Calculadora de Temperatura d'Annealing de DNA

Introducció a la Temperatura d'Annealing de DNA

La calculadora de temperatura d'annealing de DNA és una eina essencial per a biòlegs moleculars, genetistes i investigadors que treballen amb la reacció en cadena de la polimerasa (PCR). La temperatura d'annealing es refereix a la temperatura òptima a la qual els primers de DNA s'uneixen a les seves seqüències complementàries durant la PCR. Aquest paràmetre crític impacta significativament la especificitat i l'eficiència de les reaccions de PCR, fent que el càlcul precís sigui vital per a experiments reeixits.

La nostra calculadora de temperatura d'annealing de DNA proporciona una manera senzilla però potent de determinar la temperatura d'annealing òptima per als teus primers de DNA en funció de les seves característiques de seqüència. Mitjançant l'anàlisi de factors com el contingut de GC, la longitud de la seqüència i la composició de nucleòtids, aquesta calculadora ofereix recomanacions de temperatura precises per optimitzar els teus protocols de PCR.

Ja sigui que estiguis dissenyant primers per a l'amplificació de gens, detecció de mutacions o seqüenciació de DNA, entendre i establir correctament la temperatura d'annealing és crucial per a l'èxit experimental. Aquesta calculadora elimina la conjetura i t'ajuda a aconseguir resultats de PCR més consistents i fiables.

La Ciència Darrere de la Temperatura d'Annealing

Comprenent l'Annealing de Primers de DNA

L'annealing de DNA és el procés on els primers de DNA de cadena simple s'uneixen a les seves seqüències complementàries sobre el DNA plantilla. Aquest pas d'hibridació ocorre durant la segona fase de cada cicle de PCR, entre la desnaturalització (separació de cadenes) i l'extensió (sintesi de DNA).

La temperatura d'annealing afecta directament:

Especificitat: Temperatures massa baixes permeten unió no específica, resultant en productes no desitjats
Eficiència: Temperatures massa altes impedeixen la unió adequada dels primers, reduint el rendiment
Reproduïbilitat: Temperatures d'annealing consistents asseguren resultats fiables a través d'experiments

La temperatura d'annealing òptima depèn principalment de la composició de nucleòtids del primer, amb especial èmfasi en la proporció de bases de guanina (G) i citosina (C), coneguda com el contingut de GC.

Les cadenes de DNA es separen Els primers s'uneixen a la plantilla La polimerasa de DNA s'extén

Primer

El Paper del Contingut de GC

El contingut de GC forma parells de bases més estables que els parells d'adenina (A) i timina (T). Aquesta diferència fa que les seqüències riques en GC siguin més estables tèrmicament, requerint temperatures més altes per desnaturalitzar-se i annealar-se. Punts clau sobre el contingut de GC:

Contingut de GC més alt = unió més forta = temperatura d'annealing més alta
Contingut de GC més baix = unió més feble = temperatura d'annealing més baixa
La majoria dels primers tenen un contingut de GC entre el 40-60% per a un rendiment òptim
Un contingut de GC extrem (per sota del 30% o per sobre del 70%) pot requerir condicions especials de PCR

Consideracions sobre la Longitud del Primer

La longitud del primer també impacta significativament la temperatura d'annealing:

Primers més curts (15-20 nucleòtids) generalment requereixen temperatures d'annealing més baixes
Primers més llargs (25-35 nucleòtids) necessiten temperatures d'annealing més altes
La majoria dels primers estàndard de PCR oscil·len entre 18-30 nucleòtids de longitud
Primers molt curts (<15 nucleòtids) poden mancar d'especificitat independentment de la temperatura d'annealing

Fórmula de Càlcul de la Temperatura d'Annealing

La nostra calculadora utilitza una fórmula àmpliament acceptada per estimar la temperatura d'annealing (Tm) dels primers de DNA:

$Tm = 64.9 + 41 \times \frac{(GC\% - 16.4)}{N}$

On:

Tm = Temperatura d'annealing en graus Celsius (°C)
GC% = Percentatge de nucleòtids G i C en la seqüència del primer
N = Longitud total de la seqüència del primer (nombre de nucleòtids)

Aquesta fórmula, basada en el model termodinàmic de veïnat més proper, proporciona una aproximació fiable per a primers entre 18-30 nucleòtids amb un contingut de GC estàndard (40-60%).

