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बीसीए अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर प्रयोगशाला प्रोटोकॉल के लिए

बीसीए परीक्षण अवशोषण रीडिंग और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान के आधार पर सटीक नमूना मात्रा की गणना करें। पश्चिमी ब्लॉट और अन्य प्रयोगशाला अनुप्रयोगों में सुसंगत प्रोटीन लोडिंग के लिए आवश्यक।

बीसीए अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर

यह उपकरण बीसीए अवशोषण परिणामों और नमूना द्रव्यमान के आधार पर आवश्यक नमूना मात्रा की गणना करता है। प्रत्येक नमूने के लिए अवशोषण मान और नमूना द्रव्यमान दर्ज करें ताकि संबंधित नमूना मात्रा की गणना की जा सके।

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

नमूना इनपुट

नमूना 1

Copy
N/A μL

गणना सूत्र

नमूना मात्रा निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके गणना की जाती है:

नमूना मात्रा (μL) = नमूना द्रव्यमान (μg) / प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

दस्तावेज़ीकरण

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर

परिचय

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर एक विशेष उपकरण है जिसे शोधकर्ताओं और प्रयोगशाला तकनीशियनों द्वारा BCA (बाइसिन्चोनिनिक एसिड) परीक्षण परिणामों के आधार पर प्रयोगों के लिए उपयुक्त नमूना मात्रा सटीकता से निर्धारित करने में मदद करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। यह कैलकुलेटर आपके BCA परीक्षण से अवशोषण रीडिंग और आपकी इच्छित नमूना द्रव्यमान को लेता है ताकि पश्चिमी ब्लॉटिंग, एंजाइमेटिक परीक्षणों और अन्य प्रोटीन विश्लेषण तकनीकों जैसे अनुप्रयोगों में सुसंगत प्रोटीन लोडिंग के लिए आवश्यक सटीक मात्रा की गणना की जा सके।

BCA परीक्षण प्रोटीन की मात्रात्मकता के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले तरीकों में से एक है, जो बायोकैमिस्ट्री और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोग किया जाता है। अपने प्रोटीन नमूनों के अवशोषण को मापकर और उन्हें मानक वक्र के साथ तुलना करके, आप उच्च सटीकता के साथ प्रोटीन सांद्रता निर्धारित कर सकते हैं। हमारा कैलकुलेटर इस प्रक्रिया को सरल बनाता है, क्योंकि यह स्वचालित रूप से अवशोषण रीडिंग को आपके प्रयोगों के लिए आवश्यक सटीक नमूना मात्रा में परिवर्तित करता है।

BCA परीक्षण और नमूना मात्रा गणना को समझना

BCA परीक्षण क्या है?

बाइसिन्चोनिनिक एसिड (BCA) परीक्षण एक जैव रासायनिक परीक्षण है जिसका उपयोग किसी समाधान में प्रोटीन की कुल सांद्रता निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस परीक्षण का सिद्धांत क्षारीय परिस्थितियों के तहत Cu²⁺-प्रोटीन जटिल के निर्माण पर निर्भर करता है, जिसके बाद Cu²⁺ का Cu¹⁺ में परिवर्तन होता है। कमी की मात्रा प्रोटीन की उपस्थिति के समानुपाती होती है। BCA एक क्षारीय वातावरण में Cu¹⁺ के साथ एक बैंगनी रंग का जटिल बनाता है, जो प्रोटीन की कमी की निगरानी करने के लिए एक आधार प्रदान करता है।

बैंगनी रंग की तीव्रता प्रोटीन सांद्रता के साथ समानुपाती रूप से बढ़ती है, जिसे लगभग 562 एनएम पर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है। अवशोषण रीडिंग को फिर मानक वक्र के साथ तुलना करके अज्ञात नमूनों में प्रोटीन सांद्रता निर्धारित की जाती है।

नमूना मात्रा गणना के लिए सूत्र

BCA अवशोषण परिणामों से नमूना मात्रा की गणना के लिए मौलिक सूत्र है:

नमूना मात्रा (μL)=नमूना द्रव्यमान (μg)प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)\text{नमूना मात्रा (μL)} = \frac{\text{नमूना द्रव्यमान (μg)}}{\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)}}

जहां:

