Calculateur de volume d'échantillon d'absorbance BCA pour protocoles de laboratoire

Calculez des volumes d'échantillon précis en fonction des lectures d'absorbance de l'essai BCA et de la masse protéique souhaitée. Essentiel pour un chargement protéique cohérent dans les western blots et d'autres applications de laboratoire.

Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA

Cet outil calcule le volume d'échantillon requis en fonction des résultats d'absorbance BCA et de la masse de l'échantillon. Entrez la valeur d'absorbance et la masse de l'échantillon pour chaque échantillon afin de calculer le volume d'échantillon correspondant.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Entrées d'Échantillon

Échantillon 1

Nom de l'Échantillon

Absorbance BCA*

Masse de l'Échantillon (μg)*

Volume de l'Échantillon

Copy

N/A μL

Formule de Calcul

Le volume de l'échantillon est calculé en utilisant la formule suivante :

Volume de l'Échantillon (μL) = Masse de l'Échantillon (μg) / Concentration en Protéines (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Documentation

Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA

Introduction

Le Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA est un outil spécialisé conçu pour aider les chercheurs et les techniciens de laboratoire à déterminer avec précision le volume d'échantillon approprié pour les expériences en fonction des résultats du dosage BCA (acide bicinchonique). Ce calculateur prend les lectures d'absorbance de votre dosage BCA et votre masse d'échantillon souhaitée pour calculer le volume précis nécessaire pour un chargement de protéines cohérent dans des applications telles que le western blot, les dosages enzymatiques et d'autres techniques d'analyse des protéines.

Le dosage BCA est l'une des méthodes les plus largement utilisées pour la quantification des protéines dans les laboratoires de biochimie et de biologie moléculaire. En mesurant l'absorbance de vos échantillons de protéines et en les comparant à une courbe standard, vous pouvez déterminer la concentration en protéines avec une grande précision. Notre calculateur simplifie ce processus en convertissant automatiquement les lectures d'absorbance en volumes d'échantillon exacts requis pour vos expériences.

Comprendre le Dosage BCA et le Calcul du Volume d'Échantillon

Qu'est-ce qu'un Dosage BCA ?

Le dosage à l'acide bicinchonique (BCA) est un dosage biochimique pour déterminer la concentration totale de protéines dans une solution. Le principe de ce dosage repose sur la formation d'un complexe Cu²⁺-protéine dans des conditions alcalines, suivi de la réduction de Cu²⁺ en Cu¹⁺. La quantité de réduction est proportionnelle à la protéine présente. Le BCA forme un complexe de couleur violette avec Cu¹⁺ dans des environnements alcalins, fournissant une base pour surveiller la réduction du cuivre par les protéines.

L'intensité de la couleur violette augmente proportionnellement à la concentration en protéines, qui peut être mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre à environ 562 nm. Les lectures d'absorbance sont ensuite comparées à une courbe standard pour déterminer la concentration en protéines dans les échantillons inconnus.

La Formule pour le Calcul du Volume d'Échantillon

La formule fondamentale pour calculer le volume d'échantillon à partir des résultats d'absorbance BCA est :

$\text{Volume d'Échantillon (μL)} = \frac{\text{Masse d'Échantillon (μg)}}{\text{Concentration en Protéines (μg/μL)}}$

Où :

Volume d'Échantillon est le volume d'échantillon nécessaire (en microlitres, μL)
Masse d'Échantillon est la quantité de protéines souhaitée à utiliser (en microgrammes, μg)
Concentration en Protéines est dérivée de la lecture d'absorbance du BCA (en μg/μL)

La concentration en protéines est calculée à partir de la lecture d'absorbance en utilisant une équation de courbe standard :

$\text{Concentration en Protéines (μg/μL)} = \text{Pente} \times \text{Absorbance} + \text{Ordonnée à l'origine}$

Pour un dosage BCA standard, la pente typique est d'environ 2,0, et l'ordonnée à l'origine est souvent proche de zéro, bien que ces valeurs puissent varier en fonction de vos conditions de dosage spécifiques et de la courbe standard.

