🛠️

Whiz Tools

बीसीए अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर प्रयोगशाला प्रोटोकॉल के लिए

बीसीए परीक्षण अवशोषण रीडिंग और इच्छित प्रोटीन मास के आधार पर सटीक नमूना मात्रा की गणना करें। पश्चिमी ब्लॉट और अन्य प्रयोगशाला अनुप्रयोगों में लगातार प्रोटीन लोडिंग के लिए आवश्यक।

बीसीए अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर

यह उपकरण बीसीए अवशोषण परिणामों और नमूना द्रव्यमान के आधार पर आवश्यक नमूना मात्रा की गणना करता है। प्रत्येक नमूने के लिए अवशोषण मान और नमूना द्रव्यमान दर्ज करें ताकि संबंधित नमूना मात्रा की गणना की जा सके।

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

नमूना इनपुट

नमूना 1

Copy
N/A μL

गणना सूत्र

नमूना मात्रा निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके गणना की जाती है:

नमूना मात्रा (μL) = नमूना द्रव्यमान (μg) / प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

വിവരണം

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर

परिचय

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर एक विशेष उपकरण है जिसे शोधकर्ताओं और प्रयोगशाला तकनीशियनों के लिए डिज़ाइन किया गया है ताकि वे BCA (बाइसिनचोनिक एसिड) परीक्षण परिणामों के आधार पर प्रयोगों के लिए उचित नमूना मात्रा को सटीक रूप से निर्धारित कर सकें। यह कैलकुलेटर आपके BCA परीक्षण से अवशोषण रीडिंग और आपकी इच्छित नमूना मात्रा को लेकर सटीक मात्रा की गणना करता है जो कि वेस्टर्न ब्लॉटिंग, एंजाइमेटिक परीक्षणों और अन्य प्रोटीन विश्लेषण तकनीकों में स्थिर प्रोटीन लोडिंग के लिए आवश्यक है।

BCA परीक्षण प्रोटीन की मात्रात्मकता के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले तरीकों में से एक है जो जैव रसायन और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोग होता है। अपने प्रोटीन नमूनों के अवशोषण को मापकर और उन्हें एक मानक वक्र से तुलना करके, आप उच्च सटीकता के साथ प्रोटीन सांद्रता निर्धारित कर सकते हैं। हमारा कैलकुलेटर इस प्रक्रिया को सरल बनाता है, अवशोषण रीडिंग को आपके प्रयोगों के लिए आवश्यक सटीक नमूना मात्रा में स्वचालित रूप से परिवर्तित करता है।

BCA परीक्षण और नमूना मात्रा गणना को समझना

BCA परीक्षण क्या है?

बाइसिनचोनिक एसिड (BCA) परीक्षण एक जैव रासायनिक परीक्षण है जो किसी समाधान में प्रोटीन की कुल सांद्रता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस परीक्षण का सिद्धांत अल्कलाइन परिस्थितियों में Cu²⁺-प्रोटीन जटिल के निर्माण पर आधारित है, जिसके बाद Cu²⁺ का Cu¹⁺ में कमी होती है। कमी की मात्रा प्रोटीन की उपस्थिति के समानुपाती होती है। BCA अल्कलाइन वातावरण में Cu¹⁺ के साथ एक बैंगनी रंग का जटिल बनाता है, जो प्रोटीन की कमी की निगरानी करने का आधार प्रदान करता है।

बैंगनी रंग की तीव्रता प्रोटीन की सांद्रता के साथ समानुपाती रूप से बढ़ती है, जिसे लगभग 562 nm पर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है। अवशोषण रीडिंग को मानक वक्र से तुलना करके अज्ञात नमूनों में प्रोटीन की सांद्रता निर्धारित की जाती है।

नमूना मात्रा गणना का सूत्र

BCA अवशोषण परिणामों से नमूना मात्रा की गणना के लिए मूलभूत सूत्र है:

नमूना मात्रा (μL)=नमूना द्रव्यमान (μg)प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)\text{नमूना मात्रा (μL)} = \frac{\text{नमूना द्रव्यमान (μg)}}{\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)}}