Exemple de Càlcul

Per a un primer amb la seqüència ATGCTAGCTAGCTGCTAGC:

Longitud (N) = 19 nucleòtids
Comptatge de GC = 9 (nucleòtids G o C)
GC% = (9/19) × 100 = 47.4%
Tm = 64.9 + 41 × (47.4 - 16.4) / 19
Tm = 64.9 + 41 × 31 / 19
Tm = 64.9 + 41 × 1.63
Tm = 64.9 + 66.83
Tm = 66.83°C

Tanmateix, per a aplicacions pràctiques de PCR, la temperatura d'annealing real utilitzada és típicament de 5-10°C per sota de la Tm calculada per assegurar una unió eficient dels primers. Per al nostre exemple amb una Tm calculada de 66.83°C, la temperatura d'annealing recomanada per a PCR seria aproximadament de 56.8-61.8°C.

Com Utilitzar la Calculadora de Temperatura d'Annealing de DNA

Utilitzar la nostra calculadora de temperatura d'annealing de DNA és senzill:

Introdueix la teva seqüència de primer de DNA al camp d'entrada (només es permeten caràcters A, T, G i C)
La calculadora validarà automàticament la teva seqüència per assegurar-se que conté només nucleòtids de DNA vàlids
Un cop s'introdueixi una seqüència vàlida, la calculadora mostrarà instantàniament:
- Longitud de la seqüència
- Percentatge de contingut de GC
- Temperatura d'annealing calculada
Pots copiar els resultats utilitzant el botó de còpia per a una fàcil referència
Per a un nou càlcul, simplement introdueix una seqüència de primer diferent

La calculadora proporciona retroalimentació en temps real, permetent-te provar ràpidament diferents dissenys de primers i comparar les seves temperatures d'annealing.

Consells per a Resultats Òptims

Introdueix la seqüència completa del primer sense espais ni caràcters especials
Per a parells de primers, calcula cada primer per separat i utilitza la temperatura més baixa
Considera utilitzar la temperatura calculada com a punt de partida, després optimitza mitjançant proves experimentals
Per a primers degenerats, calcula utilitzant la combinació més rica en GC possible

Aplicacions Pràctiques

Optimització de PCR

L'aplicació principal del càlcul de temperatura d'annealing és l'optimització de PCR. La selecció adequada de la temperatura d'annealing ajuda a:

Augmentar la especificitat d'amplificació
Reduir la formació de dimers de primers
Minimitzar l'amplificació no específica
Millorar el rendiment dels productes desitjats
Millorar la reproduïbilitat entre experiments

Molts fracassos de PCR es poden atribuir a temperatures d'annealing inadequades, fent d'aquest càlcul un pas essencial en el disseny experimental.

Disseny de Primers

En dissenyar primers, la temperatura d'annealing és una consideració crítica:

Apunta a parells de primers amb temperatures d'annealing similars (dins de 5°C els uns dels altres)
Dissenya primers amb un contingut de GC moderat (40-60%) per a un comportament d'annealing previsible
Evita un contingut de GC extrem a l'extrem 3' dels primers
Considera afegir clamps de GC (nucleòtids G o C) a l'extrem 3' per millorar l'estabilitat de la unió

Tècniques Especialitzades de PCR

Diferents variacions de PCR poden requerir enfocaments específics per a la temperatura d'annealing:

Tècnica de PCR	Consideració de Temperatura d'Annealing
PCR de Touchdown	Comença amb una temperatura alta i disminueix gradualment
PCR Nivellada	Els primers interiors i exteriors poden requerir temperatures diferents
PCR Multiplex	Tots els primers haurien de tenir temperatures d'annealing similars
PCR de Hot-start	Temperatura d'annealing inicial més alta per reduir la unió no específica
PCR en temps real	Control de temperatura precís per a una quantificació consistent

Mètodes Alternatius de Càlcul

Si bé la nostra calculadora utilitza una fórmula àmpliament acceptada, existeixen diversos mètodes alternatius per calcular la temperatura d'annealing:

Fórmula Bàsica: Tm = 2(A+T) + 4(G+C)
- Simple però menys precisa per a primers més llargs
- Adequada per a estimacions ràpides amb primers curts
Regla de Wallace: Tm = 64.9 + 41 × (GC% - 16.4) / N
- La fórmula utilitzada en la nostra calculadora
- Bon equilibri entre simplicitat i precisió
Mètode de Veïnat: Utilitza paràmetres termodinàmics
- Predicció més precisa
- Considera el context de la seqüència, no només la composició
- Requereix càlculs complexos o programari especialitzat
Fórmula Ajustada per Sal: Incorpora els efectes de la concentració de sal
- Tm = 81.5 + 16.6 × log10[Na+] + 0.41 × (GC%) - 600/N
- Útil per a condicions de buffer no estàndard

Cada mètode té les seves fortaleses i limitacions, però la regla de Wallace proporciona un bon equilibri de precisió i simplicitat per a la majoria d'aplicacions estàndard de PCR.

