ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ: A260 ਨੂੰ ng/μL ਵਿੱਚ ਤੁਰੰਤ ਬਦਲੋ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਕੀ ਹੈ?

ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇੱਕ ਅਹਮ ਆਨਲਾਈਨ ਟੂਲ ਹੈ ਜੋ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜਿਸਟ, ਜੈਨੇਟਿਸਟ ਅਤੇ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਟੈਕਨੀਸ਼ੀਅਨ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨੂੰ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ ਤੋਂ ਨਿਕਾਲਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਮੁਫਤ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਮਿਆਰੀ A260 ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਯੂਵੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਮਾਪਾਂ ਨੂੰ ng/μL ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮੁੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਸਕੇ।

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੂਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ, ਜੋ PCR, ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ, ਕਲੋਨਿੰਗ ਅਤੇ ਹੋਰ ਮੌਲਿਕ ਤਕਨੀਕਾਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇੱਕ ਅਹਮ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਕਦਮ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਾਡਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਹੱਥ ਨਾਲ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਕਾਲਣ ਵੇਲੇ ਗਲਤੀਆਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਸਾਡੇ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਫਾਇਦੇ

• ਤੁਰੰਤ ਨਤੀਜੇ: A260 ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ ਨੂੰ ng/μL ਵਿੱਚ ਸੈਕੰਡਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲੋ
• ਸਹੀ ਗਣਨਾਵਾਂ: ਮਿਆਰੀ 50 ng/μL ਬਦਲਾਅ ਫੈਕਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ
• ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਸਹਾਇਤਾ: ਨਮੂਨਾ ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਨੂੰ ਆਪਣੇ ਆਪ ਗਣਨਾ ਕਰਦਾ ਹੈ
• ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਯੂਨਿਟ: ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾ ਦੋਹਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
• ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਮੁਫਤ: ਕੋਈ ਰਜਿਸਟ੍ਰੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਇੰਸਟਾਲੇਸ਼ਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕਿਵੇਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ

ਬੁਨਿਆਦੀ ਸਿਧਾਂਤ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਬੀਅਰ-ਲੈਂਬਰਟ ਕਾਨੂੰਨ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਹਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇੱਕ ਹੱਲ ਦੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਉਸ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਅਬਜ਼ਾਰਬਿੰਗ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਅਤੇ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਰੋਸ਼ਨੀ ਦੇ ਪਾਥ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ, 1.0 ਦੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ 260nm (A260) 'ਤੇ 1cm ਪਾਥ ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੇ ਕੂਵੇਟ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 50 ng/μL ਦੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।

ਫਾਰਮੂਲਾ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:

$\text{ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ}$

ਜਿੱਥੇ:

• A260 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਪੜ੍ਹਾਈ ਹੈ
• 50 ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਬਦਲਾਅ ਫੈਕਟਰ ਹੈ (A260 = 1.0 ਲਈ 50 ng/μL)
• ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਉਹ ਫੈਕਟਰ ਹੈ ਜਿਸ ਨਾਲ ਮੂਲ ਨਮੂਨਾ ਮਾਪਣ ਲਈ ਡਿਲੂਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ

ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਫਿਰ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ:

$\text{ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ (μg)} = \frac{\text{ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ (ng/μL)} \times \text{ਵਾਲਿਊਮ (μL)}}{1000}$

ਵੈਰੀਏਬਲਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ

1. 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ (A260):

   • ਇਹ ਮਾਪ ਹੈ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਦੁਆਰਾ 260nm ਲੰਬਾਈ ਦੀ ਯੂਵੀ ਰੋਸ਼ਨੀ ਕਿੰਨੀ ਅਬਜ਼ਰਬ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ
   • ਡੀਐਨਏ ਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡ (ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨਸ ਬੇਸ) 260nm 'ਤੇ ਇੱਕ ਚੋਟੀ ਦੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਨਾਲ ਯੂਵੀ ਰੋਸ਼ਨੀ ਨੂੰ ਅਬਜ਼ਰਬ ਕਰਦੇ ਹਨ
   • ਜਿੰਨਾ ਵੱਧ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ, ਉਨਾ ਵੱਧ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੈ

2. ਬਦਲਾਅ ਫੈਕਟਰ (50):