जहाँ:

  • नमूना मात्रा आवश्यक नमूना की मात्रा है (माइक्रोलिटर्स में, μL)
  • नमूना द्रव्यमान उपयोग के लिए प्रोटीन की इच्छित मात्रा है (माइक्रोग्राम में, μg)
  • प्रोटीन सांद्रता BCA अवशोषण रीडिंग से प्राप्त होती है (μg/μL में)

प्रोटीन सांद्रता को अवशोषण रीडिंग से मानक वक्र समीकरण का उपयोग करके गणना की जाती है:

प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)=Slope×अवशोषण+Intercept\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)} = \text{Slope} \times \text{अवशोषण} + \text{Intercept}

एक मानक BCA परीक्षण के लिए, सामान्य ढलान लगभग 2.0 है, और अवरोध अक्सर शून्य के करीब होता है, हालांकि ये मान आपके विशिष्ट परीक्षण की परिस्थितियों और मानक वक्र के आधार पर भिन्न हो सकते हैं।

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर का उपयोग कैसे करें

हमारा कैलकुलेटर BCA परीक्षण परिणामों से नमूना मात्रा निर्धारित करने की प्रक्रिया को सरल बनाता है। सटीक गणनाएँ प्राप्त करने के लिए इन चरणों का पालन करें:

  1. नमूना जानकारी दर्ज करें:

    • अपने नमूने का नाम प्रदान करें (वैकल्पिक लेकिन कई नमूनों को ट्रैक करने के लिए सहायक)
    • अपने स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से BCA अवशोषण रीडिंग दर्ज करें
    • अपनी इच्छित नमूना द्रव्यमान (आपके उपयोग के लिए प्रोटीन की मात्रा μg में)

  2. मानक वक्र प्रकार चुनें:

    • मानक (डिफ़ॉल्ट): सामान्य BCA मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करता है
    • संवर्धित: संवर्धित संवेदनशीलता प्रोटोकॉल के लिए
    • सूक्ष्म: माइक्रोप्लेट प्रोटोकॉल के लिए
    • कस्टम: आपको अपने स्वयं के ढलान और अवरोध मान दर्ज करने की अनुमति देता है

  3. परिणाम देखें:

    • कैलकुलेटर तुरंत माइक्रोलिटर्स में आवश्यक नमूना मात्रा प्रदर्शित करेगा
    • परिणामों को आसान संदर्भ के लिए एक सारांश तालिका में प्रस्तुत किया गया है
    • कई नमूनों के लिए, आप अधिक प्रविष्टियाँ जोड़ सकते हैं और परिणामों की तुलना कर सकते हैं

  4. परिणामों को कॉपी या निर्यात करें:

    • प्रयोगशाला नोटबुक या अन्य अनुप्रयोगों में परिणामों को स्थानांतरित करने के लिए कॉपी बटन का उपयोग करें
    • सभी गणनाएँ भविष्य के संदर्भ के लिए सहेजी जा सकती हैं

चरण-दर-चरण उदाहरण

आइए एक व्यावहारिक उदाहरण के माध्यम से चलते हैं:

  1. आपने एक BCA परीक्षण किया है और अपने प्रोटीन नमूने के लिए 0.75 का अवशोषण रीडिंग प्राप्त किया है।
  2. आप अपने वेस्टर्न ब्लॉट के लिए 20 μg प्रोटीन लोड करना चाहते हैं।
  3. मानक वक्र (ढलान = 2.0, अवरोध = 0) का उपयोग करते हुए:
    • प्रोटीन सांद्रता = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • आवश्यक नमूना मात्रा = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

इसका मतलब है कि आपको 20 μg प्रोटीन प्राप्त करने के लिए अपने नमूने का 13.33 μL लोड करना चाहिए।

परिणामों को समझना

कैलकुलेटर कई महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करता है:

  1. प्रोटीन सांद्रता: यह आपके अवशोषण रीडिंग से चयनित मानक वक्र का उपयोग करके गणना की जाती है। यह आपके नमूने में प्रति इकाई मात्रा में प्रोटीन की मात्रा (μg/μL) का प्रतिनिधित्व करती है।

