ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ

ਪਰੀਚਯ

ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਕੋਵੈਲੈਂਟ ਬਾਂਦਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਟੂਲ ਹੈ, ਜੋ ਸਫਲ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਢੰਗਾਂ ਦੀ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਵੈਕਟਰ (ਪਲਾਸਮਿਡ) ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਹੀ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਕੇ, ਇਹ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਬੇਕਾਰ ਰੀਏਜੈਂਟਸ ਅਤੇ ਫੇਲ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਜੀਨਿਕ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ, ਸੰਸਥਾਨਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ, ਅਤੇ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਬੁਨਿਆਦੀ ਹਨ। ਇਹ ਵਿਗਿਆਨੀਆਂ ਨੂੰ ਰੀਕੰਬਿਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਪਲਾਸਮਿਡ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਰੁਚੀ ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਤਾਂ ਜੋ ਹੋਸਟ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਲਈ। ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਡੀਐਨਏ ਘਟਕਾਂ ਦੀ ਉਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਵਰਤੋਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇਸ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੀ ਸਹਾਇਤਾ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਚਾਹੇ ਤੁਸੀਂ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਵੈਕਟਰ ਬਣਾਉਣ, ਜੀਨ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਬਣਾਉਣ ਜਾਂ ਰੁਟੀਨ ਸਬਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ, ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਤੁਹਾਡੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਹਾਲਾਤਾਂ ਨੂੰ ਬਣਾਉਣ ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਸਫਲਤਾ ਦਰ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰੇਗਾ। ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਬਾਰੇ ਕੁਝ ਮੁੱਖ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਦਾਖਲ ਕਰਕੇ, ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਸਹੀ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ।

ਫਾਰਮੂਲਾ/ਗਣਨਾ

ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇੱਕ ਬੁਨਿਆਦੀ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਜੋੜੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਆਕਾਰਾਂ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰਤਾਵਾਂ ਦਾ ਖਿਆਲ ਰੱਖਦਾ ਹੈ। ਮੁੱਖ ਗਣਨਾ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੋੜੀਂਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਕੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਸਬੰਧਿਤ ਲੰਬਾਈਆਂ ਅਤੇ ਚਾਹੀਦੇ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਹੈ।

ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਗਣਨਾ

ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਨੈਨੋਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ) ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:

$\text{ng of insert} = \text{ng of vector} \times \frac{\text{kb size of insert}}{\text{kb size of vector}} \times \text{molar ratio}$

ਜਿੱਥੇ:

• ng of vector = ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਗਈ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 50-100 ng)
• kb size of insert = ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਕਿਲੋਬੇਸ ਵਿੱਚ (kb)
• kb size of vector = ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਕਿਲੋਬੇਸ ਵਿੱਚ (kb)
• molar ratio = ਇੰਸਰਟ ਮੋਲੈਕੂਲਾਂ ਦਾ ਵੈਕਟਰ ਮੋਲੈਕੂਲਾਂ ਨਾਲ ਚਾਹੀਦਾ ਅਨੁਪਾਤ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 3:1 ਤੋਂ 5:1)

ਵੋਲਿਊਮ ਗਣਨਾਵਾਂ

ਇੱਕ ਵਾਰੀ ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਹੋ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:

$\text{Vector volume (μL)} = \frac{\text{ng of vector}}{\text{vector concentration (ng/μL)}}$

$\text{Insert volume (μL)} = \frac{\text{ng of insert}}{\text{insert concentration (ng/μL)}}$

$\text{Buffer/water volume (μL)} = \text{Total reaction volume (μL)} - \text{Vector volume (μL)} - \text{Insert volume (μL)}$

ਉਦਾਹਰਣ ਗਣਨਾ

ਚਲੋ ਇੱਕ ਵਾਸਤਵਿਕ ਉਦਾਹਰਣ ਦੇ ਰਾਹੀਂ ਕੰਮ ਕਰੀਏ:

• ਵੈਕਟਰ ਕੇਂਦਰਤਾ: 50 ng/μL
• ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ: 3000 bp (3 kb)
• ਇੰਸਰਟ ਕੇਂਦਰਤਾ: 25 ng/μL
• ਇੰਸਰਟ ਦੀ ਲੰਬਾਈ: 1000 bp (1 kb)
• ਚਾਹੀਦਾ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ (ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ): 3:1
• ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ: 20 μL
• ਵਰਤਣ ਲਈ ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ: 50 ng

ਕਦਮ 1: ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ $\text{ng of insert} = 50 \text{ ng} \times \frac{1 \text{ kb}}{3 \text{ kb}} \times 3 = 50 \times 0.33 \times 3 = 50 \text{ ng}$

ਕਦਮ 2: ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ $\text{Vector volume} = \frac{50 \text{ ng}}{50 \text{ ng/μL}} = 1 \text{ μL}$

