🛠️

Whiz Tools

BCA Absorbans Örnek Hacmi Hesaplayıcı Laboratuvar Protokolleri için

BCA testi absorbans okumalarına ve istenen protein miktarına dayalı olarak hassas örnek hacimlerini hesaplayın. Batı blotları ve diğer laboratuvar uygulamalarında tutarlı protein yüklemesi için gereklidir.

BCA Absorbans Örnek Hacmi Hesaplayıcı

Bu araç, BCA absorbans sonuçları ve örnek kütlesine dayanarak gerekli örnek hacmini hesaplar. Her örnek için absorbans değerini ve örnek kütlesini girerek karşılık gelen örnek hacmini hesaplayın.

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

Örnek Girdileri

Örnek 1

Copy
N/A μL

Hesaplama Formülü

Örnek hacmi aşağıdaki formül kullanılarak hesaplanır:

Örnek Hacmi (μL) = Örnek Kütlesi (μg) / Protein Konsantrasyonu (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Belgeler

BCA Absorbans Hesaplayıcı

Giriş

BCA Absorbans Hesaplayıcı, araştırmacıların ve laboratuvar teknisyenlerinin BCA (bisinkoninik asit) analiz sonuçlarına dayanarak deneyler için uygun örnek hacmini doğru bir şekilde belirlemelerine yardımcı olmak için tasarlanmış özel bir araçtır. Bu hesaplayıcı, BCA analizinizden elde ettiğiniz absorbans okumalarını ve istediğiniz örnek kütlesini alarak, batı blotlama, enzimatik analizler ve diğer protein analiz teknikleri gibi uygulamalarda tutarlı protein yüklemesi için gereken kesin hacmi hesaplar.

BCA analizi, biyokimya ve moleküler biyoloji laboratuvarlarında protein miktarını belirlemek için en yaygın kullanılan yöntemlerden biridir. Protein örneklerinizin absorbansını ölçerek ve bunları bir standart eğri ile karşılaştırarak, yüksek doğrulukla protein konsantrasyonunu belirleyebilirsiniz. Hesaplayıcımız, bu süreci otomatikleştirerek absorbans okumalarını deneyleriniz için gereken tam örnek hacimlerine dönüştürür.

BCA Analizi ve Örnek Hacmi Hesaplama Anlayışı

BCA Analizi Nedir?

Bisinkoninik Asit (BCA) analizi, bir çözeltideki toplam protein konsantrasyonunu belirlemek için kullanılan biyokimyasal bir analizdir. Bu analizin prensibi, alkali koşullar altında bir Cu²⁺-protein kompleksinin oluşumuna dayanır ve ardından Cu²⁺'nin Cu¹⁺'ye indirgenmesi sağlanır. İndirgenme miktarı, mevcut proteinle orantılıdır. BCA, alkali ortamlarda Cu¹⁺ ile mor renkte bir kompleks oluşturur ve bu da proteinlerin indirgenmesini izlemek için bir temel sağlar.

Mor rengin yoğunluğu, protein konsantrasyonu ile orantılı olarak artar ve bu, yaklaşık 562 nm'de bir spektrofotometre kullanılarak ölçülebilir. Absorbans okumaları daha sonra bilinmeyen örneklerdeki protein konsantrasyonunu belirlemek için bir standart eğri ile karşılaştırılır.

Örnek Hacmi Hesaplama Formülü

BCA absorbans sonuçlarından örnek hacmini hesaplamak için temel formül şudur:

O¨rnek Hacmi (μL)=O¨rnek Ku¨tlesi (μg)Protein Konsantrasyonu (μg/μL)\text{Örnek Hacmi (μL)} = \frac{\text{Örnek Kütlesi (μg)}}{\text{Protein Konsantrasyonu (μg/μL)}}

Burada:

  • Örnek Hacmi, gereken örnek hacmini (mikrolitre, μL cinsinden)
  • Örnek Kütlesi, kullanmak istediğiniz protein miktarını (mikrogram, μg cinsinden)
  • Protein Konsantrasyonu, BCA absorbans okumalarından elde edilen değerdir (μg/μL cinsinden)

