Calculator de volum al probelor de absorbție BCA pentru protocoale de laborator

Calculați volumele precise ale probelor pe baza citirilor de absorbție ale testului BCA și a masei dorite de proteină. Esențial pentru încărcarea consistentă a proteinelor în bloturi western și alte aplicații de laborator.

Calculator de Volum al Probe BCA

Acest instrument calculează volumul necesar al probei pe baza rezultatelor de absorbție BCA și a masei probei. Introduceți valoarea absorbției și masa probei pentru fiecare probă pentru a calcula volumul corespunzător al probei.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Intrări pentru Probe

Probă 1

Numele Probei

Absorbție BCA*

Masa Probei (μg)*

Volumul Probei

Copy

N/A μL

Formula de Calcul

Volumul probei este calculat folosind următoarea formulă:

Volumul Probe (μL) = Masa Probe (μg) / Concentrarea Proteinelor (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Documentație

Calculator de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA

Introducere

Calculatorul de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA este un instrument specializat conceput pentru a ajuta cercetătorii și tehnicienii de laborator să determine cu acuratețe volumul de probă adecvat pentru experimente, pe baza rezultatelor testului BCA (acid bicinchoninic). Acest calculator preia citirile de absorbție din testul BCA și masa dorită a probei pentru a calcula volumul precis necesar pentru încărcarea consistentă a proteinelor în aplicații precum blotting-ul western, teste enzimatice și alte tehnici de analiză a proteinelor.

Testul BCA este una dintre cele mai utilizate metode pentru cuantificarea proteinelor în laboratoarele de biochimie și biologie moleculară. Măsurând absorbția probelor de proteină și comparându-le cu o curbă standard, puteți determina concentrația proteinelor cu o mare acuratețe. Calculatorul nostru simplifică acest proces prin convertirea automată a citirilor de absorbție în volumele exacte necesare pentru experimentele dumneavoastră.

Înțelegerea Testului BCA și Calculul Volumului de Proba

Ce este un Test BCA?

Testul Bicinchoninic Acid (BCA) este un test biochimic pentru determinarea concentrației totale de proteină într-o soluție. Principiul acestui test se bazează pe formarea unui complex Cu²⁺-proteină în condiții alcaline, urmată de reducerea Cu²⁺ la Cu¹⁺. Cantitatea de reducere este proporțională cu proteina prezentă. BCA formează un complex de culoare violet cu Cu¹⁺ în medii alcaline, oferind o bază pentru a monitoriza reducerea cuprului de către proteine.

Intensitatea culorii violet crește proporțional cu concentrația de proteină, care poate fi măsurată utilizând un spectrofotometru la aproximativ 562 nm. Citirile de absorbție sunt apoi comparate cu o curbă standard pentru a determina concentrația de proteină în probele necunoscute.

Formula pentru Calculul Volumului de Proba

Formula fundamentală pentru calcularea volumului de probă din rezultatele de absorbție BCA este:

$\text{Volumul Probei (μL)} = \frac{\text{Masa Probe (μg)}}{\text{Concentrația Proteinelor (μg/μL)}}$

Unde:

Volumul Probei este volumul de probă necesar (în microlitri, μL)
Masa Probe este cantitatea dorită de proteină de utilizat (în micrograme, μg)
Concentrația Proteinelor este derivată din citirea de absorbție BCA (în μg/μL)

Concentrația de proteină este calculată din citirea de absorbție folosind ecuația curbei standard:

$\text{Concentrația Proteinelor (μg/μL)} = \text{Panta} \times \text{Absorbție} + \text{Intercept}$

Pentru un test BCA standard, panta tipică este de aproximativ 2.0, iar interceptul este adesea aproape de zero, deși aceste valori pot varia în funcție de condițiile specifice ale testului și de curba standard.