$\text{Insert volume} = \frac{50 \text{ ng}}{25 \text{ ng/μL}} = 2 \text{ μL}$

$\text{Buffer/water volume} = 20 \text{ μL} - 1 \text{ μL} - 2 \text{ μL} = 17 \text{ μL}$

ਇਹ ਗਣਨਾ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਹਰ ਵੈਕਟਰ ਮੋਲੈਕੂਲ ਲਈ ਤਿੰਨ ਇੰਸਰਟ ਮੋਲੈਕੂਲ ਹਨ, ਜੋ ਸਫਲ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੇ ਮੌਕੇ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ।

ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਕਦਮ-ਦਰ-ਕਦਮ ਗਾਈਡ

ਸਾਡਾ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇਨਟੂਇਟਿਵ ਅਤੇ ਸਧਾਰਨ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਆਪਣੇ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਢੰਗਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਕਦਮਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ:

1. ਵੈਕਟਰ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾਖਲ ਕਰੋ:

   • ਆਪਣੇ ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਕੇਂਦਰਤਾ ng/μL ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
   • ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਬੇਸ ਪੇਅਰ (bp) ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
   • ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਰਤਣ ਲਈ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ng) ਦਾਖਲ ਕਰੋ

2. ਇੰਸਰਟ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾਖਲ ਕਰੋ:

   • ਆਪਣੇ ਇੰਸਰਟ ਦੀ ਕੇਂਦਰਤਾ ng/μL ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
   • ਇੰਸਰਟ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਬੇਸ ਪੇਅਰ (bp) ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਕਰੋ

3. ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਸੈਟ ਕਰੋ:

   • ਚਾਹੀਦਾ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ (ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ) ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰੋ - ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 3:1 ਤੋਂ 5:1
   • ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ μL ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਕਰੋ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 10-20 μL)

4. ਨਤੀਜੇ ਵੇਖੋ:

   • ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਆਟੋਮੈਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਿਖਾਏਗਾ:
     • ਲੋੜੀਂਦਾ ਵੈਕਟਰ ਵੋਲਿਊਮ (μL)
     • ਲੋੜੀਂਦਾ ਇੰਸਰਟ ਵੋਲਿਊਮ (μL)
     • ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ ਬਫਰ/ਪਾਣੀ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ (μL)
     • ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ (μL)
     • ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ng)

5. ਨਤੀਜੇ ਕਾਪੀ ਕਰੋ (ਵਿਕਲਪਿਕ):

   • ਆਪਣੇ ਲੈਬ ਨੋਟਬੁੱਕ ਜਾਂ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਲਈ ਸਾਰੇ ਗਣਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਕਾਪੀ ਕਰਨ ਲਈ "ਨਤੀਜੇ ਕਾਪੀ ਕਰੋ" ਬਟਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ

ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਸਾਰੇ ਦਾਖਲਾਂ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨੰਬਰਾਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵੈਰੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਚੈੱਕ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੁੱਲ ਵੋਲਿਊਮ ਲੋੜੀਂਦੇ ਡੀਐਨਏ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਲਈ ਯੋਗ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਕੋਈ ਗਲਤੀਆਂ ਪਾਈਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਮਦਦਗਾਰ ਗਲਤੀ ਸੁਨੇਹੇ ਤੁਹਾਨੂੰ ਦਾਖਲਾਂ ਨੂੰ ਠੀਕ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਨ ਦੇਣਗੇ।

ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਕੇਸ

ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਕਈ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਮਤੀ ਹੈ:

ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ

ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਕੇਸ ਮਿਆਰੀ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਖੋਜਕਰਤਾ ਜੀਨਾਂ ਜਾਂ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਪਲਾਸਮਿਡ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ:

• ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਸਬਕਲੋਨਿੰਗ
• ਕਈ ਜੀਨ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਫਿਊਜ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਬਣਾਉਣਾ
• ਰਿਪੋਰਟਰ ਜੀਨ ਅਸੈਸਮੈਂਟ ਬਣਾਉਣਾ
• ਪਲਾਸਮਿਡ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਬਣਾਉਣਾ

ਸੰਸਥਾਨਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ

ਸੰਸਥਾਨਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ, ਜਿੱਥੇ ਕਈ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ:

• ਗਿਬਸਨ ਅਸੈੰਬਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
• ਗੋਲਡਨ ਗੇਟ ਅਸੈੰਬਲੀ ਸਿਸਟਮਾਂ ਨੂੰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਡੀਐਨਏ ਕੇਂਦਰਤਾਵਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
• ਬਾਇਓਬ੍ਰਿਕ ਦੇ ਮਿਆਰੀ ਜੀਵਨ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਅਸੈੰਬਲੀ
• ਸੰਸਥਾਨਕ ਜੀਵਨ ਸਰਕਿਟਾਂ ਦੀ ਬਣਤਰ