Protein konsantrasyonu, absorbans okumalarından standart eğri denklemi kullanılarak hesaplanır:

Protein Konsantrasyonu (μg/μL)=Eg˘im×Absorbans+Kesis¸im\text{Protein Konsantrasyonu (μg/μL)} = \text{Eğim} \times \text{Absorbans} + \text{Kesişim}

Standart bir BCA analizi için tipik eğim yaklaşık 2.0'dır ve kesişim genellikle sıfıra yakındır, ancak bu değerler belirli analiz koşullarınıza ve standart eğrinize bağlı olarak değişebilir.

BCA Absorbans Hesaplayıcısını Kullanma

Hesaplayıcımız, BCA analiz sonuçlarından örnek hacimlerini belirleme sürecini basitleştirir. Doğru hesaplamalar için şu adımları izleyin:

  1. Örnek Bilgilerini Girin:

    • Örneğiniz için bir ad girin (birden fazla örneği takip etmek için isteğe bağlı ama faydalı)
    • Spektrofotometrenizden aldığınız BCA absorbans okumalarını girin
    • Kullanmak istediğiniz örnek kütlesini (μg cinsinden) girin

  2. Standart Eğri Türünü Seçin:

    • Standart (varsayılan): Tipik BCA standart eğri parametrelerini kullanır
    • Gelişmiş: Geliştirilmiş duyarlılık protokolü için
    • Mikro: Mikroplaka protokolü için
    • Özel: Kendi eğim ve kesişim değerlerinizi girmenize olanak tanır

  3. Sonuçları Görüntüleyin:

    • Hesaplayıcı, gereken örnek hacmini anında mikrolitre cinsinden gösterecektir
    • Sonuçlar, kolay referans için bir özet tablosunda da sunulmaktadır
    • Birden fazla örnek için daha fazla giriş ekleyebilir ve sonuçları karşılaştırabilirsiniz

  4. Sonuçları Kopyala veya Dışa Aktar:

    • Sonuçları laboratuvar defterinize veya diğer uygulamalara aktarmak için kopyalama düğmesini kullanın
    • Tüm hesaplamalar gelecekteki referans için kaydedilebilir

Adım Adım Örnek

Pratik bir örneği inceleyelim:

  1. BCA analizini gerçekleştirdiniz ve protein örneğiniz için 0.75 absorbans okuması aldınız.
  2. Batı blot için 20 μg protein yüklemek istiyorsunuz.
  3. Standart eğri (eğim = 2.0, kesişim = 0) kullanarak:
    • Protein konsantrasyonu = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • Gerekli örnek hacmi = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Bu, 20 μg protein elde etmek için 13.33 μL örnek yüklemeniz gerektiği anlamına gelir.

Sonuçları Anlama

Hesaplayıcı, birkaç önemli bilgi parçası sağlar:

  1. Protein Konsantrasyonu: Bu, seçtiğiniz standart eğri kullanılarak absorbans okumalarınızdan hesaplanır. Örneğinizdeki birim hacim başına protein miktarını (μg/μL) temsil eder.

  2. Örnek Hacmi: Bu, istediğiniz protein miktarını içeren örnek hacmidir. Bu değer, deneylerinizi hazırlarken kullanacağınız değerdir.

  3. Uyarılar ve Öneriler: Hesaplayıcı, aşağıdakiler için uyarılar verebilir:

    • Çok yüksek absorbans okumaları (>3.0) analizinin doğrusal aralığının dışında olabilir
    • Çok düşük absorbans okumaları (<0.1) tespit sınırına yakın olabilir
    • Pratikte büyük (>1000 μL) veya küçük (<1 μL) hacimlerin hesaplanması

Uygulamalar ve Kullanım Durumları

Batı Blot Örnek Hazırlığı

Bu hesaplayıcının en yaygın uygulamalarından biri, batı blotlama için örnek hazırlamaktır. Tutarlı protein yüklemesi, güvenilir batı blot sonuçları için kritik öneme sahiptir ve bu hesaplayıcı, her örnek için protein miktarını yüklemenizi sağlar, hatta konsantrasyonları farklı olsa bile.