Comment Utiliser le Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA

Notre calculateur simplifie le processus de détermination des volumes d'échantillon à partir des résultats du dosage BCA. Suivez ces étapes pour obtenir des calculs précis :

Entrez les Informations sur l'Échantillon :
- Fournissez un nom pour votre échantillon (facultatif mais utile pour le suivi de plusieurs échantillons)
- Entrez la lecture d'absorbance BCA de votre spectrophotomètre
- Saisissez votre masse d'échantillon souhaitée (la quantité de protéines que vous souhaitez utiliser en μg)
Sélectionnez le Type de Courbe Standard :
- Standard (par défaut) : Utilise les paramètres de courbe standard BCA typiques
- Amélioré : Pour un protocole de sensibilité améliorée
- Micro : Pour le protocole de microplaques
- Personnalisé : Vous permet d'entrer vos propres valeurs de pente et d'ordonnée à l'origine
Voir les Résultats :
- Le calculateur affichera instantanément le volume d'échantillon requis en microlitres
- Les résultats sont également présentés dans un tableau récapitulatif pour une référence facile
- Pour plusieurs échantillons, vous pouvez ajouter d'autres entrées et comparer les résultats
Copier ou Exporter les Résultats :
- Utilisez le bouton de copie pour transférer les résultats dans votre carnet de laboratoire ou d'autres applications
- Tous les calculs peuvent être enregistrés pour référence future

Exemple Étape par Étape

Passons en revue un exemple pratique :

Vous avez réalisé un dosage BCA et obtenu une lecture d'absorbance de 0,75 pour votre échantillon de protéines.
Vous souhaitez charger 20 μg de protéines pour votre western blot.
En utilisant la courbe standard (pente = 2,0, ordonnée à l'origine = 0) :
- Concentration en protéines = 2,0 × 0,75 + 0 = 1,5 μg/μL
- Volume d'échantillon requis = 20 μg ÷ 1,5 μg/μL = 13,33 μL

Cela signifie que vous devriez charger 13,33 μL de votre échantillon pour obtenir 20 μg de protéines.

Comprendre les Résultats

Le calculateur fournit plusieurs informations importantes :

Concentration en Protéines : Cela est calculé à partir de votre lecture d'absorbance en utilisant la courbe standard sélectionnée. Cela représente la quantité de protéines par unité de volume dans votre échantillon (μg/μL).
Volume d'Échantillon : C'est le volume de votre échantillon qui contient la quantité souhaitée de protéines. Cette valeur est celle que vous utiliserez lors de la préparation de vos expériences.
Avertissements et Recommandations : Le calculateur peut fournir des avertissements pour :
- Des lectures d'absorbance très élevées (>3,0) qui peuvent être en dehors de la plage linéaire du dosage
- Des lectures d'absorbance très faibles (<0,1) qui peuvent être proches de la limite de détection
- Des volumes calculés qui sont impraticablement grands (>1000 μL) ou petits (<1 μL)

Applications et Cas d'Utilisation

Préparation d'Échantillons pour Western Blot

Une des applications les plus courantes de ce calculateur est la préparation d'échantillons pour le western blot. Un chargement cohérent de protéines est crucial pour des résultats fiables de western blot, et ce calculateur garantit que vous chargez la même quantité de protéines pour chaque échantillon, même lorsque leurs concentrations diffèrent.

Flux de travail d'exemple :

Réalisez un dosage BCA sur tous vos échantillons de protéines
Décidez d'une quantité de protéines cohérente à charger (typiquement 10-50 μg)
Utilisez le calculateur pour déterminer le volume nécessaire pour chaque échantillon
Ajoutez des volumes appropriés de tampon d'échantillon et d'agent réducteur
Chargez les volumes calculés sur votre gel

Dosages Enzymatiques

Pour les dosages enzymatiques, il est souvent nécessaire d'utiliser une quantité spécifique de protéines pour standardiser les conditions de réaction entre différents échantillons ou expériences.