ਨਿਦਾਨ ਕਿੱਟ ਵਿਕਾਸ

ਜਦੋਂ ਮੌਲਿਕ ਨਿਦਾਨ ਟੂਲ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਦੀ ਗੱਲ ਆਉਂਦੀ ਹੈ:

• ਬਿਮਾਰੀ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਜੈਨੇਟਿਕ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ
• ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਕ ਪਲਾਸਮਿਡਾਂ ਦੀ ਬਣਤਰ
• ਕੈਲਿਬਰੇਸ਼ਨ ਮਿਆਰੀਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ qPCR

ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਸਿਸਟਮ

ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ:

• ਉੱਚ-ਕਾਪੀ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਵੈਕਟਰਾਂ ਲਈ ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਨੂੰ ਵਧੀਆ ਬਣਾਉਣਾ
• ਇੰਡਿਊਸਿਬਲ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਸਿਸਟਮਾਂ ਦੀ ਬਣਤਰ
• ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੁਰਸ਼ਕਾਰ ਲਈ ਸੈਕਰੇਸ਼ਨ ਵੈਕਟਰਾਂ ਦੀ ਬਣਤਰ

CRISPR-Cas9 ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ

ਜੀਨੋਮ ਸੰਪਾਦਨ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ:

• CRISPR ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਗਾਈਡ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ
• ਹੋਮੋਲੋਜੀ-ਡਾਇਰੈਕਟਿਡ ਰਿਪੇਅਰ ਲਈ ਦਾਨਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਬਣਾਉਣਾ
• ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਗਾਈਡ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਬਣਾਉਣਾ

ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ

ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਸਥਿਤੀਆਂ ਲਈ ਕੀਮਤੀ ਹੈ:

• ਵੱਡੇ ਇੰਸਰਟ ਕਲੋਨਿੰਗ (>5 kb)
• ਬਹੁਤ ਛੋਟੇ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਇੰਸਰਸ਼ਨ (<100 bp)
• ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਜੋ ਘੱਟ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਰੱਖਦੇ ਹਨ
• ਬਹੁ-ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਅਸੈੰਬਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ

ਵਿਕਲਪ

ਜਦੋਂ ਕਿ ਸਾਡਾ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਰਵਾਇਤੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਸਹੀ ਗਣਨਾਵਾਂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਕੁਝ ਵਿਕਲਪਿਕ ਤਰੀਕੇ ਹਨ:

1. ਗਿਬਸਨ ਅਸੈੰਬਲੀ: ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ-ਟਿਊਬ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਐਕਸੋਨੁਕਲੇਜ਼, ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਤੇ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਕੋਈ ਰਵਾਇਤੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਪਰ ਕੇਂਦਰਤਾਵਾਂ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਨੂੰ ਹਾਲੇ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।

2. ਗੋਲਡਨ ਗੇਟ ਅਸੈੰਬਲੀ: ਦਿਸ਼ਾ-ਵਿਹੀਨ, ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਅਸੈੰਬਲੀ ਲਈ ਟਾਈਪ ਆਈਐਸ ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸਾਰੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਮਾਤਰਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

3. SLIC (ਸਿਕਵੈਂਸ ਅਤੇ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਇੰਡਿਪੈਂਡੈਂਟ ਕਲੋਨਿੰਗ): ਇਕਸੋਨੁਕਲੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕਲ-ਸਟਰੈਂਡ ਓਵਰਹੈਂਗ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇਕੱਠੇ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਸਮਾਨ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

4. ਇਨ-ਫਿਊਜ਼ਨ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਵਪਾਰਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਜੋ 15 bp ਓਵਰਲੈਪ ਨਾਲ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਆਕਾਰਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

5. ਗੇਟਵੇ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੇ ਬਦਲੇ ਸਾਈਟ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਦਾਖਲ ਅਤੇ ਮੰਜ਼ਿਲ ਵੈਕਟਰਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

6. ਅੰਕੜਾ ਟੈਸਟਿੰਗ: ਕੁਝ ਲੈਬਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ (1:1, 3:1, 5:1, 10:1) ਨਾਲ ਕਈ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਸੈਟ ਕਰਨ ਦੀ ਪ੍ਰੀਫਰੈਂਸ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੰਰਚਨਾਵਾਂ ਲਈ ਕਿਹੜਾ ਚੰਗਾ ਹੈ।

7. ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ: ਵਪਾਰਕ ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਪੈਕੇਜ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵੈਕਟਰ ਐਨਟੀ ਅਤੇ ਸਨੈਪਜੀਨ ਵਿੱਚ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਹਨ ਜੋ ਵਾਧੂ ਫੀਚਰਾਂ ਨਾਲ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਸਾਈਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ।

ਇਤਿਹਾਸ

ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾਵਾਂ ਦਾ ਵਿਕਾਸ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਹੈ, ਜੋ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟੈਕਨੋਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਾਂਤੀ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।

ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਵਿਕਾਸ (1970 ਦੇ ਦਹਾਕੇ)

ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦਾ ਵਿਚਾਰ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਲਈ 1970 ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਪੈਦਾ ਹੋਇਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਪੌਲ ਬਰਗ, ਹਰਬਰਟ ਬੋਇਅਰ ਅਤੇ ਸਟੈਨਲੀ ਕੋਹੇਨ ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਰੀਕੰਬਿਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਕੰਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਸਮੇਂ, ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਬਹੁਤ ਹੱਦ ਤੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਨ, ਜਿੱਥੇ ਖੋਜਕਾਰ ਸਹੀ ਹਾਲਾਤਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਟ੍ਰਾਇਲ ਅਤੇ ਐਰਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਨ।

ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਦੀ ਖੋਜ ਨੇ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਕੱਟਣ ਅਤੇ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਨ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਟੂਲ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ। ਟੀ4 ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਜ਼, ਜੋ ਟੀ4 ਬੈਕਟੀਰਿਫੇਜ ਦੁਆਰਾ ਸੰਕ੍ਰਮਿਤ ਈ. ਕੋਲੀ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਬਣ ਗਿਆ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਬਲੰਟ ਅਤੇ ਕੋਹੀਸਿਵ ਅੰਤਾਂ ਨੂੰ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕਰਨ ਦੀ ਹੈ।

ਸੁਧਾਰ ਦਾ ਸਮਾਂ (1980-1990 ਦੇ ਦਹਾਕੇ)

ਜਿਵੇਂ ਜਿਵੇਂ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਆਮ ਹੋਣ ਲੱਗੀ, ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਨੇ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਹੋਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤਾ। ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦੀ ਮਹੱਤਤਾ ਸਪਸ਼ਟ ਹੋ ਗਈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਅੱਜ ਵੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਬੁਨਿਆਦੀ ਫਾਰਮੂਲਾ ਵਿਕਸਤ ਹੋਇਆ।

ਇਸ ਸਮੇਂ ਦੌਰਾਨ, ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਨੇ ਇਹ ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਵਧੇਰੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 3:1 ਤੋਂ 5:1 ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ) ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਿਆਰੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਗਿਆਨ ਪਹਿਲਾਂ ਲੈਬ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲਾਂ ਰਾਹੀਂ ਸਾਂਝਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਆਹਿਸਤਾ-ਆਹਿਸਤਾ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੇ ਮੈਨੂਅਲਾਂ ਅਤੇ ਪਾਠਕ੍ਰਮਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਗਿਆ।

ਆਧੁਨਿਕ ਯੁੱਗ (2000-ਵਰਤਮਾਨ)

2000 ਦੇ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਕੰਪਿਊਟੇਸ਼ਨਲ ਟੂਲਾਂ ਅਤੇ ਆਨਲਾਈਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰਾਂ ਦੇ ਆਗਮਨ ਨੇ ਸਹੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਲਈ ਹੋਰ ਸਹੀ ਬਣਾਇਆ। ਜਿਵੇਂ ਜਿਵੇਂ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੀਆਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਹੋਰ ਸੁਧਰ ਗਈਆਂ, ਸਹੀ ਗਣਨਾਵਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੋ ਗਈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਕਈ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟਾਂ ਜਾਂ ਵੱਡੇ ਇੰਸਰਟਾਂ ਵਾਲੇ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰੋਜੈਕਟਾਂ ਲਈ।

ਅੱਜ, ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾਵਾਂ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਰਕਫਲੋਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਹਿੱਸਾ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਮਰਪਿਤ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇਹ ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਨੂੰ ਆਪਣੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਵਧੀਆ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਬੁਨਿਆਦੀ ਫਾਰਮੂਲਾ ਬਹੁਤ ਹੱਦ ਤੱਕ ਬਦਲਿਆ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਬਾਰੇ ਸਾਡੀ ਸਮਝ ਸੁਧਰੀ ਹੈ।

ਗਿਬਸਨ ਅਸੈੰਬਲੀ ਅਤੇ ਗੋਲਡਨ ਗੇਟ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਰਗੀਆਂ ਵਿਕਲਪਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਉਭਾਰ ਨੇ ਨਵੇਂ ਗਣਨਾ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਪਰ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦਾ ਬੁਨਿਆਦੀ ਸੰਕਲਪ ਇਨ੍ਹਾਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।

ਕੋਡ ਉਦਾਹਰਣ

ਇੱਥੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਿੰਗ ਭਾਸ਼ਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੇ ਨਿਰਮਾਣ ਹਨ:

1' Excel VBA ਫੰਕਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਲਈ
2Function CalculateInsertAmount(vectorAmount As Double, vectorLength As Double, insertLength As Double, molarRatio As Double) As Double
3    ' ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ng ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
4    CalculateInsertAmount = vectorAmount * (insertLength / vectorLength) * molarRatio
5End Function
6
7Function CalculateVectorVolume(vectorAmount As Double, vectorConcentration As Double) As Double
8    ' ਵੈਕਟਰ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
9    CalculateVectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration
10End Function
11
12Function CalculateInsertVolume(insertAmount As Double, insertConcentration As Double) As Double
13    ' ਇੰਸਰਟ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
14    CalculateInsertVolume = insertAmount / insertConcentration
15End Function
16
17Function CalculateBufferVolume(totalVolume As Double, vectorVolume As Double, insertVolume As Double) As Double
18    ' ਬਫਰ/ਪਾਣੀ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
19    CalculateBufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume
20End Function
21
22' ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਉਦਾਹਰਣ:
23' =CalculateInsertAmount(50, 3000, 1000, 3)
24

1def calculate_ligation_volumes(vector_concentration, vector_length, insert_concentration, 
2                              insert_length, molar_ratio, total_volume, vector_amount=50):
3    """
4    ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ।
5    
6    ਪੈਰਾਮੀਟਰ:
7    vector_concentration (float): ng/μL ਵਿੱਚ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਕੇਂਦਰਤਾ
8    vector_length (float): ਬੇਸ ਪੇਅਰਾਂ (bp) ਵਿੱਚ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੰਬਾਈ
9    insert_concentration (float): ng/μL ਵਿੱਚ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਕੇਂਦਰਤਾ
10    insert_length (float): ਬੇਸ ਪੇਅਰਾਂ (bp) ਵਿੱਚ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੰਬਾਈ
11    molar_ratio (float): ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਦਾ ਚਾਹੀਦਾ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ
12    total_volume (float): μL ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ
13    vector_amount (float): ng ਵਿੱਚ ਵਰਤਣ ਲਈ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਡਿਫਾਲਟ: 50)
14    
15    ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ:
16    dict: ਗਣਨਾ ਕੀਤੇ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸਮੇਤਨ ਵਾਲਾ ਡਿਕਸ਼ਨਰੀ
17    """
18    # ਵੈਕਟਰ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
19    vector_volume = vector_amount / vector_concentration
20    
21    # ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
22    vector_length_kb = vector_length / 1000
23    insert_length_kb = insert_length / 1000
24    insert_amount = (vector_amount * insert_length_kb / vector_length_kb) * molar_ratio
25    
26    # ਇੰਸਰਟ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
27    insert_volume = insert_amount / insert_concentration
28    
29    # ਬਫਰ/ਪਾਣੀ ਦੇ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
30    buffer_volume = total_volume - vector_volume - insert_volume
31    
32    return {
33        "vector_volume": round(vector_volume, 2),
34        "insert_volume": round(insert_volume, 2),
35        "buffer_volume": round(buffer_volume, 2),
36        "insert_amount": round(insert_amount, 2),
37        "vector_amount": vector_amount
38    }
39
40# ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
41result = calculate_ligation_volumes(
42    vector_concentration=50,
43    vector_length=3000,
44    insert_concentration=25,
45    insert_length=1000,
46    molar_ratio=3,
47    total_volume=20
48)
49
50print(f"ਵੈਕਟਰ: {result['vector_volume']} μL ({result['vector_amount']} ng)")
51print(f"ਇੰਸਰਟ: {result['insert_volume']} μL ({result['insert_amount']} ng)")
52print(f"ਬਫਰ: {result['buffer_volume']} μL")
53print(f"ਕੁੱਲ: 20 μL")
54

1function calculateLigationVolumes(vectorConcentration, vectorLength, insertConcentration, 
2                                insertLength, molarRatio, totalVolume, vectorAmount = 50) {
3  // ਲੰਬਾਈਆਂ ਨੂੰ kb ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
4  const vectorLengthKb = vectorLength / 1000;
5  const insertLengthKb = insertLength / 1000;
6  
7  // ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
8  const insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
9  
10  // ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
11  const vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
12  const insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
13  const bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
14  
15  return {
16    vectorVolume: parseFloat(vectorVolume.toFixed(2)),
17    insertVolume: parseFloat(insertVolume.toFixed(2)),
18    bufferVolume: parseFloat(bufferVolume.toFixed(2)),
19    insertAmount: parseFloat(insertAmount.toFixed(2)),
20    vectorAmount: vectorAmount
21  };
22}
23
24// ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
25const result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
26console.log(`ਵੈਕਟਰ: ${result.vectorVolume} μL (${result.vectorAmount} ng)`);
27console.log(`ਇੰਸਰਟ: ${result.insertVolume} μL (${result.insertAmount} ng)`);
28console.log(`ਬਫਰ: ${result.bufferVolume} μL`);
29console.log(`ਕੁੱਲ: 20 μL`);
30

