🛠️

Whiz Tools

Kalkulator objętości próbki BCA na podstawie absorbancji dla protokołów laboratoryjnych

Oblicz dokładne objętości próbek na podstawie odczytów absorbancji testu BCA i pożądanej masy białka. Niezbędne do spójnego ładowania białka w western blotach i innych zastosowaniach laboratoryjnych.

Kalkulator objętości próbki BCA na podstawie absorbancji

To narzędzie oblicza wymaganą objętość próbki na podstawie wyników absorbancji BCA i masy próbki. Wprowadź wartość absorbancji i masę próbki dla każdej próbki, aby obliczyć odpowiadającą objętość próbki.

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

Dane próbki

Próbka 1

Copy
N/A μL

Wzór obliczeniowy

Objętość próbki oblicza się za pomocą następującego wzoru:

Objętość próbki (μL) = Masa próbki (μg) / Stężenie białka (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Dokumentacja

Kalkulator objętości próbki BCA Absorbancji

Wprowadzenie

Kalkulator objętości próbki BCA Absorbancji to specjalistyczne narzędzie zaprojektowane, aby pomóc badaczom i technikom laboratoryjnym dokładnie określić odpowiednią objętość próbki do eksperymentów na podstawie wyników testu BCA (kwas bicinchonowy). Ten kalkulator przyjmuje odczyty absorbancji z twojego testu BCA oraz pożądaną masę próbki, aby obliczyć precyzyjną objętość potrzebną do spójnego ładowania białka w aplikacjach takich jak western blotting, testy enzymatyczne i inne techniki analizy białek.

Test BCA jest jedną z najczęściej stosowanych metod do ilościowego oznaczania białek w laboratoriach biochemicznych i biologii molekularnej. Mierząc absorbancję próbek białkowych i porównując je z krzywą standardową, można określić stężenie białka z wysoką dokładnością. Nasz kalkulator upraszcza ten proces, automatycznie przekształcając odczyty absorbancji w dokładne objętości próbek wymagane do twoich eksperymentów.

Zrozumienie testu BCA i obliczania objętości próbki

Czym jest test BCA?

Test kwasu bicinchonowego (BCA) to biochemiczna metoda do określania całkowitego stężenia białka w roztworze. Zasada tego testu opiera się na tworzeniu kompleksu Cu²⁺-białko w warunkach alkalicznych, a następnie redukcji Cu²⁺ do Cu¹⁺. Ilość redukcji jest proporcjonalna do obecności białka. BCA tworzy fioletowy kompleks z Cu¹⁺ w środowisku alkalicznym, co stanowi podstawę do monitorowania redukcji miedzi przez białka.

Intensywność fioletowego koloru wzrasta proporcjonalnie do stężenia białka, co można zmierzyć za pomocą spektrofotometru przy około 562 nm. Odczyty absorbancji są następnie porównywane z krzywą standardową, aby określić stężenie białka w nieznanych próbkach.

Wzór na obliczanie objętości próbki

Podstawowy wzór do obliczania objętości próbki na podstawie wyników absorbancji BCA to:

Objętosˊcˊ proˊbki (μL)=Masa proˊbki (μg)Stęz˙enie białka (μg/μL)\text{Objętość próbki (μL)} = \frac{\text{Masa próbki (μg)}}{\text{Stężenie białka (μg/μL)}}

Gdzie:

  • Objętość próbki to objętość potrzebna (w mikrolitrach, μL)
  • Masa próbki to pożądana ilość białka do użycia (w mikrogramach, μg)
  • Stężenie białka jest obliczane na podstawie odczytu absorbancji BCA (w μg/μL)

Stężenie białka oblicza się z odczytu absorbancji przy użyciu równania krzywej standardowej:

Stęz˙enie białka (μg/μL)=Nachylenie×Absorbancja+Przecięcie\text{Stężenie białka (μg/μL)} = \text{Nachylenie} \times \text{Absorbancja} + \text{Przecięcie}

Dla standardowego testu BCA typowe nachylenie wynosi około 2,0, a przecięcie często jest bliskie zeru, chociaż wartości te mogą się różnić w zależności od specyficznych warunków testu i krzywej standardowej.