Cum să Folosiți Calculatorul de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA

Calculatorul nostru simplifică procesul de determinare a volumelor de probă din rezultatele testului BCA. Urmați acești pași pentru a obține calcule precise:

Introduceți Informațiile despre Probă:
- Furnizați un nume pentru proba dumneavoastră (opțional, dar util pentru urmărirea mai multor probe)
- Introduceți citirea de absorbție BCA de la spectrofotometru
- Introduceți masa dorită a probei (cantitatea de proteină pe care doriți să o utilizați în μg)
Selectați Tipul de Curbă Standard:
- Standard (implicit): Folosește parametrii tipici ai curbei standard BCA
- Îmbunătățit: Pentru protocol de sensibilitate îmbunătățită
- Micro: Pentru protocol de microplacă
- Personalizat: Permite introducerea valorilor proprii pentru pantă și intercept
Vizualizați Rezultatele:
- Calculatorul va afișa instantaneu volumul necesar al probei în microlitri
- Rezultatele sunt prezentate și într-un tabel rezumat pentru o referință ușoară
- Pentru mai multe probe, puteți adăuga mai multe intrări și compara rezultatele
Copiați sau Exportați Rezultatele:
- Utilizați butonul de copiere pentru a transfera rezultatele în carnetul dumneavoastră de laborator sau în alte aplicații
- Toate calculele pot fi salvate pentru referințe viitoare

Exemplu Pas cu Pas

Să parcurgem un exemplu practic:

Ați efectuat un test BCA și ați obținut o citire de absorbție de 0.75 pentru proba dumneavoastră de proteină.
Doriți să încărcați 20 μg de proteină pentru blotting-ul western.
Folosind curba standard (pantă = 2.0, intercept = 0):
- Concentrația de proteină = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Volumul necesar al probei = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Aceasta înseamnă că ar trebui să încărcați 13.33 μL din proba dumneavoastră pentru a obține 20 μg de proteină.

Înțelegerea Rezultatelor

Calculatorul oferă mai multe informații importante:

Concentrația Proteinelor: Aceasta este calculată din citirea de absorbție folosind curba standard selectată. Reprezintă cantitatea de proteină pe unitate de volum în proba dumneavoastră (μg/μL).
Volumul Probe: Acesta este volumul probei dumneavoastră care conține cantitatea dorită de proteină. Această valoare este ceea ce veți folosi atunci când pregătiți experimentele dumneavoastră.
Avertizări și Recomandări: Calculatorul poate oferi avertizări pentru:
- Citiri de absorbție foarte mari (>3.0) care pot fi în afara intervalului liniar al testului
- Citiri de absorbție foarte mici (<0.1) care pot fi aproape de limita de detecție
- Volumele calculate care sunt impracticabil de mari (>1000 μL) sau mici (<1 μL)

Aplicații și Cazuri de Utilizare

Pregătirea Probe pentru Blotting-ul Western

Una dintre cele mai comune aplicații pentru acest calculator este pregătirea probelor pentru blotting-ul western. Încărcarea consistentă a proteinelor este crucială pentru rezultate fiabile ale blotting-ului western, iar acest calculator asigură că încărcați aceeași cantitate de proteină pentru fiecare probă, chiar și atunci când concentrațiile lor diferă.

Flux de lucru exemplu:

Efectuați testul BCA pe toate probele de proteină
Decideți asupra unei cantități constante de proteină de încărcat (de obicei 10-50 μg)
Utilizați calculatorul pentru a determina volumul necesar pentru fiecare probă
Adăugați volumele corespunzătoare ale tamponului de probă și agentului reducător
Încărcați volumele calculate pe gelul dumneavoastră

Teste Enzimatice

Pentru teste enzimatice, este adesea necesar să folosiți o cantitate specifică de proteină pentru a standardiza condițiile de reacție între diferite probe sau experimente.

Flux de lucru exemplu:

Determinați concentrația de proteină folosind testul BCA
Calculați volumul necesar pentru a obține cantitatea dorită de proteină
Adăugați acest volum în amestecul de reacție
Continuați cu testul dumneavoastră enzimatic

Experimente de Imunoprecipitare

În experimentele de imunoprecipitare (IP), începerea cu o cantitate consistentă de proteină este importantă pentru compararea rezultatelor între diferite condiții.