Örnek iş akışı:

  1. Tüm protein örneklerinizin BCA analizini gerçekleştirin
  2. Yüklemek için tutarlı bir protein miktarı belirleyin (tipik olarak 10-50 μg)
  3. Hesaplayıcıyı kullanarak her örnek için gereken hacmi belirleyin
  4. Örnek tamponu ve indirgeme ajanı ekleyin
  5. Hesaplanan hacimleri jelinize yükleyin

Enzimatik Analizler

Enzimatik analizler için, genellikle farklı örnekler veya deneyler arasında reaksiyon koşullarını standartlaştırmak için belirli bir miktarda protein kullanmak gereklidir.

Örnek iş akışı:

  1. BCA analizi ile protein konsantrasyonunu belirleyin
  2. İstediğiniz protein miktarını elde etmek için gereken hacmi hesaplayın
  3. Bu hacmi reaksiyon karışımınıza ekleyin
  4. Enzimatik analizinizle devam edin

İmmünopresipitasyon Deneyleri

İmmünopresipitasyon (IP) deneylerinde, başlangıçta tutarlı bir protein miktarı kullanmak, farklı koşullar arasındaki sonuçları karşılaştırmak için önemlidir.

Örnek iş akışı:

  1. Hücre veya doku lysatlarının protein konsantrasyonunu BCA analizi ile ölçün
  2. Eşit protein miktarlarını elde etmek için gereken hacimleri hesaplayın (tipik olarak 500-1000 μg)
  3. Tüm örnekleri aynı hacme lysis tamponu ile ayarlayın
  4. Antikor inkübasyonu ve presipitasyonuna devam edin

Protein Saflaştırma

Protein saflaştırma sırasında, farklı adımlardaki protein konsantrasyonunu izlemek ve hesaplamak genellikle gereklidir.

Örnek iş akışı:

  1. Saflaştırma sırasında fraksiyonları toplayın
  2. Seçilen fraksiyonlar üzerinde BCA analizi gerçekleştirin
  3. Protein konsantrasyonunu ve toplam protein miktarını hesaplayın
  4. Sonraki uygulamalar için gereken hacimleri belirleyin

Gelişmiş Özellikler ve Dikkate Alınacaklar

Özel Standart Eğrileri

Hesaplayıcı, standart BCA analizleri için varsayılan parametreler sağlasa da, kendi standart eğrilerinizi oluşturduysanız özel değerler girebilirsiniz. Bu, özellikle aşağıdaki durumlarda faydalıdır:

  • Standart dışı protein örnekleri ile çalışırken
  • Modifiye BCA protokolleri kullanırken
  • Analiz sırasında müdahale edebilecek maddelerin varlığında

Özel bir standart eğri kullanmak için:

  1. Standart eğri seçeneklerinden "Özel"i seçin
  2. Eğim ve kesişim değerlerinizi girin
  3. Hesaplayıcı, tüm sonraki hesaplamalar için bu değerleri kullanacaktır

Birden Fazla Örnekle Baş Etme

Hesaplayıcı, birden fazla örnek eklemenize ve hacimlerini aynı anda hesaplamanıza olanak tanır. Bu, farklı koşullar için tutarlı protein yüklemesi hazırlarken özellikle faydalıdır.

