Calcolatore di Concentrazione del DNA

Introduzione

Il Calcolatore di Concentrazione del DNA è uno strumento essenziale per biologi molecolari, genetisti e tecnici di laboratorio che necessitano di determinare con precisione la concentrazione di DNA nei loro campioni. La misurazione della concentrazione del DNA è una procedura fondamentale nei laboratori di biologia molecolare, servendo come un passo critico di controllo qualità prima di procedere con applicazioni successive come PCR, sequenziamento, clonazione e altre tecniche molecolari. Questo calcolatore utilizza principi spettrofotometrici per calcolare la concentrazione di DNA basata sull'assorbanza UV a 260 nm (A260), applicando il fattore di conversione standard e tenendo conto di qualsiasi diluizione del campione originale.

Il nostro calcolatore facile da usare semplifica il processo di determinazione sia della concentrazione (ng/μL) che della quantità totale di DNA nel tuo campione, eliminando la necessità di calcoli manuali e riducendo il rischio di errori matematici. Che tu stia preparando campioni per il sequenziamento di nuova generazione, quantificando preparazioni di plasmidi o valutando i rendimenti di estrazione di DNA genomico, questo strumento fornisce risultati rapidi e affidabili per supportare le tue ricerche e flussi di lavoro diagnostici.

Come viene calcolata la concentrazione del DNA

Il Principio di Base

Il calcolo della concentrazione del DNA si basa sulla Legge di Beer-Lambert, che afferma che l'assorbanza di una soluzione è direttamente proporzionale alla concentrazione delle specie assorbenti nella soluzione e alla lunghezza del percorso della luce attraverso la soluzione. Per il DNA a doppio filamento, un'assorbanza di 1.0 a 260 nm (A260) in una cuvetta di lunghezza del percorso di 1 cm corrisponde a una concentrazione di circa 50 ng/μL.

La Formula

La concentrazione del DNA è calcolata utilizzando la seguente formula:

$\text{Concentrazione del DNA (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{Fattore di Diluizione}$

Dove:

• A260 è la lettura di assorbanza a 260 nm
• 50 è il fattore di conversione standard per il DNA a doppio filamento (50 ng/μL per A260 = 1.0)
• Fattore di Diluizione è il fattore con cui il campione originale è stato diluito per la misurazione

La quantità totale di DNA nel campione può quindi essere calcolata con:

$\text{DNA Totale (μg)} = \frac{\text{Concentrazione (ng/μL)} \times \text{Volume (μL)}}{1000}$

Comprendere le Variabili

1. Assorbanza a 260 nm (A260):

   • Questa è la misurazione di quanto la luce UV a 260 nm viene assorbita dal campione di DNA
   • I nucleotidi del DNA (in particolare le basi azotate) assorbono la luce UV con un picco di assorbanza a 260 nm
   • Maggiore è l'assorbanza, maggiore è la quantità di DNA presente nella soluzione

2. Fattore di Conversione (50):

   • Il fattore di conversione standard di 50 ng/μL è specifico per il DNA a doppio filamento
   • Per il DNA a filamento singolo, il fattore è 33 ng/μL
   • Per l'RNA, il fattore è 40 ng/μL
   • Per gli oligonucleotidi, il fattore varia in base alla sequenza

3. Fattore di Diluizione:

   • Se il campione è stato diluito prima della misurazione (ad esempio, 1 parte di campione in 9 parti di tampone = fattore di diluizione di 10)
   • Calcolato come: (Volume del Campione + Volume del Diluito) ÷ Volume del Campione
   • Usato per determinare la concentrazione nel campione originale non diluito

4. Volume:

   • Il volume totale della tua soluzione di DNA in microlitri (μL)
   • Usato per calcolare la quantità totale di DNA nel campione

Come Usare Questo Calcolatore

Segui questi passaggi per determinare con precisione la concentrazione del tuo DNA:

1. Prepara il Tuo Campione:

   • Assicurati che il tuo campione di DNA sia correttamente disciolto e mescolato
   • Se la concentrazione prevista è alta, prepara una diluizione per garantire che la lettura rientri nell'intervallo lineare (tipicamente A260 tra 0.1 e 1.0)