Jak korzystać z kalkulatora objętości próbki BCA Absorbancji

Nasz kalkulator upraszcza proces określania objętości próbek na podstawie wyników testu BCA. Wykonaj następujące kroki, aby uzyskać dokładne obliczenia:

  1. Wprowadź informacje o próbce:

    • Podaj nazwę swojej próbki (opcjonalnie, ale pomocne przy śledzeniu wielu próbek)
    • Wprowadź odczyt absorbancji z twojego spektrofotometru
    • Wprowadź pożądaną masę próbki (ilość białka, którą chcesz użyć w μg)

  2. Wybierz typ krzywej standardowej:

    • Standardowa (domyślnie): Używa typowych parametrów krzywej standardowej BCA
    • Ulepszona: Dla protokołu o zwiększonej czułości
    • Mikro: Dla protokołu mikropłytkowego
    • Niestandardowa: Pozwala na wprowadzenie własnych wartości nachylenia i przecięcia

  3. Zobacz wyniki:

    • Kalkulator natychmiast wyświetli wymaganą objętość próbki w mikrolitrach
    • Wyniki są również przedstawione w tabeli podsumowującej dla łatwego odniesienia
    • Dla wielu próbek możesz dodać więcej wpisów i porównać wyniki

  4. Skopiuj lub eksportuj wyniki:

    • Użyj przycisku kopiowania, aby przenieść wyniki do swojego notatnika laboratoryjnego lub innych aplikacji
    • Wszystkie obliczenia można zapisać do przyszłego odniesienia

Przykład krok po kroku

Przejdźmy przez praktyczny przykład:

  1. Wykonałeś test BCA i uzyskałeś odczyt absorbancji 0,75 dla swojej próbki białkowej.
  2. Chcesz załadować 20 μg białka do swojego western blota.
  3. Używając krzywej standardowej (nachylenie = 2,0, przecięcie = 0):
    • Stężenie białka = 2,0 × 0,75 + 0 = 1,5 μg/μL
    • Wymagana objętość próbki = 20 μg ÷ 1,5 μg/μL = 13,33 μL

To oznacza, że powinieneś załadować 13,33 μL swojej próbki, aby uzyskać 20 μg białka.

Zrozumienie wyników

Kalkulator dostarcza kilku ważnych informacji:

  1. Stężenie białka: To jest obliczane na podstawie twojego odczytu absorbancji przy użyciu wybranej krzywej standardowej. Reprezentuje ilość białka na jednostkę objętości w twojej próbce (μg/μL).

  2. Objętość próbki: To objętość twojej próbki, która zawiera pożądaną ilość białka. Ta wartość jest tym, co użyjesz podczas przygotowywania swoich eksperymentów.

  3. Ostrzeżenia i zalecenia: Kalkulator może dostarczać ostrzeżenia dla:

    • Bardzo wysokich odczytów absorbancji (>3,0), które mogą być poza liniowym zakresem testu
    • Bardzo niskich odczytów absorbancji (<0,1), które mogą być bliskie limitu detekcji
    • Obliczonych objętości, które są niepraktycznie duże (>1000 μL) lub małe (<1 μL)

Aplikacje i przypadki użycia

Przygotowanie próbek do western blota

Jednym z najczęstszych zastosowań tego kalkulatora jest przygotowanie próbek do western blotting. Spójne ładowanie białka jest kluczowe dla wiarygodnych wyników western blot, a ten kalkulator zapewnia, że ładujesz tę samą ilość białka dla każdej próbki, nawet gdy ich stężenia różnią się.

Przykład przepływu pracy:

  1. Wykonaj test BCA na wszystkich swoich próbkach białkowych
  2. Zdecyduj o spójnym białku do załadunku (zwykle 10-50 μg)
  3. Użyj kalkulatora, aby określić objętości potrzebne dla każdej próbki
  4. Dodaj odpowiednie objętości buforu próbki i środka redukującego
  5. Załaduj obliczone objętości na żel

Testy enzymatyczne

W przypadku testów enzymatycznych często konieczne jest użycie określonej ilości białka, aby ustandaryzować warunki reakcji w różnych próbkach lub eksperymentach.

