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Whiz Tools

பிசிஏ உறிஞ்சல் மாதிரியின் அளவீட்டுக்கான கணக்கீட்டாளர்

பிசிஏ சோதனை உறிஞ்சல் படிப்புகளும், தேவையான புரதப் பருமனும் அடிப்படையில் துல்லியமான மாதிரி அளவுகளை கணக்கிடுங்கள். மேற்கு பிளாட்களில் மற்றும் பிற ஆய்வக பயன்பாடுகளில் நிலையான புரதம் ஏற்றுவதற்காக இது அவசியம்.

பிசிஏ அப்சார்பன்ஸ் மாதிரி அளவீட்டு கணக்கீட்டான்

இந்த கருவி BCA அப்சார்பன்ஸ் முடிவுகள் மற்றும் மாதிரி மாசு அடிப்படையில் தேவையான மாதிரி அளவை கணக்கிடுகிறது. ஒவ்வொரு மாதிரிக்கும் அப்சார்பன்ஸ் மதிப்பையும் மாதிரி மாசையும் உள்ளிடவும், அதற்கேற்ப மாதிரி அளவை கணக்கிடவும்.

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

மாதிரி உள்ளீடுகள்

மாதிரி 1

Copy
N/A μL

கணக்கீட்டு சூத்திரம்

மாதிரி அளவு கீழ்காணும் சூத்திரத்தைப் பயன்படுத்தி கணக்கிடப்படுகிறது:

மாதிரி அளவு (μL) = மாதிரி மாசு (μg) / புரதக் க 농த்தன்மை (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

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ஆவணம்

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर

परिचय

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर एक विशेष उपकरण है जो शोधकर्ताओं और प्रयोगशाला तकनीशियनों को BCA (बाइसिंचोनिनिक एसिड) परीक्षण परिणामों के आधार पर प्रयोगों के लिए उपयुक्त नमूना मात्रा को सटीक रूप से निर्धारित करने में मदद करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। यह कैलकुलेटर आपके BCA परीक्षण से अवशोषण रीडिंग और आपकी इच्छित नमूना मात्रा को लेकर सटीक मात्रा की गणना करता है जो पश्चिमी ब्लॉटिंग, एंजाइमेटिक परीक्षणों और अन्य प्रोटीन विश्लेषण तकनीकों में सुसंगत प्रोटीन लोडिंग के लिए आवश्यक है।

BCA परीक्षण जैव रसायन और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में प्रोटीन मात्राकरण के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले तरीकों में से एक है। आपके प्रोटीन नमूनों के अवशोषण को मापकर और उन्हें मानक वक्र के साथ तुलना करके, आप उच्च सटीकता के साथ प्रोटीन सांद्रता निर्धारित कर सकते हैं। हमारा कैलकुलेटर इस प्रक्रिया को स्वचालित रूप से अवशोषण रीडिंग को आपके प्रयोगों के लिए आवश्यक सटीक नमूना मात्रा में परिवर्तित करके सरल बनाता है।

BCA परीक्षण और नमूना मात्रा गणना को समझना

BCA परीक्षण क्या है?

बाइसिंचोनिनिक एसिड (BCA) परीक्षण एक जैव रासायनिक परीक्षण है जिसका उपयोग समाधान में प्रोटीन की कुल सांद्रता निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस परीक्षण का सिद्धांत अल्कलाइन परिस्थितियों में Cu²⁺-प्रोटीन जटिल के निर्माण पर निर्भर करता है, जिसके बाद Cu²⁺ का Cu¹⁺ में कमी होती है। कमी की मात्रा प्रोटीन की उपस्थिति के समानुपाती होती है। BCA Cu¹⁺ के साथ एक बैंगनी रंग का जटिल बनाता है, जो अल्कलाइन वातावरण में होता है, जो प्रोटीन सांद्रता की निगरानी करने के लिए एक आधार प्रदान करता है।

बैंगनी रंग की तीव्रता प्रोटीन सांद्रता के साथ समानुपाती रूप से बढ़ती है, जिसे लगभग 562 नैनोमीटर पर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है। अवशोषण रीडिंग को मानक वक्र के साथ तुलना करके अज्ञात नमूनों में प्रोटीन सांद्रता निर्धारित की जाती है।

नमूना मात्रा गणना के लिए सूत्र

BCA अवशोषण परिणामों से नमूना मात्रा की गणना के लिए मौलिक सूत्र है:

