BCA kalkulátor objemu vzorku pre laboratórne protokoly

Vypočítajte presné objemy vzoriek na základe absorbčných hodnôt BCA testu a požadovanej hmotnosti proteínu. Nevyhnutné pre konzistentné zaťaženie proteínu v western blottingu a iných laboratórnych aplikáciách.

BCA kalkulačka objemu vzorku absorbancie

Tento nástroj vypočíta potrebný objem vzorku na základe výsledkov absorbancie BCA a hmotnosti vzorku. Zadajte hodnotu absorbancie a hmotnosť vzorku pre každý vzorok na výpočet zodpovedajúceho objemu vzorku.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Vstupy vzorku

Vzorka 1

Názov vzorky

BCA absorbancia*

Hmotnosť vzorky (μg)*

Objem vzorky

Copy

N/A μL

Výpočtový vzorec

Objem vzorky sa vypočíta pomocou nasledujúceho vzorca:

Objem vzorky (μL) = Hmotnosť vzorky (μg) / Koncentrácia proteínu (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Dokumentácia

BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku

Úvod

BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku je špecializovaný nástroj navrhnutý na pomoc výskumníkom a laboratórnym technikom presne určiť vhodný objem vzorky pre experimenty na základe výsledkov BCA (bicinchonínovej kyseliny) testu. Tento kalkulátor berie absorbancie z vášho BCA testu a požadovanú hmotnosť vzorky na výpočet presného objemu potrebného na konzistentné naloženie proteínu v aplikáciách ako je western blotting, enzymatické testy a iné techniky analýzy proteínov.

BCA test je jednou z najpoužívanejších metód na kvantifikáciu proteínov v biochemických a molekulárnych biologických laboratóriách. Meraním absorbancie vašich proteínových vzoriek a porovnaním s referenčnou krivkou môžete určiť koncentráciu proteínu s vysokou presnosťou. Náš kalkulátor zjednodušuje tento proces automatickým prevodom absorbancií na presné objemy vzoriek potrebné pre vaše experimenty.

Pochopenie BCA Testu a Výpočtu Vzorky

Čo je BCA Test?

Bicinchonínový test (BCA) je biochemický test na určenie celkovej koncentrácie proteínu v roztoku. Princíp tohto testu spočíva v tvorbe komplexu Cu²⁺-proteín za alkalických podmienok, nasledovaného redukciou Cu²⁺ na Cu¹⁺. Množstvo redukcie je úmerné prítomnému proteínu. BCA vytvára purpurovo sfarbený komplex s Cu¹⁺ v alkalickom prostredí, čím poskytuje základ na monitorovanie redukcie medi proteínmi.

Intenzita purpurovej farby sa zvyšuje úmerne s koncentráciou proteínu, čo sa dá merať pomocou spektrofotometra na približne 562 nm. Absorbancie sa potom porovnávajú s referenčnou krivkou na určenie koncentrácie proteínu v neznámych vzorkách.

Formula na Výpočet Vzorky

Základná formula na výpočet objemu vzorky z výsledkov absorbancie BCA je:

$\text{Objem Vzorky (μL)} = \frac{\text{Hmotnosť Vzorky (μg)}}{\text{Koncentrácia Proteínu (μg/μL)}}$

Kde:

Objem Vzorky je objem vzorky potrebný (v mikrolitroch, μL)
Hmotnosť Vzorky je požadované množstvo proteínu na použitie (v mikrogramoch, μg)
Koncentrácia Proteínu je odvodená z absorbancie BCA testu (v μg/μL)

Koncentrácia proteínu sa vypočíta z absorbancie pomocou rovnice referenčnej krivky:

$\text{Koncentrácia Proteínu (μg/μL)} = \text{Sklon} \times \text{Absorbancia} + \text{Priesečník}$

Pre štandardný BCA test je typický sklon približne 2.0 a priesečník je často blízko nuly, hoci tieto hodnoty sa môžu líšiť v závislosti od vašich konkrétnych podmienok testu a referenčnej krivky.