  2. नमूना मात्रा: यह आपके नमूने की मात्रा है जिसमें आपकी इच्छित प्रोटीन की मात्रा होती है। यह वह मान है जिसका आप अपने प्रयोगों की तैयारी करते समय उपयोग करेंगे।

  3. चेतावनियाँ और सिफारिशें: कैलकुलेटर निम्नलिखित के लिए चेतावनियाँ प्रदान कर सकता है:

    • बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग (>3.0) जो परीक्षण की रैखिक सीमा के बाहर हो सकती है
    • बहुत कम अवशोषण रीडिंग (<0.1) जो पहचान सीमा के निकट हो सकती है
    • गणना की गई मात्रा जो अव्यावहारिक रूप से बड़ी (>1000 μL) या छोटी (<1 μL) हो

अनुप्रयोग और उपयोग के मामले

वेस्टर्न ब्लॉट नमूना तैयारी

इस कैलकुलेटर का सबसे सामान्य अनुप्रयोग वेस्टर्न ब्लॉटिंग के लिए नमूनों की तैयारी है। सुसंगत प्रोटीन लोडिंग विश्वसनीय वेस्टर्न ब्लॉट परिणामों के लिए महत्वपूर्ण है, और यह कैलकुलेटर सुनिश्चित करता है कि आप प्रत्येक नमूने के लिए समान मात्रा में प्रोटीन लोड करें, भले ही उनकी सांद्रता भिन्न हो।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. अपने सभी प्रोटीन नमूनों पर BCA परीक्षण करें
  2. लोड करने के लिए एक सुसंगत प्रोटीन मात्रा तय करें (आम तौर पर 10-50 μg)
  3. प्रत्येक नमूने के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करने के लिए कैलकुलेटर का उपयोग करें
  4. नमूना बफर और कमी करने वाले एजेंट की उचित मात्रा जोड़ें
  5. अपने जेल पर गणना की गई मात्रा लोड करें

एंजाइमेटिक परीक्षण

एंजाइमेटिक परीक्षणों के लिए, अक्सर एक विशिष्ट मात्रा में प्रोटीन का उपयोग करना आवश्यक होता है ताकि विभिन्न नमूनों या प्रयोगों के बीच प्रतिक्रिया की स्थितियों को मानकीकृत किया जा सके।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. BCA परीक्षण का उपयोग करके प्रोटीन सांद्रता निर्धारित करें
  2. अपनी इच्छित प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें
  3. इस मात्रा को अपनी प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ें
  4. अपने एंजाइमेटिक परीक्षण के साथ आगे बढ़ें

इम्यूनोप्रेसिपिटेशन प्रयोग

इम्यूनोप्रेसिपिटेशन (IP) प्रयोगों में, समान मात्रा में प्रोटीन के साथ शुरू करना परिणामों की तुलना के लिए महत्वपूर्ण है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. सेल या ऊतक लिसेट के प्रोटीन सांद्रता को BCA परीक्षण का उपयोग करके मापें
  2. समान प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें (आम तौर पर 500-1000 μg)
  3. सभी नमूनों को लिसेट बफर के साथ समान मात्रा में समायोजित करें
  4. एंटीबॉडी इन्क्यूबेशन और प्रीसीपिटेशन के साथ आगे बढ़ें

प्रोटीन शुद्धिकरण

प्रोटीन शुद्धिकरण के दौरान, विभिन्न चरणों में प्रोटीन सांद्रता को ट्रैक करना अक्सर आवश्यक होता है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

  1. शुद्धिकरण के दौरान फ़्रैक्शन एकत्र करें
  2. चयनित फ़्रैक्शन पर BCA परीक्षण करें
  3. प्रोटीन सांद्रता और कुल प्रोटीन मात्रा निर्धारित करें
  4. आगे के अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करें

