बीसीए शोषण नमुना मात्रा गणक प्रयोगशाळा प्रोटोकॉलसाठी

बीसीए चाचणी शोषण वाचन आणि इच्छित प्रोटीन मासावर आधारित अचूक नमुना मात्रा गणना करा. वेस्टर्न ब्लॉट्स आणि इतर प्रयोगशाळा अनुप्रयोगांमध्ये सुसंगत प्रोटीन लोडिंगसाठी आवश्यक.

BCA शोषण नमुना व्हॉल्यूम गणक

हे साधन BCA शोषण परिणाम आणि नमुना वस्तुमानावर आधारित आवश्यक नमुना व्हॉल्यूम गणना करते. प्रत्येक नमुन्यासाठी शोषण मूल्य आणि नमुना वस्तुमान प्रविष्ट करा आणि संबंधित नमुना व्हॉल्यूम गणना करा.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

नमुना इनपुट

नमुना 1

नमुनाचे नाव

BCA शोषण*

नमुनाचे वस्तुमान (μg)*

नमुनाचा व्हॉल्यूम

Copy

N/A μL

गणना सूत्र

नमुनाचा व्हॉल्यूम खालील सूत्राचा वापर करून गणना केला जातो:

नमुनाचा व्हॉल्यूम (μL) = नमुनाचे वस्तुमान (μg) / प्रोटीन एकाग्रता (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

साहित्यिकरण

BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक

परिचय

BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक एक विशेष उपकरण आहे जो संशोधक आणि प्रयोगशाळा तंत्रज्ञांना BCA (बिसिन्चोनिनिक आम्ल) चाचणी परिणामांवर आधारित प्रयोगांसाठी योग्य नमुना आयतन अचूकपणे निर्धारित करण्यात मदत करण्यासाठी डिझाइन केलेले आहे. हा गणक आपल्या BCA चाचणीच्या अवशोषण वाचनांचा आणि आपल्या इच्छित नमुना वस्तुमानाचा वापर करून प्रयोगांसाठी सुसंगत प्रोटीन लोडिंगसाठी आवश्यक असलेले अचूक आयतन गणना करतो, जसे की वेस्टर्न ब्लॉटिंग, एंजाइमेटिक चाचण्या, आणि इतर प्रोटीन विश्लेषण तंत्रे.

BCA चाचणी जैव रसायनशास्त्र आणि आण्विक जीवशास्त्र प्रयोगशाळांमध्ये प्रोटीन मात्रात्मकतेसाठी सर्वाधिक वापरली जाणारी पद्धत आहे. आपल्या प्रोटीन नमुन्यांच्या अवशोषणाचे मोजमाप करून आणि त्यांना मानक वक्राशी तुलना करून, आपण उच्च अचूकतेसह प्रोटीन एकाग्रता निर्धारित करू शकता. आमचा गणक या प्रक्रियेला सुलभ करतो कारण तो स्वयंचलितपणे अवशोषण वाचनांना आपल्या प्रयोगांसाठी आवश्यक असलेल्या अचूक नमुना आयतांमध्ये रूपांतरित करतो.

BCA चाचणी आणि नमुना आयतन गणनेचे समजून घेणे

BCA चाचणी म्हणजे काय?

बिसिन्चोनिनिक आम्ल (BCA) चाचणी ही एका द्रव्यात प्रोटीनच्या एकूण एकाग्रतेचा निर्धारण करण्यासाठीची एक जैव रासायनिक चाचणी आहे. या चाचणीचा तत्त्व म्हणजे अल्कलाइन परिस्थितीत Cu²⁺-प्रोटीन संकुलाचा निर्माण होणे, त्यानंतर Cu²⁺ चा Cu¹⁺ मध्ये कमी होणे. कमी होणारी मात्रा प्रोटीनच्या उपस्थितीशी प्रमाणित आहे. BCA अल्कलाइन वातावरणात Cu¹⁺ सह एक जांभळा रंगाचा संकुल तयार करते, जो प्रोटीनच्या कमी होण्याचे निरीक्षण करण्यासाठी आधार प्रदान करतो.

जांभळ्या रंगाची तीव्रता प्रोटीन एकाग्रतेसह प्रमाणानुसार वाढते, ज्याला सुमारे 562 नॅनामीटरवर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वापरून मोजले जाऊ शकते. अवशोषण वाचनांना मानक वक्राशी तुलना करून अज्ञात नमुन्यांमध्ये प्रोटीन एकाग्रता निर्धारित केली जाते.