Ako Použiť BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku

Náš kalkulátor zjednodušuje proces určovania objemov vzoriek z výsledkov BCA testu. Postupujte podľa týchto krokov, aby ste získali presné výpočty:

Zadajte Informácie o Vzorke:
- Poskytnite názov pre vašu vzorku (voliteľné, ale užitočné na sledovanie viacerých vzoriek)
- Zadajte absorbanciu BCA z vášho spektrofotometra
- Zadajte požadovanú hmotnosť vzorky (množstvo proteínu, ktoré chcete použiť v μg)
Vyberte Typ Referenčnej Krivky:
- Štandardná (predvolené): Používa typické parametre referenčnej krivky BCA
- Zlepšená: Pre protokol so zvýšenou citlivosťou
- Mikro: Pre protokol mikroplatne
- Vlastná: Umožňuje zadať vlastné hodnoty sklonu a priesečníka
Zobraziť Výsledky:
- Kalkulátor okamžite zobrazí požadovaný objem vzorky v mikrolitroch
- Výsledky sú tiež prezentované v súhrnnej tabuľke pre jednoduché odkazy
- Pre viaceré vzorky môžete pridať ďalšie záznamy a porovnať výsledky
Kopírovať alebo Exportovať Výsledky:
- Použite tlačidlo na kopírovanie na prenos výsledkov do vášho laboratórneho zápisníka alebo iných aplikácií
- Všetky výpočty môžu byť uložené na budúce odkazy

Príklad Krok za Krokem

Prejdime si praktický príklad:

Vykonali ste BCA test a získali ste absorbanciu 0.75 pre vašu proteínovú vzorku.
Chcete naložiť 20 μg proteínu pre váš western blot.
Použitím referenčnej krivky (sklon = 2.0, priesečník = 0):
- Koncentrácia proteínu = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Požadovaný objem vzorky = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

To znamená, že by ste mali naložiť 13.33 μL vašej vzorky, aby ste získali 20 μg proteínu.

Pochopenie Výsledkov

Kalkulátor poskytuje niekoľko dôležitých informácií:

Koncentrácia Proteínu: Toto je vypočítané z vašej absorbancie pomocou vybranej referenčnej krivky. Predstavuje množstvo proteínu na jednotkový objem vo vašej vzorke (μg/μL).
Objem Vzorky: Toto je objem vašej vzorky, ktorý obsahuje požadované množstvo proteínu. Táto hodnota je to, čo použijete pri príprave vašich experimentov.
Varovania a Odporúčania: Kalkulátor môže poskytnúť varovania pre:
- Veľmi vysoké absorbancie (>3.0), ktoré môžu byť mimo lineárneho rozsahu testu
- Veľmi nízke absorbancie (<0.1), ktoré môžu byť blízko detekčného limitu
- Vypočítané objemy, ktoré sú neprakticky veľké (>1000 μL) alebo malé (<1 μL)

Aplikácie a Použitie

Príprava Vzorky pre Western Blot

Jednou z najbežnejších aplikácií tohto kalkulátora je príprava vzoriek pre western blotting. Konzistentné naloženie proteínu je kľúčové pre spoľahlivé výsledky western blotu, a tento kalkulátor zabezpečuje, že naložíte rovnaké množstvo proteínu pre každú vzorku, aj keď sa ich koncentrácie líšia.

Príklad pracovného postupu:

Vykonajte BCA test na všetkých vašich proteínových vzorkách
Rozhodnite sa o konzistentnom množstve proteínu, ktoré chcete naložiť (typicky 10-50 μg)
Použite kalkulátor na určenie objemu potrebného pre každú vzorku
Pridajte príslušné objemy vzorkového pufra a redukčného činidla
Naložte vypočítané objemy na váš gél

Enzymatické Testy

Pre enzymatické testy je často potrebné použiť konkrétne množstvo proteínu na štandardizáciu podmienok reakcie naprieč rôznymi vzorkami alebo experimentmi.

Príklad pracovného postupu:

Určte koncentráciu proteínu pomocou BCA testu
Vypočítajte objem potrebný na získanie požadovaného množstva proteínu
Pridajte tento objem do vašej reakčnej zmesi
Pokračujte vo vašom enzymatickom teste

Experimenty s Imunoprecipitáciou

V experimentoch s imunoprecipitáciou je dôležité začať s konzistentným množstvom proteínu na porovnanie výsledkov naprieč rôznymi podmienkami.

Príklad pracovného postupu:

Zmerajte koncentráciu proteínu z lysátov buniek alebo tkanív pomocou BCA testu
Vypočítajte objemy potrebné na dosiahnutie rovnakých množstiev proteínu (typicky 500-1000 μg)
Upravte všetky vzorky na rovnaký objem pomocou lysis pufra
Pokračujte s inkubáciou protilátok a precipitáciou

Purifikácia Proteínu

Počas purifikácie proteínu je často potrebné sledovať koncentráciu proteínu a vypočítať výťažky v rôznych krokoch.