Flux de lucru exemplu:

Măsurați concentrația de proteină a lysatelor celulare sau tisulare folosind testul BCA
Calculați volumele necesare pentru a obține cantități egale de proteină (de obicei 500-1000 μg)
Ajustați toate probele la același volum cu tampon de liză
Continuați cu incubația cu anticorpi și precipitația

Purificarea Proteinelor

În timpul purificării proteinelor, este adesea necesar să urmăriți concentrația de proteină și să calculați randamentele în diferite etape.

Flux de lucru exemplu:

Colectați fracții în timpul purificării
Efectuați testul BCA pe fracțiile selectate
Calculați concentrația de proteină și cantitatea totală de proteină
Determinați volumele necesare pentru aplicațiile ulterioare

Funcții Avansate și Considerații

Curbe Standard Personalizate

Deși calculatorul oferă parametrii prestabiliți pentru testele standard BCA, puteți introduce și valori personalizate dacă ați generat propria curbă standard. Acest lucru este deosebit de util atunci când:

Lucrați cu probe de proteină non-standard
Utilizați protocoale BCA modificate
Lucrați în prezența substanțelor care ar putea interfera cu testul

Pentru a utiliza o curbă standard personalizată:

Selectați "Personalizat" din opțiunile curbei standard
Introduceți valorile pentru pantă și intercept
Calculatorul va folosi aceste valori pentru toate calculele ulterioare

Gestionarea Mai Multor Probe

Calculatorul permite adăugarea mai multor probe și calcularea volumelor lor simultan. Acest lucru este deosebit de util atunci când pregătiți probe pentru experimente care necesită încărcarea consistentă a proteinelor între diferite condiții.

Beneficiile procesării în lot:

Economisiți timp calculând toate volumele deodată
Asigurați consistența între toate probele dumneavoastră
Comparați cu ușurință concentrațiile de proteină între probe
Identificați valori aberante sau erori potențiale de măsurare

Gestionarea Cazurilor Limite

Citiri de Absorbție Foarte Mari

Dacă citirea dumneavoastră de absorbție este peste 2.0, aceasta poate fi în afara intervalului liniar al testului BCA. În astfel de cazuri:

Diluați proba și repetați testul BCA
Alternativ, utilizați sistemul de avertizare al calculatorului, care va semnala citirile potențial problematice

Citiri de Absorbție Foarte Mici

Pentru citirile de absorbție sub 0.1, este posibil să fiți aproape de limita de detecție a testului, ceea ce ar putea afecta acuratețea. Considerați:

Concentrând proba dumneavoastră, dacă este posibil
Utilizând o metodă de cuantificare a proteinelor mai sensibilă
Ajustând designul experimental pentru a acomoda cantități mai mici de proteină

Volume Calculated Impracticabil de Mari

Dacă calculatorul sugerează un volum care este prea mare pentru aplicația dumneavoastră:

Considerați concentrarea probei de proteină
Ajustați cantitatea dorită de proteină în jos, dacă experimentul dumneavoastră permite
Utilizați volumul maxim practic și notați cantitatea reală de proteină utilizată

Istoria Cuantificării Proteinelor și Testul BCA

Cuantificarea precisă a proteinelor a fost o cerință fundamentală în biochimie și biologie moleculară de la apariția acestor domenii. Metodele timpurii s-au bazat pe determinarea conținutului de azot, care era consumatoare de timp și necesita echipamente specializate.

Evoluția Metodelor de Cuantificare a Proteinelor

Metoda Kjeldahl (1883): Una dintre cele mai timpurii metode pentru cuantificarea proteinelor, bazată pe măsurarea conținutului de azot.
Testul Biuret (Începutul anilor 1900): Această metodă se bazează pe reacția dintre legăturile peptide și ionii de cupru într-o soluție alcalină, producând o culoare violet.
Testul Lowry (1951): Dezvoltat de Oliver Lowry, această metodă a combinat reacția Biuret cu reactivul Folin-Ciocalteu, crescând sensibilitatea.
Testul Bradford (1976): Marion Bradford a dezvoltat această metodă folosind colorantul Coomassie Brilliant Blue G-250, care se leagă de proteine și schimbă maximul de absorbție.
Testul BCA (1985): Dezvoltat de Paul Smith și colegii săi de la Pierce Chemical Company, această metodă a combinat reacția biuret cu detecția BCA, oferind o sensibilitate îmbunătățită și compatibilitate cu detergenții.