Przykład przepływu pracy:

  1. Określ stężenie białka, używając testu BCA
  2. Oblicz objętość potrzebną do uzyskania pożądanego białka
  3. Dodaj tę objętość do swojej mieszanki reakcyjnej
  4. Kontynuuj z testem enzymatycznym

Eksperymenty immunoprecypitacyjne

W eksperymentach immunoprecypitacyjnych ważne jest, aby zacząć od spójnej ilości białka, aby porównać wyniki w różnych warunkach.

Przykład przepływu pracy:

  1. Zmierz stężenie białka w lysatach komórkowych lub tkankowych, używając testu BCA
  2. Oblicz objętości potrzebne do uzyskania równych ilości białka (zwykle 500-1000 μg)
  3. Dostosuj wszystkie próbki do tej samej objętości z buforem lizyjnym
  4. Kontynuuj z inkubacją przeciwciała i precypitacją

Oczyszczanie białek

Podczas oczyszczania białek często konieczne jest śledzenie stężenia białka i obliczanie wydajności na różnych etapach.

Przykład przepływu pracy:

  1. Zbieraj frakcje podczas oczyszczania
  2. Wykonaj test BCA na wybranych frakcjach
  3. Oblicz stężenie białka i całkowitą ilość białka
  4. Określ objętości potrzebne do kolejnych aplikacji

Zaawansowane funkcje i uwagi

Niestandardowe krzywe standardowe

Chociaż kalkulator dostarcza domyślne parametry dla standardowych testów BCA, możesz również wprowadzić niestandardowe wartości, jeśli wygenerowałeś własną krzywą standardową. Jest to szczególnie przydatne, gdy:

  • Pracujesz z niestandardowymi próbkami białkowymi
  • Używasz zmodyfikowanych protokołów BCA
  • Pracujesz w obecności substancji, które mogą zakłócać test

Aby użyć niestandardowej krzywej standardowej:

  1. Wybierz "Niestandardowa" z opcji krzywej standardowej
  2. Wprowadź swoje wartości nachylenia i przecięcia
  3. Kalkulator użyje tych wartości do wszystkich kolejnych obliczeń

Obsługa wielu próbek

Kalkulator pozwala na dodanie wielu próbek i jednoczesne obliczenie ich objętości. Jest to szczególnie przydatne podczas przygotowywania próbek do eksperymentów, które wymagają spójnego ładowania białka w różnych warunkach.

Zalety przetwarzania wsadowego:

  • Oszczędność czasu poprzez obliczanie wszystkich objętości jednocześnie
  • Zapewnienie spójności we wszystkich twoich próbkach
  • Łatwe porównywanie stężenia białka między próbkami
  • Identyfikacja wartości odstających lub potencjalnych błędów pomiarowych

Radzenie sobie z przypadkami skrajnymi

Bardzo wysokie odczyty absorbancji

Jeśli twój odczyt absorbancji jest powyżej 2,0, może to być poza liniowym zakresem testu BCA. W takich przypadkach:

  1. Rozcieńcz swoją próbkę i powtórz test BCA
  2. Alternatywnie, użyj systemu ostrzegawczego kalkulatora, który zaznaczy potencjalnie problematyczne odczyty

Bardzo niskie odczyty absorbancji

Dla odczytów absorbancji poniżej 0,1 możesz być blisko limitu detekcji testu, co może wpłynąć na dokładność. Rozważ:

  1. Skoncentrowanie swojej próbki, jeśli to możliwe
  2. Użycie bardziej czułej metody ilościowego oznaczania białka
  3. Dostosowanie projektu eksperymentu do niższych ilości białka

Niepraktycznie duże obliczone objętości

Jeśli kalkulator sugeruje objętość, która jest zbyt duża dla twojej aplikacji:

  1. Rozważ skoncentrowanie próbki białkowej
  2. Dostosuj pożądaną ilość białka w dół, jeśli twój eksperyment na to pozwala
  3. Użyj maksymalnej praktycznej objętości i zanotuj rzeczywistą ilość białka użytego

Historia ilościowego oznaczania białek i testu BCA

Dokładne ilościowe oznaczanie białek było fundamentalnym wymaganiem w biochemii i biologii molekularnej od momentu powstania tych dziedzin. Wczesne metody opierały się na oznaczaniu zawartości azotu, co było czasochłonne i wymagało specjalistycznego sprzętu.