Factors que Afecten la Temperatura d'Annealing

Composició del Buffer

La força iònica del buffer de PCR afecta significativament la temperatura d'annealing:

Concentracions de sal més altes estabilitzen els duplex de DNA, augmentant efectivament la temperatura d'annealing
La concentració de magnesi impacta particularment la unió dels primers
Buffers especialitzats per a plantilles riques en GC poden alterar les temperatures d'annealing òptimes

Complexitat del Template de DNA

La naturalesa del DNA plantilla pot influir en el comportament d'annealing:

El DNA genòmic pot requerir una major estrictesa (temperatura d'annealing més alta)
Plasmidis o plantilles purificades sovint funcionen bé amb temperatures calculades estàndard
Regions riques en GC poden necessitar temperatures de desnaturalització més altes però temperatures d'annealing més baixes

Additius de PCR

Diversos additius poden modificar el comportament d'annealing:

DMSO i betaine ajuden a reduir estructures secundàries, potencialment baixant la temperatura d'annealing efectiva
La formamida disminueix la temperatura de fusió
BSA i altres agents estabilitzadors poden requerir ajustaments de temperatura

Context Històric

Evolució de la PCR i Comprensió de la Temperatura d'Annealing

El concepte de temperatura d'annealing de DNA es va convertir en crucial amb el desenvolupament de la PCR per Kary Mullis el 1983. Els protocols de PCR inicials utilitzaven enfocaments empírics per determinar les temperatures d'annealing, sovint mitjançant proves i errors.

Fites clau en el càlcul de temperatura d'annealing:

1960s: Comprensió bàsica de la cinètica d'hibridació de DNA establerta
1970s: Desenvolupament de fórmules simples basades en el contingut de GC
1980s: Introducció de la PCR i reconeixement de la importància de la temperatura d'annealing
1990s: Desenvolupament de models termodinàmics de veïnat
2000s: Eines computacionals per a la predicció precisa de la temperatura d'annealing
Present: Integració d'enfocaments d'aprenentatge automàtic per a la predicció de plantilles complexes

La precisió de la predicció de la temperatura d'annealing ha millorat dràsticament al llarg del temps, contribuint a l'adopció i l'èxit generalitzats de tècniques basades en PCR en biologia molecular.

Exemples de Codi per Calcular la Temperatura d'Annealing

Implementació en Python

1def calculate_gc_content(sequence):
2    """Calcular el percentatge de contingut de GC d'una seqüència de DNA."""
3    sequence = sequence.upper()
4    gc_count = sequence.count('G') + sequence.count('C')
5    return (gc_count / len(sequence)) * 100 if len(sequence) > 0 else 0
6
7def calculate_annealing_temperature(sequence):
8    """Calcular la temperatura d'annealing utilitzant la regla de Wallace."""
9    sequence = sequence.upper()
10    if not sequence or not all(base in 'ATGC' for base in sequence):
11        return 0
12        
13    gc_content = calculate_gc_content(sequence)
14    length = len(sequence)
15    
16    # Fórmula de la regla de Wallace
17    tm = 64.9 + 41 * (gc_content - 16.4) / length
18    
19    return round(tm * 10) / 10  # Arrodonir a 1 decimal
20
21# Exemple d'ús
22primer_sequence = "ATGCTAGCTAGCTGCTAGC"
23gc_content = calculate_gc_content(primer_sequence)
24tm = calculate_annealing_temperature(primer_sequence)
25
26print(f"Seqüència: {primer_sequence}")
27print(f"Longitud: {len(primer_sequence)}")
28print(f"Contingut de GC: {gc_content:.1f}%")
29print(f"Temperatura d'Annealing: {tm:.1f}°C")
30