Dezvoltarea Testului BCA

Testul BCA a fost descris pentru prima dată într-un articol din 1985 de Smith et al. intitulat "Measurement of protein using bicinchoninic acid." A fost dezvoltat pentru a aborda limitările metodelor existente, în special interferența din partea diverselor substanțe chimice utilizate frecvent în extracția și purificarea proteinelor.

Inovația cheie a fost utilizarea acidului bicinchoninic pentru a detecta ionii Cu¹⁺ produși prin reducerea Cu²⁺ mediată de proteine, formând un complex de culoare violet care putea fi măsurat spectrofotometric. Acest lucru a oferit mai multe avantaje:

Sensibilitate mai mare decât metoda Biuret
Mai puțină susceptibilitate la interferențe din partea substanțelor non-proteice comparativ cu metoda Lowry
Mai bună compatibilitate cu detergenții decât testul Bradford
Protocol mai simplu cu mai puține reactivi și pași

De la introducerea sa, testul BCA a devenit una dintre cele mai utilizate metode de cuantificare a proteinelor în laboratoarele de biochimie și biologie moleculară din întreaga lume.

Exemple de Cod pentru Calcularea Volumului Probei

Formula Excel

1=IF(B2<=0,"Eroare: Absorbție invalidă",IF(C2<=0,"Eroare: Masă de probă invalidă",C2/(2*B2)))
2
3' Unde:
4' B2 conține citirea de absorbție
5' C2 conține masa dorită a probei în μg
6' Formula returnează volumul necesar al probei în μL
7

Implementare Python

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Calculați concentrația de proteină din absorbție folosind curba standard."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbția nu poate fi negativă")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Calculați volumul necesar al probei pe baza absorbției și masei dorite."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Masa probei trebuie să fie pozitivă")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Concentrația de proteină calculată trebuie să fie pozitivă")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Exemplu de utilizare
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Pentru absorbția {absorbance} și masa dorită de proteină {sample_mass} μg:")
31    print(f"Concentrația de proteină: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Volumul necesar al probei: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Eroare: {e}")
35

Cod R pentru Analiză

1# Funcție pentru a calcula concentrația de proteină din absorbție
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbția nu poate fi negativă")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funcție pentru a calcula volumul probei
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Masa probei trebuie să fie pozitivă")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Concentrația de proteină calculată trebuie să fie pozitivă")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Exemplu de utilizare
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Pentru absorbția %.2f și masa dorită de proteină %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Concentrația de proteină: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Volumul necesar al probei: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Eroare: %s\n", e$message))
39})
40

Implementare JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbția nu poate fi negativă");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Masa probei trebuie să fie pozitivă");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Concentrația de proteină calculată trebuie să fie pozitivă");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Exemplu de utilizare
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Pentru absorbția ${absorbance} și masa dorită de proteină ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Concentrația de proteină: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Volumul necesar al probei: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Eroare: ${error.message}`);
37}
38

Vizualizarea Curbei Standard

Relația dintre absorbție și concentrația de proteină este de obicei liniară într-un anumit interval. Mai jos este o vizualizare a unei curbe standard BCA:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbție (562 nm) Concentrația Proteinelor (μg/μL)

Curba Standard Probe Standard

Curba Standard BCA

Compararea cu Alte Metode de Cuantificare a Proteinelor

Diferitele metode de cuantificare a proteinelor au diverse avantaje și limitări. Iată cum se compară testul BCA cu alte metode comune:

Metodă	Interval de Sensibilitate	Avantaje	Limitări	Cel Mai Bun Pentru
Test BCA	5-2000 μg/mL	• Compatibil cu detergenții • Variabilitate mai mică între proteine • Stabilitate în dezvoltarea culorii	• Interferat de agenți reducători • Afectat de unele agenți chelatori	• Cuantificarea generală a proteinelor • Probe care conțin detergenți
Test Bradford	1-1500 μg/mL	• Rapid (2-5 min) • Puține substanțe interferente	• Variabilitate mare între proteine • Incompatibil cu detergenții	• Măsurători rapide • Probe fără detergenți
Metoda Lowry	1-1500 μg/mL	• Bine stabilită • Bună sensibilitate	• Multe substanțe interferente • Pași multipli	• Consistență istorică • Probe pure de proteină
Absorbție UV (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Non-distructiv • Foarte rapid • Fără reactivi necesari	• Afectat de acizi nucleici • Necesită probe pure	• Soluții pure de proteină • Verificări rapide în timpul purificării
Fluorometric	0.1-500 μg/mL	• Sensibilitate maximă • Interval dinamic larg	• Reagenți costisitori • Necesită fluorometru	• Probe foarte diluate • Volum de probă limitat