नमुना आयतन गणनेचा सूत्र

BCA अवशोषण परिणामांमधून नमुना आयतन गणण्यासाठी मूलभूत सूत्र आहे:

$\text{नमुना आयतन (μL)} = \frac{\text{नमुना वस्तुमान (μg)}}{\text{प्रोटीन एकाग्रता (μg/μL)}}$

जिथे:

नमुना आयतन म्हणजे आवश्यक नमुन्याचे आयतन (मायक्रोलिटर, μL मध्ये)
नमुना वस्तुमान म्हणजे वापरायचे प्रोटीनचे इच्छित प्रमाण (मायक्रोग्राम, μg मध्ये)
प्रोटीन एकाग्रता BCA अवशोषण वाचनातून प्राप्त होते (μg/μL मध्ये)

प्रोटीन एकाग्रता अवशोषण वाचनाच्या आधारे मानक वक्र समीकरणाचा वापर करून गणली जाते:

$\text{प्रोटीन एकाग्रता (μg/μL)} = \text{स्लोप} \times \text{अवशोषण} + \text{इंटरसेप्ट}$

एक मानक BCA चाचणीसाठी, सामान्य स्लोप सुमारे 2.0 आहे, आणि इंटरसेप्ट सहसा शून्याच्या जवळ असतो, तरीही या मूल्यांमध्ये आपल्या विशिष्ट चाचणी परिस्थिती आणि मानक वक्रावर आधारित बदल होऊ शकतो.

BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक कसे वापरावे

आमचा गणक BCA चाचणी परिणामांमधून नमुना आयतांचा निर्धारण करण्याची प्रक्रिया सुलभ करतो. अचूक गणनांसाठी खालील चरणांचे पालन करा:

नमुना माहिती प्रविष्ट करा:
- आपल्या नमुन्याचे नाव द्या (पर्यायी पण अनेक नमुन्यांचे ट्रॅक ठेवण्यासाठी उपयुक्त)
- आपल्या स्पेक्ट्रोफोटोमीटरमधून BCA अवशोषण वाचन प्रविष्ट करा
- आपले इच्छित नमुना वस्तुमान प्रविष्ट करा (μg मध्ये प्रोटीन वापरण्याची मात्रा)
मानक वक्र प्रकार निवडा:
- मानक (डिफॉल्ट): सामान्य BCA मानक वक्र पॅरामिटर्स वापरते
- वाढीव: वाढीव संवेदनशीलता प्रोटोकॉलसाठी
- मायक्रो: मायक्रोप्लेट प्रोटोकॉलसाठी
- कस्टम: आपले स्वतःचे स्लोप आणि इंटरसेप्ट मूल्ये प्रविष्ट करण्याची परवानगी देते
परिणाम पहा:
- गणक त्वरित मायक्रोलिटरमध्ये आवश्यक नमुना आयतन प्रदर्शित करेल
- सोपी संदर्भासाठी परिणामांचे सारांश तक्त्यात देखील सादर केले जातात
- अनेक नमुन्यांसाठी, आपण अधिक नोंदी जोडू शकता आणि परिणामांची तुलना करू शकता
परिणाम कॉपी किंवा निर्यात करा:
- आपल्या प्रयोगशाळेच्या नोटबुक किंवा इतर अनुप्रयोगांमध्ये परिणाम हस्तांतरित करण्यासाठी कॉपी बटण वापरा
- सर्व गणनांचा भविष्यकाळात संदर्भासाठी जतन केला जाऊ शकतो

चरण-दर-चरण उदाहरण

चला एक व्यावहारिक उदाहरण पाहूया:

आपण BCA चाचणी केली आहे आणि आपल्या प्रोटीन नमुन्यासाठी 0.75 चा अवशोषण वाचन प्राप्त केला आहे.
आपण आपल्या वेस्टर्न ब्लॉटसाठी 20 μg प्रोटीन लोड करायचे आहे.
मानक वक्र (स्लोप = 2.0, इंटरसेप्ट = 0) चा वापर करून:
- प्रोटीन एकाग्रता = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- आवश्यक नमुना आयतन = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

याचा अर्थ आपण 20 μg प्रोटीन मिळवण्यासाठी आपल्या नमुन्याचे 13.33 μL लोड करणे आवश्यक आहे.

