BCA Absorbancia Mintavolum Számító a Laboratóriumi Protokollokhoz

Számítsa ki a pontos mintavolumokat a BCA vizsgálati absorbancia mérések és a kívánt fehérje tömeg alapján. Elengedhetetlen a fehérje konzisztens terheléséhez western blotokban és más laboratóriumi alkalmazásokban.

BCA Elszívás Mintamennyiség Számító

Ez az eszköz kiszámítja a szükséges mintamennyiséget a BCA elszívás eredményei és a minta tömege alapján. Adja meg az elszívás értékét és a minta tömegét minden mintához, hogy kiszámolja a megfelelő mintamennyiséget.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Minta Bemenetek

Minta 1

Minta Neve

BCA Elszívás*

Minta Tömeg (μg)*

Minta Mennyiség

Copy

N/A μL

Számítási Képlet

A mintamennyiséget a következő képlet segítségével számítjuk ki:

Minta Mennyiség (μL) = Minta Tömeg (μg) / Fehérje Koncentráció (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Dokumentáció

BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátor

Bevezetés

A BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátor egy speciális eszköz, amelyet kutatók és laboratóriumi technikusok számára terveztek, hogy pontosan meghatározzák a megfelelő minta térfogatot a BCA (bicinchoninsav) teszt eredményei alapján. Ez a kalkulátor a BCA tesztből származó abszorbancia-értékeket és a kívánt minta tömeget figyelembe véve kiszámítja a szükséges térfogatot a következetes fehérje terheléshez olyan alkalmazásokban, mint a western blot, enzimatikus tesztek és más fehérjeanalitikai technikák.

A BCA teszt az egyik legszélesebb körben használt módszer a fehérje mennyiségének meghatározására biokémiai és molekuláris biológiai laboratóriumokban. A fehérje minták abszorbancia-értékeinek mérésével és egy standard görbéhez való összehasonlításával a fehérje koncentrációját nagy pontossággal meghatározhatja. Kalkulátorunk leegyszerűsíti ezt a folyamatot azáltal, hogy automatikusan átváltja az abszorbancia-értékeket a kísérleteihez szükséges pontos minta térfogatokká.

A BCA Teszt és a Minta Térfogat Kiszámításának Megértése

Mi az a BCA Teszt?

A Bicinchoninsav (BCA) teszt egy biokémiai teszt a fehérje teljes koncentrációjának meghatározására egy oldatban. A teszt elve a Cu²⁺-fehérje komplex kialakulásán alapul alkalikus körülmények között, amelyet a Cu²⁺ Cu¹⁺-ra való redukálása követ. A redukció mértéke arányos a jelen lévő fehérjével. A BCA lila színű komplexet képez a Cu¹⁺-al alkalikus környezetben, ami alapot ad a fehérjék által okozott réz redukciójának nyomon követésére.

A lila szín intenzitása arányosan növekszik a fehérje koncentrációval, amelyet spektrofotométerrel lehet mérni körülbelül 562 nm-en. Az abszorbancia-értékeket ezután egy standard görbéhez hasonlítják, hogy meghatározzák az ismeretlen minták fehérje koncentrációját.

A Minta Térfogat Kiszámításának Képlete

A BCA abszorbancia eredményekből származó minta térfogat kiszámításának alapvető képlete:

$\text{Minta Térfogat (μL)} = \frac{\text{Minta Tömeg (μg)}}{\text{Fehérje Koncentráció (μg/μL)}}$

Ahol:

Minta Térfogat a szükséges minta térfogata (mikroliterben, μL)
Minta Tömeg a felhasználni kívánt fehérje mennyisége (mikrogrammban, μg)
Fehérje Koncentráció a BCA abszorbancia-értékből származik (μg/μL)

A fehérje koncentrációt az abszorbancia-értékből a standard görbe egyenlete segítségével számítják:

$\text{Fehérje Koncentráció (μg/μL)} = \text{Meredekség} \times \text{Absorbancia} + \text{Metszéspont}$

Egy tipikus BCA teszt esetén a szokásos meredekség körülbelül 2.0, és a metszéspont gyakran közel van a nullához, bár ezek az értékek változhatnak az Ön specifikus tesztkörülményei és standard görbéje alapján.

A BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátor Használata

Kalkulátorunk leegyszerűsíti a minta térfogatának meghatározását a BCA teszt eredményeiből. Kövesse ezeket a lépéseket a pontos számításokhoz:

Minta Információk Megadása:
- Adjon meg egy nevet a mintájának (opcionális, de hasznos több minta nyomon követéséhez)
- Adja meg a BCA abszorbancia-értékét a spektrofotométeréből
- Írja be a kívánt minta tömeget (a felhasználni kívánt fehérje mennyisége μg-ban)
Standard Görbe Típusának Kiválasztása:
- Standard (alapértelmezett): A tipikus BCA standard görbe paramétereit használja
- Fokozott: Fokozott érzékenységű protokollhoz
- Mikró: Mikrotálcás protokollhoz
- Egyéni: Lehetővé teszi a saját meredekség és metszéspont értékek megadását
Eredmények Megtekintése:
- A kalkulátor azonnal megjeleníti a szükséges minta térfogatot mikroliterben
- Az eredmények összegző táblázatban is megjelennek a könnyű referencia érdekében
- Több minta esetén további bejegyzéseket adhat hozzá, és összehasonlíthatja az eredményeket
Eredmények Másolása vagy Exportálása:
- Használja a másolás gombot az eredmények átvitelére a laboratóriumi naplójába vagy más alkalmazásokba
- Minden számítás elmenthető a jövőbeli referencia érdekében

Lépésről Lépésre Példa

Nézzünk meg egy gyakorlati példát:

Ön BCA tesztet végzett, és 0.75-ös abszorbancia-értéket kapott a fehérje mintájához.
20 μg fehérjét szeretne betölteni a western blotjához.
A standard görbe (meredekség = 2.0, metszéspont = 0) használatával:
- Fehérje koncentráció = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Szükséges minta térfogat = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Ez azt jelenti, hogy 13.33 μL mintát kell betöltenie, hogy 20 μg fehérjét kapjon.

Az Eredmények Megértése

A kalkulátor több fontos információt nyújt:

Fehérje Koncentráció: Ez az Ön abszorbancia-értéke alapján a kiválasztott standard görbe segítségével számítva. Ez a minta egységnyi térfogatában lévő fehérje mennyiségét képviseli (μg/μL).
Minta Térfogat: Ez a minta térfogata, amely tartalmazza a kívánt fehérje mennyiséget. Ezt az értéket fogja használni a kísérletei előkészítésekor.
Figyelmeztetések és Ajánlások: A kalkulátor figyelmeztetéseket adhat:
- Nagyon magas abszorbancia-értékek (>3.0), amelyek lehetnek a teszt lineáris tartományán kívül
- Nagyon alacsony abszorbancia-értékek (<0.1), amelyek a detektálási határ közelében lehetnek
- Számított térfogat, amely gyakorlatilag túl nagy (>1000 μL) vagy túl kicsi (<1 μL)

Alkalmazások és Felhasználási Esetek

Western Blot Minta Előkészítés

A kalkulátor egyik leggyakoribb alkalmazása a minták előkészítése western blottinghoz. A következetes fehérje terhelés kulcsfontosságú a megbízható western blot eredményekhez, és ez a kalkulátor biztosítja, hogy minden mintából ugyanannyi fehérjét töltsön be, még akkor is, ha a koncentrációik eltérnek.