उन्नत विशेषताएँ और विचार

कस्टम मानक वक्र

हालांकि कैलकुलेटर मानक BCA परीक्षणों के लिए डिफ़ॉल्ट पैरामीटर प्रदान करता है, आप अपने स्वयं के मानक वक्र उत्पन्न करने के लिए कस्टम मान भी दर्ज कर सकते हैं। यह विशेष रूप से तब उपयोगी होता है जब:

  • गैर-मानक प्रोटीन नमूनों के साथ काम कर रहे हों
  • संशोधित BCA प्रोटोकॉल का उपयोग कर रहे हों
  • ऐसे पदार्थों की उपस्थिति में काम कर रहे हों जो परीक्षण में हस्तक्षेप कर सकते हैं

कस्टम मानक वक्र का उपयोग करने के लिए:

  1. मानक वक्र विकल्पों में "कस्टम" चुनें
  2. अपने ढलान और अवरोध मान दर्ज करें
  3. कैलकुलेटर इन मानों का उपयोग सभी आगामी गणनाओं के लिए करेगा

कई नमूनों को संभालना

कैलकुलेटर आपको कई नमूनों को जोड़ने और एक साथ उनकी मात्रा की गणना करने की अनुमति देता है। यह विशेष रूप से तब उपयोगी होता है जब प्रयोगों के लिए समान प्रोटीन लोडिंग की आवश्यकता होती है।

बैच प्रोसेसिंग के लाभ:

  • एक बार में सभी मात्रा की गणना करके समय बचाएँ
  • सभी नमूनों के बीच सुसंगति सुनिश्चित करें
  • नमूनों के बीच प्रोटीन सांद्रता की तुलना करना आसान
  • आउटलेयर या संभावित माप त्रुटियों की पहचान करें

किनारे के मामलों से निपटना

बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग

यदि आपकी अवशोषण रीडिंग 2.0 से ऊपर है, तो यह BCA परीक्षण की रैखिक सीमा के बाहर हो सकती है। ऐसे मामलों में:

  1. अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण को दोबारा करें
  2. वैकल्पिक रूप से, कैलकुलेटर की चेतावनी प्रणाली का उपयोग करें, जो संभावित समस्याग्रस्त रीडिंग को चिह्नित करेगी

बहुत कम अवशोषण रीडिंग

0.1 से कम अवशोषण रीडिंग के लिए, आप परीक्षण की पहचान सीमा के निकट हो सकते हैं, जो सटीकता को प्रभावित कर सकती है। विचार करें:

  1. यदि संभव हो तो अपने नमूने को संकेंद्रित करें
  2. अधिक संवेदनशील प्रोटीन मात्रात्मकता विधि का उपयोग करें
  3. अपने प्रयोगात्मक डिज़ाइन को कम प्रोटीन मात्रा को समायोजित करने के लिए समायोजित करें

अव्यावहारिक रूप से बड़ी गणना की गई मात्रा

यदि कैलकुलेटर एक मात्रा दिखाता है जो आपके अनुप्रयोग के लिए बहुत बड़ी है:

  1. अपने प्रोटीन नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें
  2. यदि आपका प्रयोग अनुमति देता है तो अपनी इच्छित प्रोटीन मात्रा को नीचे की ओर समायोजित करें
  3. अधिकतम व्यावहारिक मात्रा का उपयोग करें और नोट करें कि वास्तव में उपयोग की गई प्रोटीन मात्रा क्या है

प्रोटीन मात्रात्मकता और BCA परीक्षण का इतिहास

प्रोटीन की सटीक मात्रात्मकता जैव रसायन और आणविक जीवविज्ञान में एक मौलिक आवश्यकता रही है जब से ये क्षेत्र उभरे हैं। प्रारंभिक विधियाँ नाइट्रोजन सामग्री के निर्धारण पर निर्भर थीं, जो समय लेने वाली और विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती थी।

प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों का विकास

  1. केजेल्डहल विधि (1883): प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे प्रारंभिक विधियों में से एक, जो नाइट्रोजन सामग्री को मापने पर आधारित है।

  2. बायुरेट परीक्षण (1900 के प्रारंभ): यह विधि पेप्टाइड बंधनों और अल्कलाइन समाधान में तांबे के आयनों के बीच प्रतिक्रिया पर निर्भर करती है, जो एक बैंगनी रंग उत्पन्न करती है।