Toplu işlem yapmanın avantajları:

  • Tüm hacimleri bir kerede hesaplayarak zaman kazanın
  • Tüm örnekleriniz arasında tutarlılık sağlayın
  • Örnekler arasında protein konsantrasyonlarını kolayca karşılaştırın
  • Aykırı değerleri veya potansiyel ölçüm hatalarını belirleyin

Kenar Durumlarıyla Baş Etme

Çok Yüksek Absorbans Okumaları

Absorbans okumalarınız 2.0'ın üzerindeyse, BCA analizinin doğrusal aralığının dışında olabilir. Bu durumda:

  1. Örneğinizi seyreltin ve BCA analizini tekrarlayın
  2. Alternatif bir protein miktarlandırma yöntemi kullanın
  3. Yüksek konsantrasyon standartlarını içerecek şekilde standart eğriyi ayarlayın

Çok Düşük Absorbans Okumaları

0.1'in altındaki absorbans okumaları, analizin tespit sınırına yakın olabileceği anlamına gelir, bu da doğruluğu etkileyebilir. Dikkate alın:

  1. Mümkünse örneğinizi konsantre edin
  2. Daha hassas bir protein miktarlandırma yöntemi kullanın
  3. Deney tasarımınızı daha düşük protein miktarlarını karşılayacak şekilde ayarlayın

Pratikte Büyük Hesaplanan Hacimler

Hesaplayıcının çok büyük bir hacim önerdiği durumlarda:

  1. Protein örneğinizi konsantre etmeyi düşünün
  2. Deneyinizin izin verdiği durumlarda istediğiniz protein miktarını aşağıya ayarlayın
  3. Maksimum pratik hacmi kullanın ve kullanılan gerçek protein miktarını not edin

Protein Miktarlandırma Tarihi ve BCA Analizi

Proteinlerin doğru bir şekilde miktarlandırılması, biyokimya ve moleküler biyoloji alanları ortaya çıktığından beri temel bir gereklilik olmuştur. Erken yöntemler, azot içeriği belirlemeye dayanıyordu ve bu, zaman alıcıydı ve özel ekipman gerektiriyordu.

Protein Miktarlandırma Yöntemlerinin Evrimi

  1. Kjeldahl Yöntemi (1883): Protein miktarını belirlemek için en eski yöntemlerden biri, azot içeriğini ölçmeye dayanır.

  2. Biuret Testi (1900'lerin Başları): Bu yöntem, peptit bağlarının bakır iyonları ile tepkimesine dayanır ve mor bir renk üretir.

  3. Lowry Analizi (1951): Oliver Lowry tarafından geliştirilen bu yöntem, Biuret tepkimesini Folin-Ciocalteu reaktanı ile birleştirerek duyarlılığı artırmıştır.

  4. Bradford Analizi (1976): Marion Bradford, proteinlere bağlanan ve absorbans maksimumunu kaydıran Coomassie Brilliant Blue G-250 boyasını kullanarak bu yöntemi geliştirmiştir.

  5. BCA Analizi (1985): Paul Smith ve arkadaşları tarafından Pierce Kimya Şirketi'nde geliştirilen bu yöntem, Biuret tepkimesini BCA tespiti ile birleştirerek daha iyi bir duyarlılık ve deterjanlarla uyumluluk sunmuştur.

BCA Analizinin Gelişimi

BCA analizi, Smith ve arkadaşlarının 1985 yılında "Bicinchoninic Acid ile Protein Miktarının Ölçümü" başlıklı makalede ilk kez tanımlanmıştır. Mevcut yöntemlerin sınırlamalarını gidermek amacıyla geliştirilmiştir, özellikle protein ekstraksiyonu ve saflaştırmasında yaygın olarak kullanılan çeşitli kimyasalların müdahalesine karşı.

Ana yenilik, protein aracılığıyla üretilen Cu¹⁺ iyonlarını tespit etmek için bisinkoninik asidin kullanılmasıdır. Bu, spektrofotometrik olarak ölçülebilen mor renkte bir kompleks oluşturur. Bu, birkaç avantaj sağlamıştır:

  1. Biuret yöntemine göre daha yüksek duyarlılık
  2. Lowry yöntemine göre daha az müdahale
  3. Bradford analizine göre deterjanlarla daha iyi uyumluluk
  4. Daha az reaktana ve adım sayısına sahip daha basit bir protokol

Tanıtımından bu yana, BCA analizi, dünya genelinde biyokimya ve moleküler biyoloji laboratuvarlarında en yaygın kullanılan protein miktarlandırma yöntemlerinden biri haline gelmiştir.

