå igennem et praktisk eksempel:

  1. Du har udført et BCA assay og opnået en absorbansmåling på 0.75 for din proteinprøve.
  2. Du ønsker at indlæse 20 μg protein til din western blot.
  3. Ved hjælp af standardkurven (hældning = 2.0, intercept = 0):
    • Protein koncentration = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • Nødvendigt prøvevolumen = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Det betyder, at du skal indlæse 13.33 μL af din prøve for at få 20 μg protein.

Forståelse af Resultaterne

Beregneren giver flere vigtige oplysninger:

  1. Protein koncentration: Dette beregnes fra din absorbansmåling ved hjælp af den valgte standardkurve. Det repræsenterer mængden af protein pr. enhedsvolumen i din prøve (μg/μL).

  2. Prøvevolumen: Dette er volumen af din prøve, der indeholder den ønskede mængde protein. Denne værdi er, hvad du vil bruge, når du forbereder dine eksperimenter.

  3. Advarsler og Anbefalinger: Beregneren kan give advarsler for:

    • Meget høje absorbansmålinger (>3.0), der kan være uden for assayets lineære område
    • Meget lave absorbansmålinger (<0.1), der kan være tæt på detektionsgrænsen
    • Beregnede volumener, der er upraktisk store (>1000 μL) eller små (<1 μL)

Anvendelser og Brugssager

Western Blot Prøveforberedelse

En af de mest almindelige anvendelser for denne beregner er at forberede prøver til western blotting. Ensartet proteinbelastning er afgørende for pålidelige western blot resultater, og denne beregner sikrer, at du indlæser den samme mængde protein for hver prøve, selv når deres koncentrationer varierer.

Eksempel arbejdsforløb:

  1. Udfør BCA assay på alle dine proteinprøver
  2. Beslut om en ensartet proteinmængde at indlæse (typisk 10-50 μg)
  3. Brug beregneren til at bestemme det nødvendige volumen for hver prøve
  4. Tilsæt passende volumener af prøvebuffer og reducerende middel
  5. Indlæs de beregnede volumener på din gel

Enzymatiske Assays

Til enzymatiske assays er det ofte nødvendigt at bruge en specifik mængde protein for at standardisere reaktionsbetingelserne på tværs af forskellige prøver eller eksperimenter.

Eksempel arbejdsforløb:

  1. Bestem protein koncentrationen ved hjælp af BCA assay
  2. Beregn volumenet, der er nødvendigt for at opnå din ønskede proteinmængde
  3. Tilsæt dette volumen til din reaktionsblanding
  4. Fortsæt med dit enzymatiske assay

Immunpræcipitation Eksperimenter

I immunpræcipitation (IP) eksperimenter er det vigtigt at starte med en ensartet mængde protein for at sammenligne resultater på tværs af forskellige betingelser.

Eksempel arbejdsforløb:

  1. Mål protein koncentrationen af celle- eller vævsliser ved hjælp af BCA assay
  2. Beregn volumenerne, der er nødvendige for at opnå lige proteinmængder (typisk 500-1000 μg)
  3. Juster alle prøver til det samme volumen med lysisbuffer
  4. Fortsæt med antistofinkubation og præcipitation

Proteinrensning

Under proteinrensning er det ofte nødvendigt at spore protein koncentration og beregne udbytter på forskellige trin.

Eksempel arbejdsforløb:

  1. Indsaml fraktioner under rensningen
  2. Udfør BCA assay på udvalgte fraktioner
  3. Beregn protein koncentration og total proteinmængde
  4. Bestem volumener, der er nødvendige til efterfølgende applikationer

Avancerede Funktioner og Overvejelser

Tilpassede Standardkurver

Selvom beregneren giver standardparametre for standard BCA assays, kan du også indtaste tilpassede værdier, hvis du har genereret din egen standardkurve. Dette er især nyttigt, når:

  • Arbejder med ikke-standard proteinprøver
  • Bruger modificerede BCA protokoller
  • Arbejder i nærvær af stoffer, der kan forstyrre assayet

For at bruge en tilpasset standardkurve:

  1. Vælg "Tilpasset" fra standardkurveindstillingerne
  2. Indtast dine hældnings- og interceptværdier
  3. Beregneren bruger disse værdier til alle efterfølgende beregninger

Håndtering af Flere Prøver

Beregneren giver dig mulighed for at tilføje flere prøver og beregne deres volumener samtidig. Dette er især nyttigt, når du forbereder prøver til eksperimenter, der kræver ensartet proteinbelastning på tværs af flere betingelser.