  3. लोवरी परीक्षण (1951): ओलिवर लोवरी द्वारा विकसित, इस विधि ने बायुरेट प्रतिक्रिया को फोलिन-सीओकैल्ट्यू रेजेंट के साथ संयोजित किया, संवेदनशीलता बढ़ाई।

  4. ब्रैडफोर्ड परीक्षण (1976): मैरियन ब्रैडफोर्ड ने इस विधि को कोमासी ब्रिलियंट ब्लू G-250 डाई का उपयोग करके विकसित किया, जो प्रोटीन के साथ बंधती है और अवशोषण अधिकतम को स्थानांतरित करती है।

  5. BCA परीक्षण (1985): इसे पियर्स केमिकल कंपनी के पॉल स्मिथ और सहयोगियों द्वारा विकसित किया गया, इस विधि ने बायुरेट प्रतिक्रिया को BCA पहचान के साथ संयोजित किया, बेहतर संवेदनशीलता और डिटर्जेंट के साथ संगतता प्रदान की।

BCA परीक्षण का विकास

BCA परीक्षण का पहला वर्णन 1985 में स्मिथ एट अल. द्वारा "बाइसिनचोनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप" शीर्षक वाली एक पेपर में किया गया था। इसे मौजूदा विधियों की सीमाओं को संबोधित करने के लिए विकसित किया गया था, विशेष रूप से प्रोटीन निष्कर्षण और शुद्धिकरण में सामान्य रूप से उपयोग किए जाने वाले विभिन्न रसायनों से हस्तक्षेप।

मुख्य नवाचार यह था कि प्रोटीन द्वारा Cu²⁺ के कमी के कारण उत्पन्न Cu¹⁺ के पहचान के लिए बाइसिनचोनिक एसिड का उपयोग किया गया, जो एक बैंगनी रंग का जटिल बनाता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जा सकता है। इसने कई लाभ प्रदान किए:

  1. बायुरेट विधि की तुलना में उच्च संवेदनशीलता
  2. लोवरी विधि की तुलना में विभिन्न रसायनों से कम संवेदनशीलता
  3. ब्रैडफोर्ड परीक्षण की तुलना में डिटर्जेंट के साथ बेहतर संगतता
  4. कम रसायनों और चरणों के साथ सरल प्रोटोकॉल

इसके परिचय के बाद से, BCA परीक्षण जैव रसायन और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधियों में से एक बन गया है।

नमूना मात्रा की गणना के लिए कोड उदाहरण

एक्सेल सूत्र

1=IF(B2<=0,"त्रुटि: अमान्य अवशोषण",IF(C2<=0,"त्रुटि: अमान्य नमूना द्रव्यमान",C2/(2*B2)))
2
3' जहाँ:
4' B2 में अवशोषण रीडिंग होती है
5' C2 में μg में इच्छित नमूना द्रव्यमान होता है
6' सूत्र आवश्यक नमूना मात्रा μL में लौटाता है
7

पायथन कार्यान्वयन

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करें मानक वक्र का उपयोग करके।"""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """अवशोषण और इच्छित द्रव्यमान के आधार पर आवश्यक नमूना मात्रा की गणना करें।"""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# उदाहरण उपयोग
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"अवशोषण {absorbance} और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान {sample_mass} μg के लिए:")
31    print(f"प्रोटीन सांद्रता: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"आवश्यक नमूना मात्रा: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"त्रुटि: {e}")
35

आर कोड विश्लेषण के लिए

1# अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# नमूना मात्रा की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# उदाहरण उपयोग
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("अवशोषण %.2f और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान %.2f μg के लिए:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("प्रोटीन सांद्रता: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("आवश्यक नमूना मात्रा: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("त्रुटि: %s\n", e$message))
39})
40

