Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA para Protocolos de Laboratório

Calcule volumes de amostra precisos com base nas leituras de absorbância do ensaio BCA e na massa de proteína desejada. Essencial para carregamento consistente de proteínas em blotting ocidental e outras aplicações de laboratório.

Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA

Esta ferramenta calcula o volume de amostra necessário com base nos resultados de absorbância BCA e na massa da amostra. Insira o valor de absorbância e a massa da amostra para cada amostra para calcular o volume de amostra correspondente.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Entradas da Amostra

Amostra 1

Nome da Amostra

Absorbância BCA*

Massa da Amostra (μg)*

Volume da Amostra

Copy

N/A μL

Fórmula de Cálculo

O volume da amostra é calculado usando a seguinte fórmula:

Volume da Amostra (μL) = Massa da Amostra (μg) / Concentração de Proteína (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Documentação

Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA

Introdução

A Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA é uma ferramenta especializada projetada para ajudar pesquisadores e técnicos de laboratório a determinar com precisão o volume de amostra apropriado para experimentos com base nos resultados do ensaio BCA (ácido bicinchonínico). Esta calculadora utiliza as leituras de absorbância do seu ensaio BCA e a massa de amostra desejada para calcular o volume preciso necessário para um carregamento consistente de proteínas em aplicações como western blotting, ensaios enzimáticos e outras técnicas de análise de proteínas.

O ensaio BCA é um dos métodos mais amplamente utilizados para quantificação de proteínas em laboratórios de bioquímica e biologia molecular. Ao medir a absorbância de suas amostras de proteína e compará-las a uma curva padrão, você pode determinar a concentração de proteína com alta precisão. Nossa calculadora simplifica esse processo, convertendo automaticamente as leituras de absorbância nos volumes exatos de amostra necessários para seus experimentos.

Entendendo o Ensaio BCA e o Cálculo do Volume de Amostra

O que é um Ensaio BCA?

O ensaio de Ácido Bicinchonínico (BCA) é um ensaio bioquímico para determinar a concentração total de proteína em uma solução. O princípio deste ensaio baseia-se na formação de um complexo Cu²⁺-proteína em condições alcalinas, seguido pela redução de Cu²⁺ a Cu¹⁺. A quantidade de redução é proporcional à proteína presente. O BCA forma um complexo de cor roxa com Cu¹⁺ em ambientes alcalinos, fornecendo uma base para monitorar a redução do cobre por proteínas.

A intensidade da cor roxa aumenta proporcionalmente com a concentração de proteína, que pode ser medida usando um espectrofotômetro a aproximadamente 562 nm. As leituras de absorbância são então comparadas a uma curva padrão para determinar a concentração de proteína em amostras desconhecidas.

A Fórmula para Cálculo do Volume de Amostra

A fórmula fundamental para calcular o volume de amostra a partir dos resultados de absorbância do BCA é:

$\text{Volume da Amostra (μL)} = \frac{\text{Massa da Amostra (μg)}}{\text{Concentração de Proteína (μg/μL)}}$

Onde:

Volume da Amostra é o volume de amostra necessário (em microlitros, μL)
Massa da Amostra é a quantidade desejada de proteína a ser utilizada (em microgramas, μg)
Concentração de Proteína é derivada da leitura de absorbância do BCA (em μg/μL)

A concentração de proteína é calculada a partir da leitura de absorbância usando a equação da curva padrão:

$\text{Concentração de Proteína (μg/μL)} = \text{Inclinação} \times \text{Absorbância} + \text{Intercepto}$

Para um ensaio BCA padrão, a inclinação típica é aproximadamente 2.0, e o intercepto geralmente está próximo de zero, embora esses valores possam variar com base nas condições específicas do seu ensaio e na curva padrão.

Como Usar a Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA

Nossa calculadora simplifica o processo de determinação dos volumes de amostra a partir dos resultados do ensaio BCA. Siga estas etapas para obter cálculos precisos:

Insira as Informações da Amostra:
- Forneça um nome para sua amostra (opcional, mas útil para rastrear várias amostras)
- Insira a leitura de absorbância do seu espectrofotômetro
- Digite a massa de amostra desejada (a quantidade de proteína que você deseja usar em μg)
Selecione o Tipo de Curva Padrão:
- Padrão (padrão): Usa os parâmetros típicos da curva padrão do BCA
- Aprimorada: Para protocolo de sensibilidade aprimorada
- Micro: Para protocolo de microplaca
- Personalizado: Permite que você insira seus próprios valores de inclinação e intercepto
Visualize os Resultados:
- A calculadora exibirá instantaneamente o volume de amostra necessário em microlitros
- Os resultados também são apresentados em uma tabela resumo para fácil referência
- Para várias amostras, você pode adicionar mais entradas e comparar os resultados
Copie ou Exporte os Resultados:
- Use o botão de copiar para transferir os resultados para seu caderno de laboratório ou outras aplicações
- Todos os cálculos podem ser salvos para referência futura