परिणामांचे समजून घेणे

गणक काही महत्त्वाची माहिती प्रदान करतो:

प्रोटीन एकाग्रता: हे आपल्या अवशोषण वाचनाच्या आधारे निवडक मानक वक्राचा वापर करून गणले जाते. हे आपल्या नमुन्यातील प्रोटीनच्या प्रमाणाचे प्रतिनिधित्व करते (μg/μL).
नमुना आयतन: हे आपल्या नमुन्याचे आयतन आहे ज्यामध्ये आपले इच्छित प्रोटीन प्रमाण समाविष्ट आहे. हे मूल्य आपण आपल्या प्रयोगांची तयारी करताना वापरणार आहात.
चेतावणी आणि शिफारसी: गणक खालील बाबींसाठी चेतावणी देऊ शकतो:
- अत्यधिक उच्च अवशोषण वाचन (>3.0) जे चाचणीच्या रेखीय श्रेणीच्या बाहेर असू शकते
- अत्यंत कमी अवशोषण वाचन (<0.1) जे शोधण्याच्या मर्यादेच्या जवळ असू शकते
- गणलेले आयतन जे अप्रत्यक्षपणे मोठे (>1000 μL) किंवा लहान (<1 μL) आहे

अनुप्रयोग आणि वापर प्रकरणे

वेस्टर्न ब्लॉट नमुना तयारी

या गणकाचा एक सामान्य अनुप्रयोग म्हणजे वेस्टर्न ब्लॉटिंगसाठी नमुन्यांची तयारी करणे. सुसंगत प्रोटीन लोडिंग विश्वसनीय वेस्टर्न ब्लॉट परिणामांसाठी अत्यंत महत्त्वाचे आहे, आणि हा गणक सुनिश्चित करतो की आपण प्रत्येक नमुन्यासाठी समान प्रमाणातील प्रोटीन लोड करता, जरी त्यांच्या एकाग्रता वेगवेगळ्या असल्या तरी.

उदाहरण कार्यप्रवाह:

आपल्या सर्व प्रोटीन नमुन्यांवर BCA चाचणी करा
लोड करण्यासाठी एक सुसंगत प्रोटीन प्रमाण ठरवा (सामान्यतः 10-50 μg)
प्रत्येक नमुन्यासाठी आवश्यक आयतन ठरवण्यासाठी गणक वापरा
नमुना बफर आणि कमी करणारे एजंट यांचे योग्य आयतन जोडा
आपल्या जेलीवर गणलेले आयतन लोड करा

एंजाइमेटिक चाचण्या

एंजाइमेटिक चाचण्यांसाठी, सामान्यतः प्रोटीनचे विशिष्ट प्रमाण वापरणे आवश्यक असते जे विविध नमुन्यांमध्ये किंवा प्रयोगांमध्ये प्रतिक्रिया परिस्थिती मानक करण्यासाठी.

उदाहरण कार्यप्रवाह:

BCA चाचणीद्वारे प्रोटीन एकाग्रता निर्धारित करा
आपल्या इच्छित प्रोटीन प्रमाण प्राप्त करण्यासाठी आवश्यक आयतन गणना करा
या आयतनाला आपल्या प्रतिक्रिया मिश्रणात जोडा
आपल्या एंजाइमेटिक चाचणीसह पुढे जा

इम्युनोप्रेसिपिटेशन प्रयोग

इम्युनोप्रेसिपिटेशन (IP) प्रयोगांमध्ये, समान प्रमाणातील प्रोटीनसह प्रारंभ करणे महत्त्वाचे आहे जेणेकरून विविध परिस्थितींमध्ये परिणामांची तुलना करता येईल.

उदाहरण कार्यप्रवाह:

BCA चाचणीद्वारे सेल किंवा ऊतक लायसेट्सच्या प्रोटीन एकाग्रतेची मोजमाप करा
समान प्रोटीन प्रमाण प्राप्त करण्यासाठी समान आयतन गणना करा (सामान्यतः 500-1000 μg)
सर्व नमुन्यांना लायसिस बफरसह समान आयतनात समायोजित करा
अँटीबॉडी इन्क्यूबेशन आणि प्रीपिटेशनसह पुढे जा

प्रोटीन शुद्धीकरण

प्रोटीन शुद्धीकरणादरम्यान, विविध टप्प्यांवर प्रोटीन एकाग्रतेचे ट्रॅक ठेवणे आवश्यक असते.

उदाहरण कार्यप्रवाह:

शुद्धीकरणादरम्यान फ्रॅक्शन्स गोळा करा
निवडक फ्रॅक्शन्सवर BCA चाचणी करा
प्रोटीन एकाग्रता आणि एकूण प्रोटीन प्रमाण निर्धारित करा
पुढील अनुप्रयोगांसाठी आवश्यक आयतांचा निर्धारण करा

प्रगत वैशिष्ट्ये आणि विचार

कस्टम मानक वक्र

गणक मानक BCA चाचण्यांसाठी डिफॉल्ट पॅरामिटर्स प्रदान करतो, परंतु आपण आपल्या स्वतःच्या मानक वक्र तयार केल्यास कस्टम मूल्ये प्रविष्ट करू शकता. हे विशेषतः उपयुक्त आहे जेव्हा:

गैर-मानक प्रोटीन नमुन्यांसह काम करताना
सुधारित BCA प्रोटोकॉल वापरताना
चाचणीमध्ये हस्तक्षेप करणाऱ्या पदार्थांच्या उपस्थितीत काम करताना