Fordele ved batchbehandling:

  • Spar tid ved at beregne alle volumener på én gang
  • Sikre konsistens på tværs af alle dine prøver
  • Sammenlign protein koncentrationer mellem prøver nemt
  • Identificer outliers eller potentielle målefejl

Håndtering af Kanttilfælde

Meget Høje Absorbansmålinger

Hvis din absorbansmåling er over 2.0, kan det være uden for det lineære område af BCA assayet. I sådanne tilfælde:

  1. Fortynd din prøve og gentag BCA assayet
  2. Alternativt, brug beregnerens advarselssystem, som vil markere potentielt problematiske målinger

Meget Lave Absorbansmålinger

For absorbansmålinger under 0.1 kan du være tæt på detektionsgrænsen for assayet, hvilket kan påvirke nøjagtigheden. Overvej:

  1. At koncentrere din prøve, hvis det er muligt
  2. At bruge en mere følsom protein kvantificeringsmetode
  3. At justere dit eksperimentelle design for at imødekomme lavere proteinmængder

Uppraktisk Store Beregnede Volumener

Hvis beregneren foreslår et volumen, der er for stort til din applikation:

  1. Overvej at koncentrere din proteinprøve
  2. Juster din ønskede proteinmængde nedad, hvis dit eksperiment tillader det
  3. Brug det maksimalt praktiske volumen og noter den faktiske proteinmængde, der blev brugt

Historie om Protein Kvantificering og BCA Assay

Den nøjagtige kvantificering af proteiner har været et grundlæggende krav inden for biokemi og molekylærbiologi, siden disse felter opstod. Tidlige metoder var baseret på bestemmelse af nitrogenindhold, hvilket var tidskrævende og krævede specialiseret udstyr.

Udvikling af Protein Kvantificeringsmetoder

  1. Kjeldahl Metode (1883): En af de tidligste metoder til protein kvantificering, baseret på måling af nitrogenindhold.

  2. Biuret Test (Tidligt 1900-tallet): Denne metode er baseret på reaktionen mellem peptidbindinger og kobberioner i en alkalisk opløsning, hvilket producerer en violet farve.

  3. Lowry Assay (1951): Udviklet af Oliver Lowry, kombinerede denne metode Biuret reaktionen med Folin-Ciocalteu reagenset, hvilket øgede følsomheden.

  4. Bradford Assay (1976): Marion Bradford udviklede denne metode ved hjælp af Coomassie Brilliant Blue G-250 farvestof, som binder til proteiner og skifter absorptionsmaksimum.

  5. BCA Assay (1985): Udviklet af Paul Smith og kolleger ved Pierce Chemical Company, kombinerede denne metode Biuret reaktionen med BCA detektion, hvilket tilbød forbedret følsomhed og kompatibilitet med sæbe.

Udvikling af BCA Assay

BCA assayet blev først beskrevet i en artikel fra 1985 af Smith et al. med titlen "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Det blev udviklet for at imødekomme begrænsningerne ved eksisterende metoder, især forstyrrelser fra forskellige kemikalier, der ofte anvendes i proteinudvinding og -rensning.

Den nøgleinnovation var brugen af bicinchoninsyre til at detektere Cu¹⁺ ioner produceret ved proteinmedieret reduktion af Cu²⁺, hvilket danner et lilla farvet kompleks, der kunne måles spektrofotometrisk. Dette gav flere fordele:

  1. Højere følsomhed end Biuret metoden
  2. Mindre modtagelighed for forstyrrelser fra ikke-protein stoffer sammenlignet med Lowry metoden
  3. Bedre kompatibilitet med sæber end Bradford assayet
  4. Enklere protokol med færre reagenser og trin

Siden sin introduktion er BCA assayet blevet en af de mest anvendte metoder til protein kvantificering i biokemi og molekylærbiologi laboratorier verden over.