Exemplo Passo a Passo

Vamos passar por um exemplo prático:

Você realizou um ensaio BCA e obteve uma leitura de absorbância de 0.75 para sua amostra de proteína.
Você deseja carregar 20 μg de proteína para seu western blot.
Usando a curva padrão (inclinação = 2.0, intercepto = 0):
- Concentração de proteína = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Volume de amostra necessário = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Isso significa que você deve carregar 13.33 μL de sua amostra para obter 20 μg de proteína.

Entendendo os Resultados

A calculadora fornece várias informações importantes:

Concentração de Proteína: Esta é calculada a partir da sua leitura de absorbância usando a curva padrão selecionada. Representa a quantidade de proteína por unidade de volume em sua amostra (μg/μL).
Volume da Amostra: Este é o volume de sua amostra que contém a quantidade desejada de proteína. Este valor é o que você usará ao preparar seus experimentos.
Avisos e Recomendações: A calculadora pode fornecer avisos para:
- Leituras de absorbância muito altas (>3.0) que podem estar fora da faixa linear do ensaio
- Leituras de absorbância muito baixas (<0.1) que podem estar próximas do limite de detecção
- Volumes calculados que são impraticavelmente grandes (>1000 μL) ou pequenos (<1 μL)

Aplicações e Casos de Uso

Preparação de Amostras para Western Blot

Uma das aplicações mais comuns para esta calculadora é a preparação de amostras para western blotting. O carregamento consistente de proteínas é crucial para resultados confiáveis de western blot, e esta calculadora garante que você carregue a mesma quantidade de proteína para cada amostra, mesmo quando suas concentrações diferem.

Fluxo de trabalho de exemplo:

Realize o ensaio BCA em todas as suas amostras de proteína
Decida sobre uma quantidade de proteína consistente para carregar (normalmente 10-50 μg)
Use a calculadora para determinar o volume necessário para cada amostra
Adicione volumes apropriados de tampão de amostra e agente redutor
Carregue os volumes calculados em seu gel

Ensaios Enzimáticos

Para ensaios enzimáticos, muitas vezes é necessário usar uma quantidade específica de proteína para padronizar as condições de reação em diferentes amostras ou experimentos.

Fluxo de trabalho de exemplo:

Determine a concentração de proteína usando o ensaio BCA
Calcule o volume necessário para obter a quantidade desejada de proteína
Adicione esse volume à sua mistura de reação
Prossiga com seu ensaio enzimático

Experimentos de Imunoprecipitação

Em experimentos de imunoprecipitação (IP), começar com uma quantidade consistente de proteína é importante para comparar resultados entre diferentes condições.

Fluxo de trabalho de exemplo:

Meça a concentração de proteína de lisados celulares ou teciduais usando o ensaio BCA
Calcule os volumes necessários para obter quantidades iguais de proteína (normalmente 500-1000 μg)
Ajuste todas as amostras para o mesmo volume com tampão de lise
Prossiga com a incubação e precipitação de anticorpos

Purificação de Proteínas

Durante a purificação de proteínas, muitas vezes é necessário rastrear a concentração de proteína e calcular rendimentos em diferentes etapas.

Fluxo de trabalho de exemplo:

Colete frações durante a purificação
Realize o ensaio BCA em frações selecionadas
Calcule a concentração de proteína e a quantidade total de proteína
Determine os volumes necessários para aplicações subsequentes

Recursos Avançados e Considerações

Curvas Padrão Personalizadas

Embora a calculadora forneça parâmetros padrão para ensaios BCA, você também pode inserir valores personalizados se tiver gerado sua própria curva padrão. Isso é particularmente útil ao:

Trabalhar com amostras de proteínas não padrão
Usar protocolos BCA modificados
Trabalhar na presença de substâncias que possam interferir no ensaio

Para usar uma curva padrão personalizada:

Selecione "Personalizado" nas opções de curva padrão
Insira seus valores de inclinação e intercepto
A calculadora usará esses valores para todos os cálculos subsequentes

Lidando com Múltiplas Amostras

A calculadora permite que você adicione várias amostras e calcule seus volumes simultaneamente. Isso é especialmente útil ao preparar amostras para experimentos que requerem carregamento consistente de proteínas em várias condições.

