🛠️

Whiz Tools

BCA neeldumise näidise mahu kalkulaator laboriprotokollide jaoks

Arvutage täpsed näidise mahud BCA katse neeldumise näitude ja soovitud valgu massi põhjal. Oluline ühtlase valgukoormuse tagamiseks western blotides ja muudes laborirakendustes.

BCA neeldumise näidismahu kalkulaator

See tööriist arvutab vajaliku näidismahu BCA neeldumise tulemuste ja näidise massi põhjal. Sisestage iga näidise neeldumise väärtus ja mass, et arvutada vastav näidismah.

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

Näidise sisendid

Näidis 1

Copy
N/A μL

Arvutusvalem

Näidismaht arvutatakse järgmise valemi abil:

Näidismaht (μL) = Näidise mass (μg) / Valgu kontsentratsioon (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Dokumentatsioon

BCA Absorbance Sample Volume Calculator

Sissejuhatus

BCA Absorbance Sample Volume Calculator on spetsiaalne tööriist, mis on loodud teadlastele ja laboritehnikutele, et täpselt määrata katse jaoks sobiv proovimaht BCA (bikinchoninic acid) testi tulemuste põhjal. See kalkulaator võtab teie BCA testi neeldumise näidud ja soovitud proovimassi, et arvutada täpne maht, mis on vajalik ühtlase valgu laadimise jaoks rakendustes nagu western blotting, ensümaatilised katsed ja muud valgu analüüsi tehnikad.

BCA test on üks laialdaselt kasutatavaid meetodeid valgu kvantifitseerimiseks biokeemia ja molekulaarbioloogia laborites. Mõõtes teie valgu proovide neeldumist ja võrreldes neid standardkõveraga, saate määrata valgu kontsentratsiooni kõrge täpsusega. Meie kalkulaator lihtsustab seda protsessi, muutes neeldumise näidud automaatselt täpseteks proovimahuteks, mis on vajalikud teie katseteks.

BCA testi ja proovimahu arvutamise mõistmine

Mis on BCA test?

Bikinchoninic Acid (BCA) test on biokeemiline test, mis määrab lahuses oleva valgu kogukontsentratsiooni. Selle testi põhimõte põhineb Cu²⁺-valgu kompleksi moodustumisel aluselistes tingimustes, millele järgneb Cu²⁺-i vähendamine Cu¹⁺-iks. Vähendamise hulk on proportsionaalne kohaloleva valguga. BCA moodustab aluselistes keskkondades Cu¹⁺-iga lilla värvi kompleksi, mis annab aluse jälgida vase vähendamist valkude poolt.

Lilla värvi intensiivsus suureneb proportsionaalselt valgu kontsentratsiooniga, mida saab mõõta spektrofotomeetriga umbes 562 nm juures. Neeldumise näidud võrreldakse seejärel standardkõveraga, et määrata tundmatute proovide valgu kontsentratsioon.

Proovimahu arvutamise valem

Proovimahu arvutamise põhivalem BCA neeldumise tulemuste põhjal on:

Proovimahu (μL)=Proovimass (μg)Valgu kontsentratsioon (μg/μL)\text{Proovimahu (μL)} = \frac{\text{Proovimass (μg)}}{\text{Valgu kontsentratsioon (μg/μL)}}

Kus:

  • Proovimahu on vajalik proovimaht (mikrolitrites, μL)
  • Proovimass on soovitud valgu kogus (mikrogrammides, μg)
  • Valgu kontsentratsioon saadakse BCA neeldumise näidust (μg/μL)

Valgu kontsentratsioon arvutatakse neeldumise näidu põhjal standardkõvera valemi abil:

Valgu kontsentratsioon (μg/μL)=Kalle×Neeldumine+Intercept\text{Valgu kontsentratsioon (μg/μL)} = \text{Kalle} \times \text{Neeldumine} + \text{Intercept}

Tüüpilise BCA testi puhul on tavaline kalle umbes 2.0 ja intercept on sageli lähedane nullile, kuigi need väärtused võivad varieeruda sõltuvalt teie konkreetsetest testi tingimustest ja standardkõverast.