Kode Eksempler til Beregning af Prøvevolumen

Excel Formel

1=IF(B2<=0,"Fejl: Ugyldig absorbans",IF(C2<=0,"Fejl: Ugyldig prøvevægt",C2/(2*B2)))
2
3' Hvor:
4' B2 indeholder absorbansmålingen
5' C2 indeholder den ønskede prøvevægt i μg
6' Formlen returnerer det krævede prøvevolumen i μL
7

Python Implementering

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Beregner protein koncentration fra absorbans ved hjælp af standardkurve."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbans kan ikke være negativ")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Beregner nødvendigt prøvevolumen baseret på absorbans og ønsket masse."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Prøvevægt skal være positiv")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Beregnet protein koncentration skal være positiv")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Eksempel brug
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"For absorbans {absorbance} og ønsket proteinmasse {sample_mass} μg:")
31    print(f"Protein koncentration: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Nødvendigt prøvevolumen: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Fejl: {e}")
35

R Kode til Analyse

1# Funktion til at beregne protein koncentration fra absorbans
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbans kan ikke være negativ")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funktion til at beregne prøvevolumen
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Prøvevægt skal være positiv")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Beregnet protein koncentration skal være positiv")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Eksempel brug
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("For absorbans %.2f og ønsket proteinmasse %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Protein koncentration: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Nødvendigt prøvevolumen: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Fejl: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript Implementering

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbans kan ikke være negativ");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Prøvevægt skal være positiv");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Beregnet protein koncentration skal være positiv");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Eksempel brug
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`For absorbans ${absorbance} og ønsket proteinmasse ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Protein koncentration: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Nødvendigt prøvevolumen: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Fejl: ${error.message}`);
37}
38

Standardkurve Visualisering

Forholdet mellem absorbans og protein koncentration er typisk lineært inden for et bestemt område. Nedenfor er en visualisering af en standard BCA kurve:

BCA Standardkurve for Protein Kvantificering Visualisering af den lineære sammenhæng mellem absorbans og protein koncentration i et BCA assay 0.0
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbans (562 nm) Protein Koncentration (μg/μL)

Standard Kurve Standard Prøver

BCA Standardkurve

Sammenligning med Andre Protein Kvantificeringsmetoder

Forskellige protein kvantificeringsmetoder har forskellige fordele og begrænsninger. Her er hvordan BCA assayet sammenlignes med andre almindelige metoder:

MetodeFølsomhedsområdeFordeleBegrænsningerBedst til
BCA Assay5-2000 μg/mL• Kompatibel med sæber
• Mindre protein-til-protein variation
• Stabil farveudvikling
• Forstyrret af reducerende midler
• Påvirket af nogle chelaterende midler
• Generel protein kvantificering
• Prøver der indeholder sæber
Bradford Assay1-1500 μg/mL• Hurtig (2-5 min)
• Få forstyrrende stoffer
• Høj protein-til-protein variation
• Inkompatibel med sæber
• Hurtige målinger
• Sæbefri prøver
Lowry Metode1-1500 μg/mL• Velkendt
• God følsomhed
• Mange forstyrrende stoffer
• Flere trin
• Historisk konsistens
• Rene protein prøver
UV Absorbans (280 nm)20-3000 μg/mL• Ikke-destruktiv
• Meget hurtig
• Ingen reagenser nødvendige
• Påvirket af nukleinsyrer
• Kræver rene prøver
• Rene protein opløsninger
• Hurtige tjek under rensning
Fluorometrisk0.1-500 μg/mL• Højeste følsomhed
• Bred dynamisk rækkevidde
• Dyre reagenser
• Kræver fluorometer
• Meget fortyndede prøver
• Begrænset prøvevolumen

Ofte Stillede Spørgsmål

Hvad bruges BCA assayet til?

BCA (bicinchoninsyre) assayet bruges primært til at kvantificere den samlede protein koncentration i en prøve. Det er meget anvendt inden for biokemi, cellebiologi og molekylærbiologi til applikationer såsom western blotting, enzymatiske assays, immunpræcipitation og proteinrensning.

Hvor nøjagtigt er BCA assayet?

BCA assayet er generelt nøjagtigt inden for 5-10%, når det udføres korrekt. Dets nøjagtighed afhænger af flere faktorer, herunder kvaliteten af standardkurven, fraværet af forstyrrende stoffer, og om den ukendte proteins sammensætning ligner den standardprotein, der anvendes.