कस्टम मानक वक्र वापरण्यासाठी:

मानक वक्र पर्यायांमधून "कस्टम" निवडा
आपले स्लोप आणि इंटरसेप्ट मूल्ये प्रविष्ट करा
गणक या मूल्यांचा वापर सर्व पुढील गणनांसाठी करेल

अनेक नमुन्यांचे हाताळणे

गणक आपल्याला अनेक नमुन्यांची भर घालण्याची आणि एकाच वेळी त्यांचे आयतन गणना करण्याची परवानगी देतो. हे विशेषतः उपयुक्त आहे जेव्हा प्रयोगांमध्ये समान प्रोटीन लोडिंग आवश्यक असते.

बॅच प्रोसेसिंगचे फायदे:

सर्व आयतांचा एकाच वेळी गणना करून वेळ वाचवा
आपल्या सर्व नमुन्यांमध्ये सुसंगती सुनिश्चित करा
आपल्या नमुन्यांमधील प्रोटीन एकाग्रतेची तुलना करा
बाहेरच्या किंवा संभाव्य मोजमाप त्रुटी ओळखा

कडव्या प्रकरणांवर मात करणे

अत्यधिक उच्च अवशोषण वाचन

जर आपले अवशोषण वाचन 2.0 च्या वर असेल, तर ते BCA चाचणीच्या रेखीय श्रेणीच्या बाहेर असू शकते. अशा परिस्थितीत:

आपल्या नमुन्याचे विरघळून पुन्हा BCA चाचणी करा
पर्यायीपणे, गणकाच्या चेतावणी प्रणालीचा वापर करा, जी संभाव्य समस्याग्रस्त वाचनांना झळ देईल

अत्यंत कमी अवशोषण वाचन

अवशोषण वाचन 0.1 च्या खाली असल्यास, आपण चाचणीच्या शोधण्याच्या मर्यादेच्या जवळ असू शकता, जे अचूकतेवर परिणाम करू शकते. विचार करा:

शक्य असल्यास आपल्या नमुन्याचे संकुचन
अधिक संवेदनशील प्रोटीन मात्रात्मकतेची पद्धत वापरणे
कमी प्रोटीन प्रमाण समायोजित करण्यासाठी आपल्या प्रयोगात्मक डिझाइनला समायोजित करणे

अप्रत्यक्षपणे मोठे गणलेले आयतन

जर गणक आपल्याला आपल्या अनुप्रयोगासाठी खूप मोठे आयतन सुचवित असेल:

आपल्या प्रोटीन नमुन्याचे संकुचन विचारात घ्या
आपल्या प्रयोगास परवानगी असल्यास आपल्या इच्छित प्रोटीन प्रमाणाला खाली समायोजित करा
जास्तीत जास्त व्यावहारिक आयतन वापरा आणि वापरलेल्या वास्तविक प्रोटीन प्रमाणाची नोंद ठेवा

प्रोटीन मात्रात्मकतेचा इतिहास आणि BCA चाचणी

प्रोटीनची अचूक मात्रात्मकता जैव रसायनशास्त्र आणि आण्विक जीवशास्त्रात एक मूलभूत आवश्यकता आहे. प्रारंभिक पद्धतींमध्ये नायट्रोजन सामग्रीचे निर्धारण करणे समाविष्ट होते, जे वेळ घेणारे आणि विशेष उपकरणाची आवश्यकता असते.

प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींचा विकास

Kjeldahl पद्धत (1883): प्रोटीन मात्रात्मकतेसाठी एक प्राचीन पद्धत, जी नायट्रोजन सामग्री मोजण्यावर आधारित आहे.
Biuret चाचणी (1900 च्या सुरुवातीस): ही पद्धत पेप्टाइड बंध आणि अल्कलाइन समाधानामध्ये तांबे आयनांमधील प्रतिक्रिया यावर आधारित आहे, ज्यामुळे जांभळा रंग तयार होतो.
Lowry चाचणी (1951): ओलिव्हर लोवरीने विकसित केलेली, ही पद्धत Biuret प्रतिक्रियेला Folin-Ciocalteu अभिकारकासह एकत्रित करते, संवेदनशीलता वाढवते.
Bradford चाचणी (1976): मॅरियन ब्रॅडफोर्डने Coomassie Brilliant Blue G-250 रंगाचा वापर करून विकसित केलेली ही पद्धत प्रोटीनसह बंधित होते आणि अवशोषणाच्या अधिकतम बदलते.
BCA चाचणी (1985): पॉल स्मिथ आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी पीयर्स केमिकल कंपनीमध्ये विकसित केलेली ही पद्धत विद्यमान पद्धतींच्या मर्यादांना संबोधित करण्यासाठी डिझाइन केली गेली, विशेषतः प्रोटीन निष्कर्षण आणि शुद्धीकरणामध्ये सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या विविध रसायनांमधून हस्तक्षेप.