Întrebări Frecvente

La ce se folosește testul BCA?

Testul BCA (acid bicinchoninic) este utilizat în principal pentru cuantificarea concentrației totale de proteină într-o probă. Este utilizat pe scară largă în biochimie, biologie celulară și biologie moleculară pentru aplicații precum blotting-ul western, teste enzimatice, imunoprecipitare și purificarea proteinelor.

Cât de precis este testul BCA?

Testul BCA este în general precis în intervalul de 5-10% atunci când este efectuat corect. Acuratețea sa depinde de mai mulți factori, inclusiv calitatea curbei standard, absența substanțelor interferente și dacă compoziția proteinelor necunoscute este similară cu proteina standard utilizată.

Ce poate interfera cu rezultatele testului BCA?

Mai multe substanțe pot interfera cu rezultatele testului BCA, inclusiv:

Agenți reducători (DTT, β-mercaptoetanol, glutation)
Agenți chelatori (EDTA, EGTA)
Concentrații mari de zaharuri simple
Lipide
Unele detergenți la concentrații mari
Compuși de amoniu

Care este diferența dintre testele BCA și Bradford?

Principalele diferențe sunt:

Testul BCA este mai compatibil cu detergenții și surfactanții
Testul Bradford este mai rapid (2-5 minute vs. 30+ minute pentru BCA)
BCA are o variabilitate mai mică între proteine
Bradford este mai sensibil la aminoacizii bazici
BCA este afectat de agenți reducători, în timp ce Bradford nu este

De ce volumul calculat al probei este prea mare?

Dacă calculatorul dumneavoastră arată un volum foarte mare, de obicei indică o concentrație scăzută a proteinelor în proba dumneavoastră. Acest lucru ar putea fi din cauza:

Conținutului real scăzut de proteină în proba originală
Pierderii de proteină în timpul pregătirii
Erorilor în procedura testului BCA
Citirii inexacte a absorbției

Considerați concentrarea probei dumneavoastră sau ajustați designul experimental pentru a acomoda concentrația mai mică de proteină.

Pot folosi acest calculator pentru alte metode de cuantificare a proteinelor?

Acest calculator este conceput special pentru rezultatele testului BCA. Deși principiul de bază (convertirea concentrației în volum) se aplică și altor metode, relația dintre absorbție și concentrația de proteină variază între diferite teste. Pentru alte metode, cum ar fi Bradford sau Lowry, ar trebui să utilizați parametrii diferiți ai curbei standard.

Cum să gestionăm probele cu absorbție în afara intervalului liniar?

Pentru citirile de absorbție în afara intervalului liniar (de obicei >2.0):

Diluați proba și repetați testul BCA
Utilizați o metodă diferită de cuantificare a proteinelor
Ajustați curba standard pentru a include standarde de concentrație mai mari

Ce proteină ar trebui să folosesc ca standard?

Albumina din ser bovin (BSA) este standardul cel mai frecvent utilizat pentru testele BCA deoarece este:

Ușor disponibilă și ieftină
Foarte solubilă
Stabilă în soluție
Bine caracterizată

Cu toate acestea, dacă probele dumneavoastră conțin o proteină predominantă care diferă semnificativ de BSA, luați în considerare utilizarea acelei proteine ca standard pentru rezultate mai precise.

Cât timp este stabilă reacția BCA?

Culoarea violet dezvoltată în reacția BCA este stabilă timp de câteva ore la temperatura camerei și poate fi măsurată oricând în această perioadă. Cu toate acestea, pentru cele mai bune rezultate, este recomandat să măsurați toate standardele și probele aproximativ în același timp după dezvoltarea culorii.