Ewolucja metod ilościowego oznaczania białek

  1. Metoda Kjeldahla (1883): Jedna z najwcześniejszych metod ilościowego oznaczania białka, oparta na pomiarze zawartości azotu.

  2. Test Biuretu (początek XX wieku): Metoda ta opiera się na reakcji między wiązaniami peptydowymi a jonami miedzi w roztworze alkalicznym, produkując fioletowy kolor.

  3. Test Lowry'ego (1951): Opracowany przez Olivera Lowry'ego, ta metoda łączyła reakcję biuretu z odczynnikiem Folina-Ciocalteu, zwiększając czułość.

  4. Test Bradforda (1976): Marion Bradford opracowała tę metodę, używając barwnika Coomassie Brilliant Blue G-250, który wiąże się z białkami i przesuwa maksimum absorpcji.

  5. Test BCA (1985): Opracowany przez Paula Smitha i współpracowników w firmie Pierce Chemical Company, ta metoda łączyła reakcję biuretu z detekcją BCA, oferując poprawioną czułość i kompatybilność z detergentami.

Rozwój testu BCA

Test BCA został po raz pierwszy opisany w artykule z 1985 roku autorstwa Smitha i in. zatytułowanym "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Został opracowany w celu rozwiązania ograniczeń istniejących metod, szczególnie zakłóceń ze strony różnych chemikaliów powszechnie stosowanych w ekstrakcji i oczyszczaniu białek.

Kluczową innowacją było użycie kwasu bicinchonowego do detekcji jonów Cu¹⁺ produkowanych przez białko podczas redukcji Cu²⁺, tworząc fioletowy kompleks, który można zmierzyć spektrofotometrycznie. To zapewniło kilka zalet:

  1. Wyższa czułość niż metoda biuretu
  2. Mniejsza podatność na zakłócenia ze strony substancji niebiałkowych w porównaniu do metody Lowry'ego
  3. Lepsza kompatybilność z detergentami niż test Bradforda
  4. Prostszy protokół z mniejszą liczbą odczynników i kroków

Od momentu wprowadzenia test BCA stał się jedną z najczęściej stosowanych metod ilościowego oznaczania białek w laboratoriach biochemicznych i biologii molekularnej na całym świecie.

Przykłady kodu do obliczania objętości próbki

Formuła Excel

1=IF(B2<=0,"Błąd: Nieprawidłowa absorbancja",IF(C2<=0,"Błąd: Nieprawidłowa masa próbki",C2/(2*B2)))
2
3' Gdzie:
4' B2 zawiera odczyt absorbancji
5' C2 zawiera pożądaną masę próbki w μg
6' Formuła zwraca wymaganą objętość próbki w μL
7

Implementacja w Pythonie

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Oblicz stężenie białka z absorbancji przy użyciu krzywej standardowej."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbancja nie może być ujemna")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Oblicz wymaganą objętość próbki na podstawie absorbancji i pożądanej masy."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Masa próbki musi być dodatnia")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Obliczone stężenie białka musi być dodatnie")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Przykład użycia
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Dla absorbancji {absorbance} i pożądanej masy białka {sample_mass} μg:")
31    print(f"Stężenie białka: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Wymagana objętość próbki: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Błąd: {e}")
35

Kod w R do analizy

1# Funkcja do obliczania stężenia białka z absorbancji
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbancja nie może być ujemna")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funkcja do obliczania objętości próbki
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Masa próbki musi być dodatnia")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Obliczone stężenie białka musi być dodatnie")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Przykład użycia
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Dla absorbancji %.2f i pożądanej masy białka %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Stężenie białka: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Wymagana objętość próbki: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Błąd: %s\n", e$message))
39})
40

Implementacja w JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbancja nie może być ujemna");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Masa próbki musi być dodatnia");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Obliczone stężenie białka musi być dodatnie");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Przykład użycia
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Dla absorbancji ${absorbance} i pożądanej masy białka ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Stężenie białka: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Wymagana objętość próbki: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Błąd: ${error.message}`);
37}
38

Wizualizacja krzywej standardowej

Związek między absorbancją a stężeniem białka jest zazwyczaj liniowy w pewnym zakresie. Poniżej znajduje się wizualizacja krzywej standardowej BCA:

Krzywa standardowa BCA dla ilościowego oznaczania białek Wizualizacja liniowego związku między absorbancją a stężeniem białka w teście BCA 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbancja (562 nm) Stężenie białka (μg/μL)

Krzywa standardowa Próbki standardowe

Krzywa standardowa BCA

Porównanie z innymi metodami ilościowego oznaczania białek

Różne metody ilościowego oznaczania białek mają różne zalety i ograniczenia. Oto jak test BCA porównuje się z innymi powszechnymi metodami:

MetodaZakres czułościZaletyOgraniczeniaNajlepsze do
Test BCA5-2000 μg/mL• Kompatybilny z detergentami
• Mniejsza zmienność białko-białko
• Stabilny rozwój koloru		• Zakłócony przez środki redukujące
• Wpływ niektórych substancji chelatujących		• Ogólne ilościowe oznaczanie białka
• Próbki zawierające detergenty
Test Bradforda1-1500 μg/mL• Szybki (2-5 min)
• Niewiele substancji zakłócających		• Wysoka zmienność białko-białko
• Niekompatybilny z detergentami		• Szybkie pomiary
• Próbki wolne od detergentów
Metoda Lowry'ego1-1500 μg/mL• Dobrze ugruntowana
• Dobra czułość		• Wiele substancji zakłócających
• Wiele kroków		• Historyczna spójność
• Czyste próbki białkowe
Absorbancja UV (280 nm)20-3000 μg/mL• Niezniszczalna
• Bardzo szybka
• Nie wymaga odczynników		• Wpływ na kwasy nukleinowe
• Wymaga czystych próbek		• Czyste roztwory białkowe
• Szybkie kontrole podczas oczyszczania
Fluorometryczna0.1-500 μg/mL• Najwyższa czułość
• Szeroki zakres dynamiczny		• Drogie odczynniki
• Wymaga fluorometru		• Bardzo rozcieńczone próbki
• Ograniczona objętość próbki

Najczęściej zadawane pytania

Do czego używa się testu BCA?

Test BCA (kwasu bicinchonowego) jest głównie używany do ilościowego oznaczania całkowitego stężenia białka w próbce. Jest szeroko stosowany w biochemii, biologii komórkowej i biologii molekularnej do aplikacji takich jak western blotting, testy enzymatyczne, immunoprecypitacja i oczyszczanie białek.

Jak dokładny jest test BCA?

Test BCA jest zazwyczaj dokładny w granicach 5-10% przy prawidłowym wykonaniu. Jego dokładność zależy od kilku czynników, w tym jakości krzywej standardowej, braku substancji zakłócających oraz tego, czy skład nieznanego białka jest podobny do białka standardowego używanego.

Co może zakłócać wyniki testu BCA?

Kilka substancji może zakłócać wyniki testu BCA, w tym:

  • Środki redukujące (DTT, β-merkaptopropanol, glutation)
  • Substancje chelatujące (EDTA, EGTA)
  • Wysokie stężenia prostych cukrów
  • Lipidy
  • Niektóre detergenty w wysokich stężeniach
  • Związki amonowe

Jaka jest różnica między testem BCA a testem Bradforda?

Główne różnice to:

  • Test BCA jest bardziej kompatybilny z detergentami i surfaktantami
  • Test Bradforda jest szybszy (2-5 minut w porównaniu do 30+ minut dla BCA)
  • BCA ma mniejszą zmienność białko-białko
  • Bradford jest bardziej wrażliwy na zasadowe aminokwasy
  • BCA jest zakłócany przez środki redukujące, podczas gdy Bradford nie jest

Dlaczego moja obliczona objętość próbki jest zbyt duża?

Jeśli twój kalkulator pokazuje bardzo dużą objętość próbki, zazwyczaj wskazuje to na niskie stężenie białka w próbce. Może to być spowodowane:

  1. Rzeczywistą niską zawartością białka w twojej oryginalnej próbce
  2. Utratą białka podczas przygotowania
  3. Błędami w procedurze testu BCA
  4. Nieprawidłowym odczytem absorbancji

Rozważ skoncentrowanie próbki lub dostosowanie projektu eksperymentu do niższej zawartości białka.