जावास्क्रिप्ट कार्यान्वयन

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("नमूना द्रव्यमान सकारात्मक होना चाहिए");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// उदाहरण उपयोग
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`अवशोषण ${absorbance} और इच्छित प्रोटीन द्रव्यमान ${sampleMass} μg के लिए:`);
33  console.log(`प्रोटीन सांद्रता: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`आवश्यक नमूना मात्रा: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`त्रुटि: ${error.message}`);
37}
38

मानक वक्र दृश्यता

अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध आमतौर पर एक निश्चित सीमा के भीतर रैखिक होता है। नीचे BCA वक्र का एक दृश्य है:

BCA मानक वक्र प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए BCA परीक्षण में अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच रैखिक संबंध का दृश्य 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

अवशोषण (562 nm) प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)

मानक वक्र मानक नमूने

BCA मानक वक्र

अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के साथ तुलना

विभिन्न प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के विभिन्न लाभ और सीमाएँ होती हैं। यहाँ BCA परीक्षण की अन्य सामान्य विधियों के साथ तुलना की गई है:

विधिसंवेदनशीलता सीमालाभसीमाएँसर्वश्रेष्ठ के लिए
BCA परीक्षण5-2000 μg/mL• डिटर्जेंट के साथ संगत
• प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम
• स्थिर रंग विकास		• कमी करने वाले एजेंटों द्वारा हस्तक्षेप किया गया
• कुछ चेलेटिंग एजेंटों द्वारा प्रभावित		• सामान्य प्रोटीन मात्रात्मकता
• डिटर्जेंट युक्त नमूने
ब्रैडफोर्ड परीक्षण1-1500 μg/mL• त्वरित (2-5 मिनट)
• कुछ हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ		• उच्च प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता
• डिटर्जेंट के साथ असंगत		• त्वरित माप
• डिटर्जेंट-मुक्त नमूने
लोवरी विधि1-1500 μg/mL• अच्छी तरह से स्थापित
• अच्छी संवेदनशीलता		• कई हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ
• कई चरण		• ऐतिहासिक स्थिरता
• शुद्ध प्रोटीन नमूने
UV अवशोषण (280 nm)20-3000 μg/mL• गैर-विनाशकारी
• बहुत तेज़
• कोई रसायन आवश्यक नहीं		• न्यूक्लिक एसिड द्वारा प्रभावित
• शुद्ध नमूनों की आवश्यकता		• शुद्ध प्रोटीन समाधान
• शुद्धिकरण के दौरान त्वरित जांच
फ्लोरोमेट्रिक0.1-500 μg/mL• उच्चतम संवेदनशीलता
• व्यापक गतिशील रेंज		• महंगे रसायन
• फ्लोरोमीटर की आवश्यकता		• बहुत पतले नमूने
• सीमित नमूना मात्रा

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

BCA परीक्षण का उपयोग किस लिए किया जाता है?

BCA (बाइसिनचोनिक एसिड) परीक्षण मुख्य रूप से नमूने में प्रोटीन की कुल सांद्रता को मात्रात्मक रूप से निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इसका व्यापक उपयोग जैव रसायन, सेल जीवविज्ञान, और आणविक जीवविज्ञान में वेस्टर्न ब्लॉटिंग, एंजाइम परीक्षण, इम्यूनोप्रेसिपिटेशन, और प्रोटीन शुद्धिकरण जैसे अनुप्रयोगों के लिए किया जाता है।

BCA परीक्षण कितना सटीक है?

BCA परीक्षण आमतौर पर 5-10% के भीतर सटीक होता है जब सही तरीके से किया जाता है। इसकी सटीकता कई कारकों पर निर्भर करती है जिसमें मानक वक्र की गुणवत्ता, हस्तक्षेप करने वाले पदार्थों की अनुपस्थिति, और क्या अज्ञात प्रोटीन की संरचना मानक प्रोटीन के समान है।

BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ क्या हो सकते हैं?

कई पदार्थ BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप कर सकते हैं, जिनमें शामिल हैं:

  • कमी करने वाले एजेंट (DTT, β-मेर्काप्टोएथेनॉल, ग्लूटाथियोन)
  • चेलेटिंग एजेंट (EDTA, EGTA)
  • साधारण शर्करा की उच्च सांद्रता
  • लिपिड
  • कुछ डिटर्जेंट उच्च सांद्रता में
  • अमोनिया यौगिक

BCA और ब्रैडफोर्ड परीक्षणों में क्या अंतर है?

