डीएनए लिगेशन प्रतिक्रियाओं के लिए इष्टतम मात्रा की गणना करें, वेक्टर और इंसर्ट की सांद्रता, लंबाई और मोलर अनुपात दर्ज करके। आण्विक जीवविज्ञान और आनुवंशिक इंजीनियरिंग के लिए आवश्यक उपकरण।
डीएनए लिगेशन एक महत्वपूर्ण आणविक जीवविज्ञान तकनीक है जिसका उपयोग डीएनए फ्रागमेंट्स को एक साथ जोड़ने के लिए किया जाता है। डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर शोधकर्ताओं के लिए एक आवश्यक उपकरण है, जो सफल लिगेशन प्रतिक्रियाओं के लिए आवश्यक वेक्टर और इनसर्ट डीएनए की उचित मात्रा निर्धारित करने में मदद करता है। यह कैलकुलेटर वेक्टर (प्लास्मिड) और इनसर्ट डीएनए फ्रागमेंट्स के बीच सही मोलर अनुपात की गणना करके प्रभावी आणविक क्लोनिंग प्रयोगों को सुनिश्चित करता है जबकि बर्बाद किए गए अभिकर्ताओं और असफल प्रतिक्रियाओं को कम करता है।
लिगेशन प्रतिक्रियाएँ आनुवंशिक इंजीनियरिंग, सिंथेटिक जीवविज्ञान, और आणविक क्लोनिंग प्रक्रियाओं के लिए मौलिक हैं। वे वैज्ञानिकों को प्लास्मिड वेक्टर में रुचि के जीन को डालने की अनुमति देती हैं ताकि उन्हें मेज़बान जीवों में बाद में स्थानांतरित किया जा सके। इन प्रतिक्रियाओं की सफलता मुख्य रूप से डीएनए घटकों की उचित मात्रा के उपयोग पर निर्भर करती है, जिसे यह कैलकुलेटर निर्धारित करने में मदद करता है।
चाहे आप एक्सप्रेशन वेक्टर का निर्माण कर रहे हों, जीन पुस्तकालय बना रहे हों, या नियमित सबक्लोनिंग कर रहे हों, यह डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर आपके प्रयोगात्मक स्थितियों को अनुकूलित करने में मदद करेगा और आपकी सफलता की दर को बढ़ाएगा। अपने डीएनए नमूनों के बारे में कुछ प्रमुख पैरामीटर दर्ज करके, आप अपने विशिष्ट लिगेशन प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक सटीक मात्रा जल्दी से प्राप्त कर सकते हैं।
डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर एक मौलिक आणविक जीवविज्ञान सूत्र का उपयोग करता है जो जोड़े जाने वाले डीएनए फ्रागमेंट्स के विभिन्न आकारों और सांद्रताओं को ध्यान में रखता है। प्राथमिक गणना यह निर्धारित करती है कि वेक्टर डीएनए की तुलना में कितनी इनसर्ट डीएनए की आवश्यकता है, उनके संबंधित लंबाई और इच्छित मोलर अनुपात के आधार पर।
आवश्यक इनसर्ट डीएनए की मात्रा (नैनोग्राम में) निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके गणना की जाती है:
जहाँ:
एक बार जब आवश्यक इनसर्ट डीएनए की मात्रा निर्धारित हो जाती है, तो प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक मात्रा की गणना की जाती है:
आइए एक व्यावहारिक उदाहरण के माध्यम से काम करते हैं:
चरण 1: आवश्यक इनसर्ट मात्रा की गणना करें
चरण 2: मात्रा की गणना करें
यह गणना सुनिश्चित करती है कि प्रतिक्रिया में प्रत्येक वेक्टर अणु के लिए तीन इनसर्ट अणु हैं, जो सफल लिगेशन के अवसरों को अनुकूलित करता है।
हमारा डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर उपयोग में सहज और सरल बनाने के लिए डिज़ाइन किया गया है। अपने लिगेशन प्रतिक्रिया के लिए उचित मात्रा की गणना करने के लिए इन चरणों का पालन करें:
वेव्टर जानकारी दर्ज करें:
इनसर्ट जानकारी दर्ज करें:
प्रतिक्रिया पैरामीटर सेट करें:
परिणाम देखें:
परिणाम कॉपी करें (वैकल्पिक):
कैलकुलेटर सभी इनपुट सकारात्मक संख्याएँ हैं और यह सुनिश्चित करने के लिए मान्यता जांच करता है कि कुल मात्रा आवश्यक डीएनए मात्रा के लिए पर्याप्त है। यदि कोई त्रुटियाँ पाई जाती हैं, तो सहायक त्रुटि संदेश आपको इनपुट को सही करने के लिए मार्गदर्शन करेंगे।
डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर कई आणविक जीवविज्ञान अनुप्रयोगों में मूल्यवान है:
सबसे सामान्य उपयोग मामला मानक आणविक क्लोनिंग है, जहां शोधकर्ता जीन या डीएनए फ्रागमेंट्स को प्लास्मिड वेक्टर में डालते हैं। कैलकुलेटर यह सुनिश्चित करता है कि:
सिंथेटिक जीवविज्ञान में, जहां अक्सर कई डीएनए फ्रागमेंट्स को इकट्ठा किया जाता है:
जब आणविक निदान उपकरण विकसित करते हैं:
प्रोटीन उत्पादन पर काम कर रहे शोधकर्ताओं के लिए:
जीनोम संपादन अनुप्रयोगों में:
कैलकुलेटर विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण लिगेशन परिदृश्यों के लिए मूल्यवान है:
हालांकि हमारा डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर पारंपरिक लिगेशन प्रतिक्रियाओं के लिए सटीक गणनाएँ प्रदान करता है, डीएनए फ्रागमेंट्स को जोड़ने के लिए कई वैकल्पिक दृष्टिकोण मौजूद हैं:
गिब्सन असेंबली: ओवरलैपिंग डीएनए फ्रागमेंट्स को जोड़ने के लिए एकल-ट्यूब प्रतिक्रिया में एक्सोन्यूक्लियेस, पॉलीमरेज़, और लिगेज का उपयोग करता है। पारंपरिक लिगेशन गणना की आवश्यकता नहीं है, लेकिन सांद्रता अनुपात अभी भी महत्वपूर्ण हैं।
गोल्डन गेट असेंबली: दिशा-निर्देशित, बिना दाग के कई फ्रागमेंट्स की असेंबली के लिए टाइप आईएस रिस्ट्रिक्शन एंजाइमों का उपयोग करता है। सभी फ्रागमेंट्स की समान मात्रा की आवश्यकता होती है।
SLIC (अनुक्रम और लिगेशन स्वतंत्र क्लोनिंग): एक्जोन्यूक्लियेस का उपयोग करके एकल-धागे के ओवरहैंग्स बनाता है जो एक साथ अन्नीले करते हैं। आमतौर पर फ्रागमेंट आकार के समान मात्रा का उपयोग करता है।
इन-फ्यूजन क्लोनिंग: एक व्यावसायिक प्रणाली जो 15 bp ओवरलैप के साथ फ्रागमेंट्स को जोड़ने की अनुमति देती है। आकार के आधार पर एक विशिष्ट अनुपात का उपयोग करती है।
गेटवे क्लोनिंग: लिगेशन के बजाय साइट-विशिष्ट पुनः संयोजन का उपयोग करता है। विशिष्ट प्रवेश और गंतव्य वेक्टर की आवश्यकता होती है।
व्यावहारिक परीक्षण: कुछ प्रयोगशालाएँ विभिन्न इनसर्ट:वेव्टर अनुपात (1:1, 3:1, 5:1, 10:1) के साथ कई लिगेशन प्रतिक्रियाएँ सेट करने को प्राथमिकता देती हैं और यह निर्धारित करती हैं कि उनके विशेष निर्माणों के लिए कौन सा सबसे अच्छा काम करता है।
सॉफ़्टवेयर कैलकुलेटर: व्यावसायिक सॉफ़्टवेयर पैकेज जैसे वेक्टर NTI और स्नैपजीन में अतिरिक्त सुविधाओं के साथ लिगेशन कैलकुलेटर शामिल हैं जैसे कि रिस्ट्रिक्शन साइट विश्लेषण।
डीएनए लिगेशन गणनाओं का विकास आणविक क्लोनिंग तकनीकों के विकास के समानांतर है, जिसने आणविक जीवविज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी में क्रांति ला दी है।
डीएनए लिगेशन का विचार आणविक क्लोनिंग के लिए 1970 के दशक की शुरुआत में पॉल बर्ग, हर्बर्ट बॉयर और स्टेनली कोहेन के पहले काम के साथ उभरा, जिन्होंने पहले पुनः संयोजित डीएनए अणुओं का विकास किया। इस अवधि के दौरान, लिगेशन प्रतिक्रियाएँ मुख्य रूप से अनुभवजन्य थीं, शोधकर्ता इष्टतम स्थितियों का निर्धारण करने के लिए प्रयास और त्रुटि का उपयोग कर रहे थे।
रिस्ट्रिक्शन एंजाइमों और डीएनए लिगेज की खोज ने डीएनए अणुओं को काटने और पुनः जोड़ने के लिए आवश्यक उपकरण प्रदान किए। टी4 डीएनए लिगेज, जो टी4 बैक्टीरियोफेज-संक्रमित ई. कोलाई से अलग किया गया था, ब्लंट और कोहेसिव एंड्स दोनों को जोड़ने की इसकी क्षमता के कारण डीएनए फ्रागमेंट्स को जोड़ने के लिए मानक एंजाइम बन गया।
जैसे-जैसे आणविक क्लोनिंग सामान्य होती गई, शोधकर्ताओं ने लिगेशन प्रतिक्रियाओं के लिए अधिक प्रणालीबद्ध दृष्टिकोण विकसित करना शुरू कर दिया। वेक्टर और इनसर्ट डीएनए के बीच मोलर अनुपात का महत्व स्पष्ट हो गया, जिससे आज भी उपयोग में आने वाले मूल सूत्र का विकास हुआ।
इस अवधि के दौरान, शोधकर्ताओं ने यह स्थापित किया कि अतिरिक्त इनसर्ट डीएनए (आमतौर पर 3:1 से 5:1 मोलर अनुपात) सामान्यतः मानक क्लोनिंग अनुप्रयोगों के लिए लिगेशन दक्षता में सुधार करता है। यह ज्ञान प्रारंभ में प्रयोगशाला प्रोटोकॉल के माध्यम से साझा किया गया और धीरे-धीरे आणविक जीवविज्ञान मैनुअल और पाठ्यपुस्तकों में शामिल हो गया।