Flux de travail d'exemple :

Déterminez la concentration en protéines en utilisant le dosage BCA
Calculez le volume nécessaire pour obtenir votre quantité de protéines souhaitée
Ajoutez ce volume à votre mélange de réaction
Poursuivez avec votre dosage enzymatique

Expériences d'Immunoprécipitation

Dans les expériences d'immunoprécipitation (IP), commencer avec une quantité cohérente de protéines est important pour comparer les résultats entre différentes conditions.

Flux de travail d'exemple :

Mesurez la concentration en protéines des lysats cellulaires ou tissulaires en utilisant le dosage BCA
Calculez les volumes nécessaires pour obtenir des quantités de protéines égales (typiquement 500-1000 μg)
Ajustez tous les échantillons au même volume avec le tampon de lyse
Poursuivez avec l'incubation d'anticorps et la précipitation

Purification des Protéines

Lors de la purification des protéines, il est souvent nécessaire de suivre la concentration des protéines et de calculer les rendements à différentes étapes.

Flux de travail d'exemple :

Collectez des fractions pendant la purification
Réalisez un dosage BCA sur les fractions sélectionnées
Calculez la concentration en protéines et la quantité totale de protéines
Déterminez les volumes nécessaires pour les applications suivantes

Fonctionnalités Avancées et Considérations

Courbes Standards Personnalisées

Bien que le calculateur fournisse des paramètres par défaut pour les dosages BCA standards, vous pouvez également entrer des valeurs personnalisées si vous avez généré votre propre courbe standard. Cela est particulièrement utile lorsque :

Vous travaillez avec des échantillons de protéines non standards
Vous utilisez des protocoles BCA modifiés
Vous travaillez en présence de substances qui pourraient interférer avec le dosage

Pour utiliser une courbe standard personnalisée :

Sélectionnez "Personnalisé" dans les options de courbe standard
Entrez vos valeurs de pente et d'ordonnée à l'origine
Le calculateur utilisera ces valeurs pour tous les calculs suivants

Gestion de Plusieurs Échantillons

Le calculateur vous permet d'ajouter plusieurs échantillons et de calculer leurs volumes simultanément. Cela est particulièrement utile lors de la préparation d'échantillons pour des expériences qui nécessitent un chargement cohérent de protéines à travers plusieurs conditions.

Avantages du traitement par lots :

Gagnez du temps en calculant tous les volumes à la fois
Assurez la cohérence entre tous vos échantillons
Comparez facilement les concentrations en protéines entre les échantillons
Identifiez les valeurs aberrantes ou les erreurs de mesure potentielles

Gestion des Cas Particuliers

Lectures d'Absorbance Très Élevées

Si votre lecture d'absorbance est supérieure à 2,0, elle peut être en dehors de la plage linéaire du dosage BCA. Dans ce cas :

Diluez votre échantillon et répétez le dosage BCA
Alternativement, utilisez le système d'avertissement du calculateur, qui signalera les lectures potentiellement problématiques

Lectures d'Absorbance Très Faibles

Pour les lectures d'absorbance inférieures à 0,1, vous pourriez être proche de la limite de détection du dosage, ce qui pourrait affecter la précision. Envisagez :

De concentrer votre échantillon si possible
D'utiliser une méthode de quantification des protéines plus sensible
D'ajuster votre conception expérimentale pour tenir compte de quantités de protéines plus faibles

Volumes Calculés Impraticablement Grands

Si le calculateur suggère un volume qui est trop grand pour votre application :

Envisagez de concentrer votre échantillon de protéines
Ajustez votre quantité de protéines souhaitée vers le bas si votre expérience le permet
Utilisez le volume maximum pratique et notez la quantité réelle de protéines utilisée

Histoire de la Quantification des Protéines et du Dosage BCA

La quantification précise des protéines a été une exigence fondamentale en biochimie et en biologie moléculaire depuis l'émergence de ces domaines. Les premières méthodes reposaient sur la détermination du contenu en azote, qui était chronophage et nécessitait un équipement spécialisé.