Kuidas kasutada BCA Absorbance Sample Volume Calculatorit

Meie kalkulaator lihtsustab proovimahude määramise protsessi BCA testi tulemuste põhjal. Järgige neid samme, et saada täpseid arvutusi:

  1. Sisestage prooviteave:

    • Andke oma proovile nimi (valikuline, kuid aitab mitme proovi jälgimisel)
    • Sisestage BCA neeldumise näit oma spektrofotomeetrist
    • Sisestage soovitud proovimass (valgu kogus, mida soovite kasutada μg-des)

  2. Valige standardkõvera tüüp:

    • Standard (vaikimisi): Kasutab tüüpilisi BCA standardkõvera parameetreid
    • Täiustatud: Täiendava tundlikkuse protokoll
    • Mikro: Mikroplaadi protokoll
    • Kohandatud: Lubab sisestada oma kalle ja intercept väärtused

  3. Vaadake tulemusi:

    • Kalkulaator kuvab koheselt vajaliku proovimahu mikrolitrites
    • Tulemused esitatakse ka kokkuvõtte tabelis, et oleks lihtne viidata
    • Mitme proovi korral saate lisada rohkem sisendeid ja võrrelda tulemusi

  4. Kopeeri või eksportige tulemusi:

    • Kasutage kopeerimisnuppu, et edastada tulemusi oma labori märkmikusse või teistesse rakendustesse
    • Kõik arvutused saab salvestada tulevikuks

Samm-sammuline näide

Vaatame praktilist näidet:

  1. Olete teinud BCA testi ja saanud valgu proovide neeldumise näiduks 0.75.
  2. Soovite laadida 20 μg valku oma western blot'i jaoks.
  3. Kasutades standardkõverat (kalle = 2.0, intercept = 0):
    • Valgu kontsentratsioon = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • Vajalik proovimaht = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

See tähendab, et peaksite laadima 13.33 μL oma proovi, et saada 20 μg valku.

Tulemuste mõistmine

Kalkulaator annab mitmeid olulisi teabepunkte:

  1. Valgu kontsentratsioon: See arvutatakse teie neeldumise näidu põhjal valitud standardkõvera abil. See esindab valgu kogust prooviühiku kohta (μg/μL).

  2. Proovimaht: See on proovimaht, mis sisaldab soovitud valgu kogust. See väärtus on see, mida kasutate oma katsete ettevalmistamisel.

  3. Hoiatused ja soovitused: Kalkulaator võib anda hoiatusi:

    • Väga kõrged neeldumise näidud (>3.0), mis võivad olla testi lineaarse vahemiku välised
    • Väga madalad neeldumise näidud (<0.1), mis võivad olla tuvastamise piirides
    • Arvutatud mahud, mis on ebamugavalt suured (>1000 μL) või väikesed (<1 μL)

Rakendused ja kasutusjuhud

Western Bloti proovide ettevalmistamine

Üks levinumaid rakendusi selle kalkulaatori jaoks on proovide ettevalmistamine western blotting'uks. Ühtlane valgu laadimine on usaldusväärsete western blot'i tulemuste jaoks ülioluline, ja see kalkulaator tagab, et laadite iga proovi jaoks sama palju valku, isegi kui nende kontsentratsioonid erinevad.

Näidisvoog:

  1. Tehke BCA test kõigi oma valgu proovide peal
  2. Otsustage, kui palju valku ühtlaselt laadida (tavaliselt 10-50 μg)
  3. Kasutage kalkulaatorit, et määrata iga proovi jaoks vajalik maht
  4. Lisage sobivad mahud proovipuhvrit ja vähendajat
  5. Laadige arvutatud mahud oma geelile

Ensümaatilised katsed

Ensümaatilistes katsetes on sageli vajalik kasutada kindlat kogust valku, et standardiseerida reaktsioonitingimusi erinevate proovide või katsete vahel.

Näidisvoog:

  1. Määrake valgu kontsentratsioon BCA testi abil
  2. Arvutage vajalik maht, et saada soovitud valgu kogus
  3. Lisage see maht oma reaktsioonisegule
  4. Jätkake oma ensümaatilise katsega

Immunopretsipitatsiooni katsed

Immunopretsipitatsiooni (IP) katsetes on oluline alustada ühtse valgu kogusega, et võrrelda tulemusi erinevate tingimuste vahel.