Örnek Hacmi Hesaplamak için Kod Örnekleri

Excel Formülü

1=IF(B2<=0,"Hata: Geçersiz absorbans",IF(C2<=0,"Hata: Geçersiz örnek kütlesi",C2/(2*B2)))
2
3' Burada:
4' B2, absorbans okumalarını içerir
5' C2, μg cinsinden istenen örnek kütlesini içerir
6' Formül, gereken örnek hacmini μL cinsinden döndürür
7

Python Uygulaması

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Absorbans değerinden protein konsantrasyonunu hesapla."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbans negatif olamaz")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Absorbans ve istenen kütleye göre gereken örnek hacmini hesapla."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Örnek kütlesi pozitif olmalıdır")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Hesaplanan protein konsantrasyonu pozitif olmalıdır")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Örnek kullanım
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Absorbans {absorbance} ve istenen protein kütlesi {sample_mass} μg için:")
31    print(f"Protein konsantrasyonu: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Gerekli örnek hacmi: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Hata: {e}")
35

R Kodu ile Analiz

1# Absorbans değerinden protein konsantrasyonunu hesaplamak için fonksiyon
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbans negatif olamaz")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Örnek hacmini hesaplamak için fonksiyon
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Örnek kütlesi pozitif olmalıdır")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Hesaplanan protein konsantrasyonu pozitif olmalıdır")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Örnek kullanım
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Absorbans %.2f ve istenen protein kütlesi %.2f μg için:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Protein konsantrasyonu: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Gerekli örnek hacmi: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Hata: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript Uygulaması

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbans negatif olamaz");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Örnek kütlesi pozitif olmalıdır");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Hesaplanan protein konsantrasyonu pozitif olmalıdır");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Örnek kullanım
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Absorbans ${absorbance} ve istenen protein kütlesi ${sampleMass} μg için:`);
33  console.log(`Protein konsantrasyonu: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Gerekli örnek hacmi: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Hata: ${error.message}`);
37}
38

Standart Eğri Görselleştirmesi

Absorbans ve protein konsantrasyonu arasındaki ilişki genellikle belirli bir aralık içinde doğrusaldır. Aşağıda standart bir BCA eğrisinin görselleştirilmesi bulunmaktadır:

BCA Standart Eğrisi için Protein Miktarlandırma BCA analizinde absorbans ve protein konsantrasyonu arasındaki doğrusal ilişkiyi görselleştirir 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbans (562 nm) Protein Konsantrasyonu (μg/μL)

Standart Eğri Standart Örnekler

BCA Standart Eğrisi

Diğer Protein Miktarlandırma Yöntemleri ile Karşılaştırma

Farklı protein miktarlandırma yöntemlerinin çeşitli avantajları ve sınırlamaları vardır. İşte BCA analizinin diğer yaygın yöntemlerle karşılaştırması:

YöntemDuyarlılık AralığıAvantajlarSınırlamalarEn İyi Kullanım
BCA Analizi5-2000 μg/mL• Deterjanlarla uyumlu
• Daha az protein-protein varyasyonu
• Stabil renk gelişimi		• İndirgeme ajanları tarafından etkilenir
• Bazı şelatlayıcı ajanlar tarafından etkilenir		• Genel protein miktarlandırma
• Deterjan içeren örnekler
Bradford Analizi1-1500 μg/mL• Hızlı (2-5 dk)
• Az sayıda müdahale eden madde		• Yüksek protein-protein varyasyonu
• Deterjanlarla uyumsuz		• Hızlı ölçümler
• Deterjansız örnekler
Lowry Yöntemi1-1500 μg/mL• İyi kurulmuş
• İyi duyarlılık		• Birçok müdahale eden madde
• Birden fazla adım		• Tarihsel tutarlılık
• Saf protein örnekleri
UV Absorbans (280 nm)20-3000 μg/mL• Yok edici değildir
• Çok hızlı
• Reaktana ihtiyaç yok		• Nükleik asitlerden etkilenir
• Saf örnekler gerektirir		• Saf protein çözeltileri
• Saflaştırma sırasında hızlı kontroller
Florometrik0.1-500 μg/mL• En yüksek duyarlılık
• Geniş dinamik aralık		• Pahalı reaktana ihtiyaç
• Florometre gerektirir		• Çok seyreltik örnekler
• Sınırlı örnek hacmi