  • नमूना मात्रा आवश्यक नमूने की मात्रा है (माइक्रोलिटर्स, μL में)
  • नमूना द्रव्यमान उपयोग करने के लिए इच्छित प्रोटीन की मात्रा है (माइक्रोग्राम, μg में)
  • प्रोटीन सांद्रता BCA अवशोषण रीडिंग से प्राप्त होती है (μg/μL में)

प्रोटीन सांद्रता को अवशोषण रीडिंग से मानक वक्र समीकरण का उपयोग करके गणना की जाती है:

प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)=ढलान×अवशोषण+इंटरसेप्ट\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)} = \text{ढलान} \times \text{अवशोषण} + \text{इंटरसेप्ट}

एक मानक BCA परीक्षण के लिए, सामान्य ढलान लगभग 2.0 है, और इंटरसेप्ट अक्सर शून्य के करीब होता है, हालांकि ये मान आपके विशिष्ट परीक्षण स्थितियों और मानक वक्र के आधार पर भिन्न हो सकते हैं।

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर का उपयोग कैसे करें

हमारा कैलकुलेटर BCA परीक्षण परिणामों से नमूना मात्रा निर्धारित करने की प्रक्रिया को सरल बनाता है। सटीक गणनाओं के लिए निम्नलिखित कदमों का पालन करें:

  1. नमूना जानकारी दर्ज करें:

    • अपने नमूने का नाम प्रदान करें (वैकल्पिक लेकिन कई नमूनों को ट्रैक करने में सहायक)
    • अपने स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से BCA अवशोषण रीडिंग दर्ज करें
    • अपने इच्छित नमूना द्रव्यमान (आपके द्वारा उपयोग किए जाने वाले प्रोटीन की मात्रा μg में)

  2. मानक वक्र प्रकार चुनें:

    • मानक (डिफ़ॉल्ट): सामान्य BCA मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करता है
    • संवर्धित: संवर्धित संवेदनशीलता प्रोटोकॉल के लिए
    • माइक्रो: माइक्रोप्लेट प्रोटोकॉल के लिए
    • कस्टम: आपको अपने स्वयं के ढलान और इंटरसेप्ट मान दर्ज करने की अनुमति देता है

  3. परिणाम देखें:

    • कैलकुलेटर तुरंत माइक्रोलिटर्स में आवश्यक नमूना मात्रा प्रदर्शित करेगा
    • परिणामों को आसान संदर्भ के लिए एक सारांश तालिका में प्रस्तुत किया गया है
    • कई नमूनों के लिए, आप अधिक प्रविष्टियाँ जोड़ सकते हैं और परिणामों की तुलना कर सकते हैं

  4. परिणामों की कॉपी या निर्यात करें:

    • अपने प्रयोगशाला नोटबुक या अन्य अनुप्रयोगों में परिणामों को स्थानांतरित करने के लिए कॉपी बटन का उपयोग करें
    • सभी गणनाएँ भविष्य के संदर्भ के लिए सहेजी जा सकती हैं

चरण-दर-चरण उदाहरण

आइए एक व्यावहारिक उदाहरण से चलते हैं:

  1. आपने एक BCA परीक्षण किया है और अपने प्रोटीन नमूने के लिए 0.75 की अवशोषण रीडिंग प्राप्त की है।
  2. आप अपने पश्चिमी ब्लॉट के लिए 20 μg प्रोटीन लोड करना चाहते हैं।
  3. मानक वक्र (ढलान = 2.0, इंटरसेप्ट = 0) का उपयोग करते हुए:
    • प्रोटीन सांद्रता = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • आवश्यक नमूना मात्रा = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

इसका मतलब है कि आपको 20 μg प्रोटीन प्राप्त करने के लिए अपने नमूने का 13.33 μL लोड करना चाहिए।

परिणामों को समझना

कैलकुलेटर कई महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करता है:

  1. प्रोटीन सांद्रता: यह आपके अवशोषण रीडिंग से चयनित मानक वक्र का उपयोग करके गणना की जाती है। यह आपके नमूने में प्रति इकाई मात्रा में प्रोटीन की मात्रा को दर्शाता है (μg/μL में)।

  2. नमूना मात्रा: यह आपके नमूने की मात्रा है जिसमें आपकी इच्छित प्रोटीन मात्रा होती है। यह वह मान है जिसका उपयोग आप अपने प्रयोगों की तैयारी करते समय करेंगे।