1public class DNALigationCalculator {
2    public static class LigationResult {
3        public final double vectorVolume;
4        public final double insertVolume;
5        public final double bufferVolume;
6        public final double insertAmount;
7        public final double vectorAmount;
8        
9        public LigationResult(double vectorVolume, double insertVolume, double bufferVolume, 
10                             double insertAmount, double vectorAmount) {
11            this.vectorVolume = vectorVolume;
12            this.insertVolume = insertVolume;
13            this.bufferVolume = bufferVolume;
14            this.insertAmount = insertAmount;
15            this.vectorAmount = vectorAmount;
16        }
17    }
18    
19    public static LigationResult calculateLigationVolumes(
20            double vectorConcentration, double vectorLength, 
21            double insertConcentration, double insertLength,
22            double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount) {
23        
24        // ਲੰਬਾਈਆਂ ਨੂੰ kb ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
25        double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
26        double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
27        
28        // ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
29        double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
30        
31        // ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
32        double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
33        double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
34        double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
35        
36        // 2 ਦਸ਼ਮਲਵ ਸਥਾਨਾਂ ਤੱਕ ਗੋਲ ਕਰੋ
37        vectorVolume = Math.round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
38        insertVolume = Math.round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
39        bufferVolume = Math.round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
40        insertAmount = Math.round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
41        
42        return new LigationResult(vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount);
43    }
44    
45    public static void main(String[] args) {
46        LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20, 50);
47        
48        System.out.printf("ਵੈਕਟਰ: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.vectorVolume, result.vectorAmount);
49        System.out.printf("ਇੰਸਰਟ: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.insertVolume, result.insertAmount);
50        System.out.printf("ਬਫਰ: %.2f μL%n", result.bufferVolume);
51        System.out.printf("ਕੁੱਲ: 20 μL%n");
52    }
53}
54

1#include <iostream>
2#include <cmath>
3#include <iomanip>
4
5struct LigationResult {
6    double vectorVolume;
7    double insertVolume;
8    double bufferVolume;
9    double insertAmount;
10    double vectorAmount;
11};
12
13LigationResult calculateLigationVolumes(
14    double vectorConcentration, double vectorLength,
15    double insertConcentration, double insertLength,
16    double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount = 50.0) {
17    
18    // ਲੰਬਾਈਆਂ ਨੂੰ kb ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
19    double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
20    double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
21    
22    // ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
23    double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
24    
25    // ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
26    double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
27    double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
28    double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
29    
30    // 2 ਦਸ਼ਮਲਵ ਸਥਾਨਾਂ ਤੱਕ ਗੋਲ ਕਰੋ
31    vectorVolume = std::round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
32    insertVolume = std::round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
33    bufferVolume = std::round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
34    insertAmount = std::round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
35    
36    return {vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount};
37}
38
39int main() {
40    LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
41    
42    std::cout << std::fixed << std::setprecision(2);
43    std::cout << "ਵੈਕਟਰ: " << result.vectorVolume << " μL (" << result.vectorAmount << " ng)" << std::endl;
44    std::cout << "ਇੰਸਰਟ: " << result.insertVolume << " μL (" << result.insertAmount << " ng)" << std::endl;
45    std::cout << "ਬਫਰ: " << result.bufferVolume << " μL" << std::endl;
46    std::cout << "ਕੁੱਲ: 20 μL" << std::endl;
47    
48    return 0;
49}
50

ਅਕਸਰ ਪੁੱਛੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸਵਾਲ (FAQ)

ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਉਤਕ੍ਰਿ਷ਟ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਕੀ ਹੈ?

ਇੰਸਰਟ ਅਤੇ ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 3:1 ਤੋਂ 5:1 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ:

• ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਲਈ: 3:1 ਤੋਂ 5:1
• ਸਟੀਕੀ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਲਈ: 1:1 ਤੋਂ 3:1
• ਵੱਡੇ ਇੰਸਰਟ (>10 kb) ਲਈ: 1:1 ਤੋਂ 2:1
• ਛੋਟੇ ਇੰਸਰਟ (<500 bp) ਲਈ: 5:1 ਤੋਂ 10:1
• ਬਹੁ-ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਅਸੈੰਬਲੀ ਲਈ: 3:1 ਹਰ ਇੰਸਰਟ ਤੋਂ ਵੈਕਟਰ ਤੱਕ

ਮੇਰੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਫੇਲ ਹੋ ਰਹੀ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਮੈਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀਆਂ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹਾਂ?

ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਈ ਕਾਰਕ ਹਨ ਜੋ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਹਨ:

1. ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ: ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਦੋਵੇਂ ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਦੇ ਅੰਤ ਸਾਫ਼ ਹਨ ਅਤੇ ਕੋਈ ਨੁਕਸਾਨ ਨਹੀਂ ਹੈ
2. ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ: ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਤੁਹਾਡਾ ਵੈਕਟਰ ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਆਪਣੇ ਆਪ ਨੂੰ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ
3. ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ: ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਤੁਹਾਡਾ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਸਰਗਰਮ ਹੈ ਅਤੇ ਸਹੀ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ
4. ਇੰਕਿਬੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ: ਕੁਝ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਲੰਬੇ ਇੰਕਿਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਲਾਭ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਦੇ ਹਨ (16°C 'ਤੇ ਰਾਤ ਭਰ)
5. ਬਫਰ ਦੀਆਂ ਹਾਲਤਾਂ: ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਸਹੀ ਬਫਰ ਨਾਲ ATP ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾ ਰਹੀ ਹੈ
6. ਸੰਕਲਨ: ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਪੁਰਸ਼ਕਾਰ ਦੇਣ ਲਈ ਪੁਰਸ਼ਕਾਰ ਕਰੋ ਤਾਂ ਜੋ ਨਿਰੋਧਕਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ ਜਿਵੇਂ ਕਿ EDTA ਜਾਂ ਉੱਚ ਨਮਕ

ਮੈਂ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਕਿੰਨੀ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ?

ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 50-100 ng ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਮਿਆਰੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ। ਜੇਕਰ ਵੱਡਾ ਵੈਕਟਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾਵੇ ਤਾਂ ਇਸ ਨਾਲ ਕੱਟੇ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਕੱਟੇ ਹੋਏ ਵੈਕਟਰ ਦਾ ਪਿਛੋਕੜ ਵਧ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਵਰਤਣ ਨਾਲ ਬਦਲਾਅ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਘਟ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ, ਤੁਸੀਂ ਇਸ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।

ਕੀ ਮੈਂ ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਅਤੇ ਸਟੀਕੀ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਗਣਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸੋਧਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ?

ਹਾਂ। ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਟੀਕੀ-ਐਂਡ (ਕੋਹੀਸਿਵ-ਐਂਡ) ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਕੁਸ਼ਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ, ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ:

• ਵਧੇਰੇ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ (3:1 ਤੋਂ 5:1 ਜਾਂ ਇਸ ਤੋਂ ਵੀ ਵੱਧ)
• ਜ਼ਿਆਦਾ T4 ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਜ਼ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 2-3 ਗੁਣਾ)
• ਲੰਬੇ ਇੰਕਿਬੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ
• ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਧਾਉਣ ਲਈ PEG ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਦੀ ਸੋਚੋ

ਕਈ ਇੰਸਰਟਾਂ ਲਈ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਿਵੇਂ ਕਰੀਏ?

ਕਈ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਅਸੈੰਬਲੀ ਲਈ:

1. ਹਰ ਇੰਸਰਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਮਾਨ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
2. ਸਮਾਨ ਕੁੱਲ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਬਣਾਓ (ਉਦਾਹਰਣ ਲਈ, ਦੋ ਇੰਸਰਟਾਂ ਲਈ, 1.5:1.5:1 ਇੰਸਰਟ1:ਇੰਸਰਟ2:ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ)
3. ਸਾਰੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰੋ
4. ਕਈ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟਾਂ ਲਈ ਗਿਬਸਨ ਅਸੈੰਬਲੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸੋਚੋ

ਕੀ ਮੈਂ ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ ਦੇ ਲਈ ਗਣਨਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਧਿਆਨ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ?

ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ (5' ਫਾਸਫੇਟ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣਾ) ਆਪਣੇ ਆਪ ਨੂੰ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਪਰ ਇਹ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਬਦਲਦਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟ ਕੀਤੇ ਵੈਕਟਰਾਂ ਲਈ:

1. ਨਵਾਂ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਅਟਕਿਆ ਹੋਇਆ 5' ਫਾਸਫੇਟ ਹੈ
2. ਥੋੜ੍ਹਾ ਵਧੇਰੇ ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ (4:1 ਤੋਂ 6:1) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸੋਚੋ
3. ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਨੂੰ ਲੰਬਾ ਕਰੋ (16°C 'ਤੇ ਰਾਤ ਭਰ)

ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ ਕਿੰਨਾ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ?

ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 10 μL ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਉਚਿਤ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬੇਹਵਾਰੀ ਦੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਡੀਆਂ ਗਣਨਾਵਾਂ ਲੋੜੀਂਦੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਨ, ਤਾਂ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਕਈ ਵਿਕਲਪ ਹਨ:

1. ਜ਼ਿਆਦਾ ਕੇਂਦਰਤ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ
2. ਵਰਤਣ ਲਈ ਵੈਕਟਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ (ਉਦਾਹਰਣ ਲਈ, 50 ng ਦੀ ਬਜਾਏ 25 ng)
3. ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣਾ
4. ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਕੁਚਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਸੋਚੋ

ਮੈਂ ਆਪਣੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਕਿੰਨਾ ਸਮਾਂ ਇੰਕਿਬੇਟ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ?