नमूना मात्रा (μL)=नमूना द्रव्यमान (μg)प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)\text{नमूना मात्रा (μL)} = \frac{\text{नमूना द्रव्यमान (μg)}}{\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)}}

जहाँ:

  • नमूना मात्रा आवश्यक नमूने की मात्रा है (माइक्रोलीटर, μL में)
  • नमूना द्रव्यमान उपयोग करने के लिए इच्छित प्रोटीन की मात्रा है (माइक्रोग्राम, μg में)
  • प्रोटीन सांद्रता BCA अवशोषण रीडिंग से प्राप्त होती है (μg/μL में)

प्रोटीन सांद्रता को अवशोषण रीडिंग से मानक वक्र समीकरण का उपयोग करके गणना की जाती है:

प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)=ढलान×अवशोषण+अवरोध\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)} = \text{ढलान} \times \text{अवशोषण} + \text{अवरोध}

एक मानक BCA परीक्षण के लिए, सामान्य ढलान लगभग 2.0 है, और अवरोध अक्सर शून्य के करीब होता है, हालांकि ये मान आपके विशिष्ट परीक्षण की परिस्थितियों और मानक वक्र के आधार पर भिन्न हो सकते हैं।

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर का उपयोग कैसे करें

हमारा कैलकुलेटर BCA परीक्षण परिणामों से नमूना मात्रा निर्धारित करने की प्रक्रिया को सरल बनाता है। सटीक गणनाएँ प्राप्त करने के लिए इन चरणों का पालन करें:

  1. नमूना जानकारी दर्ज करें:

    • अपने नमूने के लिए एक नाम प्रदान करें (वैकल्पिक लेकिन कई नमूनों को ट्रैक करने में सहायक)
    • अपने स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से BCA अवशोषण रीडिंग दर्ज करें
    • अपनी इच्छित नमूना द्रव्यमान (आपके द्वारा उपयोग में लाए जाने वाले प्रोटीन की मात्रा μg में)

  2. मानक वक्र प्रकार का चयन करें:

    • मानक (डिफ़ॉल्ट): सामान्य BCA मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करता है
    • संवर्धित: संवर्धित संवेदनशीलता प्रोटोकॉल के लिए
    • सूक्ष्म: माइक्रोप्लेट प्रोटोकॉल के लिए
    • कस्टम: अपने स्वयं के ढलान और अवरोध मान दर्ज करने की अनुमति देता है

  3. परिणाम देखें:

    • कैलकुलेटर तुरंत माइक्रोलीटर में आवश्यक नमूना मात्रा प्रदर्शित करेगा
    • परिणामों को आसान संदर्भ के लिए एक सारांश तालिका में भी प्रस्तुत किया जाता है
    • कई नमूनों के लिए, आप अधिक प्रविष्टियाँ जोड़ सकते हैं और परिणामों की तुलना कर सकते हैं

  4. परिणामों को कॉपी या निर्यात करें:

    • प्रयोगशाला नोटबुक या अन्य अनुप्रयोगों में परिणामों को स्थानांतरित करने के लिए कॉपी बटन का उपयोग करें
    • सभी गणनाएँ भविष्य के संदर्भ के लिए सहेजी जा सकती हैं

चरण-दर-चरण उदाहरण

आइए एक व्यावहारिक उदाहरण के माध्यम से चलते हैं:

  1. आपने एक BCA परीक्षण किया है और अपने प्रोटीन नमूने के लिए 0.75 का अवशोषण रीडिंग प्राप्त किया है।
  2. आप अपने पश्चिमी ब्लॉट के लिए 20 μg प्रोटीन लोड करना चाहते हैं।
  3. मानक वक्र (ढलान = 2.0, अवरोध = 0) का उपयोग करते हुए:
    • प्रोटीन सांद्रता = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • आवश्यक नमूना मात्रा = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

इसका अर्थ है कि आपको 20 μg प्रोटीन प्राप्त करने के लिए अपने नमूने के 13.33 μL लोड करना चाहिए।

परिणामों को समझना

कैलकुलेटर कई महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करता है:

  1. प्रोटीन सांद्रता: यह आपके अवशोषण रीडिंग से चयनित मानक वक्र का उपयोग करके गणना की जाती है। यह आपके नमूने में प्रति इकाई मात्रा में प्रोटीन की मात्रा (μg/μL) को दर्शाता है।