Évolution des Méthodes de Quantification des Protéines

Méthode Kjeldahl (1883) : L'une des premières méthodes de quantification des protéines, basée sur la mesure du contenu en azote.
Test Biuret (Début des années 1900) : Cette méthode repose sur la réaction entre les liaisons peptidiques et les ions cuivre dans une solution alcaline, produisant une couleur violette.
Dosage Lowry (1951) : Développé par Oliver Lowry, cette méthode a combiné la réaction Biuret avec le réactif de Folin-Ciocalteu, augmentant la sensibilité.
Dosage Bradford (1976) : Marion Bradford a développé cette méthode utilisant le colorant Coomassie Brilliant Blue G-250, qui se lie aux protéines et déplace le maximum d'absorption.
Dosage BCA (1985) : Développé par Paul Smith et ses collègues de Pierce Chemical Company, cette méthode a combiné la réaction Biuret avec la détection BCA, offrant une sensibilité améliorée et une compatibilité avec les détergents.

Développement du Dosage BCA

Le dosage BCA a été décrit pour la première fois dans un article de 1985 par Smith et al. intitulé "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Il a été développé pour répondre aux limitations des méthodes existantes, en particulier l'interférence de diverses substances chimiques couramment utilisées dans l'extraction et la purification des protéines.

L'innovation clé a été l'utilisation de l'acide bicinchonique pour détecter les ions Cu¹⁺ produits par la réduction médiée par les protéines de Cu²⁺, formant un complexe de couleur violette qui pouvait être mesuré spectrophotométriquement. Cela a fourni plusieurs avantages :

Sensibilité plus élevée que la méthode Biuret
Moins de susceptibilité à l'interférence de substances non protéiques par rapport à la méthode Lowry
Meilleure compatibilité avec les détergents que le dosage Bradford
Protocole plus simple avec moins de réactifs et d'étapes

Depuis son introduction, le dosage BCA est devenu l'une des méthodes de quantification des protéines les plus largement utilisées dans les laboratoires de biochimie et de biologie moléculaire dans le monde entier.

Exemples de Code pour Calculer le Volume d'Échantillon

Formule Excel

1=IF(B2<=0,"Erreur : Absorbance invalide",IF(C2<=0,"Erreur : Masse d'échantillon invalide",C2/(2*B2)))
2
3' Où :
4' B2 contient la lecture d'absorbance
5' C2 contient la masse d'échantillon souhaitée en μg
6' La formule renvoie le volume d'échantillon requis en μL
7

Implémentation Python

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Calculer la concentration en protéines à partir de l'absorbance en utilisant la courbe standard."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("L'absorbance ne peut pas être négative")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Calculer le volume d'échantillon requis en fonction de l'absorbance et de la masse souhaitée."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("La masse d'échantillon doit être positive")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("La concentration en protéines calculée doit être positive")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Exemple d'utilisation
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Pour une absorbance de {absorbance} et une masse de protéines souhaitée de {sample_mass} μg :")
31    print(f"Concentration en protéines : {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Volume d'échantillon requis : {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Erreur : {e}")
35

Code R pour l'Analyse

1# Fonction pour calculer la concentration en protéines à partir de l'absorbance
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("L'absorbance ne peut pas être négative")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Fonction pour calculer le volume d'échantillon
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("La masse d'échantillon doit être positive")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("La concentration en protéines calculée doit être positive")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Exemple d'utilisation
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Pour une absorbance de %.2f et une masse de protéines souhaitée de %.2f μg :\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Concentration en protéines : %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Volume d'échantillon requis : %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Erreur : %s\n", e$message))
39})
40

Implémentation JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("L'absorbance ne peut pas être négative");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("La masse d'échantillon doit être positive");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("La concentration en protéines calculée doit être positive");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Exemple d'utilisation
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Pour une absorbance de ${absorbance} et une masse de protéines souhaitée de ${sampleMass} μg :`);
33  console.log(`Concentration en protéines : ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Volume d'échantillon requis : ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Erreur : ${error.message}`);
37}
38

