BCA kalkulator volum uzorka apsorpcije za laboratorijske protokole
Izračunajte precizne volumene uzoraka na temelju očitanja apsorpcije BCA ispitivanja i željene mase proteina. Bitno za dosljedno učitavanje proteina u western blotovima i drugim laboratorijskim aplikacijama.
BCA kalkulator volum uzorka
Ovaj alat izračunava potrebni volumen uzorka na temelju rezultata BCA apsorbancije i mase uzorka. Unesite vrijednost apsorbancije i masu uzorka za svaki uzorak kako biste izračunali odgovarajući volumen uzorka.
standardCurveTitle
Ulazi uzorka
Uzorak 1
Formula za izračun
Volumen uzorka se izračunava pomoću sljedeće formule:
usageTipsTitle
• tipAbsorbanceRange
• tipSampleMass
• tipSampleVolume
• tipStandardCurve
Dokumentacija
BCA Absorbance Sample Volume Calculator
Uvod
BCA Absorbance Sample Volume Calculator je specijalizovani alat dizajniran da pomogne istraživačima i laboratorijskim tehničarima da precizno odrede odgovarajući volumen uzorka za eksperimente na osnovu rezultata BCA (bicinchoninske kiseline) testa. Ovaj kalkulator uzima očitavanja apsorbancije iz vašeg BCA testa i vašu željenu masu uzorka kako bi izračunao tačan volumen potreban za dosledno učitavanje proteina u aplikacijama kao što su western blotting, enzimski testovi i druge tehnike analize proteina.
BCA test je jedna od najčešće korišćenih metoda za kvantifikaciju proteina u biokemijskim i molekularno-biološkim laboratorijama. Merenjem apsorbancije vaših uzoraka proteina i upoređivanjem sa standardnom krivom, možete odrediti koncentraciju proteina sa visokom tačnošću. Naš kalkulator pojednostavljuje ovaj proces automatski pretvarajući očitavanja apsorbancije u tačne volumene uzoraka potrebne za vaše eksperimente.
Razumevanje BCA testa i izračunavanje volumena uzorka
Šta je BCA test?
Bicinchoninska kiselina (BCA) test je biohemijska metoda za određivanje ukupne koncentracije proteina u rastvoru. Princip ove metode se oslanja na formiranje Cu²⁺-proteinskog kompleksa pod alkalnim uslovima, nakon čega dolazi do redukcije Cu²⁺ u Cu¹⁺. Količina redukcije je proporcionalna prisutnom proteinu. BCA formira ljubičasti kompleks sa Cu¹⁺ u alkalnim sredinama, pružajući osnovu za praćenje redukcije bakra od strane proteina.
Intenzitet ljubičaste boje se proporcionalno povećava sa koncentracijom proteina, što se može meriti pomoću spektrofotometra na približno 562 nm. Očitavanja apsorbancije se zatim upoređuju sa standardnom krivom kako bi se odredila koncentracija proteina u nepoznatim uzorcima.
Formula za izračunavanje volumena uzorka
Osnovna formula za izračunavanje volumena uzorka iz BCA rezultata apsorbancije je:
Gde:
- Volumen uzorka je volumen uzorka koji je potreban (u mikrolitrima, μL)
- Masa uzorka je željena količina proteina koja se koristi (u mikrogramima, μg)
- Koncentracija proteina se izvodi iz očitavanja apsorbancije (u μg/μL)
Koncentracija proteina se izračunava iz očitavanja apsorbancije koristeći jednadžbu standardne krive:
Za standardni BCA test, tipični nagib je približno 2.0, a presjek je često blizu nule, iako se ove vrednosti mogu razlikovati u zavisnosti od vaših specifičnih uslova testa i standardne krive.