Példa munkafolyamat:

Végezze el a BCA tesztet minden fehérje mintáján
Döntse el a következetes fehérje mennyiséget, amelyet betölt (tipikusan 10-50 μg)
Használja a kalkulátort a szükséges térfogat meghatározásához minden mintához
Adjon hozzá megfelelő térfogatokat a minta puffert és redukáló anyagot
Töltse be a kiszámított térfogatokat a gépére

Enzimatikus Tesztek

Enzimatikus tesztek esetén gyakran szükséges egy adott mennyiségű fehérjét használni a reakciós körülmények standardizálásához különböző minták vagy kísérletek között.

Példa munkafolyamat:

Határozza meg a fehérje koncentrációját BCA teszt segítségével
Számolja ki a szükséges térfogatot a kívánt fehérje mennyiség eléréséhez
Adja hozzá ezt a térfogatot a reakciókeverékhez
Folytassa az enzimatikus tesztet

Immunprecipitációs Kísérletek

Immunprecipitációs (IP) kísérletek során fontos, hogy egy következetes mennyiségű fehérjét használjunk az eredmények összehasonlításához különböző körülmények között.

Példa munkafolyamat:

Mérje meg a sejt- vagy szövetlizátok fehérje koncentrációját BCA teszt segítségével
Számolja ki a szükséges térfogatokat, hogy egyenlő fehérje mennyiségeket érjen el (tipikusan 500-1000 μg)
Igazítsa az összes mintát ugyanarra a térfogatra lysis pufferral
Folytassa az antitest inkubálást és a preciptációt

Fehérje Tisztítás

A fehérje tisztítás során gyakran szükséges nyomon követni a fehérje koncentrációját és a hozamokat különböző lépésekben.

Példa munkafolyamat:

Gyűjtsön frakciókat a tisztítás során
Végezzen BCA tesztet a kiválasztott frakciókon
Számolja ki a fehérje koncentrációt és a teljes fehérje mennyiséget
Határozza meg a szükséges térfogatokat a következő alkalmazásokhoz

Fejlett Funkciók és Megfontolások

Egyéni Standard Görbék

Bár a kalkulátor alapértelmezett paramétereket biztosít a standard BCA tesztekhez, egyéni értékeket is megadhat, ha saját standard görbét készített. Ez különösen hasznos, ha:

Nem standard fehérje mintákkal dolgozik
Módosított BCA protokollokat használ
Olyan anyagok jelenlétében dolgozik, amelyek zavarhatják a tesztet

Egy egyéni standard görbe használatához:

Válassza az "Egyéni" lehetőséget a standard görbe opciók közül
Adja meg a meredekség és metszéspont értékeket
A kalkulátor ezeket az értékeket fogja használni az összes további számításhoz

Több Minta Kezelése

A kalkulátor lehetővé teszi, hogy több mintát adjon hozzá, és egyszerre számolja ki a térfogataikat. Ez különösen hasznos, amikor olyan kísérletekhez készít mintákat, amelyek következetes fehérje terhelést igényelnek több körülmény között.

A csoportos feldolgozás előnyei:

Időt takarít meg az összes térfogat egyidejű számításával
Biztosítja a következetességet az összes mintájában
Könnyen összehasonlíthatja a fehérje koncentrációkat a minták között
Azonosíthatja az eltérő értékeket vagy a potenciális mérési hibákat

Határ Esetek Kezelése

Nagyon Magas Absorbancia Értékek

Ha az abszorbancia-értéke meghaladja a 2.0-t, lehet, hogy a BCA teszt lineáris tartományán kívül van. Ilyen esetekben:

Hígítsa a mintát, és ismételje meg a BCA tesztet
Alternatívaként használja a kalkulátor figyelmeztetési rendszerét, amely figyelmezteti a potenciálisan problémás értékeket

Nagyon Alacsony Absorbancia Értékek

Az abszorbancia-értékek <0.1 esetén közel lehet a teszt detektálási határához, ami befolyásolhatja a pontosságot. Fontolja meg:

Ha lehetséges, koncentrálja a mintáját
Használjon érzékenyebb fehérje mennyiség meghatározási módszert
Igazítsa kísérleti tervét az alacsonyabb fehérje mennyiségekhez

Gyakorlatilag Túl Nagy Számított Térfogatok

Ha a kalkulátor olyan térfogatot javasol, amely túl nagy az alkalmazásához:

Fontolja meg a fehérje mintája koncentrálását
Ha a kísérlete lehetővé teszi, csökkentse a kívánt fehérje mennyiséget
Használja a maximális gyakorlati térfogatot, és jegyezze fel a ténylegesen használt fehérje mennyiséget

A Fehérje Mennyiség Megállapításának Története és a BCA Teszt

A fehérjék pontos mennyiségének meghatározása alapvető követelmény volt a biokémia és molekuláris biológia területén, amióta ezek a területek megjelentek. A korai módszerek a nitrogén tartalom meghatározására támaszkodtak, ami időigényes volt, és különleges felszerelést igényelt.

A Fehérje Mennyiség Megállapítási Módszerek Fejlődése

Kjeldahl Módszer (1883): Az egyik legkorábbi módszer a fehérje mennyiségének meghatározására, amely a nitrogén tartalom mérésén alapul.
Biuret Teszt (1900-as évek eleje): Ez a módszer a peptid kötések és rézionok reakciójára támaszkodik egy alkalikus oldatban, lila színt előidézve.
Lowry Teszt (1951): Oliver Lowry által kifejlesztett módszer, amely a Biuret reakciót a Folin-Ciocalteu reagenssel kombinálta, növelve az érzékenységet.
Bradford Teszt (1976): Marion Bradford fejlesztette ki ezt a módszert a Coomassie Brilliant Blue G-250 festék felhasználásával, amely a fehérjékhez kötődik, és eltolja az abszorpciós maximumot.
BCA Teszt (1985): Paul Smith és kollégái a Pierce Chemical Company-nál fejlesztették ki ezt a módszert, amely a Biuret reakciót a BCA detektálással ötvözte, javítva az érzékenységet és a detergensekkel való kompatibilitást.

A BCA Teszt Fejlesztése

A BCA tesztet először egy 1985-ös cikkben írták le Smith et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." címmel. Azért fejlesztették ki, hogy orvosolja a meglévő módszerek korlátait, különösen a fehérje extrakció és tisztítás során gyakran használt vegyületek interferenciáját.

A kulcsinnováció a bicinchoninsav felhasználása volt a Cu¹⁺ ionok detektálására, amelyeket a fehérje által okozott Cu²⁺ redukció hoz létre, lila színű komplexet képezve, amelyet spektrofotométerrel lehet mérni. Ez számos előnyt biztosított:

Magasabb érzékenység, mint a Biuret módszer
Kevesebb interferencia a nem fehérje anyagokkal szemben, mint a Lowry módszer
Jobb kompatibilitás a detergensekkel, mint a Bradford teszt
Egyszerűbb protokoll kevesebb reagenssel és lépéssel

Bevezetése óta a BCA teszt a legszélesebb körben használt fehérje mennyiség meghatározási módszerré vált a biokémiai és molekuláris biológiai laboratóriumokban világszerte.

Kód Példák a Minta Térfogat Kiszámítására

Excel Képlet

1=IF(B2<=0,"Hiba: Érvénytelen abszorbancia",IF(C2<=0,"Hiba: Érvénytelen minta tömeg",C2/(2*B2)))
2
3' Ahol:
4' B2 tartalmazza az abszorbancia-értéket
5' C2 tartalmazza a kívánt minta tömeget μg-ban
6' A képlet visszaadja a szükséges minta térfogatot μL-ben
7