2. Misura l'Assorbanza:

   • Usa uno spettrofotometro o un dispositivo nanodrop per misurare l'assorbanza a 260 nm
   • Misura anche l'assorbanza a 280 nm per valutare la purezza (rapporto A260/A280)
   • Usa lo stesso tampone usato per dissolvere/diluire il tuo DNA come riferimento per il bianco

3. Inserisci i Valori nel Calcolatore:

   • Inserisci il valore A260 misurato nel campo "Assorbanza a 260 nm"
   • Inserisci il volume totale della tua soluzione di DNA in microlitri
   • Inserisci il fattore di diluizione (usa 1 se non è stata effettuata diluizione)

4. Interpreta i Risultati:

   • Il calcolatore mostrerà la concentrazione di DNA in ng/μL
   • La quantità totale di DNA nel campione sarà mostrata in μg
   • Usa questi valori per determinare il volume appropriato necessario per le applicazioni successive

5. Valuta la Purezza del DNA (se è stata misurata A280):

   • Un rapporto A260/A280 di ~1.8 indica DNA puro
   • Rapporti più bassi possono indicare contaminazione da proteine
   • Rapporti più alti possono suggerire contaminazione da RNA

Casi d'Uso

La misurazione della concentrazione del DNA è cruciale in numerose applicazioni di biologia molecolare e biotecnologia:

Clonazione Molecolare

Prima di ligare frammenti di DNA in vettori, conoscere la concentrazione esatta consente ai ricercatori di calcolare il rapporto ottimale inserto-vettore, massimizzando l'efficienza di trasformazione. Ad esempio, un rapporto molare di 3:1 di inserto rispetto al vettore spesso produce i migliori risultati, il che richiede misurazioni di concentrazione precise di entrambi i componenti.

PCR e qPCR

Le reazioni PCR richiedono tipicamente da 1 a 10 ng di DNA template per un'amplificazione ottimale. Troppo poco DNA può portare a un fallimento dell'amplificazione, mentre troppo può inibire la reazione. Per la PCR quantitativa (qPCR), è necessaria una quantificazione del DNA ancora più precisa per garantire curve standard accurate e una quantificazione affidabile.

Sequenziamento di Nuova Generazione (NGS)

I protocolli di preparazione delle librerie NGS specificano quantità di input di DNA esatte, spesso nell'intervallo di 1-500 ng a seconda della piattaforma e dell'applicazione. La misurazione accurata della concentrazione è essenziale per una preparazione della libreria di successo e una rappresentazione bilanciata dei campioni nelle corse di sequenziamento multiplexate.

Esperimenti di Trasfezione

Quando si introduce il DNA nelle cellule eucariotiche, la quantità ottimale di DNA varia in base al tipo di cellula e al metodo di trasfezione. Tipicamente, si utilizzano da 0.5 a 5 μg di DNA plasmidico per pozzetto in un formato a 6 pozzetti, richiedendo una misurazione precisa della concentrazione per standardizzare gli esperimenti.

Analisi del DNA Forense

Nelle applicazioni forensi, i campioni di DNA sono spesso limitati e preziosi. La quantificazione accurata consente agli scienziati forensi di determinare se è presente una quantità sufficiente di DNA per il profilo e di standardizzare la quantità di DNA utilizzata nelle analisi successive.

Digestione con Enzimi di Restrizione

Gli enzimi di restrizione hanno unità di attività specifiche definite per μg di DNA. Conoscere la concentrazione esatta del DNA consente di ottenere rapporti corretti enzima-DNA, garantendo una digestione completa senza attività di star (taglio non specifico).