Kako koristiti BCA Absorbance Sample Volume Calculator
Naš kalkulator pojednostavljuje proces određivanja volumena uzoraka iz BCA rezultata apsorbancije. Pratite ove korake kako biste dobili tačne proračune:
-
Unesite informacije o uzorku:
- Pružite naziv za vaš uzorak (opciono, ali korisno za praćenje više uzoraka)
- Unesite očitavanje apsorbancije iz vašeg spektrofotometra
- Unesite vašu željenu masu uzorka (količinu proteina koju želite da koristite u μg)
-
Odaberite tip standardne krive:
- Standard (podrazumevano): Koristi tipične parametre standardne BCA krive
- Povećana: Za protokol sa povećanom osetljivošću
- Mikro: Za protokol mikroploca
- Prilagođeno: Omogućava vam da unesete svoje vrednosti nagiba i presjeka
-
Pogledajte rezultate:
- Kalkulator će odmah prikazati potreban volumen uzorka u mikrolitrima
- Rezultati se takođe prikazuju u sažetku za laku referencu
- Za više uzoraka, možete dodati više unosa i uporediti rezultate
-
Kopirajte ili izvezite rezultate:
- Koristite dugme za kopiranje da prenesete rezultate u vaš laboratorijski dnevnik ili druge aplikacije
- Svi proračuni se mogu sačuvati za buduću referencu
Primer korak po korak
Hajde da prođemo kroz praktičan primer:
- Izvršili ste BCA test i dobili očitavanje apsorbancije od 0.75 za vaš uzorak proteina.
- Želite da učitate 20 μg proteina za vaš western blot.
- Koristeći standardnu krivu (nagib = 2.0, presjek = 0):
- Koncentracija proteina = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Potreban volumen uzorka = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL
To znači da treba da učitate 13.33 μL vašeg uzorka kako biste dobili 20 μg proteina.
Razumevanje rezultata
Kalkulator pruža nekoliko važnih informacija:
-
Koncentracija proteina: Ovo se izračunava iz vašeg očitavanja apsorbancije koristeći odabranu standardnu krivu. Predstavlja količinu proteina po jedinici zapremine u vašem uzorku (μg/μL).
-
Volumen uzorka: Ovo je volumen vašeg uzorka koji sadrži vašu željenu količinu proteina. Ova vrednost je ono što ćete koristiti prilikom pripreme vaših eksperimenata.
-
Upozorenja i preporuke: Kalkulator može pružiti upozorenja za:
- Vrlo visoka očitavanja apsorbancije (>3.0) koja mogu biti van linearne oblasti testa
- Vrlo niska očitavanja apsorbancije (<0.1) koja mogu biti blizu limita detekcije
- Izračunate volumene koji su nepraktično veliki (>1000 μL) ili mali (<1 μL)
Aplikacije i slučajevi korišćenja
Priprema uzoraka za western blot
Jedna od najčešćih aplikacija za ovaj kalkulator je priprema uzoraka za western blotting. Dosledno učitavanje proteina je ključno za pouzdane rezultate western blota, a ovaj kalkulator osigurava da učitate istu količinu proteina za svaki uzorak, čak i kada se njihove koncentracije razlikuju.
Primer radnog toka:
- Izvršite BCA test na svim vašim uzorcima proteina
- Odlučite o doslednoj količini proteina za učitavanje (tipično 10-50 μg)
- Koristite kalkulator da odredite potrebne volumene za svaki uzorak
- Dodajte odgovarajuće volumene uzorke i sredstva za smanjenje
- Učitajte izračunate volumene na vaš gel
Enzimski testovi
Za enzimske testove, često je potrebno koristiti specifičnu količinu proteina kako bi se standardizovali uslovi reakcije između različitih uzoraka ili eksperimenata.
Primer radnog toka:
- Odredite koncentraciju proteina koristeći BCA test
- Izračunajte volumen potreban da dobijete vašu željenu količinu proteina
- Dodajte ovaj volumen u vašu reakcijsku mešavinu
- Nastavite sa vašim enzimski testom
Eksperimenti imunoprecipitacije
U eksperimentima imunoprecipitacije, započinjanje sa doslednom količinom proteina je važno za upoređivanje rezultata između različitih uslova.