Python Implementáció

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Számítsa ki a fehérje koncentrációt az abszorbanciából a standard görbe segítségével."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Az abszorbancia nem lehet negatív")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Számítsa ki a szükséges minta térfogatot az abszorbancia és a kívánt tömeg alapján."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("A minta tömegének pozitívnak kell lennie")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("A kiszámított fehérje koncentrációnak pozitívnak kell lennie")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Példa használat
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Az abszorbancia {absorbance} és a kívánt fehérje tömeg {sample_mass} μg esetén:")
31    print(f"Fehérje koncentráció: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Szükséges minta térfogat: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Hiba: {e}")
35

R Kód Elemzéshez

1# Függvény a fehérje koncentráció kiszámítására az abszorbanciából
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Az abszorbancia nem lehet negatív")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Függvény a minta térfogatának kiszámítására
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("A minta tömegének pozitívnak kell lennie")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("A kiszámított fehérje koncentrációnak pozitívnak kell lennie")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Példa használat
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Az abszorbancia %.2f és a kívánt fehérje tömeg %.2f μg esetén:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Fehérje koncentráció: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Szükséges minta térfogat: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Hiba: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript Implementáció

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Az abszorbancia nem lehet negatív");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("A minta tömegének pozitívnak kell lennie");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("A kiszámított fehérje koncentrációnak pozitívnak kell lennie");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Példa használat
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Az abszorbancia ${absorbance} és a kívánt fehérje tömeg ${sampleMass} μg esetén:`);
33  console.log(`Fehérje koncentráció: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Szükséges minta térfogat: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Hiba: ${error.message}`);
37}
38

Standard Görbe Vizualizáció

Az abszorbancia és a fehérje koncentráció közötti kapcsolat általában lineáris egy bizonyos tartományon belül. Az alábbiakban egy standard BCA görbe vizualizációja látható:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbancia (562 nm) Fehérje Koncentráció (μg/μL)

Standard Görbe Standard Minták

BCA Standard Görbe

Összehasonlítás Más Fehérje Mennyiség Megállapító Módszerekkel

Különböző fehérje mennyiség meghatározási módszereknek különböző előnyeik és korlátaik vannak. Íme, hogyan hasonlít a BCA teszt más gyakori módszerekhez:

Módszer	Érzékenységi Tartomány	Előnyök	Korlátok	Legjobb
BCA Teszt	5-2000 μg/mL	• Kompatibilis a detergensekkel • Kevesebb fehérje-fehérje variáció • Stabil színfejlődés	• Zavarhatják a redukáló szerek • Néhány chelátképző anyag által befolyásolt	• Általános fehérje mennyiség meghatározás • Detergens tartalmú minták
Bradford Teszt	1-1500 μg/mL	• Gyors (2-5 perc) • Kevés zavaró anyag	• Magas fehérje-fehérje variáció • Kompatibilis a detergensekkel	• Gyors mérések • Detergens-mentes minták
Lowry Módszer	1-1500 μg/mL	• Jól megalapozott • Jó érzékenység	• Sok zavaró anyag • Több lépés	• Történelmi konzisztencia • Tiszta fehérje minták
UV Absorbancia (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Nem destruktív • Nagyon gyors • Nincs szükség reagensre	• Nukleinsavak által befolyásolt • Tiszta minták szükségesek	• Tiszta fehérje oldatok • Gyors ellenőrzések a tisztítás során
Fluorometrikus	0.1-500 μg/mL	• Legmagasabb érzékenység • Széles dinamikai tartomány	• Drága reagens • Fluorométer szükséges	• Nagyon híg minták • Korlátozott minta térfogat

Gyakran Ismételt Kérdések

Mire használják a BCA tesztet?

A BCA (bicinchoninsav) tesztet elsősorban a fehérje koncentrációjának meghatározására használják egy mintában. Széles körben alkalmazzák a biokémia, sejtbiológia és molekuláris biológia területén, olyan alkalmazásokban, mint a western blotting, enzimatikus tesztek, immunprecipitáció és fehérje tisztítás.

Mennyire pontos a BCA teszt?