Alternative alla Misurazione Spettrofotometrica

Sebbene la spettrofotometria UV sia il metodo più comune per la quantificazione del DNA, esistono diverse alternative:

1. Metodi Fluorometrici:

   • Coloranti fluorescenti come PicoGreen, Qubit e SYBR Green si legano specificamente al DNA a doppio filamento
   • Più sensibili della spettrofotometria (possono rilevare anche 25 pg/mL)
   • Meno influenzati da contaminanti come proteine, RNA o nucleotidi liberi
   • Richiedono un fluorometro e reagenti specifici

2. Elettroforesi su Gel di Agarosio:

   • Il DNA può essere quantificato confrontando l'intensità delle bande con standard di concentrazione nota
   • Fornisce informazioni anche sulla dimensione e integrità del DNA contemporaneamente
   • Meno preciso rispetto ai metodi spettrofotometrici o fluorometrici
   • Richiede tempo ma utile per conferma visiva

3. PCR in Tempo Reale:

   • Metodo altamente sensibile per quantificare sequenze specifiche di DNA
   • Può rilevare concentrazioni estremamente basse (fino a poche copie)
   • Richiede primer specifici e attrezzature più complesse
   • Utilizzato quando è necessaria una quantificazione specifica della sequenza

4. PCR Digitale:

   • Quantificazione assoluta senza curve standard
   • Estremamente precisa per bersagli a bassa abbondanza
   • Costosa e richiede attrezzature specializzate
   • Utilizzata per la rilevazione di mutazioni rare e analisi della variazione del numero di copie

Storia della Misurazione della Concentrazione del DNA

La capacità di misurare con precisione la concentrazione del DNA è evoluta significativamente insieme ai progressi nella biologia molecolare:

Metodi Precoce (1950-1960)

Dopo la scoperta della struttura del DNA da parte di Watson e Crick nel 1953, gli scienziati iniziarono a sviluppare metodi per isolare e quantificare il DNA. I primi approcci si basavano su saggi colorimetrici come la reazione del difenilammina, che produceva un colore blu quando reagiva con gli zuccheri desossiribosi nel DNA. Questi metodi erano relativamente insensibili e soggetti a interferenze.

Era Spettrofotometrica (1970)

L'applicazione della spettrofotometria UV alla quantificazione degli acidi nucleici divenne diffusa negli anni '70. Gli scienziati scoprirono che il DNA assorbiva la luce UV con un massimo a 260 nm e che la relazione tra assorbanza e concentrazione era lineare entro un certo intervallo. Il fattore di conversione di 50 ng/μL per DNA a doppio filamento a A260 = 1.0 fu stabilito in questo periodo.

Rivoluzione Fluorometrica (1980-1990)

Lo sviluppo di coloranti fluorescenti specifici per il DNA negli anni '80 e '90 rivoluzionò la quantificazione del DNA, specialmente per campioni diluiti. I coloranti Hoechst e successivamente PicoGreen permisero una rilevazione molto più sensibile rispetto a quanto fosse possibile con la spettrofotometria. Questi metodi divennero particolarmente importanti con l'avvento della PCR, che spesso richiedeva una quantificazione precisa di minime quantità di DNA.

Era Moderna (2000-Presente)

L'introduzione di spettrofotometri a microvolume come il NanoDrop nei primi anni 2000 trasformò la quantificazione routinaria del DNA richiedendo solo 0.5-2 μL di campione. Questa tecnologia eliminò la necessità di diluizioni e cuvette, rendendo il processo più veloce e conveniente.

Oggi, tecniche avanzate come la PCR digitale e il sequenziamento di nuova generazione hanno spinto ulteriormente i confini della quantificazione del DNA, consentendo la quantificazione assoluta di sequenze specifiche e il rilevamento di singole molecole. Tuttavia, il principio spettrofotometrico di base stabilito decenni fa rimane la spina dorsale della misurazione routinaria della concentrazione del DNA nei laboratori di tutto il mondo.

