डीएनए सांद्रता कैलकुलेटर | ए260 से नैनोग्राम/माइक्रोलीटर में परिवर्तक

डीएनए सांद्रता कैलकुलेटर: A260 को ng/μL में तुरंत परिवर्तित करें

डीएनए सांद्रता कैलकुलेटर क्या है?

जब आप स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर डीएनए अवशोषण मापते हैं, तो आपके पास कच्चे A260 मान होते हैं जिन्हें उपयोग योग्य सांद्रता डेटा में परिवर्तित करने की आवश्यकता होती है। यहीं पर यह कैलकुलेटर काम आता है। यह बीयर-लैम्बर्ट नियम के सिद्धांतों का उपयोग करके 260nm पर यूवी अवशोषण रीडिंग को सटीक डीएनए सांद्रता (ng/μL) में बदल देता है।

हर आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशाला इस परिदृश्य से रूबरू होती है: आपने अभी-अभी प्लास्मिड डीएनए शुद्ध किया है या जीनोमिक डीएनए निकाला है, अवशोषण मापा है, और अब पीसीआर प्रतिक्रिया या अनुक्रमण रन शुरू करने से पहले आपको वास्तव में कितना डीएनए है, यह जानने की आवश्यकता है। मैनुअल गणना में त्रुटियां होने की संभावना होती है, विशेष रूप से जब विलयन कारकों से निपटना होता है। यह टूल तुरंत गणितीय काम करता है, जिससे आप अपने प्रयोगों पर ध्यान केंद्रित कर सकते हैं बजाय अपने कैलकुलेटर के।

इस कैलकुलेटर का उपयोग क्यों करें?

• समय बचाएं: कैलकुलेटर के साथ उलझने और प्रतिलिपि त्रुटियों के जोखिम के बजाय सेकंड में परिणाम प्राप्त करें
• अंतर्निहित सटीकता: डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए के लिए सार्वभौमिक रूप से स्वीकृत 50 ng/μL रूपांतरण कारक का उपयोग करता है
• तनुकरण को संभालता है: स्वचालित रूप से तनुकरण कारकों को ध्यान में रखता है—अब दिमाग में गुणा करने की आवश्यकता नहीं
• पूर्ण विश्लेषण: एक गणना में सांद्रता (ng/μL) और कुल डीएनए उपज (μg) दोनों दिखाता है
• हमेशा उपलब्ध: किसी भी उपकरण पर काम करने वाला मुफ्त ब्राउज़र-आधारित टूल, कोई इंस्टॉलेशन आवश्यक नहीं

डीएनए सांद्रता की गणना कैसे की जाती है

मूल सिद्धांत

गणना बीयर-लैम्बर्ट नियम पर आधारित है, जो स्पेक्ट्रोस्कोपी का एक मौलिक सिद्धांत है। व्यावहारिक शब्दों में, जब यूवी प्रकाश आपके डीएनए नमूने से गुजरता है, तो न्यूक्लियोटाइड्स 260nm पर प्रकाश को अवशोषित करते हैं। जितना अधिक डीएनए मौजूद होगा, उतना ही अधिक प्रकाश अवशोषित होगा। यह संबंध एक विशिष्ट सीमा के भीतर रैखिक होता है, जो मात्रा निर्धारण को सीधा बनाता है।

डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए के लिए, वैज्ञानिकों ने व्यापक प्रयोगों के माध्यम से स्थापित किया है कि A260 रीडिंग 1.0 (मानक 1cm क्यूवेट में मापा गया) लगभग 50 ng/μL डीएनए के बराबर होता है। यह रूपांतरण कारक उद्योग का मानक बन गया है, जिसका उल्लेख कोल्ड स्प्रिंग हार्बर लेबोरेटरी से लेकर थर्मो फिशर के तकनीकी दस्तावेजों में किया गया है।

सूत्र

डीएनए सांद्रता निम्न सूत्र का उपयोग करके गणना की जाती है:

$\text{डीएनए सांद्रता (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{पतला करने का कारक}$