Czy mogę użyć tego kalkulatora do innych metod ilościowego oznaczania białek?

Ten kalkulator został specjalnie zaprojektowany dla wyników testu BCA. Chociaż podstawowa zasada (przekształcanie stężenia w objętość) ma zastosowanie do innych metod, związek między absorbancją a stężeniem białka różni się między różnymi testami. Dla innych metod, takich jak Bradford czy Lowry, musisz użyć różnych parametrów krzywej standardowej.

Jak radzić sobie z próbkami o absorbancji poza zakresem liniowym?

Dla odczytów absorbancji poza zakresem liniowym (zwykle >2.0):

  1. Rozcieńcz swoją próbkę i powtórz test BCA
  2. Użyj innej metody ilościowego oznaczania białka
  3. Dostosuj krzywą standardową, aby uwzględnić standardy o wyższym stężeniu

Jakie białko powinienem użyć jako standard?

Białko surowicy bydlęcej (BSA) jest najczęściej używanym standardem w testach BCA, ponieważ jest:

  • Łatwo dostępne i niedrogie
  • Wysoce rozpuszczalne
  • Stabilne w roztworze
  • Dobrze scharakteryzowane

Jednak jeśli twoje próbki zawierają dominujące białko, które znacznie różni się od BSA, rozważ użycie tego białka jako swojego standardu dla dokładniejszych wyników.

Jak długo stabilna jest reakcja BCA?

Fioletowy kolor rozwinięty w reakcji BCA jest stabilny przez kilka godzin w temperaturze pokojowej i można go zmierzyć w dowolnym momencie w tym okresie. Jednak dla najlepszych wyników zaleca się pomiar wszystkich standardów i próbek w przybliżeniu w tym samym czasie po rozwoju koloru.

Czy mogę ponownie użyć krzywej standardowej z poprzedniego eksperymentu?

Chociaż technicznie możliwe jest ponowne użycie krzywej standardowej, nie jest to zalecane dla dokładnego ilościowego oznaczania. Różnice w odczynnikach, warunkach inkubacji i kalibracji instrumentów mogą wpłynąć na związek między absorbancją a stężeniem białka. Dla wiarygodnych wyników zaleca się generowanie świeżej krzywej standardowej za każdym razem, gdy wykonujesz test.

Referencje

  1. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, i in. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Instrukcje. Dostępne pod adresem: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." W: Walker JM, red. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Wypróbuj nasz kalkulator objętości próbki BCA Absorbancji już dziś!

Teraz, gdy rozumiesz zasady dotyczące ilościowego oznaczania białek BCA i obliczania objętości próbki, wypróbuj nasz kalkulator, aby uprościć swój przepływ pracy w laboratorium. Po prostu wprowadź swoje odczyty absorbancji i pożądaną masę próbki, aby uzyskać natychmiastowe, dokładne obliczenia objętości próbki.

Niezależnie od tego, czy przygotowujesz próbki do western blotting, testów enzymatycznych czy jakiegokolwiek innego eksperymentu opartego na białkach, nasz kalkulator pomoże zapewnić spójne i wiarygodne wyniki. Oszczędzaj czas, zmniejszaj błędy i poprawiaj powtarzalność swoich eksperymentów za pomocą kalkulatora objętości próbki BCA Absorbancji.

🔗

Powiązane narzędzia

Odkryj więcej narzędzi, które mogą być przydatne dla Twojego przepływu pracy

Kalkulator objętości zbiornika dla cylindrycznych, sferycznych i prostokątnych

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator objętości do powierzchni dla pokrycia cieczy

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator objętości otworów: Wykopy cylindryczne i prostokątne

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator objętości otworów: Mierz objętości wykopów cylindrycznych

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator objętości komórki sześciennej: Oblicz objętość na podstawie długości krawędzi

Wypróbuj ten narzędzie

Prosty kalkulator współczynnika rozcieńczenia dla roztworów laboratoryjnych

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator objętości piasku: Oszacuj materiał do każdego projektu

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator współczynnika absorpcji dwu-fotonowej

Wypróbuj ten narzędzie

Kalkulator Molarności: Narzędzie do Obliczania Stężenia Roztworu

Wypróbuj ten narzędzie