Esempi Pratici

Esaminiamo alcuni esempi pratici di calcoli della concentrazione del DNA:

Esempio 1: Preparazione di Plasmidi Standard

Un ricercatore ha purificato un plasmide e ottenuto le seguenti misurazioni:

• Lettura A260: 0.75
• Diluizione: 1:10 (fattore di diluizione = 10)
• Volume della soluzione di DNA: 50 μL

Calcolo:

• Concentrazione = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• DNA Totale = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

Esempio 2: Estrazione di DNA Genomico

Dopo aver estratto DNA genomico dal sangue:

• Lettura A260: 0.15
• Nessuna diluizione (fattore di diluizione = 1)
• Volume della soluzione di DNA: 200 μL

Calcolo:

• Concentrazione = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• DNA Totale = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

Esempio 3: Preparazione del DNA per il Sequenziamento

Un protocollo di sequenziamento richiede esattamente 500 ng di DNA:

• Concentrazione di DNA: 125 ng/μL
• Quantità richiesta: 500 ng

Volume necessario = 500 ÷ 125 = 4 μL di soluzione di DNA

Esempi di Codice

Ecco esempi di come calcolare la concentrazione del DNA in vari linguaggi di programmazione:

1' Formula di Excel per la concentrazione del DNA
2=A260*50*FattoreDiDiluizione
3
4' Formula di Excel per la quantità totale di DNA in μg
5=(A260*50*FattoreDiDiluizione*Volume)/1000
6
7' Esempio in una cella con A260=0.5, FattoreDiDiluizione=2, Volume=100
8=0.5*50*2*100/1000
9' Risultato: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    Calcola la concentrazione del DNA in ng/μL
4    
5    Parametri:
6    absorbance (float): Lettura di assorbanza a 260 nm
7    dilution_factor (float): Fattore di diluizione del campione
8    
9    Restituisce:
10    float: Concentrazione del DNA in ng/μL
11    """
12    return absorbance * 50 * dilution_factor
13
14def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
15    """
16    Calcola la quantità totale di DNA in μg
17    
18    Parametri:
19    concentration (float): Concentrazione del DNA in ng/μL
20    volume_ul (float): Volume della soluzione di DNA in μL
21    
22    Restituisce:
23    float: Quantità totale di DNA in μg
24    """
25    return (concentration * volume_ul) / 1000
26
27# Esempio di utilizzo
28absorbance = 0.8
29dilution_factor = 5
30volume = 75
31
32concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
33total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
34
35print(f"Concentrazione del DNA: {concentration:.2f} ng/μL")
36print(f"DNA Totale: {total_dna:.2f} μg")
37

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // Restituisce la concentrazione del DNA in ng/μL
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // Restituisce la quantità totale di DNA in μg
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// Esempio di utilizzo
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`Concentrazione del DNA: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`DNA Totale: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * Calcola la concentrazione del DNA in ng/μL
4     * 
5     * @param absorbance Lettura di assorbanza a 260 nm
6     * @param dilutionFactor Fattore di diluizione del campione
7     * @return Concentrazione del DNA in ng/μL
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * Calcola la quantità totale di DNA in μg
15     * 
16     * @param concentration Concentrazione del DNA in ng/μL
17     * @param volumeUL Volume della soluzione di DNA in μL
18     * @return Quantità totale di DNA in μg
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("Concentrazione del DNA: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("DNA Totale: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# Funzione R per il calcolo della concentrazione del DNA
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # Restituisce la concentrazione del DNA in ng/μL
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # Restituisce la quantità totale di DNA in μg
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# Esempio di utilizzo
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("Concentrazione del DNA: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("DNA Totale: %.2f μg\n", total_dna))
23

Domande Frequenti

Qual è la differenza tra concentrazione del DNA e purezza del DNA?

La concentrazione del DNA si riferisce alla quantità di DNA presente in una soluzione, tipicamente misurata in ng/μL o μg/mL. Ti dice quanto DNA hai, ma non indica la sua qualità. La purezza del DNA valuta la presenza di contaminanti nel tuo campione di DNA, comunemente misurata da rapporti di assorbanza come A260/A280 (per contaminazione da proteine) e A260/A230 (per contaminazione da composti organici). Un DNA puro ha tipicamente un rapporto A260/A280 di ~1.8 e un rapporto A260/A230 di 2.0-2.2.