2000 के दशक में कंप्यूटेशनल उपकरणों और ऑनलाइन कैलकुलेटरों का आगमन सटीक लिगेशन गणनाओं को शोधकर्ताओं के लिए अधिक सुलभ बना दिया। जैसे-जैसे आणविक जीवविज्ञान तकनीकें अधिक जटिल होती गईं, सटीक गणनाओं की आवश्यकता अधिक महत्वपूर्ण हो गई, विशेष रूप से कई फ्रागमेंट्स या बड़े इनसर्ट शामिल करने वाले चुनौतीपूर्ण क्लोनिंग परियोजनाओं के लिए।
आज, डीएनए लिगेशन गणनाएँ आणविक क्लोनिंग कार्यप्रवाह का एक अभिन्न हिस्सा हैं, जिसमें इस कैलकुलेटर जैसे समर्पित कैलकुलेटर शोधकर्ताओं को अपने प्रयोगों को अनुकूलित करने में मदद करते हैं। मूल सूत्र ज्यादातर अपरिवर्तित रहा है, हालांकि लिगेशन दक्षता को प्रभावित करने वाले कारकों की हमारी समझ में सुधार हुआ है।
गिब्सन असेंबली और गोल्डन गेट क्लोनिंग जैसी वैकल्पिक क्लोनिंग विधियों के उदय ने नई गणना आवश्यकताओं को पेश किया है, लेकिन डीएनए फ्रागमेंट्स के बीच मोलर अनुपात का मौलिक विचार इन तकनीकों में महत्वपूर्ण बना हुआ है।
यहाँ विभिन्न प्रोग्रामिंग भाषाओं में डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर के कार्यान्वयन हैं:
1' Excel VBA फ़ंक्शन डीएनए लिगेशन कैलकुलेटर के लिए
2Function CalculateInsertAmount(vectorAmount As Double, vectorLength As Double, insertLength As Double, molarRatio As Double) As Double
3 ' आवश्यक इनसर्ट मात्रा को ng में गणना करें
4 CalculateInsertAmount = vectorAmount * (insertLength / vectorLength) * molarRatio
5End Function
6
7Function CalculateVectorVolume(vectorAmount As Double, vectorConcentration As Double) As Double
8 ' μL में वेक्टर मात्रा की गणना करें
9 CalculateVectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration
10End Function
11
12Function CalculateInsertVolume(insertAmount As Double, insertConcentration As Double) As Double
13 ' μL में इनसर्ट मात्रा की गणना करें
14 CalculateInsertVolume = insertAmount / insertConcentration
15End Function
16
17Function CalculateBufferVolume(totalVolume As Double, vectorVolume As Double, insertVolume As Double) As Double
18 ' μL में बफर/पानी की मात्रा की गणना करें
19 CalculateBufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume
20End Function
21
22' सेल में उपयोग का उदाहरण:
23' =CalculateInsertAmount(50, 3000, 1000, 3)
241def calculate_ligation_volumes(vector_concentration, vector_length, insert_concentration,
2 insert_length, molar_ratio, total_volume, vector_amount=50):
3 """
4 एक डीएनए लिगेशन प्रतिक्रिया के लिए मात्रा की गणना करें।
5
6 पैरामीटर:
7 vector_concentration (float): वेक्टर डीएनए की सांद्रता ng/μL में
8 vector_length (float): वेक्टर डीएनए की लंबाई आधार जोड़ों में
9 insert_concentration (float): इनसर्ट डीएनए की सांद्रता ng/μL में
10 insert_length (float): इनसर्ट डीएनए की लंबाई आधार जोड़ों में
11 molar_ratio (float): इनसर्ट:वेव्टर का इच्छित मोलर अनुपात
12 total_volume (float): कुल प्रतिक्रिया मात्रा μL में
13 vector_amount (float): उपयोग करने के लिए वेक्टर डीएनए की मात्रा ng में (डिफ़ॉल्ट: 50)
14
15 लौटाता है:
16 dict: गणना की गई मात्रा और मात्रा को समाहित करने वाला शब्दकोश
17 """
18 # वेक्टर मात्रा की गणना करें
19 vector_volume = vector_amount / vector_concentration
20
21 # आवश्यक इनसर्ट मात्रा की गणना करें
22 vector_length_kb = vector_length / 1000
23 insert_length_kb = insert_length / 1000
24 insert_amount = (vector_amount * insert_length_kb / vector_length_kb) * molar_ratio