मुख्य अंतर हैं:

  • BCA परीक्षण डिटर्जेंट और सर्फेक्टेंट के साथ अधिक संगत है
  • ब्रैडफोर्ड परीक्षण अधिक तेज़ है (2-5 मिनट बनाम BCA के लिए 30+ मिनट)
  • BCA में प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम होती है
  • ब्रैडफोर्ड अधिक संवेदनशील होता है बेसिक अमीनो एसिड के प्रति
  • BCA कमी करने वाले एजेंटों से प्रभावित होता है, जबकि ब्रैडफोर्ड नहीं होता

यदि मेरी गणना की गई नमूना मात्रा बहुत बड़ी है तो मुझे क्या करना चाहिए?

यदि कैलकुलेटर एक बहुत बड़ी मात्रा दिखाता है, तो यह आमतौर पर आपके नमूने में प्रोटीन की कम सांद्रता का संकेत देता है। यह निम्नलिखित में से किसी के कारण हो सकता है:

  1. आपके मूल नमूने में वास्तव में कम प्रोटीन सामग्री
  2. तैयारी के दौरान प्रोटीन का नुकसान
  3. BCA परीक्षण प्रक्रिया में त्रुटियाँ
  4. अवशोषण रीडिंग में गलतियाँ

अपने नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें या अपनी प्रयोगात्मक डिज़ाइन को कम प्रोटीन मात्रा को समायोजित करने के लिए समायोजित करें।

क्या मैं इस कैलकुलेटर का उपयोग अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के लिए कर सकता हूँ?

यह कैलकुलेटर विशेष रूप से BCA परीक्षण परिणामों के लिए डिज़ाइन किया गया है। जबकि मूल सिद्धांत (सांद्रता को मात्रा में परिवर्तित करना) अन्य विधियों में लागू होता है, अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध विभिन्न परीक्षणों के बीच भिन्न होता है। अन्य विधियों जैसे ब्रैडफोर्ड या लोवरी के लिए, आपको विभिन्न मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करने की आवश्यकता होगी।

मैं रैखिक सीमा के बाहर अवशोषण वाले नमूनों को कैसे संभालूं?

रैखिक सीमा के बाहर (आम तौर पर >2.0) अवशोषण रीडिंग के लिए:

  1. अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण को दोबारा करें
  2. किसी अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधि का उपयोग करें
  3. उच्च सांद्रता मानकों को शामिल करने के लिए मानक वक्र को समायोजित करें

मुझे किस प्रोटीन को मानक के रूप में उपयोग करना चाहिए?

बोवाइन सीरम एल्बुमिन (BSA) BCA परीक्षणों के लिए सबसे सामान्य रूप से उपयोग किया जाने वाला मानक है क्योंकि यह:

  • आसानी से उपलब्ध और सस्ता है
  • अत्यधिक घुलनशील है
  • समाधान में स्थिर है
  • अच्छी तरह से वर्णित है

हालांकि, यदि आपके नमूनों में एक प्रमुख प्रोटीन है जो BSA से महत्वपूर्ण रूप से भिन्न है, तो अधिक सटीक परिणामों के लिए उस प्रोटीन का उपयोग मानक के रूप में करने पर विचार करें।

BCA प्रतिक्रिया कितनी देर तक स्थिर रहती है?

BCA प्रतिक्रिया में विकसित बैंगनी रंग कई घंटों तक कमरे के तापमान पर स्थिर रहता है और उस अवधि के भीतर कभी भी मापा जा सकता है। हालाँकि, सर्वोत्तम परिणामों के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि सभी मानकों और नमूनों को रंग विकास के बाद लगभग एक ही समय में मापा जाए।

क्या मैं पिछले प्रयोग से मानक वक्र का पुन: उपयोग कर सकता हूँ?