Príklad pracovného postupu:

Zbierajte frakcie počas purifikácie
Vykonajte BCA test na vybraných frakciách
Vypočítajte koncentráciu proteínu a celkové množstvo proteínu
Určte objemy potrebné pre nasledujúce aplikácie

Pokročilé Funkcie a Úvahy

Vlastné Referenčné Krivky

Hoci kalkulátor poskytuje predvolené parametre pre štandardné BCA testy, môžete tiež zadať vlastné hodnoty, ak ste vytvorili vlastnú referenčnú krivku. To je obzvlášť užitočné, keď:

Pracujete s nestandardnými proteínovými vzorkami
Používate modifikované BCA protokoly
Pracujete v prítomnosti látok, ktoré môžu interferovať s testom

Ak chcete použiť vlastnú referenčnú krivku:

Vyberte "Vlastné" z možností referenčnej krivky
Zadajte svoje hodnoty sklonu a priesečníka
Kalkulátor použije tieto hodnoty pre všetky nasledujúce výpočty

Riešenie Viacerých Vzorkov

Kalkulátor vám umožňuje pridať viaceré vzorky a vypočítať ich objemy súčasne. To je obzvlášť užitočné pri príprave vzoriek pre experimenty, ktoré vyžadujú konzistentné naloženie proteínu naprieč rôznymi podmienkami.

Výhody dávkového spracovania:

Ušetrite čas vypočítaním všetkých objemov naraz
Zabezpečte konzistenciu medzi všetkými vašimi vzorkami
Jednoducho porovnajte koncentrácie proteínu medzi vzorkami
Identifikujte odchýlky alebo potenciálne chyby merania

Riešenie Okrajových Prípadov

Veľmi Vysoké Absorbancie

Ak je vaša absorbancia nad 2.0, môže to byť mimo lineárneho rozsahu BCA testu. V takýchto prípadoch:

Zrieďte svoju vzorku a opakujte BCA test
Alternatívne použite varovný systém kalkulátora, ktorý označí potenciálne problematické merania

Veľmi Nízke Absorbancie

Pre absorbancie pod 0.1 môžete byť blízko detekčného limitu testu, čo môže ovplyvniť presnosť. Zvážte:

Koncentráciu vašej vzorky, ak je to možné
Použitie citlivejšej metódy kvantifikácie proteínu
Úpravu vášho experimentálneho dizajnu na prispôsobenie nižším množstvám proteínu

Neprakticky Veľké Vypočítané Objem

Ak kalkulátor navrhuje objem, ktorý je pre vašu aplikáciu príliš veľký:

Zvážte koncentráciu vašej proteínovej vzorky
Ak to váš experiment umožňuje, znížte požadované množstvo proteínu
Použite maximálny praktický objem a poznačte skutočné množstvo proteínu, ktoré bolo použité

História Kvantifikácie Proteínov a BCA Testu

Presná kvantifikácia proteínov bola základnou požiadavkou v biochemii a molekulárnej biologii od vzniku týchto oblastí. Ranné metódy sa spoliehali na stanovenie obsahu dusíka, čo bolo časovo náročné a vyžadovalo špecializované vybavenie.

Evolúcia Metód Kvantifikácie Proteínov

Kjeldahlova Metóda (1883): Jedna z najskorších metód na kvantifikáciu proteínov, založená na meraní obsahu dusíka.
Biuret Test (Začiatok 1900-tych rokov): Táto metóda sa spolieha na reakciu medzi peptidovými väzbami a iónmi medi v alkalickom roztoku, čo vedie k produkcii fialovej farby.
Lowry Test (1951): Vyvinutý Oliverom Lowrym, táto metóda kombinovala biuretovu reakciu s Folin-Ciocalteu činidlom, čím sa zvýšila citlivosť.
Bradford Test (1976): Marion Bradford vyvinul túto metódu pomocou farbiva Coomassie Brilliant Blue G-250, ktoré sa viaže na proteíny a posúva maximálnu absorpciu.
BCA Test (1985): Vyvinutý Paulom Smithom a jeho kolegami v spoločnosti Pierce Chemical, táto metóda kombinovala biuretovu reakciu s detekciou BCA, ponúkajúc zlepšenú citlivosť a kompatibilitu s detergentmi.