Primer radnog toka:
- Izmerite koncentraciju proteina ćelijskih ili tkivnih lisata koristeći BCA test
- Izračunajte volumene potrebne da dobijete jednake količine proteina (tipično 500-1000 μg)
- Prilagodite sve uzorke na istu zapreminu sa lizoskim rastvorom
- Nastavite sa inkubacijom sa antitelima i precipitacijom
Čišćenje proteina
Tokom čišćenja proteina, često je potrebno pratiti koncentraciju proteina i izračunati prinos na različitim koracima.
Primer radnog toka:
- Sakupite frakcije tokom čišćenja
- Izvršite BCA test na odabranim frakcijama
- Izračunajte koncentraciju proteina i ukupnu količinu proteina
- Odredite volumene potrebne za sledeće aplikacije
Napredne funkcije i razmatranja
Prilagođene standardne krive
Iako kalkulator pruža podrazumevane parametre za standardne BCA testove, možete takođe uneti prilagođene vrednosti ako ste generisali svoju standardnu krivu. Ovo je posebno korisno kada:
- Radite sa nestandardnim uzorcima proteina
- Koristite modifikovane BCA protokole
- Radite u prisustvu supstanci koje bi mogle ometati test
Da biste koristili prilagođenu standardnu krivu:
- Odaberite "Prilagođeno" iz opcija standardne krive
- Unesite svoje vrednosti nagiba i presjeka
- Kalkulator će koristiti ove vrednosti za sve naredne proračune
Rukovanje višestrukim uzorcima
Kalkulator vam omogućava da dodate više uzoraka i izračunate njihove volumene istovremeno. Ovo je posebno korisno kada pripremate uzorke za eksperimente koji zahtevaju dosledno učitavanje proteina između više uslova.
Prednosti obrade serija:
- Uštedite vreme izračunavajući sve volumene odjednom
- Osigurajte doslednost između svih vaših uzoraka
- Lako uporedite koncentracije proteina između uzoraka
- Identifikujte izuzetke ili potencijalne greške u merenju
Rukovanje ivicama
Vrlo visoka očitavanja apsorbancije
Ako je vaše očitavanje apsorbancije iznad 2.0, može biti van linearne oblasti BCA testa. U takvim slučajevima:
- Razblažite vaš uzorak i ponovite BCA test
- Alternativno, koristite sistem upozorenja kalkulatora, koji će označiti potencijalno problematična očitavanja
Vrlo niska očitavanja apsorbancije
Za očitavanja apsorbancije ispod 0.1, možda ste blizu limita detekcije testa, što može uticati na tačnost. Razmotrite:
- Koncentrisanje vašeg uzorka ako je to moguće
- Korišćenje osetljivije metode kvantifikacije proteina
- Prilagođavanje vašeg eksperimentalnog dizajna kako bi se prilagodili nižim količinama proteina
Nepraktično veliki izračunati volumeni
Ako kalkulator sugeriše volumen koji je prevelik za vašu aplikaciju:
- Razmotrite koncentrisanje vašeg uzorka proteina
- Prilagodite vašu željenu količinu proteina nadole ako vaš eksperiment to dozvoljava
- Koristite maksimalni praktični volumen i zabeležite stvarnu količinu proteina koja je korišćena
Istorija kvantifikacije proteina i BCA testa
Tačna kvantifikacija proteina je osnovni zahtev u biokemiji i molekularnoj biologiji otkako su se ova polja pojavila. Rane metode su se oslanjale na određivanje sadržaja azota, što je bilo vremenski zahtevno i zahtevalo specijalizovanu opremu.
Evolucija metoda kvantifikacije proteina
-
Kjeldahlova metoda (1883): Jedna od najranijih metoda za kvantifikaciju proteina, zasnovana na merenju sadržaja azota.
-
Biuret test (rani 1900-ih): Ova metoda se oslanja na reakciju između peptidnih veza i jona bakra u alkalnom rastvoru, proizvodeći ljubičastu boju.