हालांकि तकनीकी रूप से मानक वक्र का पुन: उपयोग करना संभव है, यह सटीक मात्रात्मकता के लिए अनुशंसित नहीं है। रसायनों, इन्क्यूबेशन की परिस्थितियों, और उपकरणों के कैलिब्रेशन में भिन्नताएँ अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध को प्रभावित कर सकती हैं। विश्वसनीय परिणामों के लिए, प्रत्येक बार परीक्षण करने पर एक ताजा मानक वक्र उत्पन्न करें।

संदर्भ

  1. स्मिथ पीके, क्रोहन आरआई, हर्मनसन जीटी, आदि। "बाइसिनचोनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप।" एनालिटिकल बायोकैमिस्ट्री। 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. थर्मो साइंटिफिक। "पियर्स BCA प्रोटीन परीक्षण किट।" निर्देश। उपलब्ध है: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. वॉकर जेएम। "बाइसिनचोनिक एसिड (BCA) परीक्षण प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए।" इन: वॉकर जेएम, संपादित। प्रोटीन प्रोटोकॉल हैंडबुक। स्प्रिंगर; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. ओल्सन बीजे, मार्कवेल जे। "प्रोटीन सांद्रता के निर्धारण के लिए परीक्षण।" करंट प्रोटोकॉल्स इन प्रोटीन साइंस। 2007;अध्याय 3:यूनिट 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. नोबल जेई, बेली एमजे। "प्रोटीन की मात्रात्मकता।" मेथड्स इन एंजाइमोलॉजी। 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

आज ही हमारा BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर आज़माएँ!

अब जब आप BCA प्रोटीन मात्रात्मकता और नमूना मात्रा गणना के पीछे के सिद्धांतों को समझते हैं, तो हमारे कैलकुलेटर का प्रयास करें ताकि आप अपनी प्रयोगशाला के कार्यप्रवाह को सरल बना सकें। बस अपनी अवशोषण रीडिंग और इच्छित नमूना द्रव्यमान दर्ज करें और तात्कालिक, सटीक नमूना मात्रा गणनाएँ प्राप्त करें।

चाहे आप वेस्टर्न ब्लॉटिंग, एंजाइमेटिक परीक्षण, या किसी अन्य प्रोटीन आधारित प्रयोग के लिए नमूनों की तैयारी कर रहे हों, हमारा कैलकुलेटर सुसंगत और विश्वसनीय परिणाम सुनिश्चित करने में मदद करेगा। समय बचाएँ, त्रुटियों को कम करें, और अपने प्रयोगों की पुनरुत्पादकता में सुधार करें BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर के साथ।

🔗

ബന്ധപ്പെട്ട ഉപകരണങ്ങൾ

നിങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനത്തിന് ഉപയോഗപ്പെടുന്ന കൂടുതൽ ഉപകരണങ്ങൾ കണ്ടെത്തുക.

सिलिंड्रिकल, गोलाकार और आयताकार टैंक वॉल्यूम कैलकुलेटर

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

तरल कवरेज के लिए मात्रा से क्षेत्र कैलकुलेटर

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

ഹോൾ വോള്യം കാൽക്കുലേറ്റർ: സിലിണ്ട്രികവും ചതുരാകൃതിയുമായ ഖനനങ്ങൾ

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

హోల్ వాల్యూమ్ క్యాల్కులేటర్: సిలిండ్రికల్ ఎక్స్కవేషన్ వాల్యూమ్స్ కొలవండి

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

ਕਿਊਬਿਕ ਸੈੱਲ ਵਾਲਿਊਮ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ: ਕਿਨਾਰੇ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਤੋਂ ਵਾਲਿਊਮ ਲੱਭੋ

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

प्रयोगशाला समाधानों के लिए सरल पतला कारक कैलकुलेटर

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

砂量计算器：估算任何项目所需材料

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

രണ്ടു-ഫോട്ടോ ആബ്സോർപ്ഷൻ കോഫിഷ്യന്റ് കാൽക്കുലേറ്റർ

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക

मोलरिटी कैलकुलेटर: समाधान सांद्रता उपकरण

ഈ ഉപകരണം പരീക്ഷിക്കുക