Vývoj BCA Testu

BCA test bol prvýkrát opísaný v článku z roku 1985 Smitha a kol. s názvom "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Bol vyvinutý na riešenie obmedzení existujúcich metód, najmä interferencie rôznych chemikálií bežne používaných v extrakcii a purifikácii proteínov.

Kľúčovou inováciou bolo použitie bicinchonínovej kyseliny na detekciu Cu¹⁺ iónov produkovaných redukciou Cu²⁺ proteínom, pričom sa vytvára purpurovo sfarbený komplex, ktorý sa dá merať spektrofotometricky. To poskytlo niekoľko výhod:

Vyššia citlivosť ako biuretova metóda
Menšia náchylnosť na interferenciu od neproteínových látok v porovnaní s Lowry metódou
Lepšia kompatibilita s detergentmi ako Bradford test
Jednoduchší protokol s menej činidlami a krokmi

Od svojho zavedenia sa BCA test stal jednou z najpoužívanejších metód kvantifikácie proteínov v biochemických a molekulárnych biologických laboratóriách po celom svete.

Kódové Príklady na Výpočet Vzorky

Excel Formula

1=IF(B2<=0,"Chyba: Neplatná absorbancia",IF(C2<=0,"Chyba: Neplatná hmotnosť vzorky",C2/(2*B2)))
2
3' Kde:
4' B2 obsahuje absorbanciu
5' C2 obsahuje požadovanú hmotnosť vzorky v μg
6' Formula vracia požadovaný objem vzorky v μL
7

Python Implementácia

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Vypočítajte koncentráciu proteínu z absorbancie pomocou referenčnej krivky."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbancia nemôže byť záporná")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Vypočítajte požadovaný objem vzorky na základe absorbancie a požadovanej hmotnosti."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Hmotnosť vzorky musí byť kladná")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Vypočítaná koncentrácia proteínu musí byť kladná")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Príklad použitia
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Pre absorbanciu {absorbance} a požadovanú hmotnosť proteínu {sample_mass} μg:")
31    print(f"Koncentrácia proteínu: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Požadovaný objem vzorky: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Chyba: {e}")
35

R Kód na Analýzu

1# Funkcia na výpočet koncentrácie proteínu z absorbancie
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbancia nemôže byť záporná")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funkcia na výpočet objemu vzorky
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Hmotnosť vzorky musí byť kladná")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Vypočítaná koncentrácia proteínu musí byť kladná")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Príklad použitia
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Pre absorbanciu %.2f a požadovanú hmotnosť %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Koncentrácia proteínu: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Požadovaný objem vzorky: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Chyba: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript Implementácia

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbancia nemôže byť záporná");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Hmotnosť vzorky musí byť kladná");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Vypočítaná koncentrácia proteínu musí byť kladná");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Príklad použitia
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Pre absorbanciu ${absorbance} a požadovanú hmotnosť ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Koncentrácia proteínu: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Požadovaný objem vzorky: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Chyba: ${error.message}`);
37}
38

Vizualizácia Referenčnej Krivky

Vztah medzi absorbanciou a koncentráciou proteínu je zvyčajne lineárny v určitom rozsahu. Nižšie je vizualizácia štandardnej BCA krivky:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbancia (562 nm) Koncentrácia Proteínu (μg/μL)

Štandardná Krivka Štandardné Vzorky

BCA Štandardná Krivka

Porovnanie s Inými Metódami Kvantifikácie Proteínov

Rôzne metódy kvantifikácie proteínov majú rôzne výhody a obmedzenia. Tu je porovnanie BCA testu s inými bežnými metódami:

Metóda	Rozsah Citlivosti	Výhody	Obmedzenia	Najlepšie Pre
BCA Test	5-2000 μg/mL	• Kompatibilný s detergentmi • Menej variabilný medzi proteínmi • Stabilný vývoj farby	• Interferovaný redukčnými činidlami • Ovplyvnený niektorými chelatačnými činidlami	• Všeobecná kvantifikácia proteínov • Vzorky obsahujúce detergenty
Bradford Test	1-1500 μg/mL	• Rýchly (2-5 min) • Málo interferujúcich látok	• Vysoká variabilita medzi proteínmi • Nezlučiteľný s detergentmi	• Rýchle merania • Vzorky bez detergentov
Lowry Metóda	1-1500 μg/mL	• Dobre zavedená • Dobrá citlivosť	• Mnoho interferujúcich látok • Viacero krokov	• Historická konzistencia • Čisté proteínové vzorky
UV Absorbancia (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Nedeštruktívny • Veľmi rýchly • Žiadne činidlá potrebné	• Ovplyvnené nukleovými kyselinami • Vyžaduje čisté vzorky	• Čisté proteínové roztoky • Rýchle kontroly počas purifikácie
Fluorometrický	0.1-500 μg/mL	• Najvyššia citlivosť • Široký dynamický rozsah	• Drahé činidlá • Vyžaduje fluorometer	• Veľmi riedke vzorky • Obmedzený objem vzorky

Často Kladené Otázky

Na čo sa používa BCA test?