Perché il fattore di conversione è diverso per DNA, RNA e proteine?

I fattori di conversione differiscono perché ogni biomolecola ha un coefficiente di estinzione unico (capacità di assorbire luce) a causa delle loro diverse composizioni chimiche. Il DNA a doppio filamento ha un fattore di conversione di 50 ng/μL a A260=1.0, mentre il DNA a filamento singolo è 33 ng/μL, l'RNA è 40 ng/μL e le proteine (misurate a 280 nm) variano ampiamente ma mediamente intorno a 1 mg/mL a A280=1.0. Queste differenze derivano dalle composizioni variabili di nucleotidi o amminoacidi e dalle loro rispettive proprietà di assorbimento.

Quanto è accurata la quantificazione del DNA spettrofotometrica?

La quantificazione del DNA spettrofotometrica è generalmente accurata entro l'intervallo lineare (tipicamente A260 tra 0.1 e 1.0), con una precisione di circa ±3-5%. Tuttavia, l'accuratezza diminuisce a concentrazioni molto basse (sotto 5 ng/μL) e può essere influenzata da contaminanti come proteine, RNA, nucleotidi liberi o alcuni tamponi. Per misurazioni altamente accurate di campioni diluiti o quando è richiesta alta purezza, si raccomandano metodi fluorometrici come Qubit o PicoGreen, che sono più specifici per il DNA a doppio filamento.

Come interpreto il rapporto A260/A280?

Il rapporto A260/A280 indica la purezza del tuo campione di DNA rispetto alla contaminazione da proteine:

• Un rapporto di ~1.8 è generalmente accettato come "puro" per il DNA
• Rapporti inferiori a 1.8 suggeriscono contaminazione da proteine
• Rapporti superiori a 2.0 possono indicare contaminazione da RNA
• Il pH e la forza ionica della soluzione possono anche influenzare questo rapporto

Sebbene utile come controllo di qualità, il rapporto A260/A280 non garantisce DNA funzionale, poiché altri contaminanti o la degradazione del DNA potrebbero non influenzare questo rapporto.

Posso misurare la concentrazione del DNA in soluzioni colorate?

Misurare la concentrazione del DNA in soluzioni colorate utilizzando la spettrofotometria può essere difficile poiché il colore può assorbire a o vicino a 260 nm, interferendo con la misurazione del DNA. In tali casi:

1. Esegui uno scan di lunghezza d'onda (220-320 nm) per controllare eventuali schemi di assorbanza anomali
2. Usa un metodo fluorometrico come Qubit, che è meno influenzato dal colore del campione
3. Purifica ulteriormente il DNA per rimuovere i composti colorati
4. Applica correzioni matematiche se lo spettro di assorbanza del composto interferente è noto

Qual è il volume minimo necessario per la misurazione della concentrazione del DNA?

Il volume minimo dipende dallo strumento utilizzato:

• Spettrofotometri tradizionali con cuvette richiedono tipicamente 50-100 μL
• Spettrofotometri a microvolume come il NanoDrop richiedono solo 0.5-2 μL
• I metodi fluorometrici di solito richiedono 1-20 μL di campione più il volume del reagente
• I lettori a micropiastre richiedono tipicamente 100-200 μL per pozzetto

Gli spettrofotometri a microvolume hanno rivoluzionato la quantificazione del DNA consentendo misurazioni di campioni preziosi con requisiti di volume minimi.

Come calcolo il fattore di diluizione?

Il fattore di diluizione è calcolato come:

$\text{Fattore di Diluizione} = \frac{\text{Volume Totale (Campione + Diluito)}}{\text{Volume del Campione}}$

Ad esempio:

• Se aggiungi 1 μL di DNA a 99 μL di tampone, il fattore di diluizione è 100
• Se aggiungi 5 μL di DNA a 45 μL di tampone, il fattore di diluizione è 10
• Se usi DNA non diluito, il fattore di diluizione è 1

Usa sempre lo stesso tampone per la diluizione che è stato usato per azzerare lo spettrofotometro.