BCA चाचणीचा विकास

BCA चाचणीचा पहिला उल्लेख 1985 च्या स्मिथ इत्यादींच्या "बिसिन्चोनिनिक आम्ल वापरून प्रोटीन मोजणे" शीर्षकाच्या कागदात झाला. हे विद्यमान पद्धतींच्या मर्यादांना संबोधित करण्यासाठी विकसित केले गेले, विशेषतः विविध रसायनांमुळे होणारे हस्तक्षेप.

मुख्य नवकल्पना म्हणजे प्रोटीन-आधारित कमी होणाऱ्या Cu²⁺ च्या कमी होण्यामुळे निर्माण होणाऱ्या Cu¹⁺ आयनांचे BCA वापरून निरीक्षण करणे, जे जांभळा रंगाच्या संकुलामध्ये रूपांतरित होते, जे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिकद्वारे मोजले जाऊ शकते. यामुळे अनेक फायदे मिळाले:

Biuret पद्धतीपेक्षा उच्च संवेदनशीलता
Lowry पद्धतीपेक्षा कमी हस्तक्षेप
Bradford चाचणीपेक्षा डिटर्जंटसह चांगली सुसंगतता
कमी पायऱ्यांसह साधी प्रोटोकॉल

त्याच्या ओळखीनंतर, BCA चाचणी जैव रसायनशास्त्र आणि आण्विक जीवशास्त्र प्रयोगशाळांमध्ये सर्वाधिक वापरली जाणारी प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धत बनली आहे.

नमुना आयतन गणन्यासाठी कोड उदाहरणे

Excel सूत्र

1=IF(B2<=0,"त्रुटी: अमान्य अवशोषण",IF(C2<=0,"त्रुटी: अमान्य नमुना वस्तुमान",C2/(2*B2)))
2
3' जिथे:
4' B2 अवशोषण वाचन समाविष्ट करते
5' C2 μg मध्ये इच्छित नमुना वस्तुमान समाविष्ट करते
6' सूत्र आवश्यक नमुना आयतन μL मध्ये परत करते
7

Python कार्यान्वयन

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """अवशोषणापासून प्रोटीन एकाग्रता गणना करा मानक वक्राचा वापर करून."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("अवशोषण नकारात्मक असू शकत नाही")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """अवशोषण आणि इच्छित वस्तुमानावर आधारित आवश्यक नमुना आयतन गणना करा."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("नमुना वस्तुमान सकारात्मक असावे")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("गणलेली प्रोटीन एकाग्रता सकारात्मक असावी")
19
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# उदाहरण वापर
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"अवशोषण {absorbance} आणि इच्छित प्रोटीन वस्तुमान {sample_mass} μg साठी:")
31    print(f"प्रोटीन एकाग्रता: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"आवश्यक नमुना आयतन: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"त्रुटी: {e}")
35

R कोड विश्लेषणासाठी

1# अवशोषणापासून प्रोटीन एकाग्रता गणना करण्यासाठी कार्य
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("अवशोषण नकारात्मक असू शकत नाही")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# नमुना आयतन गणना करण्यासाठी कार्य
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("नमुना वस्तुमान सकारात्मक असावे")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("गणलेली प्रोटीन एकाग्रता सकारात्मक असावी")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# उदाहरण वापर
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("अवशोषण %.2f आणि इच्छित प्रोटीन वस्तुमान %.2f μg साठी:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("प्रोटीन एकाग्रता: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("आवश्यक नमुना आयतन: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("त्रुटी: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript कार्यान्वयन

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("अवशोषण नकारात्मक असू शकत नाही");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("नमुना वस्तुमान सकारात्मक असावे");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("गणलेली प्रोटीन एकाग्रता सकारात्मक असावी");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// उदाहरण वापर
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`अवशोषण ${absorbance} आणि इच्छित प्रोटीन वस्तुमान ${sampleMass} μg साठी:`);
33  console.log(`प्रोटीन एकाग्रता: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`आवश्यक नमुना आयतन: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`त्रुटी: ${error.message}`);
37}
38

मानक वक्र दृश्यता

अवशोषण आणि प्रोटीन एकाग्रतेमधील संबंध सामान्यतः विशिष्ट श्रेणीमध्ये रेखीय असतो. खाली BCA वक्राचे दृश्य आहे:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

अवशोषण (562 नॅम) प्रोटीन एकाग्रता (μg/μL)