-
Lowry test (1951): Razvijen od strane Oliviera Lowryja, ova metoda kombinuje Biuret reakciju sa Folin-Ciocalteu reagensom, povećavajući osetljivost.
-
Bradford test (1976): Marion Bradford je razvila ovu metodu koristeći boju Coomassie Brilliant Blue G-250, koja se vezuje za proteine i pomera apsorpciju maksimuma.
-
BCA test (1985): Razvijen od strane Paula Smitha i njegovih kolega u Pierce Chemical Company, ova metoda je kombinovala Biuret reakciju sa BCA detekcijom, nudeći poboljšanu osetljivost i kompatibilnost sa deterdžentima.
Razvoj BCA testa
BCA test je prvi put opisan u radu iz 1985. godine koji je napisao Smith i saradnici pod naslovom "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Razvijen je kako bi se adresirali nedostaci postojećih metoda, posebno ometanja od raznih hemikalija koje se često koriste u ekstrakciji i pročišćavanju proteina.
Ključna inovacija bila je korišćenje bicinchoninske kiseline za detekciju jona Cu¹⁺ koji su proizvedeni redukcijom Cu²⁺ od strane proteina, formirajući ljubičasti kompleks koji se može meriti spektrofotometrijski. Ovo je pružilo nekoliko prednosti:
- Veća osetljivost od Biuret metode
- Manja podložnost ometanjima od ne-proteinskih supstanci u poređenju sa Lowry metodom
- Bolja kompatibilnost sa deterdžentima nego Bradford test
- Jednostavniji protokol sa manje reagenasa i koraka
Od svog uvođenja, BCA test je postao jedna od najšire korišćenih metoda kvantifikacije proteina u biokemijskim i molekularno-biološkim laboratorijama širom sveta.
Primeri koda za izračunavanje volumena uzorka
Excel formula
1=IF(B2<=0,"Greška: Nevažeća apsorbancija",IF(C2<=0,"Greška: Nevažeća masa uzorka",C2/(2*B2)))
2
3' Gde:
4' B2 sadrži očitavanje apsorbancije
5' C2 sadrži željenu masu uzorka u μg
6' Formula vraća potrebni volumen uzorka u μL
7Python implementacija
1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5 """Izračunajte koncentraciju proteina iz apsorbancije koristeći standardnu krivu."""
6 if absorbance < 0:
7 raise ValueError("Apsorbancija ne može biti negativna")
8 return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11 """Izračunajte potrebni volumen uzorka na osnovu apsorbancije i željene mase."""
12 if sample_mass <= 0:
13 raise ValueError("Masa uzorka mora biti pozitivna")
14
15 protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16
17 if protein_concentration <= 0:
18 raise ValueError("Izračunata koncentracija proteina mora biti pozitivna")
19
20 return sample_mass / protein_concentration
21
22# Primer korišćenja
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20 # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29 volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30 print(f"Za apsorbanciju {absorbance} i željenu masu proteina {sample_mass} μg:")
31 print(f"Koncentracija proteina: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32 print(f"Potreban volumen uzorka: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34 print(f"Greška: {e}")
35R kod za analizu
1# Funkcija za izračunavanje koncentracije proteina iz apsorbancije
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3 if (absorbance < 0) {
4 stop("Apsorbancija ne može biti negativna")
5 }
6 return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funkcija za izračunavanje volumena uzorka
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11 if (sample_mass <= 0) {
12 stop("Masa uzorka mora biti pozitivna")
13 }
14
15 protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16
17 if (protein_concentration <= 0) {
18 stop("Izračunata koncentracija proteina mora biti pozitivna")
19 }
20
21 return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Primer korišćenja
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20 # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31 volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32 protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33