जहाँ:

• A260 260nm पर अवशोषण रीडिंग है
• 50 डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए के लिए मानक रूपांतरण कारक है (A260 = 1.0 के लिए 50 ng/μL)
• पतला करने का कारक वह कारक है जिससे मूल नमूने को माप के लिए पतला किया गया था

कुल डीएनए की गणना इस प्रकार की जा सकती है:

$\text{कुल डीएनए (μg)} = \frac{\text{सांद्रता (ng/μL)} \times \text{आयतन (μL)}}{1000}$

चरों को समझना

260nm पर अवशोषण (A260): यह संख्या सीधे आपके स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से आती है। यह मापता है कि आपके नमूने में न्यूक्लियोटाइड्स कितना यूवी प्रकाश अवशोषित करते हैं। इसे डीएनए मात्रा का प्रॉक्सी मानें—उच्च अवशोषण का मतलब अधिक डीएनए अणु जो उस यूवी बीम को अवरुद्ध कर रहे हैं। अधिकांश स्पेक्ट्रोफोटोमीटर 0.1 और 1.0 के बीच विश्वसनीय रीडिंग देते हैं; इस सीमा से बाहर, आप अपने नमूने को पतला (उच्च मूल्यों के लिए) या संकेंद्रित (कम मूल्यों के लिए) करना चाहेंगे।

रूपांतरण कारक (50): यहाँ न्यूक्लिक एसिड प्रकार महत्वपूर्ण है। डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए 50 ng/μL का उपयोग करता है प्रति अवशोषण इकाई। लेकिन यदि आप सिंगल-स्ट्रैंडेड डीएनए के साथ काम कर रहे हैं, तो आप 33 ng/μL का उपयोग करेंगे, क्योंकि बेस अधिक खुले होते हैं और अलग-अलग अवशोषित करते हैं। RNA 40 ng/μL प्राप्त करता है। ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स जटिल हैं—उनके कारक बेस संरचना पर निर्भर करते हैं क्योंकि प्यूरीन और पाइरिमिडीन के अलग-अलग विलोपन गुणांक होते हैं।

पतला करने का कारक: आप अक्सर उच्च सांद्र नमूनों को पतला करने की आवश्यकता महसूस करेंगे ताकि उस मधुर बिंदु (0.1-1.0 अवशोषण सीमा) में रीडिंग मिल सके। मान लीजिए आप अपनी डीएनए तैयारी से 2 μL लेते हैं और 18 μL बफर जोड़ते हैं—यह 10-गुना पतला करना है, इसलिए आका पतला करने का कारक 10 है। एक सामान्य गलती जो मैंने देखी है वह है इस कारक को गुणा करना भूल जाना, जिसका अर्थ है कि आप अपनी डीएनए सांद्रता को 10-गुना कम आंकेंगे। एक सटीक क्लोनिंग प्रतिक्रिया सेट करते समय यह अच्छा नहीं है।

आयतन: माइक्रोलीटर में आपके डीएनए समाधान का कुल आयतन। यह आपको आपकी कुल डीएनए उपज की गणना करने में मदद करता है—जो कि महत्वपूर्ण है जब आप योजना बना रहे हों कि कितनी प्रतिक्रियाएँ चलाई जा सकती हैं या क्या आपको एक और निष्कर्षण करने की आवश्यकता है।

डीएनए सांद्रता की गणना कैसे करें: चरण-दर-चरण मार्गदर्शिका

यहाँ वह कार्यप्रवाह है जिसका अधिकांश आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशालाएँ पालन करती हैं:

चरण 1: अपने डीएनए नमूने को तैयार करें

अपने नमूने को अच्छी तरह मिलाएं—डीएनए बैठ सकता है या ट्यूब की दीवारों पर चिपक सकता है, जिससे असंगत रीडिंग मिल सकती है। यदि आप उच्च सांद्रता की उम्मीद कर रहे हैं (जैसे एक ताजा प्लास्मिड मिनीप्रेप), तो पहले इसे पतला कर दें। आप A260 को 0.1 और 1.0 के बीच लक्षित कर रहे हैं, जहाँ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सबसे अच्छा प्रदर्शन करते हैं। हमेशा उसी बफर का उपयोग करके पतला करें जिसका आप उपकरण को शून्य करने के लिए उपयोग करेंगे।