मानक वक्र मानक नमुने

BCA मानक वक्र

इतर प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींशी तुलना

विभिन्न प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींमध्ये विविध फायदे आणि मर्यादा आहेत. येथे BCA चाचणी इतर सामान्य पद्धतींशी कशी तुलना करते:

पद्धत	संवेदनशीलता श्रेणी	फायदे	मर्यादा	सर्वोत्तम साठी
BCA चाचणी	5-2000 μg/mL	• डिटर्जंटसह सुसंगत • कमी प्रोटीन-ते-प्रोटीन भिन्नता • स्थिर रंग विकास	• कमी करणाऱ्या एजंटांमुळे हस्तक्षेप • काही चेलेटिंग एजंटांमुळे प्रभावित	• सामान्य प्रोटीन मात्रात्मकता • डिटर्जंट असलेले नमुने
Bradford चाचणी	1-1500 μg/mL	• जलद (2-5 मिनिटे) • कमी हस्तक्षेप करणारे पदार्थ	• उच्च प्रोटीन-ते-प्रोटीन भिन्नता • डिटर्जंटसह असंगत	• जलद मोजमाप • डिटर्जंट-मुक्त नमुने
Lowry पद्धत	1-1500 μg/mL	• चांगली स्थापना • चांगली संवेदनशीलता	• अनेक हस्तक्षेप करणारे पदार्थ • अनेक पायऱ्या	• ऐतिहासिक सुसंगती • शुद्ध प्रोटीन नमुने
UV अवशोषण (280 नॅम)	20-3000 μg/mL	• नष्ट न करणारे • खूप जलद • कोणतेही रसायन आवश्यक नाही	• न्यूक्लियक आम्लांमुळे प्रभावित • शुद्ध नमुन्यांची आवश्यकता	• शुद्ध प्रोटीन द्रव • शुद्धीकरणादरम्यान जलद तपासणी
फ्लोरोमेट्रिक	0.1-500 μg/mL	• उच्चतम संवेदनशीलता • विस्तृत डायनॅमिक श्रेणी	• महागडे रसायन • फ्लोरोमीटरची आवश्यकता	• खूप कमी नमुने • मर्यादित नमुना आयतन

वारंवार विचारले जाणारे प्रश्न

BCA चाचणीचा उपयोग काय आहे?

BCA (बिसिन्चोनिनिक आम्ल) चाचणी मुख्यतः नमुन्यात प्रोटीन एकाग्रतेची मोजमाप करण्यासाठी वापरली जाते. हे जैव रसायनशास्त्र, पेशी जीवशास्त्र, आणि आण्विक जीवशास्त्रात वेस्टर्न ब्लॉटिंग, एंजाइम चाचण्या, इम्युनोप्रेसिपिटेशन, आणि प्रोटीन शुद्धीकरणासारख्या अनुप्रयोगांसाठी मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाते.

BCA चाचणी किती अचूक आहे?

BCA चाचणी सामान्यतः 5-10% च्या आत अचूक आहे जेव्हा योग्यपणे केली जाते. याची अचूकता अनेक घटकांवर अवलंबून असते ज्यामध्ये मानक वक्राची गुणवत्ता, हस्तक्षेप करणाऱ्या पदार्थांची अनुपस्थिती, आणि अज्ञात प्रोटीनच्या रचनांचा मानक प्रोटीनासह समानता समाविष्ट आहे.

BCA चाचणी परिणामांमध्ये हस्तक्षेप करणारे काय आहे?

BCA चाचणी परिणामांमध्ये हस्तक्षेप करणारे अनेक पदार्थ आहेत, ज्यामध्ये:

कमी करणारे एजंट (DTT, β-मेर्काप्टोएथेनॉल, ग्लुटाथियोन)
चेलेटिंग एजंट (EDTA, EGTA)
साध्या साखरांचे उच्च प्रमाण
लिपिड्स
उच्च प्रमाणात काही डिटर्जंट्स
अमोनिया यौगिक

BCA आणि Bradford चाचण्यांमध्ये काय फरक आहे?

मुख्य फरक म्हणजे:

BCA चाचणी डिटर्जंट्स आणि सर्फॅक्टंटसह अधिक सुसंगत आहे
Bradford चाचणी जलद आहे (2-5 मिनिटे BCA च्या तुलनेत 30+ मिनिटे)
BCA च्या तुलनेत कमी प्रोटीन-ते-प्रोटीन भिन्नता आहे
Bradford अधिक संवेदनशील आहे बेसिक अमिनो आम्लांवर
BCA कमी करणाऱ्या एजंटांमुळे प्रभावित आहे, तर Bradford प्रभावित होत नाही

गणलेले नमुना आयतन खूप मोठे का आहे?