Sıkça Sorulan Sorular

BCA analizi ne için kullanılır?

BCA (bisinkoninik asit) analizi, esas olarak bir örnekteki toplam protein konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır. Batı blotlama, enzimatik analizler, immünopresipitasyon ve protein saflaştırma gibi uygulamalar için biyokimya, hücre biyolojisi ve moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılır.

BCA analizinin doğruluğu ne kadardır?

BCA analizi, doğru bir şekilde yapıldığında genellikle %5-10 doğruluk sağlar. Doğruluğu, standart eğrinin kalitesi, müdahale eden maddelerin yokluğu ve bilinmeyen proteinin bileşiminin kullanılan standart proteine benzerliği gibi birkaç faktöre bağlıdır.

BCA analizi sonuçlarını ne etkileyebilir?

BCA analizi sonuçlarını etkileyebilecek birkaç madde bulunmaktadır:

  • İndirgeme ajanları (DTT, β-merkaptoetanol, glutatyon)
  • Şelatlayıcı ajanlar (EDTA, EGTA)
  • Yüksek konsantrasyondaki basit şekerler
  • Lipitler
  • Yüksek konsantrasyondaki bazı deterjanlar
  • Amonyak bileşenleri

BCA ve Bradford analizleri arasındaki fark nedir?

Ana farklar şunlardır:

  • BCA analizi, deterjanlarla daha uyumludur
  • Bradford analizi daha hızlıdır (2-5 dakika, BCA için 30+ dakika)
  • BCA, daha az protein-protein varyasyonu gösterir
  • Bradford, temel amino asitlere daha duyarlıdır
  • BCA, indirgeme ajanlarından etkilenirken, Bradford etkilenmez

Hesaplanan örnek hacmim neden çok büyük?

Hesaplayıcınızın çok büyük bir hacim önerdiği durumlarda, genellikle örneğinizde düşük protein konsantrasyonu olduğunu gösterir. Bu, aşağıdaki nedenlerden kaynaklanabilir:

  1. Gerçek düşük protein içeriği
  2. Hazırlama sırasında protein kaybı
  3. BCA analiz prosedüründe hatalar
  4. Absorbans okumalarının yanlışlığı

Örneğinizi konsantre etmeyi veya deney tasarımınızı daha düşük protein konsantrasyonlarını karşılayacak şekilde ayarlamayı düşünün.

Bu hesaplayıcıyı diğer protein miktarlandırma yöntemleri için kullanabilir miyim?

Bu hesaplayıcı, özellikle BCA analiz sonuçları için tasarlanmıştır. Temel prensip (konsantrasyonu hacme dönüştürmek) diğer yöntemler için geçerli olsa da, absorbans ve protein konsantrasyonu arasındaki ilişki farklı analizler arasında değişir. Diğer yöntemler için (Bradford veya Lowry gibi) farklı standart eğri parametreleri kullanmanız gerekecektir.

Doğrusal aralığın dışındaki örneklerle nasıl başa çıkabilirim?

Doğrusal aralığın dışındaki absorbans okumaları (genellikle >2.0) için:

  1. Örneğinizi seyreltin ve BCA analizini tekrarlayın
  2. Farklı bir protein miktarlandırma yöntemi kullanın
  3. Standart eğriyi daha yüksek konsantrasyon standartlarını içerecek şekilde ayarlayın

Hangi proteini standart olarak kullanmalıyım?