चरण 2: A260 अवशोषण को मापें

अपने स्पेक्ट्रोफोटोमीटर या नैनोड्रॉप को चालू करें। इसे अपने बफर से शून्य करें (यह पृष्ठभूमि अवशोषण को शून्य करता है), फिर 260nm पर अपने नमूने को मापें। उस A260 मान को नोट करें। जबकि आप वहाँ हैं, A280 रीडिंग भी प्राप्त करें—260/280 अनुपात आपको प्रोटीन संदूषण के बारे में बताता है। शुद्ध डीएनए आमतौर पर लगभग 1.8 का अनुपात दर्शाता है।

चरण 3: डीएनए सांद्रता कैलकुलेटर का उपयोग करें

अपने नंबरों को कैलकुलेटर में डालें:

1. अपनी A260 रीडिंग दर्ज करें
2. अपने नमूने की मात्रा माइक्रोलीटर में जोड़ें
3. अपने पतला करने के कारक को इनपुट करें (यदि आपने पतला नहीं किया है तो बस 1 का उपयोग करें)
4. गणना करें

चरण 4: अपने परिणामों की व्याख्या करें

कैलकुलेटर आपको दो महत्वपूर्ण संख्याएँ देता है: सांद्रता (ng/μL) आपके स्टॉक की सांद्रता बताती है, जबकि कुल डीएनए (μg) आपकी समग्र उपज दर्शाता है। जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण के लिए, आप 20-100 ng/μL देख सकते हैं। प्लास्मिड प्रेप अक्सर अधिक चलते हैं, शायद 200-500 ng/μL। यदि आपकी सांद्रता असामान्य लगती है, तो पतला करने के कारक की जाँच दोबारा करें—यह गणना त्रुटियों का सबसे सामान्य स्रोत है।

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यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री की सीमाएं

260nm पर यूवी अवशोषण तेज़ और सुविधाजनक है, लेकिन हमेशा सबसे अच्छा विकल्प नहीं होता। यहां वैकल्पिक विधियां और उनके उपयोग हैं:

फ्लोरोमेट्रिक विधियां (क्विबिट, पाइकोग्रीन)

ये डीएनए से बंधने वाले फ्लोरेसेंट रंजक का उपयोग करते हैं और 25 pg/mL तक का पता लगा सकते हैं - यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री से कहीं अधिक संवेदनशील। इन्हें मूल्यवान बनाने वाला उनकी विशिष्टता है: वे केवल तभी फ्लोरेस करते हैं जब dsDNA से बंधे होते हैं, इसलिए संदूषक प्रोटीन, RNA, या मुक्त न्यूक्लियोटाइड्स आपके माप को भ्रमित नहीं करेंगे। नुकसान? आपको एक फ्लोरोमीटर और रीएजेंट्स की आवश्यकता होती है, जो लागत बढ़ाता है। लेकिन दुर्लभ नमूनों या संदूषण की संभावना होने पर, फ्लोरोमेट्री उपयोगी है।

अगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस

अपने डीएनए को ज्ञात सांद्रता के मानकों के साथ चलाने से आप बैंड की तीव्रता की तुलना करके मात्रा का अनुमान लगा सकते हैं। यह स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री की तुलना में अनिश्चित है, और जेल तैयार करने और चलाने में समय लगता है। हालांकि, आपको एक बोनस मिलता है: डीएनए के आकार और अखंडता का दृश्य पुष्टीकरण। यदि आपका नमूना क्षतिग्रस्त है, तो जेल इसे तुरंत दिखा देगा - जो एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर नहीं कर सकता।