Implementació en JavaScript

1function calculateGCContent(sequence) {
2  if (!sequence) return 0;
3  
4  const upperSequence = sequence.toUpperCase();
5  const gcCount = (upperSequence.match(/[GC]/g) || []).length;
6  return (gcCount / upperSequence.length) * 100;
7}
8
9function calculateAnnealingTemperature(sequence) {
10  if (!sequence) return 0;
11  
12  const upperSequence = sequence.toUpperCase();
13  // Validar la seqüència de DNA (només es permeten A, T, G, C)
14  if (!/^[ATGC]+$/.test(upperSequence)) return 0;
15  
16  const length = upperSequence.length;
17  const gcContent = calculateGCContent(upperSequence);
18  
19  // Fórmula de la regla de Wallace
20  const annealingTemp = 64.9 + (41 * (gcContent - 16.4)) / length;
21  
22  // Arrodonir a 1 decimal
23  return Math.round(annealingTemp * 10) / 10;
24}
25
26// Exemple d'ús
27const primerSequence = "ATGCTAGCTAGCTGCTAGC";
28const gcContent = calculateGCContent(primerSequence);
29const tm = calculateAnnealingTemperature(primerSequence);
30
31console.log(`Seqüència: ${primerSequence}`);
32console.log(`Longitud: ${primerSequence.length}`);
33console.log(`Contingut de GC: ${gcContent.toFixed(1)}%`);
34console.log(`Temperatura d'Annealing: ${tm.toFixed(1)}°C`);
35

Implementació en R

1calculate_gc_content <- function(sequence) {
2  if (nchar(sequence) == 0) return(0)
3  
4  sequence <- toupper(sequence)
5  gc_count <- sum(strsplit(sequence, "")[[1]] %in% c("G", "C"))
6  return((gc_count / nchar(sequence)) * 100)
7}
8
9calculate_annealing_temperature <- function(sequence) {
10  if (nchar(sequence) == 0) return(0)
11  
12  sequence <- toupper(sequence)
13  # Validar la seqüència de DNA
14  if (!all(strsplit(sequence, "")[[1]] %in% c("A", "T", "G", "C"))) return(0)
15  
16  gc_content <- calculate_gc_content(sequence)
17  length <- nchar(sequence)
18  
19  # Fórmula de la regla de Wallace
20  tm <- 64.9 + 41 * (gc_content - 16.4) / length
21  
22  return(round(tm, 1))
23}
24
25# Exemple d'ús
26primer_sequence <- "ATGCTAGCTAGCTGCTAGC"
27gc_content <- calculate_gc_content(primer_sequence)
28tm <- calculate_annealing_temperature(primer_sequence)
29
30cat(sprintf("Seqüència: %s\n", primer_sequence))
31cat(sprintf("Longitud: %d\n", nchar(primer_sequence)))
32cat(sprintf("Contingut de GC: %.1f%%\n", gc_content))
33cat(sprintf("Temperatura d'Annealing: %.1f°C\n", tm))
34

Fórmula d'Excel

1' Calcular el contingut de GC a la cel·la A1
2=SUM(LEN(A1)-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"G",""))-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"C","")))/LEN(A1)*100
3
4' Calcular la temperatura d'annealing utilitzant la regla de Wallace
5=64.9+41*((SUM(LEN(A1)-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"G",""))-LEN(SUBSTITUTE(UPPER(A1),"C","")))/LEN(A1)*100)-16.4)/LEN(A1)
6

Preguntes Freqüents (FAQ)

Què és la temperatura d'annealing de DNA?

La temperatura d'annealing de DNA és la temperatura òptima a la qual els primers de DNA s'uneixen específicament a les seves seqüències complementàries durant la PCR. És un paràmetre crític que afecta la especificitat i l'eficiència de les reaccions de PCR. La temperatura d'annealing ideal permet que els primers s'uneixin només a les seves seqüències objectiu, minimitzant l'amplificació no específica.

Com afecta el contingut de GC a la temperatura d'annealing?

El contingut de GC impacta significativament la temperatura d'annealing perquè els parells de bases G-C formen tres enllaços d'hidrogen, mentre que els parells A-T només en formen dos. Un contingut de GC més alt resulta en una unió més forta i requereix temperatures d'annealing més altes. Cada augment del 1% en el contingut de GC normalment eleva la temperatura de fusió aproximadament en 0.4°C, la qual cosa afecta la temperatura d'annealing òptima.

Què passa si utilitzo la temperatura d'annealing incorrecta?