जर गणक आपल्याला खूप मोठे नमुना आयतन सुचवत असेल, तर सामान्यतः हे आपल्या नमुन्यात कमी प्रोटीन एकाग्रता दर्शवते. हे खालील कारणांमुळे असू शकते:

आपल्या मूळ नमुन्यात खरोखर कमी प्रोटीन सामग्री
तयारी दरम्यान प्रोटीन गमावणे
BCA चाचणी प्रक्रियेत त्रुटी
अविश्वसनीय अवशोषण वाचन

आपल्या नमुन्याचे संकुचन किंवा कमी प्रोटीन एकाग्रतेसाठी आपल्या प्रयोगात्मक डिझाइनला समायोजित करण्याचा विचार करा.

मी या गणकाचा वापर इतर प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींसाठी करू शकतो का?

हा गणक विशेषतः BCA चाचणी परिणामांसाठी डिझाइन केलेला आहे. जरी मूलभूत तत्त्व (एकाग्रता ते आयतनात रूपांतरित करणे) इतर पद्धतींवर लागू होते, तरी अवशोषण आणि प्रोटीन एकाग्रतेमधील संबंध विविध चाचण्यांमध्ये भिन्न असतो. इतर पद्धतींसाठी जसे की Bradford किंवा Lowry, आपल्याला वेगवेगळ्या मानक वक्र पॅरामिटर्सचा वापर करावा लागेल.

मी रेखीय श्रेणीच्या बाहेर असलेल्या नमुन्यांचे काय करावे?

अवशोषण वाचन रेखीय श्रेणीच्या बाहेर असल्यास (सामान्यतः >2.0):

आपल्या नमुन्याचे विरघळून पुन्हा BCA चाचणी करा
भिन्न प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धत वापरा
उच्च एकाग्रता मानकांचा समावेश करून मानक वक्र समायोजित करा

कोणता प्रोटीन मानक म्हणून वापरावा?

बोविन सीरम अल्ब्यूमिन (BSA) BCA चाचण्यांसाठी सर्वाधिक वापरला जाणारा मानक आहे कारण तो:

सहज उपलब्ध आणि स्वस्त आहे
उच्च प्रमाणात विरघळणारा
स्थिर असतो
चांगला वर्णन केलेला आहे

तथापि, जर आपल्या नमुन्यात एक प्रमुख प्रोटीन असले तर, ते मानक म्हणून वापरण्याचा विचार करा ज्यामुळे अधिक अचूक परिणाम मिळतील.

BCA प्रतिक्रिया किती काळ स्थिर आहे?

BCA प्रतिक्रियेमध्ये विकसित झालेला जांभळा रंग अनेक तासांपर्यंत रूम तापमानावर स्थिर असतो आणि त्या कालावधीत कोणत्याही वेळी मोजला जाऊ शकतो. तथापि, सर्वोत्तम परिणामांसाठी, सर्व मानक आणि नमुने रंग विकासानंतर साधारणतः एकाच वेळी मोजण्याची शिफारस केली जाते.

मी मागील प्रयोगातून मानक वक्र पुन्हा वापरू शकतो का?

जरी मानक वक्र पुन्हा वापरणे तांत्रिकदृष्ट्या शक्य आहे, तरीही अचूक मात्रात्मकतेसाठी ते शिफारस केले जात नाही. रसायन, इन्क्यूबेशन परिस्थिती, आणि उपकरणाचे कॅलिब्रेशन यामध्ये बदल होऊ शकतो जो अवशोषण आणि प्रोटीन एकाग्रतेमधील संबंधावर परिणाम करू शकतो. विश्वसनीय परिणामांसाठी, प्रत्येक वेळी ताजे मानक वक्र तयार करा.

संदर्भ

स्मिथ PK, क्रोहन RI, हर्मनसन GT, इत्यादी. "बिसिन्चोनिनिक आम्ल वापरून प्रोटीन मोजणे." एनालिटिकल बायोकमिस्ट्री. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
थर्मो सायंटिफिक. "पीयर्स BCA प्रोटीन चाचणी किट." सूचना. उपलब्ध येथे: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
वॉकर JM. "बिसिन्चोनिनिक आम्ल (BCA) चाचणी प्रोटीन मात्रात्मकतेसाठी." वॉकर JM, संपादक. प्रोटीन प्रोटोकॉल्स हँडबुक. स्प्रिंगर; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
ओल्सन BJ, मार्कवेल J. "प्रोटीन एकाग्रतेचा निर्धारण करण्यासाठी चाचण्या." करंट प्रोटोकॉल्स इन प्रोटीन सायन्स. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
नॉबल JE, बेली MJ. "प्रोटीनची मात्रात्मकता." मेथड्स इन एंजाइमोलॉजी. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

आजच आमचा BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक वापरा!