रियल-टाइम पीसीआर

जब आपको कुल डीएनए के बजाय किसी विशिष्ट अनुक्रम को मात्रा में मापने की आवश्यकता हो, तो रियल-टाइम पीसीआर उत्तर है। यह अत्यंत संवेदनशील (केवल कुछ प्रतियों का पता लगा सकता है) लेकिन इसके लिए प्राइमर, मानक और अधिक जटिल उपकरण की आवश्यकता होती है। यह दृष्टिकोण निदान और जीन अभिव्यक्ति अध्ययनों में सामान्य है जहां आप विशेष अनुक्रमों को लक्षित कर रहे होते हैं।

डिजिटल पीसीआर

यह तकनीक आपके नमूने को हजारों व्यक्तिगत प्रतिक्रियाओं में विभाजित करती है, जो बिना मानक वक्रों के पूर्ण मात्रा निर्धारण की अनुमति देती है। यह महंगा है और विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है, लेकिन यह दुर्लभ उत्परिवर्तनों या प्रति संख्या परिवर्तनों को मापने में सर्वश्रेष्ठ है जहां सटीकता सबसे महत्वपूर्ण है।

डीएनए मात्रा निर्धारण का विकास

आज हम जिन विधियों का उपयोग करते हैं, वे एक रात में नहीं आईं। वे आणविक जीव विज्ञान के साथ-साथ विकसित हुईं:

प्रारंभिक दिन (1950 के दशक-1960 के दशक)

1953 में वाटसन और क्रिक द्वारा डीएनए की संरचना को डिकोड करने के तुरंत बाद, शोधकर्ताओं को यह पता लगाने की आवश्यकता थी कि उन्होंने कितना डीएनए अलग किया है। डाइफेनाइलामाइन प्रतिक्रिया मुख्य विधि बन गई—यह नीला हो जाता था जब यह डीएनए के डीऑक्सीराइबोज शर्करा के साथ प्रतिक्रिया करता था। रंगीन, बिल्कुल, लेकिन असंवेदनशील और संदूषकों से आसानी से भ्रमित हो जाने वाला।

यूवी क्रांति (1970 के दशक)

प्रयोगशालाएं 1970 के दशक में यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का व्यापक रूप से उपयोग करने लगीं। शोधकर्ता जानते थे कि डीएनए यूवी प्रकाश को अवशोषित करता है, लेकिन इस दशक में विधि के मानकीकरण देखा गया। मुख्य खोज: 260nm पर, अवशोषण और सांद्रता के बीच संबंध बेहद रैखिक है। वह जादुई संख्या—A260 = 1.0 पर dsDNA के लिए 50 ng/μL—व्यवस्थित प्रयोगों के माध्यम से स्थापित की गई और क्षेत्र का मानक बन गई।

फ्लोरेसेंट रंजक सब कुछ बदल देते हैं (1980 के दशक-1990 के दशक)

होएक्स्ट रंजक और बाद में पाइकोग्रीन ने डीएनए मात्रा निर्धारण में अभूतपूर्व संवेदनशीलता लाई। ये फ्लोरेसेंट रंजक उन सांद्रताओं में डीएनए का पता लगा सकते थे जहां यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री बिल्कुल नहीं कर सकता था। पीसीआर की लोकप्रियता में वृद्धि ने इसे महत्वपूर्ण बना दिया—प्रतिक्रियाओं को टेम्पलेट डीएनए की सटीक मात्रा की आवश्यकता थी, अक्सर कम सांद्रता पर।

नैनोड्रॉप युग (2000 के दशक-वर्तमान)

नैनोड्रॉप का प्रारंभिक 2000 के दशक में परिचय एक गेम-चेंजर था। अचानक आपको 50-100 μL की जगह केवल 1-2 μL की आवश्यकता थी। कोई क्यूवेट नहीं। कोई पतला करना नहीं। बस पैडेस्टल पर एक छोटी बूंद पाइपेट करें और अपना पढ़ना प्राप्त करें। यह डीएनए मात्रा निर्धारण को दैनिक उपयोग के लिए पर्याप्त तेज बना देता है।