Bovine Serum Albumin (BSA), BCA analizleri için en yaygın kullanılan standarttır çünkü:

  • Kolayca temin edilebilir ve ucuzdur
  • Yüksek çözünürlüklüdür
  • Çözeltide kararlıdır
  • İyi karakterize edilmiştir

Ancak, örneklerinizde BSA'dan önemli ölçüde farklı bir protein baskınsa, daha doğru sonuçlar için o proteini standart olarak kullanmayı düşünün.

BCA reaksiyonu ne kadar süre stabil kalır?

BCA reaksiyonunda gelişen mor renk, oda sıcaklığında birkaç saat boyunca stabil kalır ve bu süre içinde ölçülebilir. Ancak en iyi sonuçlar için, tüm standartlar ve örneklerinizi aynı zaman diliminde ölçmeniz önerilir.

Önceki bir deneyden standart eğrisi kullanabilir miyim?

Teknik olarak, standart eğrisi yeniden kullanılabilir, ancak doğru miktarlandırma için önerilmez. Reaktandaki değişiklikler, inkübasyon koşulları ve cihaz kalibrasyonu, absorbans ve protein konsantrasyonu arasındaki ilişkiyi etkileyebilir. Güvenilir sonuçlar için, her seferinde taze bir standart eğri oluşturmanız önerilir.

Kaynaklar

  1. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, ve diğerleri. "Bicinchoninic Acid ile Protein Miktarının Ölçümü." Analitik Biyokimya. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Analiz Kiti." Talimatlar. Erişim adresi: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. Walker JM. "Bicinchoninic Asit (BCA) Analizi için Protein Miktarlandırma." In: Walker JM, ed. Protein Protokolü El Kitabı. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. Olson BJ, Markwell J. "Protein Konsantrasyonunu Belirleme Yöntemleri." Current Protocols in Protein Science. 2007;Bölüm 3:Ünite 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. Noble JE, Bailey MJ. "Protein Miktarlandırma." Enzimolojide Yöntemler. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Bugün BCA Absorbans Örnek Hacmi Hesaplayıcımızı Deneyin!

Artık BCA protein miktarlandırması ve örnek hacmi hesaplama prensiplerini anladığınıza göre, laboratuvar iş akışınızı hızlandırmak için hesaplayıcımızı deneyin. Absorbans okumalarınızı ve istenen örnek kütlenizi girin ve anında doğru örnek hacmi hesaplamaları alın.

Batı blotlama, enzimatik analizler veya herhangi bir protein bazlı deney için örnek hazırlarken, hesaplayıcımız tutarlı ve güvenilir sonuçlar elde etmenize yardımcı olacaktır. Zaman kazanın, hataları azaltın ve deneylerinizin tekrarlanabilirliğini artırın BCA Absorbans Örnek Hacmi Hesaplayıcısı ile.

🔗

İlgili Araçlar

İş akışınız için faydalı olabilecek daha fazla aracı keşfedin

Silindirik, Küresel ve Dikdörtgen Tank Hacmi Hesaplayıcı

Bu aracı dene

Sıvı Kaplama için Hacimden Alana Hesaplayıcı

Bu aracı dene

Delik Hacmi Hesaplayıcı: Silindirik & Dikdörtgen Kazılar

Bu aracı dene

Delik Hacmi Hesaplayıcı: Silindirik Kazı Hacimlerini Ölçün

Bu aracı dene

Küplü Hücre Hacmi Hesaplayıcı: Kenar Uzunluğundan Hacmi Bulun

Bu aracı dene

Laboratuvar Çözümleri için Basit Seyreltme Faktörü Hesaplayıcı

Bu aracı dene

Kum Hacmi Hesaplayıcı: Herhangi Bir Proje için Malzeme Tahmini

Bu aracı dene

İki-Foton Soğurma Katsayısı Hesaplayıcı

Bu aracı dene

Molarite Hesaplayıcı: Çözelti Konsantrasyonu Aracı

Bu aracı dene