ਉਤਕ੍ਰਿ਷ਟ ਇੰਕਿਬੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦਾ ਹੈ:

• ਸਟੀਕੀ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ: 1 ਘੰਟਾ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ (22-25°C) ਜਾਂ 4-16 ਘੰਟੇ 16°C 'ਤੇ
• ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ: 2-4 ਘੰਟੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਜਾਂ 12-16 ਘੰਟੇ 16°C 'ਤੇ ਰਾਤ ਭਰ
• ਤੇਜ਼ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ (ਉੱਚ-ਕੇਂਦਰਤ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ): 5-15 ਮਿੰਟ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ

ਕੀ ਮੈਂ ਬਚੇ ਹੋਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਬਦਲਾਅ ਲਈ ਦੁਬਾਰਾ ਵਰਤ ਸਕਦਾ ਹਾਂ?

ਹਾਂ, ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ -20°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਬਦਲਾਅ ਲਈ ਦੁਬਾਰਾ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਹਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥਾਅ ਸਾਈਕਲ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ:

1. ਫ੍ਰੀਜ਼ਿੰਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਅਲਿਕੋਟ ਕਰੋ
2. ਸਟੋਰੇਜ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਨੂੰ ਹੀਟ ਇਨਐਕਟਿਵੇਟ ਕਰੋ (65°C 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟ)
3. ਵਧੀਆ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ 1-2 ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ

ਹਵਾਲੇ

1. ਸੈਂਬਰੂਕ ਜੇ, ਰੱਸਲ ਡਬਲਯੂਡੀ। (2001)। ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਮੈਨੂਅਲ (3ਵਾਂ ਸੰਸਕਰਣ)। ਕੋਲਡ ਸਪ੍ਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ।

2. ਗ੍ਰੀਨ ਐਮਆਰ, ਸੈਂਬਰੂਕ ਜੇ। (2012)। ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਮੈਨੂਅਲ (4ਵਾਂ ਸੰਸਕਰਣ)। ਕੋਲਡ ਸਪ੍ਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ।

3. ਐਂਗਲਰ ਸੀ, ਕੰਡੀਜ਼ੀਆ ਆਰ, ਮੈਰਿਲੋਨਟ ਐਸ। (2008)। ਇੱਕ ਪੋਟ, ਇੱਕ ਕਦਮ, ਪ੍ਰਿਸ਼ਨ ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਰੀਕਾ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਥਰੋਟ ਸਮਰੱਥਾ ਹੈ। PLoS ONE, 3(11), e3647. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0003647

4. ਗਿਬਸਨ ਡੀਜੀ, ਯੰਗ ਐਲ, ਚੁਆਂਗ ਆਰਵਾਈ, ਵੇਂਟਰ ਜੇਸੀ, ਹੱਚਿਸਨ ਸੀਏ, ਸਮਿਥ ਐਚਓ। (2009)। ਸੈਂਕੜੇ ਕਿਲੋਬੇਸ ਤੱਕ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਅਸੈੰਬਲੀ। ਨੇਚਰ ਮੈਥਡਸ, 6(5), 343-345. https://doi.org/10.1038/nmeth.1318

5. ਐਸਲਾਨਿਡਿਸ ਸੀ, ਦੇ ਜੋਂਗ ਪੀਜੇ। (1990)। ਪੀਸੀਐਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ-ਇੰਡਿਪੈਂਡੈਂਟ ਕਲੋਨਿੰਗ (LIC-PCR)। ਨਕਲੀ ਐਸਿਡ ਰਿਸਰਚ, 18(20), 6069-6074. https://doi.org/10.1093/nar/18.20.6069

6. ਜ਼ਿਮਰਮੈਨ ਐਸਬੀ, ਫੀਫਰ ਭੀ। (1983)। ਮੈਕ੍ਰੋਮੋਲਿਕੁਲਰ ਕ੍ਰਾਊਡਿੰਗ ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਨੈਸ਼ਨਲ ਅਕੈਡਮੀ ਆਫ਼ ਸਾਇੰਸਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਨ, 80(19), 5852-5856. https://doi.org/10.1073/pnas.80.19.5852

7. ਐਡਜੀਨ - ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਹਵਾਲਾ। https://www.addgene.org/mol-bio-reference/

8. ਨਿਊ ਇੰਗਲੈਂਡ ਬਾਇਓਲੈਬਸ (NEB) - ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ। https://www.neb.com/protocols/0001/01/01/dna-ligation-protocol-with-t4-dna-ligase-m0202

9. ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ - ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਕਨੀਕੀ ਹਵਾਲਾ। https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/cloning-learning-center.html

10. ਪ੍ਰੋਮੇਗਾ - ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਕਨੀਕੀ ਮੈਨੂਅਲ। https://www.promega.com/resources/product-guides-and-selectors/protocols-and-applications-guide/cloning/