आज की तकनीकें जैसे डिजिटल पीसीआर और एकल-अणु अनुक्रमण मात्रा निर्धारण को चरम सीमा तक ले जाती हैं, लेकिन मूल यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री सिद्धांत अभी भी रोजमर्रा के प्रयोगशाला कार्य का बल्क संभालता है। यह 1970 के दशक की उस विधि की अच्छी तरह से विशेषता का एक प्रमाण है।

व्यावहारिक उदाहरण

आइए डीएनए सांद्रता गणना के कुछ व्यावहारिक उदाहरणों पर चलते हैं:

उदाहरण 1: मानक प्लास्मिड तैयारी

एक शोधकर्ता ने एक प्लास्मिड को शुद्ध किया है और निम्न माप प्राप्त किए हैं:

• A260 रीडिंग: 0.75
• पतला करना: 1:10 (पतला करने का कारक = 10)
• डीएनए समाधान का आयतन: 50 μL

गणना:

• सांद्रता = 0.75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
• कुल डीएनए = (375 × 50) ÷ 1000 = 18.75 μg

उदाहरण 2: जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण

रक्त से जीनोमिक डीएनए निकालने के बाद:

• A260 रीडिंग: 0.15
• कोई पतला करना नहीं (पतला करने का कारक = 1)
• डीएनए समाधान का आयतन: 200 μL

गणना:

• सांद्रता = 0.15 × 50 × 1 = 7.5 ng/μL
• कुल डीएनए = (7.5 × 200) ÷ 1000 = 1.5 μg

उदाहरण 3: अनुक्रमण के लिए डीएनए तैयार करना

एक अनुक्रमण प्रोटोकॉल को सटीक रूप से 500 ng डीएनए की आवश्यकता होती है:

• डीएनए सांद्रता: 125 ng/μL
• आवश्यक मात्रा: 500 ng

आवश्यक आयतन = 500 ÷ 125 = 4 μL डीएनए समाधान

कोड उदाहरण

यहाँ विभिन्न प्रोग्रामिंग भाषाओं में डीएनए सांद्रता की गणना के उदाहरण दिए गए हैं:

1' डीएनए सांद्रता के लिए एक्सेल सूत्र
2=A260*50*DilutionFactor
3
4' कुल डीएनए मात्रा के लिए एक्सेल सूत्र μg में
5=(A260*50*DilutionFactor*Volume)/1000
6
7' A260=0.5, DilutionFactor=2, Volume=100 वाली सेल में उदाहरण
8=0.5*50*2*100/1000
9' परिणाम: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor=1):
2    """
3    डीएनए सांद्रता की गणना ng/μL में
4    
5    मापदंड:
6    absorbance (float): 260nm पर अवशोषण पठन
7    dilution_factor (float): नमूने का पतला करने का कारक
8    
9    रिटर्न:
10    float: डीएनए सांद्रता ng/μL में
11    """
12    return absorbance * 50 * dilution_factor
13
14def calculate_total_dna(concentration, volume_ul):
15    """
16    कुल डीएनए मात्रा की गणना μg में
17    
18    मापदंड:
19    concentration (float): डीएनए सांद्रता ng/μL में
20    volume_ul (float): डीएनए समाधान का आयतन μL में
21    
22    रिटर्न:
23    float: कुल डीएनए मात्रा μg में
24    """
25    return (concentration * volume_ul) / 1000
26
27# उपयोग का उदाहरण
28absorbance = 0.8
29dilution_factor = 5
30volume = 75
31
32concentration = calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
33total_dna = calculate_total_dna(concentration, volume)
34
35print(f"डीएनए सांद्रता: {concentration:.2f} ng/μL")
36print(f"कुल डीएनए: {total_dna:.2f} μg")
37