  3. चेतावनियाँ और सिफारिशें: कैलकुलेटर निम्नलिखित के लिए चेतावनियाँ प्रदान कर सकता है:

    • बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग (>3.0) जो परीक्षण की रैखिक सीमा के बाहर हो सकती हैं
    • बहुत कम अवशोषण रीडिंग (<0.1) जो पहचान सीमा के करीब हो सकती हैं
    • गणना की गई मात्रा जो अव्यावहारिक रूप से बड़ी (>1000 μL) या छोटी (<1 μL) है

अनुप्रयोग और उपयोग के मामले

पश्चिमी ब्लॉट नमूना तैयारी

इस कैलकुलेटर का एक सामान्य अनुप्रयोग पश्चिमी ब्लॉटिंग के लिए नमूनों की तैयारी करना है। सुसंगत प्रोटीन लोडिंग विश्वसनीय पश्चिमी ब्लॉट परिणामों के लिए महत्वपूर्ण है, और यह कैलकुलेटर सुनिश्चित करता है कि आप प्रत्येक नमूने के लिए समान मात्रा में प्रोटीन लोड करें, भले ही उनकी सांद्रता भिन्न हो।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. अपने सभी प्रोटीन नमूनों पर BCA परीक्षण करें
  2. लोड करने के लिए एक सुसंगत प्रोटीन मात्रा तय करें (आमतौर पर 10-50 μg)
  3. प्रत्येक नमूने के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करने के लिए कैलकुलेटर का उपयोग करें
  4. नमूना बफर और अपघटन एजेंट की उचित मात्रा जोड़ें
  5. अपने जेल पर गणना की गई मात्रा लोड करें

एंजाइमेटिक परीक्षण

एंजाइमेटिक परीक्षणों के लिए, यह अक्सर आवश्यक होता है कि एक विशिष्ट मात्रा में प्रोटीन का उपयोग किया जाए ताकि विभिन्न नमूनों या प्रयोगों में प्रतिक्रिया की स्थितियों को मानकीकृत किया जा सके।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. BCA परीक्षण का उपयोग करके प्रोटीन सांद्रता निर्धारित करें
  2. आवश्यक प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें
  3. इस मात्रा को अपनी प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ें
  4. अपने एंजाइमेटिक परीक्षण के साथ आगे बढ़ें

इम्युनोप्रीसिपिटेशन प्रयोग

इम्युनोप्रीसिपिटेशन (IP) प्रयोगों में, एक समान मात्रा में प्रोटीन के साथ शुरू करना परिणामों की तुलना के लिए महत्वपूर्ण है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. सेल या ऊतक लिसेट्स का प्रोटीन सांद्रता BCA परीक्षण का उपयोग करके मापें
  2. समान प्रोटीन मात्रा (आमतौर पर 500-1000 μg) प्राप्त करने के लिए मात्रा की गणना करें
  3. सभी नमूनों को लिसेट बफर के साथ समान मात्रा में समायोजित करें
  4. एंटीबॉडी इन्क्यूबेशन और प्रीसीपिटेशन के साथ आगे बढ़ें

प्रोटीन शुद्धिकरण

प्रोटीन शुद्धिकरण के दौरान, विभिन्न चरणों में प्रोटीन सांद्रता को ट्रैक करना अक्सर आवश्यक होता है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. शुद्धिकरण के दौरान अंश एकत्र करें
  2. चयनित अंशों पर BCA परीक्षण करें
  3. प्रोटीन सांद्रता और कुल प्रोटीन मात्रा निर्धारित करें
  4. आगे के अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करें

उन्नत विशेषताएँ और विचार

कस्टम मानक वक्र

जबकि कैलकुलेटर मानक BCA परीक्षणों के लिए डिफ़ॉल्ट पैरामीटर प्रदान करता है, यदि आपने अपना स्वयं का मानक वक्र उत्पन्न किया है तो आप कस्टम मान भी दर्ज कर सकते हैं। यह विशेष रूप से तब उपयोगी होता है जब:

  • गैर-मानक प्रोटीन नमूनों के साथ काम करना
  • संशोधित BCA प्रोटोकॉल का उपयोग करना
  • ऐसे पदार्थों की उपस्थिति में काम करना जो परीक्षण में हस्तक्षेप कर सकते हैं