Näidisvoog:

  1. Mõõtke rakkude või kudede lüsaadi valgu kontsentratsioon BCA testi abil
  2. Arvutage mahud, mis on vajalikud, et saavutada võrdne valgu kogus (tavaliselt 500-1000 μg)
  3. Kohandage kõik proovid sama mahuga lüsaadiga
  4. Jätkake antikeha inkubeerimise ja sadestamisega

Valgu puhastamine

Valgu puhastamise käigus on sageli vajalik jälgida valgu kontsentratsiooni ja arvutada saagid erinevates etappides.

Näidisvoog:

  1. Koguge fraktsioone puhastamise käigus
  2. Tehke BCA test valitud fraktsioonide peal
  3. Arvutage valgu kontsentratsioon ja kogus
  4. Määrake mahud, mis on vajalikud edasiste rakenduste jaoks

Täiendavad funktsioonid ja kaalutlused

Kohandatud standardkõverad

Kuigi kalkulaator pakub vaikimisi parameetreid standardsete BCA testide jaoks, saate sisestada ka kohandatud väärtused, kui olete loonud oma standardkõvera. See on eriti kasulik, kui:

  • Töötate mitte-standardsete valgu proovidega
  • Kasutate muudetud BCA protokolle
  • Töötate ainete juures, mis võivad testi tulemusi mõjutada

Kohandatud standardkõvera kasutamiseks:

  1. Valige standardkõvera valikute hulgast "Kohandatud"
  2. Sisestage oma kalle ja intercept väärtused
  3. Kalkulaator kasutab neid väärtusi kõigi edasiste arvutuste jaoks

Mitme proovi käsitlemine

Kalkulaator võimaldab teil lisada mitu proovi ja arvutada nende mahtusid samaaegselt. See on eriti kasulik, kui valmistate proove katseteks, mis nõuavad ühtlast valgu laadimist erinevate tingimuste vahel.

Partii töötlemise eelised:

  • Aitab aega säästa, arvutades kõik mahud korraga
  • Tagab järjepidevuse kõigi teie proovide vahel
  • Lihtne võrrelda valgu kontsentratsioone proovide vahel
  • Tuvastada kõrvalekaldeid või võimalikke mõõtmisvigu

Äärmuslike juhtumite käsitlemine

Väga kõrged neeldumise näidud

Kui teie neeldumise näit on üle 2.0, võib see olla BCA testi lineaarse vahemiku väljas. Sellistel juhtudel:

  1. Lahjendage oma proovi ja korrake BCA testi
  2. Alternatiivselt kasutage kalkulaatori hoiatussüsteemi, mis tuvastab potentsiaalselt probleemseid näite

Väga madalad neeldumise näidud

Neeldumise näidud alla 0.1 võivad olla testi tuvastamise piirides, mis võib mõjutada täpsust. Kaaluge:

  1. Proovi kontsentreerimist, kui see on võimalik
  2. Kasutage tundlikumat valgu kvantifitseerimise meetodit
  3. Kohandage oma katse disaini madalamate valgu koguste jaoks

Ebamugavalt suured arvutatud mahud

Kui kalkulaator näitab, et maht on teie rakenduse jaoks liiga suur:

  1. Kaaluge oma valgu proovi kontsentreerimist
  2. Kohandage oma soovitud valgu kogust allapoole, kui teie katse seda lubab
  3. Kasutage maksimaalset praktilist mahtu ja märkige ära tegelikult kasutatud valgu kogus

Valgu kvantifitseerimise ajalugu ja BCA test

Valgude täpne kvantifitseerimine on olnud põhiline nõue biokeemias ja molekulaarbioloogias alates nende valdkondade tekkimisest. Varased meetodid tuginesid lämmastiku sisalduse määramisele, mis oli aeganõudev ja nõudis spetsialiseeritud seadmeid.

Valgu kvantifitseerimise meetodite areng

  1. Kjeldahli meetod (1883): Üks varasemaid valgu kvantifitseerimise meetodeid, mis põhineb lämmastiku sisalduse mõõtmisel.

  2. Biureeti test (1900. aastate algus): See meetod tugineb peptiidide sidemete reaktsioonile vaseioonidega aluselises lahuses, mille tulemusena tekib violetne värv.