25
26 # इनसर्ट मात्रा की गणना करें
27 insert_volume = insert_amount / insert_concentration
28
29 # बफर/पानी की मात्रा की गणना करें
30 buffer_volume = total_volume - vector_volume - insert_volume
31
32 return {
33 "vector_volume": round(vector_volume, 2),
34 "insert_volume": round(insert_volume, 2),
35 "buffer_volume": round(buffer_volume, 2),
36 "insert_amount": round(insert_amount, 2),
37 "vector_amount": vector_amount
38 }
39
40# उपयोग का उदाहरण
41result = calculate_ligation_volumes(
42 vector_concentration=50,
43 vector_length=3000,
44 insert_concentration=25,
45 insert_length=1000,
46 molar_ratio=3,
47 total_volume=20
48)
49
50print(f"वेक्टर: {result['vector_volume']} μL ({result['vector_amount']} ng)")
51print(f"इनसर्ट: {result['insert_volume']} μL ({result['insert_amount']} ng)")
52print(f"बफर: {result['buffer_volume']} μL")
53print(f"कुल: 20 μL")
541function calculateLigationVolumes(vectorConcentration, vectorLength, insertConcentration,
2 insertLength, molarRatio, totalVolume, vectorAmount = 50) {
3 // गणना के लिए लंबाई को kb में परिवर्तित करें
4 const vectorLengthKb = vectorLength / 1000;
5 const insertLengthKb = insertLength / 1000;
6
7 // आवश्यक इनसर्ट मात्रा की गणना करें
8 const insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
9
10 // मात्रा की गणना करें
11 const vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
12 const insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
13 const bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
14
15 return {
16 vectorVolume: parseFloat(vectorVolume.toFixed(2)),
17 insertVolume: parseFloat(insertVolume.toFixed(2)),
18 bufferVolume: parseFloat(bufferVolume.toFixed(2)),
19 insertAmount: parseFloat(insertAmount.toFixed(2)),
20 vectorAmount: vectorAmount
21 };
22}
23
24// उपयोग का उदाहरण
25const result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
26console.log(`वेक्टर: ${result.vectorVolume} μL (${result.vectorAmount} ng)`);
27console.log(`इनसर्ट: ${result.insertVolume} μL (${result.insertAmount} ng)`);
28console.log(`बफर: ${result.bufferVolume} μL`);
29console.log(`कुल: 20 μL`);
301public class DNALigationCalculator {
2 public static class LigationResult {
3 public final double vectorVolume;
4 public final double insertVolume;
5 public final double bufferVolume;
6 public final double insertAmount;
7 public final double vectorAmount;
8
9 public LigationResult(double vectorVolume, double insertVolume, double bufferVolume,
10 double insertAmount, double vectorAmount) {
11 this.vectorVolume = vectorVolume;
12 this.insertVolume = insertVolume;
13 this.bufferVolume = bufferVolume;
14 this.insertAmount = insertAmount;
15 this.vectorAmount = vectorAmount;
16 }
17 }
18
19 public static LigationResult calculateLigationVolumes(
20 double vectorConcentration, double vectorLength,
21 double insertConcentration, double insertLength,
22 double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount) {
23
24 // लंबाई को kb में परिवर्तित करें
25 double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
26 double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
27
28 // आवश्यक इनसर्ट मात्रा की गणना करें
29 double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
30
31 // मात्रा की गणना करें