  2. नमूना मात्रा: यह आपके नमूने की मात्रा है जिसमें आपकी इच्छित प्रोटीन मात्रा होती है। यह वह मान है जिसका आप अपने प्रयोगों की तैयारी करते समय उपयोग करेंगे।

  3. चेतावनियाँ और सिफारिशें: कैलकुलेटर निम्नलिखित के लिए चेतावनियाँ प्रदान कर सकता है:

    • बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग (>3.0) जो परीक्षण के रैखिक रेंज के बाहर हो सकती है
    • बहुत निम्न अवशोषण रीडिंग (<0.1) जो पहचान सीमा के करीब हो सकती है
    • गणना की गई मात्रा जो अव्यावहारिक रूप से बड़ी (>1000 μL) या छोटी (<1 μL) हो

अनुप्रयोग और उपयोग के मामले

पश्चिमी ब्लॉट नमूना तैयारी

इस कैलकुलेटर का सबसे सामान्य अनुप्रयोग पश्चिमी ब्लॉटिंग के लिए नमूनों की तैयारी है। सुसंगत प्रोटीन लोडिंग विश्वसनीय पश्चिमी ब्लॉट परिणामों के लिए महत्वपूर्ण है, और यह कैलकुलेटर सुनिश्चित करता है कि आप प्रत्येक नमूने के लिए समान मात्रा में प्रोटीन लोड करें, भले ही उनकी सांद्रता भिन्न हो।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. अपने सभी प्रोटीन नमूनों पर BCA परीक्षण करें
  2. लोड करने के लिए एक सुसंगत प्रोटीन मात्रा तय करें (आमतौर पर 10-50 μg)
  3. कैलकुलेटर का उपयोग करके प्रत्येक नमूने के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करें
  4. नमूना बफर और घटक जोड़ें
  5. अपने जेल पर गणना की गई मात्रा लोड करें

एंजाइमेटिक परीक्षण

एंजाइमेटिक परीक्षणों के लिए, अक्सर एक विशिष्ट मात्रा में प्रोटीन का उपयोग करना आवश्यक होता है ताकि विभिन्न नमूनों या प्रयोगों में प्रतिक्रिया की स्थितियों को मानकीकरण किया जा सके।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. BCA परीक्षण का उपयोग करके प्रोटीन सांद्रता निर्धारित करें
  2. आवश्यक प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें
  3. इस मात्रा को अपनी प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ें
  4. अपने एंजाइमेटिक परीक्षण के साथ आगे बढ़ें

इम्यूनोप्रेसिपिटेशन प्रयोग

इम्यूनोप्रेसिपिटेशन (IP) प्रयोगों में, समान प्रोटीन मात्रा के साथ शुरू करना परिणामों की तुलना के लिए महत्वपूर्ण है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. सेल या ऊतक लिसेट के प्रोटीन सांद्रता को BCA परीक्षण का उपयोग करके मापें
  2. समान प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें (आमतौर पर 500-1000 μg)
  3. सभी नमूनों को लिसेट बफर के साथ समान मात्रा में समायोजित करें
  4. एंटीबॉडी इंक्यूबेशन और प्रीपिपिटेशन के साथ आगे बढ़ें

प्रोटीन शुद्धिकरण

प्रोटीन शुद्धिकरण के दौरान, विभिन्न चरणों में प्रोटीन सांद्रता को ट्रैक करना अक्सर आवश्यक होता है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. शुद्धिकरण के दौरान फ्रैक्शंस एकत्र करें
  2. चयनित फ्रैक्शंस पर BCA परीक्षण करें
  3. प्रोटीन सांद्रता और कुल प्रोटीन मात्रा निर्धारित करें
  4. आगामी अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करें

उन्नत सुविधाएँ और विचार

कस्टम मानक वक्र

जबकि कैलकुलेटर मानक BCA परीक्षणों के लिए डिफ़ॉल्ट पैरामीटर प्रदान करता है, आप यदि आपने अपना स्वयं का मानक वक्र उत्पन्न किया है तो कस्टम मान भी दर्ज कर सकते हैं। यह विशेष रूप से उपयोगी है जब:

  • गैर-मानक प्रोटीन नमूनों के साथ काम करना
  • संशोधित BCA प्रोटोकॉल का उपयोग करना
  • उन पदार्थों की उपस्थिति में काम करना जो परीक्षण में हस्तक्षेप कर सकते हैं