  3. Lowry test (1951): Oliver Lowry arendas selle meetodi, mis kombineeris biureeti reaktsiooni Folin-Ciocalteu reaktiiviga, suurendades tundlikkust.

  4. Bradfordi test (1976): Marion Bradford arendas selle meetodi, kasutades Coomassie Brilliant Blue G-250 värvi, mis seondub valkudega ja muudab absorptsiooni maksimaalse.

  5. BCA test (1985): Paul Smith ja tema kolleegid Pierce Chemical Company-st arendasid selle meetodi, kombineerides biureeti reaktsiooni BCA tuvastamisega, pakkudes paremat tundlikkust ja ühilduvust detergendidega.

BCA testi areng

BCA test kirjeldati esmakordselt 1985. aasta artiklis, mille autoriteks olid Smith jt, pealkirjaga "Measurement of protein using bicinchoninic acid." See arendati, et lahendada olemasolevate meetodite piirangud, eriti kemikaalide sekkumine, mida sageli kasutatakse valgu ekstraheerimisel ja puhastamisel.

Peamine uuendus oli kasutada bikinchononic acid'i vaseioonide tuvastamiseks, mis tekivad valgu vahendatud vähendamise tulemusena, moodustades lilla värvi kompleksi, mida saab spektrofotomeetriliselt mõõta. See pakkus mitmeid eeliseid:

  1. Suurem tundlikkus kui biureeti meetodil
  2. Vähem vastuvõtlikkus sekkumistele võrreldes Lowry meetodiga
  3. Paremini ühilduv detergendidega kui Bradfordi test
  4. Lihtsam protokoll vähemate reaktiivide ja sammudega

Alates selle tutvustamisest on BCA testist saanud üks laialdaselt kasutatavaid valgu kvantifitseerimise meetodeid biokeemia ja molekulaarbioloogia laborites üle kogu maailma.

Koodinäidised proovimahu arvutamiseks

Exceli valem

1=IF(B2<=0,"Viga: Kehtetu neeldumine",IF(C2<=0,"Viga: Kehtetu proovimass",C2/(2*B2)))
2
3' Kus:
4' B2 sisaldab neeldumise näitu
5' C2 sisaldab soovitud proovimassi μg-des
6' Valem tagastab vajaliku proovimahu μL-des
7

Python'i rakendus

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Arvuta valgu kontsentratsioon neeldumise põhjal standardkõvera abil."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Neeldumine ei saa olla negatiivne")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Arvuta vajalik proovimaht, tuginedes neeldumisele ja soovitud massile."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Proovimass peab olema positiivne")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Arvutatud valgu kontsentratsioon peab olema positiivne")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Näidis kasutamine
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Neeldumise {absorbance} ja soovitud valgu massi {sample_mass} μg korral:")
31    print(f"Valgu kontsentratsioon: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Vajalik proovimaht: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Viga: {e}")
35

R-kood analüüsimiseks

1# Funktsioon valgu kontsentratsiooni arvutamiseks neeldumise põhjal
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Neeldumine ei saa olla negatiivne")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funktsioon proovimahu arvutamiseks
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Proovimass peab olema positiivne")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Arvutatud valgu kontsentratsioon peab olema positiivne")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Näidis kasutamine
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Neeldumise %.2f ja soovitud valgu massi %.2f μg korral:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Valgu kontsentratsioon: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Vajalik proovimaht: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Viga: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript'i rakendus

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Neeldumine ei saa olla negatiivne");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Proovimass peab olema positiivne");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Arvutatud valgu kontsentratsioon peab olema positiivne");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Näidis kasutamine
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Neeldumise ${absorbance} ja soovitud valgu massi ${sampleMass} μg korral:`);
33  console.log(`Valgu kontsentratsioon: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Vajalik proovimaht: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Viga: ${error.message}`);
37}
38

Standardkõvera visualiseerimine

Seos neeldumise ja valgu kontsentratsiooni vahel on tavaliselt lineaarne teatud vahemikus. Allpool on visualiseerimine BCA standardkõverast:

BCA Standard Curve for Protein Quantification Visualiseerimine lineaarse seose kohta neeldumise ja valgu kontsentratsiooni vahel BCA testis 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Neeldumine (562 nm) Valgu kontsentratsioon (μg/μL)