   • 50 ng/μL ਦਾ ਮਿਆਰੀ ਬਦਲਾਅ ਫੈਕਟਰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਹੈ
   • ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ, ਫੈਕਟਰ 33 ng/μL ਹੈ
   • ਆਰਐਨਏ ਲਈ, ਫੈਕਟਰ 40 ng/μL ਹੈ
   • ਓਲਿਗੋਨਿਊਕਲਿਟਾਈਡ ਲਈ, ਫੈਕਟਰ ਲੜੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦਾ ਹੈ

3. ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ:

   • ਜੇ ਨਮੂਨਾ ਮਾਪਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਡਿਲੂਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਜਿਵੇਂ, 1 ਭਾਗ ਨਮੂਨਾ 9 ਭਾਗ ਬਫਰ = ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ 10)
   • ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ: (ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਵਾਲਿਊਮ + ਡਿਲੂਐਂਟ ਦਾ ਵਾਲਿਊਮ) ÷ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਵਾਲਿਊਮ
   • ਮੂਲ, ਅਣਡਿਲੂਟ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨਿਕਾਲਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ

4. ਵਾਲਿਊਮ:

   • ਤੁਹਾਡੇ ਡੀਐਨਏ ਹੱਲ ਦਾ ਕੁੱਲ ਵਾਲਿਊਮ ਮਾਈਕ੍ਰੋਲੀਟਰ (μL) ਵਿੱਚ
   • ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕਿਵੇਂ ਗਣਨਾ ਕਰੀਏ: ਕਦਮ-ਦਰ-ਕਦਮ ਗਾਈਡ

ਆਪਣੇ A260 ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇਸ ਸਧਾਰਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਾ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ:

ਕਦਮ 1: ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕਰੋ

• ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਤੁਹਾਡਾ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਾ ਠੀਕ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘੁਲਿਆ ਅਤੇ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ
• ਉੱਚ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾਵਾਂ ਲਈ, ਇੱਕ ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਤਿਆਰ ਕਰੋ ਤਾਂ ਕਿ A260 0.1-1.0 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਪੜ੍ਹੇ
• ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਲਈ ਉਹੀ ਬਫਰ ਵਰਤੋਂ ਜੋ ਤੁਹਾਡੇ ਬਲੈਂਕ ਰਿਫਰੈਂਸ ਲਈ ਹੈ

ਕਦਮ 2: A260 ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਮਾਪੋ

• 260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਮਾਪਣ ਲਈ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਜਾਂ ਨੈਨੋਡ੍ਰਾਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ
• A260 ਮੁੱਲ ਨੂੰ ਦਰਜ ਕਰੋ (ਡੀਐਨਏ 260nm 'ਤੇ ਯੂਵੀ ਰੋਸ਼ਨੀ ਨੂੰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਅਬਜ਼ਰਬ ਕਰਦਾ ਹੈ)
• ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਲਈ ਵਿਕਲਪਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ A280 ਨੂੰ ਮਾਪੋ

ਕਦਮ 3: ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ

1. ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ A260 ਮੁੱਲ ਦਰਜ ਕਰੋ
2. ਮਾਈਕ੍ਰੋਲੀਟਰ (μL) ਵਿੱਚ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਵਾਲਿਊਮ ਦਰਜ ਕਰੋ
3. ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ (ਅਣਡਿਲੂਟ ਹੋਣ 'ਤੇ 1 ਵਰਤੋਂ)
4. ਤੁਰੰਤ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ ਗਣਨਾ 'ਤੇ ਕਲਿੱਕ ਕਰੋ

ਕਦਮ 4: ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰੋ

• ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ng/μL ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਿਖਾਉਂਦੀ ਹੈ
• ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ μg ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਦਿਖਾਉਂਦੀ ਹੈ
• ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਨੁਪਾਤ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ (A260/A280 ≈ 1.8 ਸ਼ੁੱਧ ਡੀਐਨਏ ਲਈ)

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ

ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਕਈ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਅਤੇ ਖੋਜ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਅਹਮ ਹੈ:

ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ

ਡੀਐਨਏ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਈਗੇਟ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਜਾਣਨਾ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਇਨਸਰਟ-ਟੂ-ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰਮੇਸ਼ਨ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਧਦੀ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ, ਇਨਸਰਟ ਤੋਂ ਵੈਕਟਰ ਦਾ 3:1 ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਅਕਸਰ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਨਤੀਜੇ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਦੋਹਾਂ ਘਟਕਾਂ ਦੀ ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