Utilitzar una temperatura d'annealing incorrecta pot portar a diversos problemes de PCR:

Massa baixa: Unió no específica, múltiples bandes, dimers de primers i amplificació de fons
Massa alta: Pobres o cap amplificació a causa d'una unió ineficient dels primers
Òptima: Amplificació neta i específica de la seqüència objectiu

Haig d'utilitzar exactament la temperatura d'annealing calculada?

La temperatura d'annealing calculada serveix com a punt de partida. En la pràctica, la temperatura d'annealing òptima és típicament de 5-10°C per sota de la temperatura de fusió (Tm) calculada. Per a plantilles o primers difícils, sovint és beneficiós realitzar una PCR de gradient de temperatura per determinar empíricament la millor temperatura d'annealing.

Com calculo la temperatura d'annealing per a parells de primers?

Per a parells de primers, calcula la Tm per a cada primer per separat. Generalment, utilitza una temperatura d'annealing basada en el primer amb la Tm més baixa per assegurar que ambdós primers s'uneixin eficientment. Idealment, dissenya parells de primers amb valors de Tm similars (dins de 5°C els uns dels altres) per a un rendiment òptim de PCR.

Puc utilitzar aquesta calculadora per a primers degenerats?

Aquesta calculadora està dissenyada per a primers de DNA estàndard que contenen només nucleòtids A, T, G i C. Per a primers degenerats que contenen bases ambigües (com R, Y, N), la calculadora pot no proporcionar resultats precisos. En aquests casos, considera calcular la Tm per a les combinacions més riques en GC possibles per establir un rang de temperatura.

Com afecta la longitud del primer a la temperatura d'annealing?

La longitud del primer afecta inversament l'impacte del contingut de GC sobre la temperatura d'annealing. En primers més llargs, l'efecte del contingut de GC es dilueix entre més nucleòtids. La fórmula considera això dividint el factor de contingut de GC per la longitud del primer. Generalment, els primers més llargs tenen una unió més estable i poden tolerar temperatures d'annealing més altes.

Per què diferents calculadores donen temperatures d'annealing diferents?

Diferents calculadores de temperatura d'annealing utilitzen diverses fórmules i algoritmes, incloent:

Fórmules bàsiques basades en el contingut de GC
Regla de Wallace (utilitzada en aquesta calculadora)
Models termodinàmics de veïnat
Càlculs ajustats per sal

Aquests diferents enfocaments poden resultar en variacions de temperatura de 5-10°C per a la mateixa seqüència de primer. La regla de Wallace proporciona un bon equilibri de simplicitat i precisió per a la majoria d'aplicacions estàndard de PCR.

Com afecten els additius de PCR la temperatura d'annealing?

Els additius de PCR comuns poden alterar significativament la temperatura d'annealing efectiva:

DMSO: Normalment redueix la Tm en 5.5-6.0°C per cada 10% de DMSO
Betaine: Redueix la Tm igualant la contribució de les bases GC i AT
Formamida: Disminueix la Tm aproximadament en 2.4-2.9°C per cada 10% de formamida
Glicerol: Pot augmentar o disminuir la Tm depenent de la concentració

Quan s'utilitzin aquests additius, pot ser necessari ajustar la temperatura d'annealing en conseqüència.

Puc utilitzar aquesta calculadora per a PCR/qPCR en temps real?

Sí, aquesta calculadora es pot utilitzar per al disseny de primers de qPCR. No obstant això, la PCR en temps real sovint utilitza amplicons més curts i pot requerir criteris de disseny de primers més estrictes. Per a resultats òptims de qPCR, considera factors addicionals com la longitud de l'amplicó (idealment de 70-150 bp) i la formació d'estructures secundàries.