Visualisation de la Courbe Standard

La relation entre l'absorbance et la concentration en protéines est généralement linéaire dans une certaine plage. Voici une visualisation d'une courbe standard BCA :

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbance (562 nm) Concentration en Protéines (μg/μL)

Courbe Standard Échantillons Standards

Courbe Standard BCA

Comparaison avec d'Autres Méthodes de Quantification des Protéines

Différentes méthodes de quantification des protéines présentent divers avantages et limitations. Voici comment le dosage BCA se compare à d'autres méthodes courantes :

Méthode	Plage de Sensibilité	Avantages	Limitations	Meilleur Pour
Dosage BCA	5-2000 μg/mL	• Compatible avec les détergents • Moins de variation entre protéines • Développement de couleur stable	• Interféré par des agents réducteurs • Affecté par certains agents chélateurs	• Quantification générale des protéines • Échantillons contenant des détergents
Dosage Bradford	1-1500 μg/mL	• Rapide (2-5 min) • Peu de substances interférentes	• Grande variation entre protéines • Incompatible avec les détergents	• Mesures rapides • Échantillons sans détergents
Méthode Lowry	1-1500 μg/mL	• Bien établie • Bonne sensibilité	• De nombreuses substances interférentes • Plusieurs étapes	• Cohérence historique • Échantillons de protéines pures
Absorbance UV (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Non destructif • Très rapide • Aucun réactif nécessaire	• Affecté par les acides nucléiques • Nécessite des échantillons purs	• Solutions de protéines pures • Vérifications rapides pendant la purification
Fluorométrique	0.1-500 μg/mL	• Sensibilité la plus élevée • Large plage dynamique	• Réactifs coûteux • Nécessite un fluoromètre	• Échantillons très dilués • Volume d'échantillon limité

Questions Fréquemment Posées

À quoi sert le dosage BCA ?

Le dosage BCA (acide bicinchonique) est principalement utilisé pour quantifier la concentration totale de protéines dans un échantillon. Il est largement utilisé en biochimie, biologie cellulaire et biologie moléculaire pour des applications telles que le western blot, les dosages enzymatiques, l'immunoprécipitation et la purification des protéines.

Quelle est la précision du dosage BCA ?

Le dosage BCA est généralement précis à ± 5-10 % lorsqu'il est effectué correctement. Sa précision dépend de plusieurs facteurs, y compris la qualité de la courbe standard, l'absence de substances interférentes et si la composition de la protéine inconnue est similaire à celle de la protéine standard utilisée.

Qu'est-ce qui peut interférer avec les résultats du dosage BCA ?

Plusieurs substances peuvent interférer avec les résultats du dosage BCA, notamment :

Agents réducteurs (DTT, β-mercaptoéthanol, glutathion)
Agents chélateurs (EDTA, EGTA)
Concentrations élevées de sucres simples
Lipides
Certains détergents à haute concentration
Composés ammoniacaux

Quelle est la différence entre les dosages BCA et Bradford ?

Les principales différences sont :

Le dosage BCA est plus compatible avec les détergents et les tensioactifs
Le dosage Bradford est plus rapide (2-5 minutes contre 30+ minutes pour le BCA)
Le BCA a moins de variation entre protéines
Le Bradford est plus sensible aux acides aminés basiques
Le BCA est affecté par des agents réducteurs, tandis que le Bradford ne l'est pas

Pourquoi mon volume d'échantillon calculé est-il trop grand ?

Si votre calculateur montre un volume d'échantillon très grand, cela indique généralement une faible concentration en protéines dans votre échantillon. Cela pourrait être dû à :

Une faible teneur en protéines réelle dans votre échantillon d'origine
Une perte de protéines pendant la préparation
Des erreurs dans la procédure de dosage BCA
Une lecture d'absorbance inexacte

Envisagez de concentrer votre échantillon ou d'ajuster votre conception expérimentale pour tenir compte de la faible concentration en protéines.

Puis-je utiliser ce calculateur pour d'autres méthodes de quantification des protéines ?