BCA (bicinchonínová kyselina) test sa primárne používa na kvantifikáciu celkovej koncentrácie proteínu vo vzorke. Je široko používaný v biochemii, bunkovej biológii a molekulárnej biológii na aplikácie ako western blotting, enzymatické testy, imunoprecipitáciu a purifikáciu proteínov.

Aká je presnosť BCA testu?

BCA test je zvyčajne presný v rámci 5-10% pri správnom vykonaní. Jeho presnosť závisí od niekoľkých faktorov, vrátane kvality referenčnej krivky, absencie interferujúcich látok a toho, či je zloženie neznámeho proteínu podobné proteínu použitému v referenčnej krivke.

Čo môže interferovať s výsledkami BCA testu?

Niekoľko látok môže interferovať s výsledkami BCA testu, vrátane:

Redukčných činidiel (DTT, β-merkaptotanol, glutathión)
Chelatačných činidiel (EDTA, EGTA)
Vysokých koncentrácií jednoduchých cukrov
Lipidov
Niektorých detergentov vo vysokých koncentráciách
Amónnych zlúčenín

Aký je rozdiel medzi BCA a Bradford testami?

Hlavné rozdiely sú:

BCA test je viac kompatibilný s detergentmi a surfaktantmi
Bradford test je rýchlejší (2-5 minút vs. 30+ minút pre BCA)
BCA má menšiu variabilitu medzi proteínmi
Bradford je citlivejší na zásadné aminokyseliny
BCA je ovplyvnená redukčnými činidlami, zatiaľ čo Bradford nie

Prečo je môj vypočítaný objem vzorky príliš veľký?

Ak kalkulátor zobrazuje veľmi veľký objem vzorky, zvyčajne to naznačuje nízku koncentráciu proteínu vo vašej vzorke. Môže to byť spôsobené:

Skutočne nízkym obsahom proteínu vo vašej pôvodnej vzorke
Stratou proteínu počas prípravy
Chybami v postupe BCA testu
Nepresným meraním absorbancie

Zvážte koncentráciu vašej vzorky alebo úpravu vášho experimentálneho dizajnu na prispôsobenie nižším koncentráciám proteínu.

Môžem použiť tento kalkulátor pre iné metódy kvantifikácie proteínov?

Tento kalkulátor je špecificky navrhnutý pre výsledky BCA testu. Hoci základný princíp (prevod koncentrácie na objem) platí aj pre iné metódy, vzťah medzi absorbanciou a koncentráciou proteínu sa líši medzi rôznymi testami. Pre iné metódy ako Bradford alebo Lowry by ste museli použiť iné parametre referenčnej krivky.

Ako sa mám zaobchádzať so vzorkami s absorbanciou mimo lineárneho rozsahu?

Pre absorbancie mimo lineárneho rozsahu (typicky >2.0):

Zrieďte svoju vzorku a opakujte BCA test
Použite inú metódu kvantifikácie proteínu
Upravte referenčnú krivku tak, aby zahŕňala vyššie koncentrácie štandardov

Aký proteín by som mal použiť ako štandard?

Bovinný sérový albumín (BSA) je najbežnejšie používaný štandard pre BCA testy, pretože je:

Ľahko dostupný a lacný
Veľmi rozpustný
Stabilný v roztoku
Dobre charakterizovaný

Avšak, ak vaše vzorky obsahujú prevažujúci proteín, ktorý sa významne líši od BSA, zvážte použitie tohto proteínu ako vášho štandardu pre presnejšie výsledky.

Ako dlho je reakcia BCA stabilná?

Purpurová farba vyvinutá v BCA reakcii je stabilná niekoľko hodín pri izbovej teplote a môže byť meraná kedykoľvek v tomto období. Pre najlepšie výsledky sa však odporúča merať všetky štandardy a vzorky približne v rovnakom čase po vývoji farby.