Referències

Rychlik W, Spencer WJ, Rhoads RE. Optimització de la temperatura d'annealing per a l'amplificació de DNA in vitro. Nucleic Acids Res. 1990;18(21):6409-6412. doi:10.1093/nar/18.21.6409
SantaLucia J Jr. Una visió unificada de la polimerasa, el dumbbell i la termodinàmica de veïnat dels oligonucleòtids de DNA. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998;95(4):1460-1465. doi:10.1073/pnas.95.4.1460
Lorenz TC. Reacció en cadena de la polimerasa: protocol bàsic més estratègies de solució de problemes i optimització. J Vis Exp. 2012;(63):e3998. doi:10.3791/3998
Innis MA, Gelfand DH, Sninsky JJ, White TJ, eds. Protocols de PCR: Una Guia de Mètodes i Aplicacions. Academic Press; 1990.
Mullis KB. L'inhabitual origen de la reacció en cadena de la polimerasa. Sci Am. 1990;262(4):56-65. doi:10.1038/scientificamerican0490-56
Wallace RB, Shaffer J, Murphy RF, Bonner J, Hirose T, Itakura K. Hibridació d'oligodeoxiribonucleòtids sintètics a DNA phi chi 174: l'efecte d'un emparellament de base única. Nucleic Acids Res. 1979;6(11):3543-3557. doi:10.1093/nar/6.11.3543
Owczarzy R, Moreira BG, You Y, Behlke MA, Walder JA. Predicció de l'estabilitat dels duplex de DNA en solucions que contenen magnesi i cations monovalents. Biochemistry. 2008;47(19):5336-5353. doi:10.1021/bi702363u
Dieffenbach CW, Lowe TM, Dveksler GS. Conceptes generals per al disseny de primers de PCR. PCR Methods Appl. 1993;3(3):S30-S37. doi:10.1101/gr.3.3.s30

Conclusió

La calculadora de temperatura d'annealing de DNA proporciona una eina valuosa per a biòlegs moleculars i investigadors que treballen amb PCR. En determinar amb precisió la temperatura d'annealing òptima per als primers de DNA, pots millorar significativament la especificitat, l'eficiència i la reproduïbilitat dels teus experiments de PCR.

Recorda que, si bé la calculadora proporciona un punt de partida científicament sòlid, l'optimització de PCR sovint requereix proves empíriques. Considera la temperatura d'annealing calculada com una guia i estigues preparat per ajustar-la en funció dels resultats experimentals.

Per a plantilles complexes, amplificacions difícils o aplicacions especialitzades de PCR, pot ser necessari realitzar PCR de gradient de temperatura o explorar mètodes alternatius de càlcul. No obstant això, per a la majoria d'aplicacions estàndard de PCR, aquesta calculadora ofereix una base fiable per a experiments reeixits.

Prova la nostra calculadora de temperatura d'annealing de DNA avui mateix per millorar els teus protocols de PCR i aconseguir resultats d'amplificació més consistents i específics en la teva investigació de biologia molecular.

Calculadora de Temperatura d'Anellament de DNA per al Disseny de Primers PCR

Calculadora de Temperatura d'Annealing de DNA

Sobre la Temperatura d'Annealing

Documentació

Calculadora de Temperatura d'Annealing de DNA

Introducció a la Temperatura d'Annealing de DNA

La Ciència Darrere de la Temperatura d'Annealing

Comprenent l'Annealing de Primers de DNA

El Paper del Contingut de GC

Consideracions sobre la Longitud del Primer

Fórmula de Càlcul de la Temperatura d'Annealing

Exemple de Càlcul

Com Utilitzar la Calculadora de Temperatura d'Annealing de DNA

Consells per a Resultats Òptims

Aplicacions Pràctiques

Optimització de PCR

Disseny de Primers

Tècniques Especialitzades de PCR

Mètodes Alternatius de Càlcul

Factors que Afecten la Temperatura d'Annealing

Composició del Buffer

Complexitat del Template de DNA

Additius de PCR

Context Històric

Evolució de la PCR i Comprensió de la Temperatura d'Annealing

Exemples de Codi per Calcular la Temperatura d'Annealing

Implementació en Python

Implementació en JavaScript

Implementació en R

Fórmula d'Excel

Preguntes Freqüents (FAQ)

Què és la temperatura d'annealing de DNA?

Com afecta el contingut de GC a la temperatura d'annealing?

Què passa si utilitzo la temperatura d'annealing incorrecta?

Haig d'utilitzar exactament la temperatura d'annealing calculada?

Com calculo la temperatura d'annealing per a parells de primers?

Puc utilitzar aquesta calculadora per a primers degenerats?

Com afecta la longitud del primer a la temperatura d'annealing?

Per què diferents calculadores donen temperatures d'annealing diferents?

Com afecten els additius de PCR la temperatura d'annealing?

Puc utilitzar aquesta calculadora per a PCR/qPCR en temps real?

Referències

Conclusió

Retroalimentació

Eines Relacionades

Calculadora de concentració d'ADN: Converteix A260 a ng/μL

Calculadora de Lligadura de DNA per a Experiments de Clonació Molecular

Seguiment de la Variació Genètica: Calcula les Frequències d'Alels en les Poblacions

Calculadora de Distribució Gamma per a Anàlisi Estadística