आता आपण BCA प्रोटीन मात्रात्मकता आणि नमुना आयतन गणनेच्या तत्त्वांचा समजून घेतल्यावर, आमच्या गणकाचा वापर करून आपल्या प्रयोगशाळेतील कार्यप्रवाह सुलभ करा. आपल्या अवशोषण वाचनांचा आणि इच्छित नमुना वस्तुमानाचा साधा प्रविष्ट करा आणि त्वरित, अचूक नमुना आयतन गणनांसाठी मिळवा.

आपण वेस्टर्न ब्लॉटिंग, एंजाइम चाचण्या, किंवा कोणत्याही इतर प्रोटीन आधारित प्रयोगांसाठी नमुने तयार करत असलात तरी, आमचा गणक सुसंगत आणि विश्वसनीय परिणाम सुनिश्चित करण्यात मदत करेल. वेळ वाचवा, त्रुटी कमी करा, आणि आपल्या प्रयोगांची पुनरुत्पादकता सुधारित करा BCA अवशोषण नमुना आयतन गणकासह.

🔗

बीसीए शोषण नमुना मात्रा गणक प्रयोगशाळा प्रोटोकॉलसाठी

BCA शोषण नमुना व्हॉल्यूम गणक

standardCurveTitle

नमुना इनपुट

नमुना 1

गणना सूत्र

साहित्यिकरण

BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक

परिचय

BCA चाचणी आणि नमुना आयतन गणनेचे समजून घेणे

BCA चाचणी म्हणजे काय?

नमुना आयतन गणनेचा सूत्र

BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक कसे वापरावे

चरण-दर-चरण उदाहरण

परिणामांचे समजून घेणे

अनुप्रयोग आणि वापर प्रकरणे

वेस्टर्न ब्लॉट नमुना तयारी

एंजाइमेटिक चाचण्या

इम्युनोप्रेसिपिटेशन प्रयोग

प्रोटीन शुद्धीकरण

प्रगत वैशिष्ट्ये आणि विचार

कस्टम मानक वक्र

अनेक नमुन्यांचे हाताळणे

कडव्या प्रकरणांवर मात करणे

अत्यधिक उच्च अवशोषण वाचन

अत्यंत कमी अवशोषण वाचन

अप्रत्यक्षपणे मोठे गणलेले आयतन

प्रोटीन मात्रात्मकतेचा इतिहास आणि BCA चाचणी

प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींचा विकास

BCA चाचणीचा विकास

नमुना आयतन गणन्यासाठी कोड उदाहरणे

Excel सूत्र

Python कार्यान्वयन

R कोड विश्लेषणासाठी

JavaScript कार्यान्वयन

मानक वक्र दृश्यता

इतर प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींशी तुलना

वारंवार विचारले जाणारे प्रश्न

BCA चाचणीचा उपयोग काय आहे?

BCA चाचणी किती अचूक आहे?

BCA चाचणी परिणामांमध्ये हस्तक्षेप करणारे काय आहे?

BCA आणि Bradford चाचण्यांमध्ये काय फरक आहे?

गणलेले नमुना आयतन खूप मोठे का आहे?

मी या गणकाचा वापर इतर प्रोटीन मात्रात्मकता पद्धतींसाठी करू शकतो का?

मी रेखीय श्रेणीच्या बाहेर असलेल्या नमुन्यांचे काय करावे?

कोणता प्रोटीन मानक म्हणून वापरावा?

BCA प्रतिक्रिया किती काळ स्थिर आहे?

मी मागील प्रयोगातून मानक वक्र पुन्हा वापरू शकतो का?

संदर्भ

आजच आमचा BCA अवशोषण नमुना आयतन गणक वापरा!

संबंधित टूल्स

सिलिंड्रिकल, गोलाकार आणि आयताकृती टाकींचा व्हॉल्यूम कॅल्क्युलेटर

तरल कव्हरेजसाठी आयतन ते क्षेत्रफळ गणक

ग hole वॉल्यूम कॅल्क्युलेटर: सिलिंड्रिकल आणि आयताकृती उत्खनन

गोलाकार खड्डा गणक: गोलाकार खुदाईचे आयतन मोजा

घन सेल वॉल्यूम कॅल्क्युलेटर: काठाच्या लांबीवरून वॉल्यूम शोधा

प्रयोगशाळा सोल्यूशन्ससाठी साधा विरघळन गुणांक कॅल्क्युलेटर

रेत व्हॉल्यूम गणक: कोणत्याही प्रकल्पासाठी सामग्रीचा अंदाज घ्या

दोन-फोटॉन शोषण गुणांक कॅल्क्युलेटर

मोलारिटी कॅल्क्युलेटर: सोल्यूशन संकेंद्रण साधन