34 cat(sprintf("Za apsorbanciju %.2f i željenu masu proteina %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35 cat(sprintf("Koncentracija proteina: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36 cat(sprintf("Potreban volumen uzorka: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38 cat(sprintf("Greška: %s\n", e$message))
39})
40JavaScript implementacija
1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2 if (absorbance < 0) {
3 throw new Error("Apsorbancija ne može biti negativna");
4 }
5 return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9 if (sampleMass <= 0) {
10 throw new Error("Masa uzorka mora biti pozitivna");
11 }
12
13 const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14
15 if (proteinConcentration <= 0) {
16 throw new Error("Izračunata koncentracija proteina mora biti pozitivna");
17 }
18
19 return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Primer korišćenja
23try {
24 const absorbance = 0.75;
25 const sampleMass = 20; // μg
26 const slope = 2.0;
27 const intercept = 0;
28
29 const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30 const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31
32 console.log(`Za apsorbanciju ${absorbance} i željenu masu proteina ${sampleMass} μg:`);
33 console.log(`Koncentracija proteina: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34 console.log(`Potreban volumen uzorka: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36 console.error(`Greška: ${error.message}`);
37}
38Vizualizacija standardne krive
Odnos između apsorbancije i koncentracije proteina je obično linearan unutar određenog opsega. Ispod je vizualizacija standardne BCA krive:
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>
Poređenje sa drugim metodama kvantifikacije proteina
Različite metode kvantifikacije proteina imaju razne prednosti i ograničenja. Evo kako se BCA test upoređuje sa drugim uobičajenim metodama:
| Metoda | Opseg osetljivosti | Prednosti | Ograničenja | Najbolje za |
|---|---|---|---|---|
| BCA test | 5-2000 μg/mL | • Kompatibilan sa deterdžentima • Manja varijacija između proteina • Stabilni razvoj boje | • Ometanje od redukcionih agenasa • Pogođen nekim agensima za chelaciju | • Opšta kvantifikacija proteina • Uzorci koji sadrže deterdžente |
| Bradford test | 1-1500 μg/mL | • Brzo (2-5 min) • Malo ometajućih supstanci | • Visoka varijacija između proteina • Nepodnosiv sa deterdžentima | • Brza merenja • Uzorci bez deterdženta |
| Lowry metoda | 1-1500 μg/mL | • Dobro uspostavljena • Dobra osetljivost | • Mnoge ometajuće supstance • Više koraka | • Istorijska doslednost • Čisti uzorci proteina |
| UV apsorbancija (280 nm) | 20-3000 μg/mL | • Nedestruktivno • Veoma brzo • Nema potrebnih reagenasa | • Pogođen nukleinskim kiselinama • Zahteva čiste uzorke | • Čista rešenja proteina • Brza provere tokom pročišćavanja |
| Fluorometrijska | 0.1-500 μg/mL | • Najveća osetljivost • Širok dinamički opseg | • Skupi reagensi • Zahteva fluorometar | • Veoma razređeni uzorci • Ograničeni volumen uzorka |
Često postavljana pitanja
Čemu služi BCA test?
BCA (bicinchoninska kiselina) test se prvenstveno koristi za kvantifikaciju ukupne koncentracije proteina u uzorku. Široko se koristi u biokemiji, ćelijskoj biologiji i molekularnoj biologiji za aplikacije kao što su western blotting, enzimski testovi, imunoprecipitacija i pročišćavanje proteina.
Koliko je tačan BCA test?
BCA test je generalno tačan unutar 5-10% kada se pravilno izvrši. Njegova tačnost zavisi od nekoliko faktora uključujući kvalitet standardne krive, odsustvo ometajućih supstanci i da li je sastav nepoznatog proteina sličan standardnom proteinu koji se koristi.
Šta može ometati rezultate BCA testa?
Nekoliko supstanci može ometati rezultate BCA testa, uključujući:
- Redukcione agense (DTT, β-merkaptopropanol, glutation)
- Agense za chelaciju (EDTA, EGTA)
- Visoke koncentracije jednostavnih šećera
- Lipide
- Neke deterdžente u visokim koncentracijama
- Ammonijumove jedinjenja
Koja je razlika između BCA i Bradford testova?