Standardkõver Standardproovid

BCA Standardkõver

Võrdlus teiste valgu kvantifitseerimise meetoditega

Erinevatel valgu kvantifitseerimise meetoditel on erinevad eelised ja piirangud. Siin on, kuidas BCA test võrreldes teiste levinud meetoditega:

MeetodTundlikkuse vahemikEelisedPiirangudParim
BCA test5-2000 μg/mL• Ühilduv detergendidega
• Vähem valgu-vaheline variatsioon
• Stabiilne värvi areng		• Vähendavad ained võivad sekkuda
• Mõned keemilised ained võivad mõjutada		• Üldine valgu kvantifitseerimine
• Proovid, mis sisaldavad detergente
Bradfordi test1-1500 μg/mL• Kiire (2-5 min)
• Vähe sekkumise aineid		• Suur valgu-vaheline variatsioon
• Ühilduv detergendidega		• Kiired mõõtmised
• Detergendivabad proovid
Lowry meetod1-1500 μg/mL• Hästi väljakujunenud
• Hea tundlikkus		• Palju sekkumise aineid
• Mitmed sammud		• Ajalooline järjepidevus
• Puhtad valgu proovid
UV neeldumine (280 nm)20-3000 μg/mL• Mittehävitav
• Väga kiire
• Ei ole vaja reaktiive		• Mõjutavad nukleiinhappeid
• Nõuab puhtaid proove		• Puhtad valgu lahendused
• Kiired kontrollid puhastamise ajal
Fluoromeetriline0.1-500 μg/mL• Kõrgeim tundlikkus
• Lai dünaamiline vahemik		• Kallid reaktiivid
• Nõuab fluoromeetrit		• Väga lahjad proovid
• Piiratud proovimaht

Korduma kippuvad küsimused

Milleks kasutatakse BCA testi?

BCA (bikinchoninic acid) testi kasutatakse peamiselt lahuses oleva valgu kogukontsentratsiooni kvantifitseerimiseks. Seda kasutatakse laialdaselt biokeemias, rakkude bioloogias ja molekulaarbioloogias rakendustes nagu western blotting, ensümaatilised katsed, immunopretsipitatsioon ja valgu puhastamine.

Kui täpne on BCA test?

BCA test on tavaliselt täpne 5-10% ulatuses, kui seda tehakse õigesti. Selle täpsus sõltub mitmest tegurist, sealhulgas standardkõvera kvaliteedist, sekkumise ainete puudumisest ja kas tundmatu valgu koostis on sarnane kasutatud standardvalgu omaga.

Mis võib BCA testi tulemusi mõjutada?

Mitmed ained võivad BCA testi tulemusi mõjutada, sealhulgas:

  • Vähendavad ained (DTT, β-merkaptan, glutation)
  • Keemilised ained (EDTA, EGTA)
  • Suurte kontsentratsioonide lihtsoolad
  • Lipiidid
  • Mõned detergendid suurtes kontsentratsioonides
  • Ammoniaagikompoundid

Mis vahe on BCA ja Bradfordi testidel?

Peamised erinevused on:

  • BCA test on rohkem ühilduv detergendidega ja pindaktiivsete ainetega
  • Bradfordi test on kiirem (2-5 minutit vs. 30+ minutit BCA jaoks)
  • BCA-l on vähem valgu-vaheline variatsioon
  • Bradford on tundlikum aluseliste aminohapete suhtes
  • BCA-d mõjutavad vähendavad ained, samas kui Bradfordit ei mõjuta

Miks on minu arvutatud proovimaht liiga suur?

Kui teie kalkulaator näitab väga suurt proovimahtu, näitab see tavaliselt madalat valgu kontsentratsiooni teie proovis. See võib olla tingitud:

  1. Tegelikult madalast valgu sisust teie algses proovis
  2. Valgu kaotus ettevalmistamise käigus
  3. BCA testi protseduuri vead
  4. Ebatäpsed neeldumise näidud

Kaaluge oma proovi kontsentreerimist või kohandage oma katse disaini madalamate valgu kontsentratsioonide jaoks.

Kas ma saan seda kalkulaatorit kasutada teiste valgu kvantifitseerimise meetodite jaoks?