कस्टम मानक वक्र का उपयोग करने के लिए:

  1. मानक वक्र विकल्पों में "कस्टम" चुनें
  2. अपने ढलान और इंटरसेप्ट मान दर्ज करें
  3. कैलकुलेटर इन मानों का उपयोग सभी आगे की गणनाओं के लिए करेगा

कई नमूनों को संभालना

कैलकुलेटर आपको कई नमूनों को जोड़ने और एक साथ उनकी मात्रा की गणना करने की अनुमति देता है। यह विशेष रूप से तब उपयोगी होता है जब प्रयोगों के लिए समान प्रोटीन लोडिंग की आवश्यकता होती है।

बैच प्रोसेसिंग के लाभ:

  • एक बार में सभी मात्रा की गणना करके समय बचाएँ
  • सभी नमूनों के बीच सुसंगतता सुनिश्चित करें
  • नमूनों के बीच प्रोटीन सांद्रताओं की तुलना करें
  • बाहरी तत्वों या संभावित मापन त्रुटियों की पहचान करें

किनारे के मामलों से निपटना

बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग

यदि आपकी अवशोषण रीडिंग 2.0 से अधिक है, तो यह BCA परीक्षण की रैखिक सीमा के बाहर हो सकती है। ऐसे मामलों में:

  1. अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण दोबारा करें
  2. वैकल्पिक रूप से, कैलकुलेटर की चेतावनी प्रणाली का उपयोग करें, जो संभावित समस्याग्रस्त रीडिंग को चिह्नित करेगी

बहुत कम अवशोषण रीडिंग

0.1 से कम अवशोषण रीडिंग के लिए, आप परीक्षण की पहचान सीमा के करीब हो सकते हैं, जो सटीकता को प्रभावित कर सकती है। विचार करें:

  1. यदि संभव हो तो अपने नमूने को संकेंद्रित करें
  2. अधिक संवेदनशील प्रोटीन मात्रात्मकता विधि का उपयोग करें
  3. कम प्रोटीन मात्रा को समायोजित करने के लिए अपने प्रयोगात्मक डिज़ाइन को समायोजित करें

अव्यावहारिक रूप से बड़ी गणना की गई मात्रा

यदि कैलकुलेटर एक मात्रा का सुझाव देता है जो आपके अनुप्रयोग के लिए बहुत बड़ी है:

  1. अपने प्रोटीन नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें
  2. यदि आपका प्रयोग अनुमति देता है तो अपनी इच्छित प्रोटीन मात्रा को नीचे समायोजित करें
  3. अधिकतम व्यावहारिक मात्रा का उपयोग करें और उपयोग की गई वास्तविक प्रोटीन मात्रा को नोट करें

प्रोटीन मात्रात्मकता और BCA परीक्षण का इतिहास

प्रोटीन की सटीक मात्रात्मकता बायोकैमिस्ट्री और आणविक जीवविज्ञान में एक मौलिक आवश्यकता रही है जब से ये क्षेत्र उभरे हैं। प्रारंभिक विधियाँ नाइट्रोजन सामग्री निर्धारण पर निर्भर थीं, जो समय लेने वाली और विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती थी।

प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों का विकास

  1. केजेल्डहल विधि (1883): प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे प्रारंभिक विधियों में से एक, जो नाइट्रोजन सामग्री को मापने पर आधारित है।

  2. बायुरेट परीक्षण (1900 के प्रारंभ): यह विधि पेप्टाइड बंधनों और क्षारीय समाधान में तांबे के आयनों के बीच प्रतिक्रिया पर निर्भर करती है, जो एक बैंगनी रंग उत्पन्न करती है।

  3. लोवरी परीक्षण (1951): ओलिवर लोवरी द्वारा विकसित, इस विधि ने बायुरेट प्रतिक्रिया को फोलिन-सीओकैल्ट्यू रेजेंट के साथ मिलाकर संवेदनशीलता बढ़ाई।

  4. ब्रैडफोर्ड परीक्षण (1976): मैरियन ब्रैडफोर्ड ने इस विधि का विकास किया, जिसमें प्रोटीनों से बंधने वाले कूमासी ब्रिलियंट ब्लू G-250 डाई का उपयोग किया गया, जो प्रोटीनों के साथ बंधकर अवशोषण अधिकतम को बदलता है।