A BCA teszt általában 5-10% pontossággal működik, ha helyesen hajtják végre. A pontossága számos tényezőtől függ, beleértve a standard görbe minőségét, a zavaró anyagok hiányát, és hogy az ismeretlen fehérje összetétele hasonló-e a használt standard fehérjéhez.

Mi zavarhatja a BCA teszt eredményeit?

Számos anyag zavarhatja a BCA teszt eredményeit, beleértve:

Redukáló szerek (DTT, β-merkaptot etanol, glutatiion)
Chelátképző szerek (EDTA, EGTA)
Magas koncentrációjú egyszerű cukrok
Lipidek
Néhány detergens magas koncentrációban
Ammónia vegyületek

Mi a különbség a BCA és a Bradford tesztek között?

A fő különbségek:

A BCA teszt jobban kompatibilis a detergensekkel és felületaktív anyagokkal
A Bradford teszt gyorsabb (2-5 perc a BCA 30+ percével szemben)
A BCA teszt kevesebb fehérje-fehérje variációval rendelkezik
A Bradford érzékenyebb a bázikus aminosavakra
A BCA tesztet zavarják a redukáló szerek, míg a Bradford nem

Miért túl nagy a számított minta térfogat?

Ha a kalkulátor nagyon nagy minta térfogatot mutat, az általában alacsony fehérje koncentrációt jelez az Ön mintájában. Ez lehet a következők miatt:

Valóban alacsony fehérje tartalom az eredeti mintájában
Fehérje veszteség a készítés során
Hibák a BCA teszt eljárásában
Pontatlan abszorbancia-érték

Fontolja meg a minta koncentrálását, vagy állítsa be a kísérleti tervét az alacsonyabb fehérje koncentrációhoz.

Használhatom ezt a kalkulátort más fehérje mennyiség meghatározási módszerekhez?

Ez a kalkulátor kifejezetten a BCA teszt eredményeire van tervezve. Bár az alapelv (koncentráció térfogatra váltása) más módszerekre is érvényes, az abszorbancia és a fehérje koncentráció közötti kapcsolat eltérő a különböző tesztek között. Más módszerekhez, mint a Bradford vagy Lowry, különböző standard görbe paramétereket kell használni.

Hogyan kezeljem a lineáris tartományon kívüli mintákat?

Ha az abszorbancia-értékek a lineáris tartományon kívül esnek (tipikusan >2.0):

Hígítsa a mintát, és ismételje meg a BCA tesztet
Használjon más fehérje mennyiség meghatározási módszert
Igazítsa a standard görbét, hogy magasabb koncentrációjú standardokat tartalmazzon

Milyen fehérjét használjak standardként?

A Bovin Szérum Albumin (BSA) a leggyakrabban használt standard a BCA tesztekhez, mert:

Könnyen elérhető és olcsó
Magasan oldható
Stabil oldatban
Jól jellemzett

Ha azonban a mintái jelentősen eltérnek a BSA-tól, fontolja meg, hogy azt a fehérjét használja standardként a pontosabb eredmények érdekében.

Meddig stabil a BCA reakció?

A BCA reakció során kifejlesztett lila szín stabil néhány órán át szobahőmérsékleten, és bármikor mérhető ezen időszak alatt. Azonban a legjobb eredmények érdekében ajánlott, hogy minden standardot és mintát körülbelül ugyanakkor mérjenek a színfejlődés után.

Újra felhasználhatom a korábbi kísérletből származó standard görbét?

Bár technikailag lehetséges újra felhasználni egy standard görbét, nem ajánlott a megbízható mennyiség meghatározásához. A reagens, inkubációs körülmények és az eszköz kalibrálásában bekövetkező változások befolyásolhatják az abszorbancia és a fehérje koncentráció közötti kapcsolatot. Megbízható eredmények érdekében minden alkalommal friss standard görbét kell készíteni.