Glavne razlike su:
- BCA test je više kompatibilan sa deterdžentima i surfaktantima
- Bradford test je brži (2-5 minuta naspram 30+ minuta za BCA)
- BCA ima manju varijaciju između proteina
- Bradford je osetljiviji na osnovne amino kiseline
- BCA je pogođen redukcionim agensima, dok Bradford nije
Zašto je moj izračunati volumen uzorka prevelik?
Ako vaš kalkulator prikazuje vrlo veliki volumen, to obično ukazuje na nisku koncentraciju proteina u vašem uzorku. Ovo može biti zbog:
- Stvarno niskog sadržaja proteina u vašem originalnom uzorku
- Gubitka proteina tokom pripreme
- Grešaka u postupku BCA testa
- Nepravilnog očitavanja apsorbancije
Razmotrite koncentrisanje vašeg uzorka ili prilagodite vaš eksperimentalni dizajn kako biste se prilagodili nižoj koncentraciji proteina.
Mogu li koristiti ovaj kalkulator za druge metode kvantifikacije proteina?
Ovaj kalkulator je specifično dizajniran za rezultate BCA testa. Iako se osnovni princip (pretvaranje koncentracije u volumen) primenjuje na druge metode, odnos između apsorbancije i koncentracije proteina se razlikuje između različitih testova. Za druge metode kao što su Bradford ili Lowry, morali biste koristiti različite parametre standardne krive.
Kako da se nosim sa uzorcima sa apsorbancijom van linearne oblasti?
Za očitavanja apsorbancije van linearne oblasti (tipično >2.0):
- Razblažite vaš uzorak i ponovite BCA test
- Koristite drugu metodu kvantifikacije proteina
- Prilagodite standardnu krivu da uključite više koncentracione standarde
Koji protein treba da koristim kao standard?
Bovin serum albumin (BSA) je najčešće korišćeni standard za BCA testove jer je:
- Lako dostupan i jeftin
- Visoko rastvorljiv
- Stabilan u rastvoru
- Dobro karakterizovan
Međutim, ako vaši uzorci sadrže dominantan protein koji se značajno razlikuje od BSA, razmotrite korišćenje tog proteina kao vašeg standarda za tačnije rezultate.
Koliko dugo je BCA reakcija stabilna?
Ljubičasta boja koja se razvija u BCA reakciji je stabilna nekoliko sati na sobnoj temperaturi i može se meriti u bilo kojem trenutku unutar tog perioda. Međutim, za najbolje rezultate preporučuje se merenje svih standarda i uzoraka otprilike u isto vreme nakon razvoja boje.
Mogu li ponovo koristiti standardnu krivu iz prethodnog eksperimenta?
Iako je tehnički moguće ponovo koristiti standardnu krivu, to se ne preporučuje za tačnu kvantifikaciju. Varijacije u reagensima, uslovima inkubacije i kalibraciji instrumenta mogu uticati na odnos između apsorbancije i koncentracije proteina. Za pouzdane rezultate, generišite svežu standardnu krivu svaki put kada izvršite test.
Reference
-
Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
-
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Uputstvo. Dostupno na: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
-
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
-
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
-
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1
Isprobajte naš BCA Absorbance Sample Volume Calculator danas!
Sada kada razumete principe iza BCA kvantifikacije proteina i izračunavanja volumena uzorka, isprobajte naš kalkulator da pojednostavite vaš laboratorijski rad. Jednostavno unesite vaša očitavanja apsorbancije i željenu masu uzorka da biste dobili trenutne, tačne izračune volumena uzorka.
Bilo da pripremate uzorke za western blotting, enzimske testove ili bilo koju drugu eksperimentalnu tehniku zasnovanu na proteinima, naš kalkulator će pomoći da se osiguraju dosledni i pouzdani rezultati. Uštedite vreme, smanjite greške i poboljšajte ponovljivost vaših eksperimenata sa BCA Absorbance Sample Volume Calculator.
Povezani alati
Otkrijte više alata koji bi mogli biti korisni za vaš radni proces