  5. BCA परीक्षण (1985): पॉल स्मिथ और उनके सहयोगियों द्वारा पियर्स रासायनिक कंपनी में विकसित, इस विधि ने मौजूदा विधियों की सीमाओं को संबोधित करने के लिए बायुरेट प्रतिक्रिया को BCA पहचान के साथ मिलाया, जो संवेदनशीलता और डिटर्जेंट के साथ संगतता में सुधार प्रदान करता है।

BCA परीक्षण का विकास

BCA परीक्षण का पहला वर्णन 1985 के एक पेपर में स्मिथ एट अल द्वारा "बाइसिन्चोनिनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप" शीर्षक से किया गया था। इसे मौजूदा विधियों की सीमाओं को संबोधित करने के लिए विकसित किया गया था, विशेष रूप से प्रोटीन निष्कर्षण और शुद्धिकरण में सामान्य रूप से उपयोग किए जाने वाले विभिन्न रसायनों से हस्तक्षेप।

मुख्य नवाचार यह था कि BCA को Cu²⁺ के कमी के माध्यम से उत्पन्न Cu¹⁺ आयनों का पता लगाने के लिए उपयोग किया गया, जो एक बैंगनी रंग का जटिल बनाता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जा सकता है। इससे कई लाभ प्राप्त हुए:

  1. बायुरेट विधि की तुलना में उच्च संवेदनशीलता
  2. लोवरी विधि की तुलना में विभिन्न रसायनों से हस्तक्षेप के लिए कम संवेदनशीलता
  3. ब्रैडफोर्ड परीक्षण की तुलना में डिटर्जेंट के साथ बेहतर संगतता
  4. कम रसायनों और चरणों के साथ सरल प्रोटोकॉल

इसके परिचय के बाद से, BCA परीक्षण बायोकैमिस्ट्री और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधियों में से एक बन गया है।

नमूना मात्रा की गणना के लिए कोड उदाहरण

एक्सेल सूत्र

1=IF(B2<=0,"त्रुटि: अमान्य अवशोषण",IF(C2<=0,"त्रुटि: अमान्य नमूना द्रव्यमान",C2/(2*B2)))
2
3' जहां:
4' B2 अवशोषण रीडिंग है
5' C2 μg में इच्छित नमूना द्रव्यमान है
6' सूत्र आवश्यक नमूना मात्रा μL में लौटाता है
7

पायथन कार्यान्वयन

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करें मानक वक्र का उपयोग करके।"""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """अवशोषण और इच्छित द्रव्यमान के आधार पर आवश्यक नमूना मात्रा की गणना करें।"""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# उदाहरण उपयोग
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"अवशोषण {absorbance} और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान {sample_mass} μg के लिए:")
31    print(f"प्रोटीन सांद्रता: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"आवश्यक नमूना मात्रा: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"त्रुटि: {e}")
35

आर कोड विश्लेषण के लिए

1# अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# नमूना मात्रा की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# उदाहरण उपयोग
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("अवशोषण %.2f और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान %.2f μg के लिए:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("प्रोटीन सांद्रता: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("आवश्यक नमूना मात्रा: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("त्रुटि: %s\n", e$message))
39})
40

जावास्क्रिप्ट कार्यान्वयन

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// उदाहरण उपयोग
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`अवशोषण ${absorbance} और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान ${sampleMass} μg के लिए:`);
33  console.log(`प्रोटीन सांद्रता: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`आवश्यक नमूना मात्रा: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`त्रुटि: ${error.message}`);
37}
38

मानक वक्र दृश्यता

अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध आमतौर पर एक निश्चित सीमा के भीतर रैखिक होता है। नीचे BCA वक्र का एक दृश्य है:

BCA मानक वक्र प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए BCA परीक्षण में अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच रैखिक संबंध का दृश्य 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

अवशोषण (562 एनएम) प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)

मानक वक्र मानक नमूने

BCA मानक वक्र

अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के साथ तुलना

विभिन्न प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के विभिन्न लाभ और सीमाएँ होती हैं। यहाँ BCA परीक्षण अन्य सामान्य विधियों की तुलना में है:

विधिसंवेदनशीलता सीमालाभसीमाएँसर्वश्रेष्ठ के लिए
BCA परीक्षण5-2000 μg/mL• डिटर्जेंट के साथ संगत
• प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम
• स्थिर रंग विकास		• कमी एजेंटों द्वारा हस्तक्षेप
• कुछ चेलेटिंग एजेंटों द्वारा प्रभावित		• सामान्य प्रोटीन मात्रात्मकता
• डिटर्जेंट युक्त नमूने
ब्रैडफोर्ड परीक्षण1-1500 μg/mL• त्वरित (2-5 मिनट)
• कुछ हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ		• उच्च प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता
• डिटर्जेंट के साथ असंगत		• त्वरित माप
• डिटर्जेंट-रहित नमूने
लोवरी विधि1-1500 μg/mL• अच्छी तरह से स्थापित
• अच्छी संवेदनशीलता		• कई हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ
• कई चरण		• ऐतिहासिक स्थिरता
• शुद्ध प्रोटीन नमूने
UV अवशोषण (280 एनएम)20-3000 μg/mL• नष्ट-नहीं करने वाला
• बहुत तेज
• कोई रसायन आवश्यक नहीं		• न्यूक्लिक एसिड द्वारा प्रभावित
• शुद्ध नमूनों की आवश्यकता		• शुद्ध प्रोटीन समाधान
• शुद्धिकरण के दौरान त्वरित जांच
फ्लोरोमेट्रिक0.1-500 μg/mL• उच्चतम संवेदनशीलता
• व्यापक गतिशील सीमा		• महंगे रसायन
• फ्लोरोमीटर की आवश्यकता		• बहुत पतले नमूने
• सीमित नमूना मात्रा

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

BCA परीक्षण का उपयोग किस लिए किया जाता है?

BCA (बाइसिन्चोनिनिक एसिड) परीक्षण का मुख्य उपयोग नमूने में प्रोटीन की कुल सांद्रता को मात्रात्मक रूप से निर्धारित करना है। इसका व्यापक उपयोग बायोकैमिस्ट्री, सेल बायोलॉजी, और आणविक जीवविज्ञान में पश्चिमी ब्लॉटिंग, एंजाइम परीक्षण, इम्युनोप्रीसिपिटेशन, और प्रोटीन शुद्धिकरण जैसे अनुप्रयोगों के लिए किया जाता है।

BCA परीक्षण की सटीकता कितनी है?

BCA परीक्षण सामान्यतः सही तरीके से किए जाने पर 5-10% के भीतर सटीक होता है। इसकी सटीकता कई कारकों पर निर्भर करती है, जिसमें मानक वक्र की गुणवत्ता, हस्तक्षेप करने वाले पदार्थों की अनुपस्थिति, और क्या अज्ञात प्रोटीन की संरचना मानक प्रोटीन के समान है।

BCA परीक्षण परिणामों में क्या हस्तक्षेप कर सकता है?

कई पदार्थ BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप कर सकते हैं, जिनमें शामिल हैं:

  • कमी एजेंट (DTT, β-मेर्कैप्टोएथेनोल, ग्लूटाथियोन)
  • चेलेटिंग एजेंट (EDTA, EGTA)
  • सरल शर्करा की उच्च सांद्रता
  • लिपिड
  • उच्च सांद्रता में कुछ डिटर्जेंट
  • अमोनिया यौगिक

BCA और ब्रैडफोर्ड परीक्षणों के बीच क्या अंतर है?

मुख्य अंतर हैं:

  • BCA परीक्षण डिटर्जेंट और सर्फेक्टेंट के साथ अधिक संगत है
  • ब्रैडफोर्ड परीक्षण तेजी से (2-5 मिनट बनाम 30+ मिनट BCA के लिए)
  • BCA में प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम होती है
  • ब्रैडफोर्ड अधिक संवेदनशील होता है बेसिक अमीनो एसिड के प्रति
  • BCA कमी एजेंटों से प्रभावित होता है, जबकि ब्रैडफोर्ड नहीं

यदि मेरी गणना की गई नमूना मात्रा बहुत बड़ी है तो क्या करें?