1function calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor = 1) {
2  // डीएनए सांद्रता ng/μL में लौटाता है
3  return absorbance * 50 * dilutionFactor;
4}
5
6function calculateTotalDNA(concentration, volumeUL) {
7  // कुल डीएनए मात्रा μg में लौटाता है
8  return (concentration * volumeUL) / 1000;
9}
10
11// उपयोग का उदाहरण
12const absorbance = 0.65;
13const dilutionFactor = 2;
14const volume = 100;
15
16const concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
17const totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
18
19console.log(`डीएनए सांद्रता: ${concentration.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`कुल डीएनए: ${totalDNA.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNACalculator {
2    /**
3     * डीएनए सांद्रता की गणना ng/μL में
4     * 
5     * @param absorbance 260nm पर अवशोषण पठन
6     * @param dilutionFactor नमूने का पतला करने का कारक
7     * @return डीएनए सांद्रता ng/μL में
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double absorbance, double dilutionFactor) {
10        return absorbance * 50 * dilutionFactor;
11    }
12    
13    /**
14     * कुल डीएनए मात्रा की गणना μg में
15     * 
16     * @param concentration डीएनए सांद्रता ng/μL में
17     * @param volumeUL डीएनए समाधान का आयतन μL में
18     * @return कुल डीएनए मात्रा μg में
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double concentration, double volumeUL) {
21        return (concentration * volumeUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double absorbance = 0.42;
26        double dilutionFactor = 3;
27        double volume = 150;
28        
29        double concentration = calculateDNAConcentration(absorbance, dilutionFactor);
30        double totalDNA = calculateTotalDNA(concentration, volume);
31        
32        System.out.printf("डीएनए सांद्रता: %.2f ng/μL%n", concentration);
33        System.out.printf("कुल डीएनए: %.2f μg%n", totalDNA);
34    }
35}
36

1# डीएनए सांद्रता गणना के लिए R फ़ंक्शन
2
3calculate_dna_concentration <- function(absorbance, dilution_factor = 1) {
4  # डीएनए सांद्रता ng/μL में लौटाता है
5  return(absorbance * 50 * dilution_factor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(concentration, volume_ul) {
9  # कुल डीएनए मात्रा μg में लौटाता है
10  return((concentration * volume_ul) / 1000)
11}
12
13# उपयोग का उदाहरण
14absorbance <- 0.35
15dilution_factor <- 4
16volume <- 200
17
18concentration <- calculate_dna_concentration(absorbance, dilution_factor)
19total_dna <- calculate_total_dna(concentration, volume)
20
21cat(sprintf("डीएनए सांद्रता: %.2f ng/μL\n", concentration))
22cat(sprintf("कुल डीएनए: %.2f μg\n", total_dna))
23

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

DNA सांद्रता की गणना A260 से कैसे करते हैं?

अपना A260 पढ़ना लें, 50 (डबल-स्ट्रैंडेड DNA के लिए रूपांतरण कारक) से गुणा करें, फिर अपने पतला करने के कारक से गुणा करें। तो सूत्र इस प्रकार है:

DNA सांद्रता (ng/μL) = A260 × 50 × पतला करने का कारक

यदि आपने अपने नमूने को पतला नहीं किया है, तो बस पतला करने के कारक के रूप में 1 का उपयोग करें।

A260 का DNA सांद्रता में क्या अर्थ है?

A260 "260 नैनोमीटर पर अवशोषण" का संक्षिप्त रूप है। DNA के न्यूक्लियोटाइड बेस इस तरंगदैर्ध्य पर UV प्रकाश को सबसे अधिक अवशोषित करते हैं, इसलिए हम वहां माप करते हैं। जब आका स्पेक्ट्रोफोटोमीटर A260 = 1.0 दिखाता है, तो यह लगभग 50 ng/μL डबल-स्ट्रैंडेड DNA के नमूने के बराबर होता है।

(बाकी अनुवाद जारी रहेगा...)