Ce calculateur est spécifiquement conçu pour les résultats du dosage BCA. Bien que le principe de base (convertir la concentration en volume) s'applique à d'autres méthodes, la relation entre l'absorbance et la concentration en protéines varie entre les différents dosages. Pour d'autres méthodes comme Bradford ou Lowry, vous devrez utiliser des paramètres de courbe standard différents.

Comment gérer les échantillons avec une absorbance en dehors de la plage linéaire ?

Pour les lectures d'absorbance en dehors de la plage linéaire (typiquement >2.0) :

Diluez votre échantillon et répétez le dosage BCA
Utilisez une méthode de quantification des protéines différente
Ajustez la courbe standard pour inclure des standards de concentration plus élevée

Quelle protéine devrais-je utiliser comme standard ?

L'albumine sérique bovine (BSA) est le standard le plus couramment utilisé pour les dosages BCA car elle est :

Facilement disponible et peu coûteuse
Hautement soluble
Stable en solution
Bien caractérisée

Cependant, si vos échantillons contiennent une protéine prédominante qui diffère considérablement de la BSA, envisagez d'utiliser cette protéine comme standard pour obtenir des résultats plus précis.

Combien de temps la réaction BCA est-elle stable ?

La couleur violette développée dans la réaction BCA est stable pendant plusieurs heures à température ambiante et peut être mesurée à tout moment dans cette période. Cependant, pour de meilleurs résultats, il est recommandé de mesurer tous les standards et échantillons à peu près au même moment après le développement de la couleur.

Puis-je réutiliser la courbe standard d'une expérience précédente ?

Bien qu'il soit techniquement possible de réutiliser une courbe standard, il n'est pas recommandé pour une quantification précise. Les variations des réactifs, des conditions d'incubation et de l'étalonnage de l'instrument peuvent affecter la relation entre l'absorbance et la concentration en protéines. Pour des résultats fiables, générez une nouvelle courbe standard chaque fois que vous effectuez le dosage.

Références

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Instructions. Disponible à : https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In : Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

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Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA

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Entrées d'Échantillon

Échantillon 1

Formule de Calcul

Documentation

Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA

Introduction

Comprendre le Dosage BCA et le Calcul du Volume d'Échantillon

Qu'est-ce qu'un Dosage BCA ?

La Formule pour le Calcul du Volume d'Échantillon

Comment Utiliser le Calculateur de Volume d'Échantillon d'Absorbance BCA

Exemple Étape par Étape

Comprendre les Résultats

Applications et Cas d'Utilisation

Préparation d'Échantillons pour Western Blot

Dosages Enzymatiques

Expériences d'Immunoprécipitation

Purification des Protéines

Fonctionnalités Avancées et Considérations

Courbes Standards Personnalisées

Gestion de Plusieurs Échantillons

Gestion des Cas Particuliers

Lectures d'Absorbance Très Élevées

Lectures d'Absorbance Très Faibles

Volumes Calculés Impraticablement Grands

Histoire de la Quantification des Protéines et du Dosage BCA

Évolution des Méthodes de Quantification des Protéines

Développement du Dosage BCA

Exemples de Code pour Calculer le Volume d'Échantillon

Formule Excel

Implémentation Python

Code R pour l'Analyse

Implémentation JavaScript

Visualisation de la Courbe Standard

Comparaison avec d'Autres Méthodes de Quantification des Protéines

Questions Fréquemment Posées

À quoi sert le dosage BCA ?

Quelle est la précision du dosage BCA ?

Qu'est-ce qui peut interférer avec les résultats du dosage BCA ?

Quelle est la différence entre les dosages BCA et Bradford ?

Pourquoi mon volume d'échantillon calculé est-il trop grand ?

Puis-je utiliser ce calculateur pour d'autres méthodes de quantification des protéines ?

Comment gérer les échantillons avec une absorbance en dehors de la plage linéaire ?

Quelle protéine devrais-je utiliser comme standard ?

Combien de temps la réaction BCA est-elle stable ?

Puis-je réutiliser la courbe standard d'une expérience précédente ?

Références

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