Benefícios do processamento em lote:

Economize tempo calculando todos os volumes de uma vez
Garanta consistência em todas as suas amostras
Compare facilmente as concentrações de proteína entre amostras
Identifique outliers ou potenciais erros de medição

Lidando com Casos Limite

Leituras de Absorbância Muito Altas

Se sua leitura de absorbância estiver acima de 2.0, pode estar fora da faixa linear do ensaio BCA. Nesses casos:

Dilua sua amostra e repita o ensaio BCA
Alternativamente, use o sistema de aviso da calculadora, que sinalizará leituras potencialmente problemáticas

Leituras de Absorbância Muito Baixas

Para leituras de absorbância abaixo de 0.1, você pode estar próximo do limite de detecção do ensaio, o que pode afetar a precisão. Considere:

Concentrar sua amostra, se possível
Usar um método de quantificação de proteína mais sensível
Ajustar seu design experimental para acomodar quantidades de proteína mais baixas

Volumes Calculados Impraticavelmente Grandes

Se a calculadora sugerir um volume que é muito grande para sua aplicação:

Considere concentrar sua amostra de proteína
Ajuste sua quantidade de proteína desejada para baixo, se seu experimento permitir
Use o volume prático máximo e anote a quantidade real de proteína utilizada

História da Quantificação de Proteínas e Ensaio BCA

A quantificação precisa de proteínas tem sido uma necessidade fundamental na bioquímica e biologia molecular desde que esses campos surgiram. Métodos antigos dependiam da determinação do conteúdo de nitrogênio, que era demorado e exigia equipamentos especializados.

Evolução dos Métodos de Quantificação de Proteínas

Método de Kjeldahl (1883): Um dos primeiros métodos para quantificação de proteínas, baseado na medição do conteúdo de nitrogênio.
Teste de Biuret (Início dos anos 1900): Este método depende da reação entre ligações peptídicas e íons de cobre em uma solução alcalina, produzindo uma cor violeta.
Ensaio de Lowry (1951): Desenvolvido por Oliver Lowry, este método combinou a reação de Biuret com o reagente de Folin-Ciocalteu, aumentando a sensibilidade.
Ensaio de Bradford (1976): Marion Bradford desenvolveu este método usando o corante Coomassie Brilliant Blue G-250, que se liga às proteínas e muda o máximo de absorção.
Ensaio BCA (1985): Desenvolvido por Paul Smith e colegas da Pierce Chemical Company, este método combinou a reação de biuret com a detecção de BCA, oferecendo sensibilidade melhorada e compatibilidade com detergentes.

Desenvolvimento do Ensaio BCA

O ensaio BCA foi descrito pela primeira vez em um artigo de 1985 por Smith et al. intitulado "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Foi desenvolvido para abordar as limitações dos métodos existentes, particularmente a interferência de vários produtos químicos comumente usados na extração e purificação de proteínas.

A inovação chave foi usar o ácido bicinchonínico para detectar os íons Cu¹⁺ produzidos pela redução mediada por proteínas de Cu²⁺, formando um complexo de cor roxa que poderia ser medido espectrofotometricamente. Isso forneceu várias vantagens:

Maior sensibilidade do que o método de Biuret
Menos suscetível a interferências de substâncias não proteicas em comparação com o método de Lowry
Melhor compatibilidade com detergentes do que o ensaio de Bradford
Protocolo mais simples com menos reagentes e etapas

Desde sua introdução, o ensaio BCA se tornou um dos métodos de quantificação de proteínas mais amplamente utilizados em laboratórios de bioquímica e biologia molecular em todo o mundo.

Exemplos de Código para Calcular o Volume de Amostra

Fórmula do Excel

1=SE(B2<=0;"Erro: Absorbância inválida";SE(C2<=0;"Erro: Massa da amostra inválida";C2/(2*B2)))
2
3' Onde:
4' B2 contém a leitura de absorbância
5' C2 contém a massa da amostra desejada em μg
6' A fórmula retorna o volume da amostra necessário em μL
7

Implementação em Python

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Calcular a concentração de proteína a partir da absorbância usando a curva padrão."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("A absorbância não pode ser negativa")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Calcular o volume de amostra necessário com base na absorbância e na massa desejada."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("A massa da amostra deve ser positiva")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("A concentração de proteína calculada deve ser positiva")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Exemplo de uso
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Para a absorbância {absorbance} e a massa de proteína desejada {sample_mass} μg:")
31    print(f"Concentração de proteína: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Volume da amostra necessário: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Erro: {e}")
35