Hivatkozások

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Utasítások. Elérhető: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Próbálja Ki a BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátorunkat Ma!

Most, hogy megértette a BCA fehérje mennyiség meghatározásának és a minta térfogatának kiszámításának elveit, próbálja ki kalkulátorunkat, hogy egyszerűsítse laboratóriumi munkafolyamatát. Egyszerűen adja meg az abszorbancia-értékeket és a kívánt minta tömeget, hogy azonnali, pontos minta térfogat számításokat kapjon.

Akár mintákat készít western blottinghoz, enzimatikus tesztekhez, vagy bármely más fehérjealapú kísérlethez, kalkulátorunk segít biztosítani a következetes és megbízható eredményeket. Időt takarít meg, csökkenti a hibákat, és javítja kísérletei reprodukálhatóságát a BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátorral.

🔗

Kapcsolódó Eszközök

Fedezzen fel több olyan eszközt, amely hasznos lehet a munkafolyamatához

BCA Absorbancia Mintavolum Számító a Laboratóriumi Protokollokhoz

BCA Elszívás Mintamennyiség Számító

standardCurveTitle

Minta Bemenetek

Minta 1

Számítási Képlet

Dokumentáció

BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátor

Bevezetés

A BCA Teszt és a Minta Térfogat Kiszámításának Megértése

Mi az a BCA Teszt?

A Minta Térfogat Kiszámításának Képlete

A BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátor Használata

Lépésről Lépésre Példa

Az Eredmények Megértése

Alkalmazások és Felhasználási Esetek

Western Blot Minta Előkészítés

Enzimatikus Tesztek

Immunprecipitációs Kísérletek

Fehérje Tisztítás

Fejlett Funkciók és Megfontolások

Egyéni Standard Görbék

Több Minta Kezelése

Határ Esetek Kezelése

Nagyon Magas Absorbancia Értékek

Nagyon Alacsony Absorbancia Értékek

Gyakorlatilag Túl Nagy Számított Térfogatok

A Fehérje Mennyiség Megállapításának Története és a BCA Teszt

A Fehérje Mennyiség Megállapítási Módszerek Fejlődése

A BCA Teszt Fejlesztése

Kód Példák a Minta Térfogat Kiszámítására

Excel Képlet

Python Implementáció

R Kód Elemzéshez

JavaScript Implementáció

Standard Görbe Vizualizáció

Összehasonlítás Más Fehérje Mennyiség Megállapító Módszerekkel

Gyakran Ismételt Kérdések

Mire használják a BCA tesztet?

Mennyire pontos a BCA teszt?

Mi zavarhatja a BCA teszt eredményeit?

Mi a különbség a BCA és a Bradford tesztek között?

Miért túl nagy a számított minta térfogat?

Használhatom ezt a kalkulátort más fehérje mennyiség meghatározási módszerekhez?

Hogyan kezeljem a lineáris tartományon kívüli mintákat?

Milyen fehérjét használjak standardként?

Meddig stabil a BCA reakció?

Újra felhasználhatom a korábbi kísérletből származó standard görbét?

Hivatkozások

Próbálja Ki a BCA Absorbance Minta Térfogat Kalkulátorunkat Ma!

Kapcsolódó Eszközök

Hengeres, gömbölyű és téglalap alakú tartály térfogat kalkulátor

Folyadékborítás térfogat- és területkalkulátor

Lyuk térfogat kalkulátor: Hengeres és Téglalap alakú Ásások

Lyuk térfogat kalkulátor: Hengeres kiásott térfogatok mérése

Kocka Cellás Térfogat Számító: Térfogat Kiszámítása Éltől

Egyszerű hígítási tényező kalkulátor laboratóriumi oldatokhoz

Homokmennyiség Számító: Anyagok Becslése Bármilyen Projekthez

Kétfotonos Elnyelési Koeficiens Számító

Molaritás Kalkulátor: Oldat Koncentrációs Eszköz