Môžem znovu použiť referenčnú krivku z predchádzajúceho experimentu?

Hoci je technicky možné znovu použiť referenčnú krivku, pre presnú kvantifikáciu sa to neodporúča. Variácie v činidlách, inkubačných podmienkach a kalibrácii prístroja môžu ovplyvniť vzťah medzi absorbanciou a koncentráciou proteínu. Pre spoľahlivé výsledky generujte čerstvú referenčnú krivku zakaždým, keď vykonáte test.

Odkazy

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Pokyny. Dostupné na: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Vyskúšajte náš BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku Dnes!

Teraz, keď rozumiete princípom kvantifikácie proteínu BCA a výpočtu objemu vzorky, vyskúšajte náš kalkulátor na zjednodušenie vašej laboratórnej práce. Jednoducho zadajte vaše absorbancie a požadovanú hmotnosť vzorky, aby ste získali okamžité, presné výpočty objemu vzorky.

Či už pripravujete vzorky na western blotting, enzymatické testy alebo akýkoľvek iný experiment založený na proteíne, náš kalkulátor pomôže zabezpečiť konzistentné a spoľahlivé výsledky. Ušetrite čas, znížte chyby a zlepšite reprodukovateľnosť vašich experimentov s BCA Absorbancia Kalkulátorom Vzorku.

🔗

Súvisiace nástroje

Objavte ďalšie nástroje, ktoré by mohli byť užitočné pre vašu pracovnú postupnosť

BCA kalkulátor objemu vzorku pre laboratórne protokoly

BCA kalkulačka objemu vzorku absorbancie

standardCurveTitle

Vstupy vzorku

Vzorka 1

Výpočtový vzorec

Dokumentácia

BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku

Úvod

Pochopenie BCA Testu a Výpočtu Vzorky

Čo je BCA Test?

Formula na Výpočet Vzorky

Ako Použiť BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku

Príklad Krok za Krokem

Pochopenie Výsledkov

Aplikácie a Použitie

Príprava Vzorky pre Western Blot

Enzymatické Testy

Experimenty s Imunoprecipitáciou

Purifikácia Proteínu

Pokročilé Funkcie a Úvahy

Vlastné Referenčné Krivky

Riešenie Viacerých Vzorkov

Riešenie Okrajových Prípadov

Veľmi Vysoké Absorbancie

Veľmi Nízke Absorbancie

Neprakticky Veľké Vypočítané Objem

História Kvantifikácie Proteínov a BCA Testu

Evolúcia Metód Kvantifikácie Proteínov

Vývoj BCA Testu

Kódové Príklady na Výpočet Vzorky

Excel Formula

Python Implementácia

R Kód na Analýzu

JavaScript Implementácia

Vizualizácia Referenčnej Krivky

Porovnanie s Inými Metódami Kvantifikácie Proteínov

Často Kladené Otázky

Na čo sa používa BCA test?

Aká je presnosť BCA testu?

Čo môže interferovať s výsledkami BCA testu?

Aký je rozdiel medzi BCA a Bradford testami?

Prečo je môj vypočítaný objem vzorky príliš veľký?

Môžem použiť tento kalkulátor pre iné metódy kvantifikácie proteínov?

Ako sa mám zaobchádzať so vzorkami s absorbanciou mimo lineárneho rozsahu?

Aký proteín by som mal použiť ako štandard?

Ako dlho je reakcia BCA stabilná?

Môžem znovu použiť referenčnú krivku z predchádzajúceho experimentu?

Odkazy

Vyskúšajte náš BCA Absorbancia Kalkulátor Vzorku Dnes!

Súvisiace nástroje

Kalkulačka objemu nádrže pre valcové, guľové a obdĺžnikové nádrže

Kalkulačka objemu na plochu pre kvapalné pokrytie

Kalkulačka objemu jámy: Valcové a obdĺžnikové výkopy

Kalkulačka objemu jámy: Meranie objemov valcových výkopov

Kalkulačka objemu kubickej bunky: Zistite objem z dĺžky hrany

Jednoduchý kalkulátor faktora zriedenia pre laboratórne roztoky

Kalkulačka objemu piesku: Odhadnite materiál pre akýkoľvek projekt

Kalkulačka koeficientu absorpcie dvoch fotónov

Kalkulačka molarity: Nástroj na koncentráciu roztokov