कस्टम मानक वक्र का उपयोग करने के लिए:

  1. मानक वक्र विकल्पों में "कस्टम" का चयन करें
  2. अपने ढलान और अवरोध मान दर्ज करें
  3. कैलकुलेटर इन मानों का उपयोग सभी बाद की गणनाओं के लिए करेगा

कई नमूनों को संभालना

कैलकुलेटर आपको कई नमूनों को जोड़ने और एक साथ उनकी मात्रा की गणना करने की अनुमति देता है। यह विशेष रूप से तब उपयोगी होता है जब प्रयोगों के लिए समान प्रोटीन लोडिंग की आवश्यकता होती है।

बैच प्रोसेसिंग के लाभ:

  • एक बार में सभी मात्रा की गणना करके समय बचाएँ
  • सभी नमूनों में सुसंगतता सुनिश्चित करें
  • नमूनों के बीच प्रोटीन सांद्रता की तुलना करना आसान बनाएं
  • असामान्यताओं या संभावित मापन त्रुटियों की पहचान करें

किनारे के मामलों से निपटना

बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग

यदि आपकी अवशोषण रीडिंग 2.0 से ऊपर है, तो यह BCA परीक्षण के रैखिक रेंज के बाहर हो सकता है। ऐसे मामलों में:

  1. अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण दोबारा करें
  2. वैकल्पिक रूप से, कैलकुलेटर की चेतावनी प्रणाली का उपयोग करें, जो संभावित समस्याग्रस्त रीडिंग को चिह्नित करेगा

बहुत निम्न अवशोषण रीडिंग

अवशोषण रीडिंग के लिए 0.1 से कम, आप परीक्षण की पहचान सीमा के करीब हो सकते हैं, जो सटीकता को प्रभावित कर सकता है। विचार करें:

  1. यदि संभव हो तो अपने नमूने को संकेंद्रित करें
  2. अधिक संवेदनशील प्रोटीन मात्राकरण विधि का उपयोग करें
  3. अपने प्रयोग के डिज़ाइन को निम्न प्रोटीन मात्रा को समायोजित करने के लिए समायोजित करें

अव्यावहारिक रूप से बड़ी गणना की गई मात्रा

यदि कैलकुलेटर एक मात्रा सुझाता है जो आपके अनुप्रयोग के लिए बहुत बड़ी है:

  1. अपने प्रोटीन नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें
  2. यदि आपका प्रयोग अनुमति देता है तो अपनी इच्छित प्रोटीन मात्रा को नीचे समायोजित करें
  3. अधिकतम व्यावहारिक मात्रा का उपयोग करें और नोट करें कि वास्तविक प्रोटीन मात्रा का उपयोग किया गया

प्रोटीन मात्राकरण का इतिहास और BCA परीक्षण

प्रोटीन की सटीक मात्राकरण जैव रसायन और आणविक जीवविज्ञान में एक मौलिक आवश्यकता रही है जब से ये क्षेत्र उभरे हैं। प्रारंभिक विधियाँ नाइट्रोजन सामग्री निर्धारण पर निर्भर करती थीं, जो समय लेने वाली और विशेष उपकरण की आवश्यकता होती थी।

प्रोटीन मात्राकरण विधियों का विकास

  1. क्जेल्डहल विधि (1883): प्रोटीन मात्राकरण के लिए सबसे प्रारंभिक विधियों में से एक, जो नाइट्रोजन सामग्री को मापने पर आधारित है।

  2. बायुरेट परीक्षण (1900 के प्रारंभ): यह विधि पेप्टाइड बंधनों और अल्कलाइन समाधान में तांबे के आयनों के बीच प्रतिक्रिया पर निर्भर करती है, जिससे बैंगनी रंग उत्पन्न होता है।

  3. लोवरी परीक्षण (1951): ओलिवर लोवरी द्वारा विकसित, इस विधि ने बायुरेट प्रतिक्रिया को फोलिन-सीओकलेट्यू अभिकर्ता के साथ मिलाया, संवेदनशीलता को बढ़ाया।

  4. ब्रैडफोर्ड परीक्षण (1976): मैरियन ब्रैडफोर्ड द्वारा विकसित, यह विधि कोमासी ब्रिलियंट ब्लू G-250 रंग का उपयोग करती है, जो प्रोटीन के साथ बंधता है और अवशोषण अधिकतम को स्थानांतरित करता है।