PCR ਅਤੇ qPCR

PCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1-10 ng ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਵਧੀਆ ਵਧਾਉਣ ਲਈ। ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲਤਾ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਮਾਤਰਕ PCR (qPCR) ਲਈ, ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਸਹੀ ਮਿਆਰੀ ਵਕਰਾਂ ਅਤੇ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਮਾਪਣ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।

ਨੈਕਸਟ-ਜਨਰੇਸ਼ਨ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ (NGS)

NGS ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਇਨਪੁਟ ਮਾਤਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1-500 ng ਦੇ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ। ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਸਫਲ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸਡ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਚਲਾਉਣ ਵਿੱਚ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਸੰਤੁਲਿਤ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਲਈ ਅਹਮ ਹੈ।

ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਯੋਗ

ਯੂਕੈਰੀਓਟਿਕ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਨ ਵੇਲੇ, ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਦੇ ਕਿਸਮ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 6-ਵੈੱਲ ਪਲੇਟ ਫਾਰਮੈਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਵੈੱਲ 0.5-5 μg ਪਲਾਸਮਿਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਸਟੈਂਡਰਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਡੀਐਨਏ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ

ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਅਕਸਰ ਸੀਮਿਤ ਅਤੇ ਕੀਮਤੀ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਸਹੀ ਮਾਪਣ ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਵਿਗਿਆਨੀਆਂ ਨੂੰ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਿੰਗ ਲਈ ਯੋਗ ਡੀਐਨਏ ਮੌਜੂਦ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਸਟੈਂਡਰਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ।

ਰਿਸਟ੍ਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਡਾਈਜੈਸ਼ਨ

ਰਿਸਟ੍ਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ μg ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਜਾਣਨਾ ਐਂਜ਼ਾਈਮ-ਟੂ-ਡੀਐਨਏ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਲਈ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਡਾਈਜੈਸ਼ਨ ਬਿਨਾਂ ਸਟਾਰ ਗਤੀਵਿਧੀ (ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕੱਟਣਾ) ਦੇ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਮਾਪਣ ਦੇ ਵਿਕਲਪ

ਜਦੋਂ ਕਿ ਯੂਵੀ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਵਿਧੀ ਹੈ, ਕਈ ਵਿਕਲਪ ਮੌਜੂਦ ਹਨ:

1. ਫਲੂਓਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਵਿਧੀਆਂ:

   • ਪੀਕੋਗ੍ਰੀਨ, ਕਿਊਬਿਟ, ਅਤੇ SYBR ਗ੍ਰੀਨ ਵਰਗੇ ਫਲੂੋਰੇਸੈਂਟ ਡਾਈਆਂ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਬਾਈਂਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ
   • ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ (25 pg/mL ਤੱਕ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦੇ ਹਨ)
   • ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਆਰਐਨਏ, ਜਾਂ ਮੁਫਤ ਨਿਊਕਲਿਓਟਾਈਡਾਂ ਵਰਗੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕਾਂ ਦੁਆਰਾ ਘੱਟ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ
   • ਇੱਕ ਫਲੂਰੋਮੀਟਰ ਅਤੇ ਖਾਸ ਰੀਏਜੈਂਟਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ

2. ਅਗਰੋਜ਼ ਜੈਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ:

   • ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਦੇ ਮਿਆਰੀਆਂ ਨਾਲ ਬੈਂਡ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ
   • ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਅਖੰਡਤਾ ਬਾਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ
   • ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਜਾਂ ਫਲੂਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਵਿਧੀਆਂ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਸਹੀ
   • ਸਮੇਂ-ਲੈਣ ਵਾਲਾ ਪਰ ਵਿਜ਼ੂਅਲ ਪੁਸ਼ਟੀ ਲਈ ਲਾਭਦਾਇਕ

3. ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ PCR:

   • ਖਾਸ ਡੀਐਨਏ ਲੜੀਆਂ ਦੀ ਮਾਪਣ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਵਿਧੀ
   • ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾਵਾਂ (ਕੁਝ ਕਾਪੀਆਂ ਤੱਕ) ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦੀ ਹੈ
   • ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਜਟਿਲ ਸਾਜ਼ੋ-ਸਾਮਾਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