Código em R para Análise

1# Função para calcular a concentração de proteína a partir da absorbância
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("A absorbância não pode ser negativa")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Função para calcular o volume da amostra
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("A massa da amostra deve ser positiva")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("A concentração de proteína calculada deve ser positiva")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Exemplo de uso
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Para a absorbância %.2f e a massa de proteína desejada %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Concentração de proteína: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Volume da amostra necessário: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Erro: %s\n", e$message))
39})
40

Implementação em JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("A absorbância não pode ser negativa");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("A massa da amostra deve ser positiva");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("A concentração de proteína calculada deve ser positiva");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Exemplo de uso
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Para a absorbância ${absorbance} e a massa de proteína desejada ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Concentração de proteína: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Volume da amostra necessário: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Erro: ${error.message}`);
37}
38

Visualização da Curva Padrão

A relação entre absorbância e concentração de proteína é tipicamente linear dentro de uma certa faixa. Abaixo está uma visualização de uma curva padrão BCA:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbância (562 nm) Concentração de Proteína (μg/μL)

Curva Padrão Amostras Padrão

Curva Padrão BCA

Comparação com Outros Métodos de Quantificação de Proteínas

Diferentes métodos de quantificação de proteínas possuem várias vantagens e limitações. Aqui está como o ensaio BCA se compara a outros métodos comuns:

Método	Faixa de Sensibilidade	Vantagens	Limitações	Melhor Para
Ensaio BCA	5-2000 μg/mL	• Compatível com detergentes • Menos variação proteína-proteína • Desenvolvimento de cor estável	• Interferido por agentes redutores • Afetado por alguns agentes quelantes	• Quantificação geral de proteínas • Amostras contendo detergentes
Ensaio Bradford	1-1500 μg/mL	• Rápido (2-5 min) • Poucas substâncias interferentes	• Alta variação proteína-proteína • Incompatível com detergentes	• Medidas rápidas • Amostras sem detergentes
Método de Lowry	1-1500 μg/mL	• Bem estabelecido • Boa sensibilidade	• Muitas substâncias interferentes • Múltiplas etapas	• Consistência histórica • Amostras de proteínas puras
Absorbância UV (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Não destrutivo • Muito rápido • Sem reagentes necessários	• Afetado por ácidos nucleicos • Requer amostras puras	• Soluções de proteínas puras • Verificações rápidas durante a purificação
Fluorométrico	0.1-500 μg/mL	• Maior sensibilidade • Ampla faixa dinâmica	• Reagentes caros • Requer fluorômetro	• Amostras muito diluídas • Volume de amostra limitado

Perguntas Frequentes

Para que é utilizado o ensaio BCA?

O ensaio BCA (ácido bicinchonínico) é utilizado principalmente para quantificar a concentração total de proteína em uma amostra. É amplamente utilizado em bioquímica, biologia celular e biologia molecular para aplicações como western blotting, ensaios enzimáticos, imunoprecipitação e purificação de proteínas.

Quão preciso é o ensaio BCA?

O ensaio BCA é geralmente preciso dentro de 5-10% quando realizado corretamente. Sua precisão depende de vários fatores, incluindo a qualidade da curva padrão, a ausência de substâncias interferentes e se a composição da proteína desconhecida é semelhante à proteína padrão utilizada.

O que pode interferir nos resultados do ensaio BCA?

Várias substâncias podem interferir nos resultados do ensaio BCA, incluindo:

Agentes redutores (DTT, β-mercaptoetanol, glutationa)
Agentes quelantes (EDTA, EGTA)
Altas concentrações de açúcares simples
Lipídios
Alguns detergentes em altas concentrações
Compostos de amônia

Qual é a diferença entre os ensaios BCA e Bradford?

As principais diferenças são:

O ensaio BCA é mais compatível com detergentes e surfactantes
O ensaio Bradford é mais rápido (2-5 minutos vs. 30+ minutos para BCA)
O BCA tem menos variação proteína-proteína
O Bradford é mais sensível a aminoácidos básicos
O BCA é afetado por agentes redutores, enquanto o Bradford não é

Por que meu volume de amostra calculado é muito grande?

Se sua calculadora mostrar um volume muito grande, geralmente indica uma baixa concentração de proteína em sua amostra. Isso pode ser devido a:

Conteúdo real de proteína baixo em sua amostra original
Perda de proteína durante a preparação
Erros no procedimento do ensaio BCA
Leitura de absorbância imprecisa

Considere concentrar sua amostra ou ajustar seu design experimental para acomodar a menor concentração de proteína.