संदर्भ

1. गैलागर, एस. आर., & डेसजार्डिन्स, पी. आर. (2006). अवशोषण और फ्लोरेसेंस स्पेक्ट्रोस्कोपी के साथ डीएनए और आरएनए की मात्रा निर्धारण। वर्तमान प्रोटोकॉल इन मॉलिक्यूलर बायोलॉजी, 76(1), ए-3डी।

2. सैम्ब्रुक, जे., & रसेल, डी. डब्ल्यू. (2001). आणविक क्लोनिंग: एक प्रयोगशाला मैनुअल (3रा संस्करण)। कोल्ड स्प्रिंग हार्बर लेबोरेटरी प्रेस।

3. मैनचेस्टर, के. एल. (1995). न्यूक्लिक एसिड की शुद्धता के मापन के लिए ए260/ए280 अनुपात का मूल्य। बायोटेक्निक्स, 19(2), 208-210।

4. विल्फिंगर, डब्ल्यू. डब्ल्यू., मैकी, के., & चोमचिंस्की, पी. (1997). पीएच और आयनिक शक्ति का न्यूक्लिक एसिड की स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक मूल्यांकन पर प्रभाव। बायोटेक्निक्स, 22(3), 474-481।

5. डेसजार्डिन्स, पी., & कॉन्क्लिन, डी. (2010). न्यूक्लिक एसिड की माइक्रोवॉल्यूम मात्रा निर्धारण। जर्नल ऑफ विज़ुअलाइज्ड एक्सपेरिमेंट्स, (45), e2565।

6. नाकायामा, वाई., यामागुची, एच., एइनागा, एन., & एसुमी, एम. (2016). डीएनए-बाइंडिंग फ्लोरेसेंट डाइज का उपयोग करके डीएनए मात्रा निर्धारण के पिटफॉल्स और सुझाए गए समाधान। पीएलओएस वन, 11(3), e0150528।

7. थर्मो फिशर साइंटिफिक। (2010). न्यूक्लिक एसिड शुद्धता का मूल्यांकन। टी042-तकनीकी बुलेटिन।

8. हुबरमैन, जे. ए. (1995). 260 और 280 नैनोमीटर के साथ-साथ 240 नैनोमीटर पर न्यूक्लिक एसिड अवशोषण को मापने का महत्व। बायोटेक्निक्स, 18(4), 636।

9. वार्बर्ग, ओ., & क्रिश्चियन, डब्ल्यू. (1942). एनोलेज का अलगाव और क्रिस्टलीकरण। बायोकेमिश्चे जाइटश्रिफ्ट, 310, 384-421।

10. ग्लासेल, जे. ए. (1995). 260nm/280nm अवशोषण अनुपात द्वारा निगरानी किए गए न्यूक्लिक एसिड शुद्धता की वैधता। बायोटेक्निक्स, 18(1), 62-63।

अपनी डीएनए सांद्रता की गणना शुरू करें

A260 रीडिंग को कन्वर्ट करने के लिए तैयार? तुरंत अपने परिणाम प्राप्त करने के लिए ऊपर के कैलकुलेटर का उपयोग करें। चाहे आपने अभी-अभी प्लास्मिड प्रेप पूरा किया हो, जीनोमिक डीएनए निकाला हो, या पीसीआर उत्पाद शुद्ध किया हो, आपको अपने कैलकुलेटर की ओर देखे बिना सटीक सांद्रता डेटा मिल जाएगा।

टूल का उपयोग:

1. स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से अपनी A260 रीडिंग दर्ज करें
2. अपना नमूना आयतन (μL में) जोड़ें
3. अपना डाइल्यूशन फैक्टर डालें (या यदि आपने डाइल्यूट नहीं किया है तो बस 1 दर्ज करें)
4. तुरंत सांद्रता (ng/μL) और कुल डीएनए उपज (μg) देखें

क्लोनिंग प्रतिक्रियाएं सेट करने, पीसीआर अनुकूलन, या अनुक्रमण के लिए नमूने तैयार करने के लिए बिल्कुल सही। कोई पंजीकरण नहीं, कोई इंस्टॉलेशन नहीं, बस जब भी आवश्यक हो त्वरित और सटीक गणनाएं।