यदि आपका कैलकुलेटर एक बहुत बड़ी नमूना मात्रा दिखाता है, तो यह आमतौर पर आपके नमूने में कम प्रोटीन सांद्रता का संकेत देता है। यह निम्नलिखित कारणों से हो सकता है:

  1. आपके मूल नमूने में वास्तव में कम प्रोटीन सामग्री
  2. तैयारी के दौरान प्रोटीन हानि
  3. BCA परीक्षण प्रक्रिया में त्रुटियाँ
  4. अविश्वसनीय अवशोषण रीडिंग

अपने नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें या कम प्रोटीन सांद्रता को समायोजित करने के लिए अपने प्रयोगात्मक डिज़ाइन को समायोजित करें।

क्या मैं इस कैलकुलेटर का उपयोग अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के लिए कर सकता हूँ?

यह कैलकुलेटर विशेष रूप से BCA परीक्षण परिणामों के लिए डिज़ाइन किया गया है। जबकि मूल सिद्धांत (सांद्रता को मात्रा में परिवर्तित करना) अन्य विधियों पर लागू होता है, अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध विभिन्न परीक्षणों के बीच भिन्न होता है। अन्य विधियों जैसे ब्रैडफोर्ड या लोवरी के लिए, आपको विभिन्न मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करना होगा।

मैं रैखिक सीमा के बाहर अवशोषण के साथ नमूनों को कैसे संभालूं?

रैखिक सीमा के बाहर (आमतौर पर >2.0) अवशोषण रीडिंग के लिए:

  1. अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण दोबारा करें
  2. एक अलग प्रोटीन मात्रात्मकता विधि का उपयोग करें
  3. उच्च सांद्रता मानकों को शामिल करने के लिए मानक वक्र को समायोजित करें

मुझे किस प्रोटीन को मानक के रूप में उपयोग करना चाहिए?

बोवाइन सीरम एल्बुमिन (BSA) BCA परीक्षणों के लिए सबसे सामान्य रूप से उपयोग किया जाने वाला मानक है क्योंकि यह:

  • आसानी से उपलब्ध और सस्ता है
  • अत्यधिक घुलनशील है
  • समाधान में स्थिर है
  • अच्छी तरह से वर्णित है

हालांकि, यदि आपके नमूनों में एक प्रमुख प्रोटीन है जो BSA से काफी भिन्न है, तो अधिक सटीक परिणामों के लिए उस प्रोटीन का उपयोग मानक के रूप में करने पर विचार करें।

BCA प्रतिक्रिया कितनी देर तक स्थिर रहती है?

BCA प्रतिक्रिया में विकसित बैंगनी रंग कई घंटों तक कमरे के तापमान पर स्थिर रहता है और उस अवधि के भीतर किसी भी समय मापा जा सकता है। हालाँकि, सर्वोत्तम परिणामों के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि सभी मानकों और नमूनों को रंग विकास के बाद लगभग एक ही समय में मापा जाए।

क्या मैं पिछले प्रयोग से मानक वक्र का पुन: उपयोग कर सकता हूँ?

हालांकि मानक वक्र का पुन: उपयोग तकनीकी रूप से संभव है, यह सटीक मात्रात्मकता के लिए अनुशंसित नहीं है। रसायनों, इन्क्यूबेशन की स्थितियों, और उपकरण कैलिब्रेशन में भिन्नताएँ अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध को प्रभावित कर सकती हैं। विश्वसनीय परिणामों के लिए, प्रत्येक बार जब आप परीक्षण करते हैं तो एक ताजा मानक वक्र उत्पन्न करें।

संदर्भ

  1. स्मिथ पीके, क्रोन आरआई, हर्मनसन जीटी, एट अल। "बाइसिन्चोनिनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप।" एनालिटिकल बायोकैमिस्ट्री। 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. थर्मो साइंटिफिक। "पियर्स BCA प्रोटीन परीक्षण किट।" निर्देश। उपलब्ध है: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. वॉकर जेएम। "बाइसिन्चोनिनिक एसिड (BCA) परीक्षण प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए।" वॉकर जेएम, संपादक। प्रोटीन प्रोटोकॉल हैंडबुक। स्प्रिंगर; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. ओल्सन बीजे, मार्कवेल जे। "प्रोटीन सांद्रता का निर्धारण करने के लिए परीक्षण।" करंट प्रोटोकॉल्स इन प्रोटीन साइंस। 2007;अध्याय 3:यूनिट 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. नोबल जेई, बेली एमजे। "प्रोटीन की मात्रात्मकता।" मेथड्स इन एंजाइमोलॉजी। 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

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