Posso usar esta calculadora para outros métodos de quantificação de proteínas?

Esta calculadora é especificamente projetada para resultados do ensaio BCA. Embora o princípio básico (converter concentração em volume) se aplique a outros métodos, a relação entre absorbância e concentração de proteína varia entre diferentes ensaios. Para outros métodos como Bradford ou Lowry, você precisaria usar diferentes parâmetros de curva padrão.

Como lido com amostras com absorbância fora da faixa linear?

Para leituras de absorbância fora da faixa linear (tipicamente >2.0):

Dilua sua amostra e repita o ensaio BCA
Use um método diferente de quantificação de proteína
Ajuste a curva padrão para incluir padrões de maior concentração

Qual proteína devo usar como padrão?

A Albumina Sérica Bovina (BSA) é o padrão mais comumente usado para ensaios BCA porque é:

Facilmente disponível e barata
Altamente solúvel
Estável em solução
Bem caracterizada

No entanto, se suas amostras contêm uma proteína predominante que difere significativamente da BSA, considere usar essa proteína como seu padrão para resultados mais precisos.

Quanto tempo a reação BCA é estável?

A cor roxa desenvolvida na reação BCA é estável por várias horas à temperatura ambiente e pode ser medida a qualquer momento dentro desse período. No entanto, para melhores resultados, é recomendável medir todos os padrões e amostras aproximadamente ao mesmo tempo após o desenvolvimento da cor.

Posso reutilizar a curva padrão de um experimento anterior?

Embora seja tecnicamente possível reutilizar uma curva padrão, não é recomendado para quantificação precisa. Variações nos reagentes, condições de incubação e calibração do instrumento podem afetar a relação entre absorbância e concentração de proteína. Para resultados confiáveis, gere uma nova curva padrão toda vez que realizar o ensaio.

Referências

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Instruções. Disponível em: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Experimente Hoje Nossa Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA!

Agora que você entende os princípios por trás da quantificação de proteínas BCA e do cálculo do volume de amostra, experimente nossa calculadora para simplificar seu fluxo de trabalho no laboratório. Basta inserir suas leituras de absorbância e a massa de amostra desejada para obter cálculos instantâneos e precisos de volume de amostra.

Seja preparando amostras para western blotting, ensaios enzimáticos ou qualquer outro experimento baseado em proteínas, nossa calculadora ajudará a garantir resultados consistentes e confiáveis. Economize tempo, reduza erros e melhore a reprodutibilidade de seus experimentos com a Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA.

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Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA para Protocolos de Laboratório

Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA

standardCurveTitle

Entradas da Amostra

Amostra 1

Fórmula de Cálculo

Documentação

Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA

Introdução

Entendendo o Ensaio BCA e o Cálculo do Volume de Amostra

O que é um Ensaio BCA?

A Fórmula para Cálculo do Volume de Amostra

Como Usar a Calculadora de Volume de Amostra de Absorbância BCA

Exemplo Passo a Passo

Entendendo os Resultados

Aplicações e Casos de Uso

Preparação de Amostras para Western Blot

Ensaios Enzimáticos

Experimentos de Imunoprecipitação

Purificação de Proteínas

Recursos Avançados e Considerações

Curvas Padrão Personalizadas

Lidando com Múltiplas Amostras

Lidando com Casos Limite

Leituras de Absorbância Muito Altas

Leituras de Absorbância Muito Baixas

Volumes Calculados Impraticavelmente Grandes

História da Quantificação de Proteínas e Ensaio BCA

Evolução dos Métodos de Quantificação de Proteínas

Desenvolvimento do Ensaio BCA

Exemplos de Código para Calcular o Volume de Amostra

Fórmula do Excel

Implementação em Python

Código em R para Análise

Implementação em JavaScript

Visualização da Curva Padrão

Comparação com Outros Métodos de Quantificação de Proteínas

Perguntas Frequentes

Para que é utilizado o ensaio BCA?

Quão preciso é o ensaio BCA?

O que pode interferir nos resultados do ensaio BCA?

Qual é a diferença entre os ensaios BCA e Bradford?

Por que meu volume de amostra calculado é muito grande?

Posso usar esta calculadora para outros métodos de quantificação de proteínas?

Como lido com amostras com absorbância fora da faixa linear?

Qual proteína devo usar como padrão?

Quanto tempo a reação BCA é estável?

Posso reutilizar a curva padrão de um experimento anterior?

Referências

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