  5. BCA परीक्षण (1985): पॉल स्मिथ और उनके सहयोगियों द्वारा पियर्स केमिकल कंपनी में विकसित, इस विधि ने बायुरेट प्रतिक्रिया को BCA पहचान के साथ संयोजित किया, संवेदनशीलता और डिटर्जेंट के साथ संगतता में सुधार किया।

BCA परीक्षण का विकास

BCA परीक्षण का पहला वर्णन 1985 के पेपर "बाइसिंचोनिनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप" में किया गया था। इसे मौजूदा विधियों की सीमाओं को संबोधित करने के लिए विकसित किया गया था, विशेष रूप से प्रोटीन निष्कर्षण और शुद्धिकरण में सामान्य रूप से उपयोग किए जाने वाले विभिन्न रसायनों से हस्तक्षेप।

मुख्य नवाचार यह था कि बाइसिंचोनिनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन-जनित Cu²⁺ के कमी के द्वारा उत्पन्न Cu¹⁺ के लिए पहचान की गई, जिससे एक बैंगनी रंग का जटिल बनता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के माध्यम से मापा जा सकता है। इसने कई लाभ प्रदान किए:

  1. बायुरेट विधि की तुलना में उच्च संवेदनशीलता
  2. लोवरी विधि की तुलना में विभिन्न रसायनों से कम संवेदनशीलता
  3. ब्रैडफोर्ड परीक्षण की तुलना में डिटर्जेंट के साथ बेहतर संगतता
  4. कम अभिकर्ताओं और चरणों के साथ सरल प्रोटोकॉल

इसके परिचय के बाद से, BCA परीक्षण जैव रसायन और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में प्रोटीन मात्राकरण के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधियों में से एक बन गया है।

नमूना मात्रा की गणना के लिए कोड उदाहरण

एक्सेल सूत्र

1=IF(B2<=0,"त्रुटि: अमान्य अवशोषण",IF(C2<=0,"त्रुटि: अमान्य नमूना द्रव्यमान",C2/(2*B2)))
2
3' जहाँ:
4' B2 अवशोषण रीडिंग है
5' C2 μg में इच्छित नमूना द्रव्यमान है
6' सूत्र आवश्यक नमूना मात्रा μL में लौटाता है
7

पायथन कार्यान्वयन

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करें मानक वक्र का उपयोग करके।"""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """अवशोषण और इच्छित द्रव्यमान के आधार पर आवश्यक नमूना मात्रा की गणना करें।"""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# उदाहरण उपयोग
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"अवशोषण {absorbance} और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान {sample_mass} μg के लिए:")
31    print(f"प्रोटीन सांद्रता: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"आवश्यक नमूना मात्रा: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"त्रुटि: {e}")
35

आर कोड विश्लेषण के लिए

1# अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# नमूना मात्रा की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# उदाहरण उपयोग
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("अवशोषण %.2f और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान %.2f μg के लिए:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("प्रोटीन सांद्रता: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("आवश्यक नमूना मात्रा: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("त्रुटि: %s\n", e$message))
39})
40

जावास्क्रिप्ट कार्यान्वयन

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// उदाहरण उपयोग
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`अवशोषण ${absorbance} और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान ${sampleMass} μg के लिए:`);
33  console.log(`प्रोटीन सांद्रता: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`आवश्यक नमूना मात्रा: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`त्रुटि: ${error.message}`);
37}
38

मानक वक्र दृश्यता

अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध आमतौर पर एक निश्चित सीमा के भीतर रैखिक होता है। नीचे एक मानक BCA वक्र का दृश्यांकन है:

BCA मानक वक्र प्रोटीन मात्राकरण के लिए BCA परीक्षण में अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच रैखिक संबंध का दृश्यांकन 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

अवशोषण (562 नैनोमीटर) प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)

मानक वक्र मानक नमूने

BCA मानक वक्र

अन्य प्रोटीन मात्राकरण विधियों के साथ तुलना

विभिन्न प्रोटीन मात्राकरण विधियों के विभिन्न लाभ और सीमाएँ होती हैं। यहाँ BCA परीक्षण अन्य सामान्य विधियों के साथ कैसे तुलना करता है:

विधिसंवेदनशीलता रेंजलाभसीमाएँसबसे अच्छा के लिए
BCA परीक्षण5-2000 μg/mL• डिटर्जेंट के साथ संगत
• प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम
• स्थिर रंग विकास		• कमी करने वाले अभिकर्ताओं द्वारा हस्तक्षेप
• कुछ चेलाटिंग एजेंटों द्वारा प्रभावित		• सामान्य प्रोटीन मात्राकरण
• डिटर्जेंट युक्त नमूने
ब्रैडफोर्ड परीक्षण1-1500 μg/mL• त्वरित (2-5 मिनट)
• कम हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ		• उच्च प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता
• डिटर्जेंट के साथ असंगत		• त्वरित माप
• डिटर्जेंट मुक्त नमूने
लोवरी विधि1-1500 μg/mL• अच्छी तरह से स्थापित
• अच्छी संवेदनशीलता		• कई हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ
• कई चरण		• ऐतिहासिक स्थिरता
• शुद्ध प्रोटीन नमूने
UV अवशोषण (280 नैनोमीटर)20-3000 μg/mL• गैर-क्षति
• बहुत त्वरित
• कोई अभिकर्ता आवश्यक नहीं		• न्यूक्लिक एसिड द्वारा प्रभावित
• शुद्ध नमूनों की आवश्यकता		• शुद्ध प्रोटीन समाधान
• शुद्धिकरण के दौरान त्वरित जांच
फ्लोरोमेट्रिक0.1-500 μg/mL• उच्चतम संवेदनशीलता
• व्यापक गतिशील रेंज		• महंगे अभिकर्ता
• फ्लोरोमीटर की आवश्यकता		• बहुत पतले नमूने
• सीमित नमूना मात्रा

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

BCA परीक्षण का उपयोग किस लिए किया जाता है?

BCA (बाइसिंचोनिनिक एसिड) परीक्षण मुख्य रूप से नमूने में प्रोटीन की कुल सांद्रता को मात्राकृत करने के लिए उपयोग किया जाता है। इसका व्यापक उपयोग जैव रसायन, कोशिका जीवविज्ञान, और आणविक जीवविज्ञान में पश्चिमी ब्लॉटिंग, एंजाइम परीक्षण, इम्यूनोप्रेसिपिटेशन, और प्रोटीन शुद्धिकरण जैसे अनुप्रयोगों के लिए किया जाता है।

BCA परीक्षण की सटीकता कितनी है?

BCA परीक्षण आमतौर पर 5-10% के भीतर सटीक होता है जब सही ढंग से किया जाता है। इसकी सटीकता कई कारकों पर निर्भर करती है जिसमें मानक वक्र की गुणवत्ता, हस्तक्षेप करने वाले पदार्थों की अनुपस्थिति, और क्या अज्ञात प्रोटीन का संघटन मानक प्रोटीन के समान है।

BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ कौन से हैं?

कई पदार्थ BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप कर सकते हैं, जिनमें शामिल हैं:

  • कमी करने वाले अभिकर्ता (DTT, β-मेर्काप्टोएथेनॉल, ग्लूटाथियोन)
  • चेलाटिंग एजेंट (EDTA, EGTA)
  • साधारण शर्करा की उच्च सांद्रता
  • लिपिड
  • उच्च सांद्रता में कुछ डिटर्जेंट
  • अमोनिया यौगिक

BCA और ब्रैडफोर्ड परीक्षणों के बीच क्या अंतर है?

मुख्य अंतर हैं:

  • BCA परीक्षण डिटर्जेंट और सर्फेक्टेंट के साथ अधिक संगत है
  • ब्रैडफोर्ड परीक्षण तेजी से (2-5 मिनट बनाम BCA के लिए 30+ मिनट)
  • BCA में प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम है
  • ब्रैडफोर्ड अधिक संवेदनशील है बुनियादी अमीनो एसिड के प्रति
  • BCA कमी करने वाले अभिकर्ताओं से प्रभावित है, जबकि ब्रैडफोर्ड नहीं है

यदि मेरी गणना की गई नमूना मात्रा बहुत बड़ी है तो क्या करें?