Pot reutiliza curba standard dintr-un experiment anterior?

Deși este tehnic posibil să reutilizați o curbă standard, nu este recomandat pentru cuantificare precisă. Variațiile în reactivi, condițiile de incubație și calibrarea instrumentului pot afecta relația dintre absorbție și concentrația de proteină. Pentru rezultate fiabile, generați o curbă standard proaspătă de fiecare dată când efectuați testul.

Referințe

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Instrucțiuni. Disponibil la: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Încercați Astăzi Calculatorul de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA!

Acum că înțelegeți principiile din spatele cuantificării proteinelor BCA și calculului volumului de probă, încercați calculatorul nostru pentru a simplifica fluxul de lucru din laborator. Introduceți pur și simplu citirile de absorbție și masa dorită a probei pentru a obține calcule instantanee și precise ale volumului probei.

Indiferent dacă pregătiți probe pentru blotting-ul western, teste enzimatice sau orice alt experiment bazat pe proteine, calculatorul nostru va ajuta să asigurați rezultate consistente și fiabile. Economisiți timp, reduceți erorile și îmbunătățiți reproducibilitatea experimentelor dumneavoastră cu Calculatorul de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA.

🔗

Instrumente conexe

Descoperiți mai multe instrumente care ar putea fi utile pentru fluxul dvs. de lucru

Calculator de volum al probelor de absorbție BCA pentru protocoale de laborator

Calculator de Volum al Probe BCA

standardCurveTitle

Intrări pentru Probe

Probă 1

Formula de Calcul

Documentație

Calculator de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA

Introducere

Înțelegerea Testului BCA și Calculul Volumului de Proba

Ce este un Test BCA?

Formula pentru Calculul Volumului de Proba

Cum să Folosiți Calculatorul de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA

Exemplu Pas cu Pas

Înțelegerea Rezultatelor

Aplicații și Cazuri de Utilizare

Pregătirea Probe pentru Blotting-ul Western

Teste Enzimatice

Experimente de Imunoprecipitare

Purificarea Proteinelor

Funcții Avansate și Considerații

Curbe Standard Personalizate

Gestionarea Mai Multor Probe

Gestionarea Cazurilor Limite

Citiri de Absorbție Foarte Mari

Citiri de Absorbție Foarte Mici

Volume Calculated Impracticabil de Mari

Istoria Cuantificării Proteinelor și Testul BCA

Evoluția Metodelor de Cuantificare a Proteinelor

Dezvoltarea Testului BCA

Exemple de Cod pentru Calcularea Volumului Probei

Formula Excel

Implementare Python

Cod R pentru Analiză

Implementare JavaScript

Vizualizarea Curbei Standard

Compararea cu Alte Metode de Cuantificare a Proteinelor

Întrebări Frecvente

La ce se folosește testul BCA?

Cât de precis este testul BCA?

Ce poate interfera cu rezultatele testului BCA?

Care este diferența dintre testele BCA și Bradford?

De ce volumul calculat al probei este prea mare?

Pot folosi acest calculator pentru alte metode de cuantificare a proteinelor?

Cum să gestionăm probele cu absorbție în afara intervalului liniar?

Ce proteină ar trebui să folosesc ca standard?

Cât timp este stabilă reacția BCA?

Pot reutiliza curba standard dintr-un experiment anterior?

Referințe

Încercați Astăzi Calculatorul de Volum de Proba pe Baza de Absorbție BCA!

Instrumente conexe

Calculator de volum pentru rezervoare cilindrice, sferice și dreptunghiulare

Calculator de volum la suprafață pentru acoperirea cu lichid

Calculator de volum pentru gropi: Excavări cilindrice și dreptunghiulare

Calculator de volum pentru găuri: Măsurați volumele excavațiilor cilindrice

Calculator de volum al celulei cubice: Găsește volumul din lungimea unei laturi

Calculator simplu pentru factorul de diluție pentru soluții de laborator

Calculator de volum de nisip: Estimează materialul pentru orice proiect

Calculator pentru coeficientul de absorbție cu două fotoni

Calculator de molaritate: Instrument de concentrare a soluțiilor