Come converto tra diverse unità di concentrazione?

Conversioni comuni delle unità di concentrazione del DNA:

• 1 ng/μL = 1 μg/mL
• 1 μg/mL = 0.001 mg/mL
• 1 ng/μL = 1000 pg/μL
• 1 μM di un frammento di DNA di 1000 bp ≈ 660 ng/μL

Per convertire dalla concentrazione di massa (ng/μL) alla concentrazione molare (nM) per un frammento di DNA:

$\text{Concentrazione (nM)} = \frac{\text{Concentrazione (ng/μL)} \times 10^6}{\text{lunghezza del DNA (bp)} \times 660}$

Cosa può causare misurazioni inaccurate della concentrazione del DNA?

Diversi fattori possono portare a misurazioni inaccurate della concentrazione del DNA:

1. Contaminazione: Proteine, fenolo, guanidina o altri reagenti di estrazione possono influenzare l'assorbanza
2. Bolle: Bolle d'aria nel percorso della luce possono causare letture errate
3. Degradazione del DNA: Il DNA frammentato può avere proprietà di assorbimento alterate
4. Azzeramento improprio: Usare un tampone diverso per il bianco rispetto a quello in cui è disciolto il DNA
5. Soluzione non omogenea: Soluzioni di DNA mescolate in modo inadeguato danno letture incoerenti
6. Calibrazione dello strumento: Spettrofotometri non calibrati o sporchi producono risultati inaffidabili
7. Misurazioni al di fuori dell'intervallo lineare: Valori di assorbanza molto alti o molto bassi potrebbero non essere accurati

Posso usare questo calcolatore per la concentrazione dell'RNA?

Sebbene questo calcolatore sia ottimizzato per il DNA a doppio filamento (utilizzando il fattore di conversione di 50 ng/μL), puoi adattarlo per l'RNA facendo:

1. Misurare l'A260 come al solito
2. Moltiplicare per 40 invece di 50 (il fattore di conversione specifico per l'RNA)
3. Applicare il fattore di diluizione appropriato

La formula per l'RNA sarebbe: $\text{Concentrazione dell'RNA (ng/μL)} = A_{260} \times 40 \times \text{Fattore di Diluizione}$

Riferimenti

1. Gallagher, S. R., & Desjardins, P. R. (2006). Quantitation of DNA and RNA with absorption and fluorescence spectroscopy. Current Protocols in Molecular Biology, 76(1), A-3D.

2. Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular cloning: a laboratory manual (3rd ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.

3. Manchester, K. L. (1995). Value of A260/A280 ratios for measurement of purity of nucleic acids. BioTechniques, 19(2), 208-210.

4. Wilfinger, W. W., Mackey, K., & Chomczynski, P. (1997). Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity. BioTechniques, 22(3), 474-481.

5. Desjardins, P., & Conklin, D. (2010). NanoDrop microvolume quantitation of nucleic acids. Journal of Visualized Experiments, (45), e2565.

6. Nakayama, Y., Yamaguchi, H., Einaga, N., & Esumi, M. (2016). Pitfalls of DNA Quantification Using DNA-Binding Fluorescent Dyes and Suggested Solutions. PLOS ONE, 11(3), e0150528.

7. Thermo Fisher Scientific. (2010). Assessment of Nucleic Acid Purity. T042-Technical Bulletin.

8. Huberman, J. A. (1995). Importance of measuring nucleic acid absorbance at 240 nm as well as at 260 and 280 nm. BioTechniques, 18(4), 636.

9. Warburg, O., & Christian, W. (1942). Isolation and crystallization of enolase. Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.

10. Glasel, J. A. (1995). Validity of nucleic acid purities monitored by 260nm/280nm absorbance ratios. BioTechniques, 18(1), 62-63.

Pronto a calcolare la tua concentrazione di DNA? Usa il nostro calcolatore sopra per ottenere risultati accurati istantaneamente. Basta inserire la tua lettura di assorbanza, volume e fattore di diluizione per determinare sia la concentrazione che la quantità totale di DNA nel tuo campione.