Hvad kan forstyrre BCA assay resultaterne?

Flere stoffer kan forstyrre BCA assay resultaterne, herunder:

  • Reducerende midler (DTT, β-mercaptoethanol, glutathion)
  • Chelaterende midler (EDTA, EGTA)
  • Høje koncentrationer af simple sukkerarter
  • Lipider
  • Nogle sæber i høje koncentrationer
  • Ammoniakforbindelser

Hvad er forskellen mellem BCA og Bradford assays?

De vigtigste forskelle er:

  • BCA assayet er mere kompatibelt med sæber og overfladeaktive stoffer
  • Bradford assayet er hurtigere (2-5 minutter vs. 30+ minutter for BCA)
  • BCA har mindre protein-til-protein variation
  • Bradford er mere følsom over for basiske aminosyrer
  • BCA påvirkes af reducerende midler, mens Bradford ikke gør

Hvorfor er mit beregnede prøvevolumen for stort?

Hvis din beregner viser et meget stort prøvevolumen, indikerer det normalt en lav protein koncentration i din prøve. Dette kan skyldes:

  1. Faktisk lav proteinindhold i din oprindelige prøve
  2. Protein tab under forberedelse
  3. Fejl i BCA assay proceduren
  4. Unøjagtig absorbansmåling

Overvej at koncentrere din prøve eller justere dit eksperimentelle design for at imødekomme den lavere protein koncentration.

Kan jeg bruge denne beregner til andre protein kvantificeringsmetoder?

Denne beregner er specifikt designet til BCA assay resultater. Selvom det grundlæggende princip (at konvertere koncentration til volumen) gælder for andre metoder, varierer forholdet mellem absorbans og protein koncentration mellem forskellige assays. For andre metoder som Bradford eller Lowry skal du bruge forskellige standardkurveparametre.

Hvordan håndterer jeg prøver med absorbans uden for det lineære område?

For absorbansmålinger uden for det lineære område (typisk >2.0):

  1. Fortynd din prøve og gentag BCA assayet
  2. Brug en anden protein kvantificeringsmetode
  3. Juster standardkurven for at inkludere højere koncentrationsstandarder

Hvilket protein skal jeg bruge som standard?

Bovin serum albumin (BSA) er den mest almindeligt anvendte standard for BCA assays, fordi det er:

  • Let tilgængeligt og billigt
  • Meget opløseligt
  • Stabilt i opløsning
  • Velkarakteriseret

Men hvis dine prøver indeholder et dominerende protein, der adskiller sig betydeligt fra BSA, kan du overveje at bruge det protein som din standard for mere nøjagtige resultater.

Hvor længe er BCA reaktionen stabil?

Den lilla farve, der udvikles i BCA reaktionen, er stabil i flere timer ved stuetemperatur og kan måles når som helst inden for den periode. For bedste resultater anbefales det dog at måle alle standarder og prøver på omtrent samme tid efter farveudviklingen.

Kan jeg genbruge standardkurven fra et tidligere eksperiment?

Selvom det teknisk set er muligt at genbruge en standardkurve, anbefales det ikke for nøjagtig kvantificering. Variationer i reagenser, inkubationsbetingelser og instrumentkalibrering kan påvirke forholdet mellem absorbans og protein koncentration. For pålidelige resultater, generer en frisk standardkurve hver gang du udfører assayet.

Referencer

  1. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Instruktioner. Tilgængelig på: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Prøv Vores BCA Absorbans Prøvevolumen Beregner I Dag!

Nu hvor du forstår principperne bag BCA protein kvantificering og prøvevolumen beregning, prøv vores beregner for at strømline dit laboratoriearbejde. Indtast blot dine absorbansmålinger og ønskede prøvevægt for at få øjeblikkelige, nøjagtige prøvevolumen beregninger.

Uanset om du forbereder prøver til western blotting, enzymatiske assays eller enhver anden proteinbaseret eksperiment, vil vores beregner hjælpe med at sikre konsistente og pålidelige resultater. Spar tid, reducer fejl og forbedr reproducerbarheden af dine eksperimenter med BCA Absorbans Prøvevolumen Beregneren.