यदि आपका कैलकुलेटर एक बहुत बड़ी नमूना मात्रा दिखाता है, तो यह आमतौर पर आपके नमूने में प्रोटीन की कम सांद्रता को इंगित करता है। यह निम्नलिखित कारणों से हो सकता है:

  1. आपके मूल नमूने में वास्तव में कम प्रोटीन सामग्री
  2. तैयारी के दौरान प्रोटीन का नुकसान
  3. BCA परीक्षण प्रक्रिया में त्रुटियाँ
  4. अविश्वसनीय अवशोषण रीडिंग

अपने नमूनों को संकेंद्रित करने पर विचार करें या अपनी प्रयोगात्मक डिज़ाइन को निम्न प्रोटीन सांद्रता को समायोजित करने के लिए समायोजित करें।

क्या मैं इस कैलकुलेटर का उपयोग अन्य प्रोटीन मात्राकरण विधियों के लिए कर सकता हूँ?

यह कैलकुलेटर विशेष रूप से BCA परीक्षण परिणामों के लिए डिज़ाइन किया गया है। जबकि मूल सिद्धांत (सांद्रता को मात्रा में परिवर्तित करना) अन्य विधियों के लिए लागू होता है, अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध विभिन्न परीक्षणों के बीच भिन्न होता है। अन्य विधियों जैसे ब्रैडफोर्ड या लोरी के लिए, आपको विभिन्न मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करने की आवश्यकता होगी।

मैं रैखिक रेंज के बाहर अवशोषण वाले नमूनों को कैसे संभालूं?

रैखिक रेंज के बाहर (आमतौर पर >2.0) अवशोषण रीडिंग के लिए:

  1. अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण दोबारा करें
  2. किसी अन्य प्रोटीन मात्राकरण विधि का उपयोग करें
  3. उच्च सांद्रता मानकों को शामिल करने के लिए मानक वक्र को समायोजित करें

मुझे किस प्रोटीन को मानक के रूप में उपयोग करना चाहिए?

बोविन सीरम एल्ब्यूमिन (BSA) BCA परीक्षणों के लिए सबसे सामान्य रूप से उपयोग किया जाने वाला मानक है क्योंकि यह:

  • आसानी से उपलब्ध और सस्ता है
  • अत्यधिक घुलनशील है
  • समाधान में स्थिर है
  • अच्छी तरह से वर्णित है

हालांकि, यदि आपके नमूनों में एक प्रमुख प्रोटीन है जो BSA से काफी भिन्न है, तो अधिक सटीक परिणामों के लिए उस प्रोटीन का उपयोग करने पर विचार करें।

BCA प्रतिक्रिया कितनी देर तक स्थिर रहती है?

BCA प्रतिक्रिया में विकसित बैंगनी रंग कमरे के तापमान पर कई घंटों तक स्थिर रहता है और उस अवधि के भीतर किसी भी समय मापा जा सकता है। हालाँकि, सर्वोत्तम परिणामों के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि मानकों और नमूनों को रंग विकास के बाद लगभग उसी समय पर मापा जाए।

क्या मैं पिछले प्रयोग से मानक वक्र का पुन: उपयोग कर सकता हूँ?

हालांकि मानक वक्र का पुन: उपयोग करना तकनीकी रूप से संभव है, यह सटीक मात्राकरण के लिए अनुशंसित नहीं है। अभिकर्ताओं, इंक्यूबेशन की स्थितियों, और उपकरण की कैलिब्रेशन में भिन्नताएँ अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध को प्रभावित कर सकती हैं। विश्वसनीय परिणामों के लिए, प्रत्येक बार परीक्षण करने पर एक ताजा मानक वक्र उत्पन्न करें।

संदर्भ

  1. स्मिथ पीके, क्रोन आरआई, हर्मनसन जीटी, एट अल। "बाइसिंचोनिनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप।" एनालिटिकल बायोकैमिस्ट्री। 1985;150(1):76-85। doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. थर्मो साइंटिफिक। "पियर्स BCA प्रोटीन परीक्षण किट।" निर्देश। उपलब्ध है: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. वॉकर जेएम। "बाइसिंचोनिनिक एसिड (BCA) परीक्षण प्रोटीन मात्राकरण के लिए।" में: वॉकर जेएम, संपादक। प्रोटीन प्रोटोकॉल हैंडबुक। स्प्रिंगर; 2009:11-15। doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. ओल्सन बीजे, मार्कवेल जे। "प्रोटीन सांद्रता का निर्धारण।" करंट प्रोटोकॉल्स इन प्रोटीन साइंस। 2007;अध्याय 3:यूनिट 3.4। doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. नोबल जेई, बेली एमजे। "प्रोटीन की मात्राकरण।" मेथड्स इन एंजाइमोलॉजी। 2009;463:73-95। doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

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