See kalkulaator on spetsiaalselt loodud BCA testi tulemuste jaoks. Kuigi põhialus (kontsentratsiooni muutmine mahuks) kehtib ka teiste meetodite puhul, varieerub neeldumise ja valgu kontsentratsiooni suhe erinevate testide vahel. Teiste meetodite, nagu Bradfordi või Lowry, jaoks peate kasutama erinevaid standardkõvera parameetreid.

Kuidas käsitleda proove, mille neeldumine on väljaspool lineaarset vahemikku?

Neeldumise näitude puhul, mis on väljaspool lineaarset vahemikku (tavaliselt >2.0):

  1. Lahjendage oma proovi ja korrake BCA testi
  2. Kasutage erinevat valgu kvantifitseerimise meetodit
  3. Kohandage standardkõverat, et hõlmata kõrgema kontsentratsiooni standardeid

Millist valku peaksin kasutama standardina?

Bovina serum albumiin (BSA) on kõige sagedamini kasutatav standard BCA testides, kuna see on:

  • Kergesti kättesaadav ja odav
  • Väga lahustuv
  • Stabiilne lahuses
  • Hästi iseloomustatud

Kuid kui teie proovid sisaldavad domineerivat valku, mis erineb oluliselt BSA-st, kaaluge selle valgu kasutamist oma standardina täpsemate tulemuste saavutamiseks.

Kui kaua on BCA reaktsioon stabiilne?

BCA reaktsioonis tekkinud lilla värv on toatemperatuuril stabiilne mitu tundi ja seda saab mõõta igal ajal selle perioodi jooksul. Siiski on soovitatav mõõta kõiki standardeid ja proove ligikaudu samal ajal pärast värvi arengut.

Kas ma saan eelmist katse standardkõverat uuesti kasutada?

Kuigi tehniliselt on võimalik eelmist standardkõverat uuesti kasutada, ei soovitata seda täpsete kvantifitseerimise tulemuste jaoks. Reaktiivide, inkubeerimise tingimuste ja seadme kalibreerimise variatsioonid võivad mõjutada neeldumise ja valgu kontsentratsiooni vahelist seost. Usaldusväärsete tulemuste saamiseks genereerige iga kord värske standardkõver.

Viidatud allikad

  1. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Juhised. Saadaval aadressil: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Proovige meie BCA Absorbance Sample Volume Calculatorit täna!

Nüüd, kui mõistate BCA valgu kvantifitseerimise ja proovimahu arvutamise põhimõtteid, proovige meie kalkulaatorit, et lihtsustada oma labori töövoogu. Lihtsalt sisestage oma neeldumise näidud ja soovitud proovimass, et saada koheseid, täpseid proovimahu arvutusi.

Olgu need teie proovide ettevalmistamine western blotting'uks, ensümaatiliste katsete tegemine või mõni muu valgu põhine katse, meie kalkulaator aitab tagada järjepidevad ja usaldusväärsed tulemused. Säästke aega, vähendage vigu ja parandage oma katsete korduvust BCA Absorbance Sample Volume Calculatoriga.

🔗

Seotud tööriistad

Avasta rohkem tööriistu, mis võivad olla kasulikud teie töövoos

Tsisterni mahutavuse kalkulaator silindrilistele, sfäärilistele ja ristkülikulistele

Proovige seda tööriista

Vedelikuga katteala kalkulaator

Proovige seda tööriista

Augu Mahutavuse Kalkulaator: Silindrilised ja Ristkülikukujulised Kaevamised

Proovige seda tööriista

Auger Mahuti Kalkulaator: Mõõda Silindriliste Kaevamiste Mahud

Proovige seda tööriista

Küübiklahtri mahu kalkulaator: leia maht serva pikkuse järgi

Proovige seda tööriista

Lihtne lahjendusteguri kalkulaator laboratoorsete lahuste jaoks

Proovige seda tööriista

Liiva Mahu Kalkulaator: Hinda Materjali Iga Projekti jaoks

Proovige seda tööriista

Kahe-Fotoni Neelduse Koefitsiendi Kalkulaator

Proovige seda tööriista

Molaarsuse kalkulaator: Lahuse kontsentratsiooni tööriist

Proovige seda tööriista