32 double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
33 double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
34 double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
35
36 // 2 दशमलव स्थानों तक गोल करें
37 vectorVolume = Math.round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
38 insertVolume = Math.round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
39 bufferVolume = Math.round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
40 insertAmount = Math.round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
41
42 return new LigationResult(vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount);
43 }
44
45 public static void main(String[] args) {
46 LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20, 50);
47
48 System.out.printf("वेक्टर: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.vectorVolume, result.vectorAmount);
49 System.out.printf("इनसर्ट: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.insertVolume, result.insertAmount);
50 System.out.printf("बफर: %.2f μL%n", result.bufferVolume);
51 System.out.printf("कुल: 20 μL%n");
52 }
53}
541#include <iostream>
2#include <cmath>
3#include <iomanip>
4
5struct LigationResult {
6 double vectorVolume;
7 double insertVolume;
8 double bufferVolume;
9 double insertAmount;
10 double vectorAmount;
11};
12
13LigationResult calculateLigationVolumes(
14 double vectorConcentration, double vectorLength,
15 double insertConcentration, double insertLength,
16 double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount = 50.0) {
17
18 // लंबाई को kb में परिवर्तित करें
19 double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
20 double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
21
22 // आवश्यक इनसर्ट मात्रा की गणना करें
23 double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
24
25 // मात्रा की गणना करें
26 double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
27 double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
28 double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
29
30 // 2 दशमलव स्थानों तक गोल करें
31 vectorVolume = std::round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
32 insertVolume = std::round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
33 bufferVolume = std::round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
34 insertAmount = std::round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
35
36 return {vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount};
37}
38
39int main() {
40 LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
41
42 std::cout << std::fixed << std::setprecision(2);
43 std::cout << "वेक्टर: " << result.vectorVolume << " μL (" << result.vectorAmount << " ng)" << std::endl;
44 std::cout << "इनसर्ट: " << result.insertVolume << " μL (" << result.insertAmount << " ng)" << std::endl;
45 std::cout << "बफर: " << result.bufferVolume << " μL" << std::endl;
46 std::cout << "कुल: 20 μL" << std::endl;
47
48 return 0;
49}
50इनसर्ट और वेक्टर के लिए इष्टतम मोलर अनुपात आमतौर पर 3:1 से 5:1 के बीच होता है। हालाँकि, यह विशिष्ट लिगेशन परिदृश्य के आधार पर भिन्न हो सकता है:
लिगेशन दक्षता को प्रभावित करने वाले कई कारक हैं जो मोलर अनुपात से परे हैं:
आमतौर पर, 50-100 ng वेक्टर डीएनए की सिफारिश की जाती है। बहुत अधिक वेक्टर का उपयोग करने से कटे हुए या आत्म-लिगेटेड वेक्टर की उच्च पृष्ठभूमि हो सकती है, जबकि बहुत कम उपयोग करने से परिवर्तन दक्षता कम हो सकती है। चुनौतीपूर्ण लिगेशनों के लिए, आपको इस राशि को अनुकूलित करने की आवश्यकता हो सकती है।
हां। ब्लंट-एंड लिगेशन आमतौर पर स्टिकी-एंड (कोहेसिव-एंड) लिगेशन की तुलना में कम कुशल होते हैं। ब्लंट-एंड लिगेशन के लिए, उच्च मोलर अनुपात (3:1 से 5:1 या उससे भी अधिक) का उपयोग करें, अधिक टी4 डीएनए लिगेज (आमतौर पर 2-3 गुना अधिक) का उपयोग करें, और लंबे इनक्यूबेशन समय पर विचार करें। पीईजी जोड़ने पर विचार करें ताकि लिगेशन दक्षता बढ़ सके।
कई फ्रागमेंट असेंबली के लिए:
यह कैलकुलेटर विशेष रूप से पारंपरिक रिस्ट्रिक्शन एंजाइम और लिगेज-आधारित क्लोनिंग के लिए डिज़ाइन किया गया है। गिब्सन असेंबली के लिए, सभी फ्रागमेंट्स की समान मात्रा की सिफारिश की जाती है (1:1 अनुपात), हालाँकि डीएनए मात्रा की गणना के लिए मूल गणना समान है। गोल्डन गेट असेंबली के लिए, सभी घटकों के समान मात्रा का उपयोग भी आमतौर पर किया जाता है।
हाँ, लिगेशन मिश्रण को आमतौर पर -20°C पर संग्रहीत किया जा सकता है और परिवर्तन के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है। हालाँकि, प्रत्येक फ्रीज़-थॉ फ़ेज़ दक्षता को कम कर सकता है। सर्वोत्तम परिणामों के लिए:
इष्टतम इनक्यूबेशन समय लिगेशन प्रकार के आधार पर भिन्न होता है:
हाँ, लिगेशन मिश्रण को आमतौर पर -20°C पर संग्रहीत किया जा सकता है और परिवर्तन के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है। हालाँकि, प्रत्येक फ्रीज़-थॉ फ़ेज़ दक्षता को कम कर सकता है। सर्वोत्तम परिणामों के लिए:
इष्टतम इनक्यूबेशन समय लिगेशन प्रकार के आधार पर भिन्न होता है:
हाँ, लिगेशन मिश्रण को आमतौर पर -20°C पर संग्रहीत किया जा सकता है और परिवर्तन के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है। हालाँकि, प्रत्येक फ्रीज़-थॉ फ़ेज़ दक्षता को कम कर सकता है। सर्वोत्तम परिणामों के लिए:
सैंब्रोोक जे, रसेल डब्ल्यू. (2001). आणविक क्लोनिंग: एक प्रयोगशाला मैनुअल (3रा संस्करण). कोल्ड स्प्रिंग हार्बर प्रयोगशाला प्रेस।
ग्रीन एमआर, सैंब्रोोक जे. (2012). आणविक क्लोनिंग: एक प्रयोगशाला मैनुअल (4थ संस्करण). कोल्ड स्प्रिंग हार्बर प्रयोगशाला प्रेस।
एंग्लर सी, कंद्जिया आर, मारिलियननेट एस. (2008). एक पॉट, एक कदम, उच्च थ्रूपुट क्षमता के साथ सटीक क्लोनिंग विधि। पीएलओएस वन, 3(11), e3647. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0003647
गिब्सन डीजी, यंग एल, चुआंग आरवाई, वेंटर जेसी, हचिसन सीए, स्मिथ एचओ. (2009). कई सौ किलोबेस तक डीएनए अणुओं की एंजाइमेटिक असेंबली। नेचर मेथड्स, 6(5), 343-345. https://doi.org/10.1038/nmeth.1318
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ज़िमरमैन एसबी, फेइफर बीएच. (1983). मैक्रोमोलेक्यूलर भीड़ ब्लंट-एंड लिगेशन की अनुमति देती है। नेशनल एकेडमी ऑफ साइंसेज की कार्यवाहियाँ, 80(19), 5852-5856. https://doi.org/10.1073/pnas.80.19.5852
ऐडजीन - आणविक जीवविज्ञान संदर्भ। https://www.addgene.org/mol-bio-reference/
न्यू इंग्लैंड बायोलैब्स (NEB) - डीएनए लिगेशन प्रोटोकॉल। https://www.neb.com/protocols/0001/01/01/dna-ligation-protocol-with-t4-dna-ligase-m0202
थर्मो फिशर वैज्ञानिक - आणविक क्लोनिंग तकनीकी संदर्भ। https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/cloning-learning-center.html
प्रोमेगा - क्लोनिंग तकनीकी मैनुअल। https://www.promega.com/resources/product-guides-and-selectors/protocols-and-applications-guide/cloning/
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