ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್: A260 ಅನ್ನು ng/μL ಗೆ ತಕ್ಷಣ ಪರಿವರ್ತಿಸಿ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಎಂದರೆ ಏನು?

ಒಂದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಎಂಬುದು ಆನ್‌ಲೈನ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯವಾದ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ, ಇದು ಅಣುಜೀವಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರು, ಜನಿತಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರು ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ತಂತ್ರಜ್ಞರಿಗೆ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಓದಿನಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಖಚಿತವಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಈ ಉಚಿತ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಮಾನದಂಡ A260 ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು UV ಶೋಷಣಾ ಅಳೆಯುವಿಕೆಗಳನ್ನು ng/μL ನಲ್ಲಿ ಖಚಿತ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮೌಲ್ಯಗಳಿಗೆ ಪರಿವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ.

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆ ಅಣುಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಮೂಲಭೂತ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ, ಇದು PCR, ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳಿಸುವಿಕೆ, ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಅಣುಜೀವ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ಮೊದಲು ಪ್ರಮುಖ ಗುಣಮಟ್ಟದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಹಂತವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ನಮ್ಮ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಕೈಗಣನೆಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿಮ್ಮ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮತ್ತು ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವಾಗ ದೋಷಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ನಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಬಳಸುವ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು

• ತಕ್ಷಣದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು: A260 ಓದನ್ನು ng/μL ಗೆ ಸೆಕೆಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಿ
• ಖಚಿತ ಗಣನೆಗಳು: ಮಾನದಂಡ 50 ng/μL ಪರಿವರ್ತನಾ ಅಂಶವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ
• ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಬೆಂಬಲ: ಮಾದರಿಯ ಡಿಲ್ಯೂಶನ್‌ಗಳನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸುತ್ತದೆ
• ಬಹು ಘಟಕಗಳು: ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮತ್ತು ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಎರಡೂ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ
• ಬಳಸಲು ಉಚಿತ: ನೋಂದಣಿ ಅಥವಾ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಸ್ಥಾಪನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಹೇಗೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ

ಮೂಲ ತತ್ವ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವುದು ಬೀರ್-ಲ್ಯಾಂಬರ್ಟ್ ಕಾನೂನಕ್ಕೆ ಆಧಾರಿತವಾಗಿದೆ, ಇದು ಒಂದು ದ್ರಾವಣದ ಶೋಷಣೆ ಶ್ರೇಣಿಯು ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಶೋಷಕ ಪ್ರಜಾತಿಯ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಮತ್ತು ದ್ರಾವಣದ ಮೂಲಕ ಬೆಳಕಿನ ಮಾರ್ಗದ ಉದ್ದಕ್ಕೆ ನೇರವಾಗಿ ಅನುಪಾತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಹೇಳುತ್ತದೆ. ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ, 1.0 ಶೋಷಣೆ 260nm (A260) ನಲ್ಲಿ 1cm ಮಾರ್ಗದ ಉದ್ದದಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 50 ng/μL ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಸೂತ್ರ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕೆಳಗಿನ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ:

$\text{ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್}$

ಇಲ್ಲಿ:

• A260 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆ ಓದು
• 50 ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ ಮಾನದಂಡ ಪರಿವರ್ತನಾ ಅಂಶ (A260 = 1.0 ಗೆ 50 ng/μL)
• ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆಗೆ ಮೂಲ ಮಾದರಿಯು ಎಷ್ಟು ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಡಿಲ್ಯೂಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಎಂಬ ಅಂಶ

ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಂತರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಬಹುದು:

$\text{ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ (μg)} = \frac{\text{ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ (ng/μL)} \times \text{ಆಯತ (μL)}}{1000}$

ಚರಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು

1. 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆ (A260):

   • ಇದು 260nm ಅಲೆದೈರ್ಘ್ಯದ UV ಬೆಳಕನ್ನು ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಯು ಎಷ್ಟು ಶೋಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಅಳೆಯುವಿಕೆ
   • ಡಿಎನ್‌ಎ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳು (ವಿಶೇಷವಾಗಿ ನೈಟ್ರೋಜನಸ್ ಬೇಸ್ಗಳು) 260nm ನಲ್ಲಿ ಶ್ರೇಷ್ಟ ಶೋಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ UV ಬೆಳಕನ್ನು ಶೋಷಿಸುತ್ತವೆ
   • ಶೋಷಣೆ ಹೆಚ್ಚು ಇದ್ದರೆ, ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದೆ

2. ಪರಿವರ್ತನಾ ಅಂಶ (50):

   • 50 ng/μL ನ ಮಾನದಂಡ ಪರಿವರ್ತನಾ ಅಂಶವು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ
   • ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ, ಅಂಶ 33 ng/μL
   • RNA ಗೆ, ಅಂಶ 40 ng/μL
   • ಓಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ, ಅಂಶ ಕ್ರಮವನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ

3. ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್:

   • ಮಾದರಿಯು ಅಳೆಯುವಿಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಡಿಲ್ಯೂಟ್ ಮಾಡಲ್ಪಟ್ಟರೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 1 ಭಾಗ ಮಾದರಿ 9 ಭಾಗ ಬಫರ್ = ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ 10)
   • ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ: (ಮಾದರಿಯ ಆಯತ + ಡಿಲ್ಯೂಂಟ್ ಆಯತ) ÷ ಮಾದರಿಯ ಆಯತ
   • ಮೂಲ, ಅಡಿಲ್ಯೂಟ್ ಮಾಡದ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

4. ಆಯತ:

   • ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ದ್ರಾವಣೆಯ ಒಟ್ಟು ಆಯತ ಮೈಕ್ರೋಲಿಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (μL)
   • ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಲೆಕ್ಕಹಾಕುವುದು: ಹಂತ-ಹಂತ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ

ನಿಮ್ಮ A260 ಓದುಗಳಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಈ ಸರಳ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ:

ಹಂತ 1: ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ

• ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿ ಸರಿಯಾಗಿ ಕರಗಿದ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಿತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ
• ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್‌ಗಳಿಗೆ, A260 ಓದು 0.1-1.0 ನಡುವೆ ಓದಲು ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ತಯಾರಿಸಿ
• ನಿಮ್ಮ ಬ್ಲ್ಯಾಂಕ್ ಉಲ್ಲೇಖದಂತೆ ಡಿಲ್ಯೂಶನ್‌ಗಾಗಿ ಅದೇ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿರಿ

ಹಂತ 2: A260 ಶೋಷಣೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ

• 260nm ನಲ್ಲಿ ಶೋಷಣೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟರ್ ಅಥವಾ ನಾನೋಡ್ರಾಪ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿರಿ
• A260 ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ದಾಖಲಿಸಿ (ಡಿಎನ್‌ಎ 260nm ನಲ್ಲಿ UV ಬೆಳಕನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಶೋಷಿಸುತ್ತದೆ)
• ಶುದ್ಧತೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನಕ್ಕಾಗಿ ಆಯ್ಕೆಯಾದಂತೆ A280 ಅನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ

ಹಂತ 3: ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿರಿ

1. ಶೋಷಣೆ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ A260 ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ
2. ಮೈಕ್ರೋಲಿಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯ ಆಯತವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ
3. ಡಿಲ್ಯೂಶನ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ (ಅಡಿಲ್ಯೂಟ್ ಮಾಡದಿದ್ದರೆ 1 ಅನ್ನು ಬಳಸಿರಿ)
4. ತಕ್ಷಣದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಾಗಿ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಿ ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ

ಹಂತ 4: ನಿಮ್ಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಿ

• ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ng/μL ನಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ
• ಒಟ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ μg ನಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ
• ಶುದ್ಧತೆ ಅನುಪಾತಗಳು ಮಾದರಿಯ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತವೆ (A260/A280 ≈ 1.8 ಶುದ್ಧ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ)

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಕ್ಯಾಲ್ಕುಲೇಟರ್ ಅನ್ವಯಗಳು

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆ ಅನೇಕ ಅಣುಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಸಂಶೋಧನಾ ಅನ್ವಯಗಳಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಾಗಿದೆ:

ಅಣುಜೀವ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್

ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಂಡುಗಳನ್ನು ವೆಕ್ಟರ್‌ಗಳಿಗೆ ಲೈಗೇಟ್ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು, ಖಚಿತ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ತಿಳಿಯುವುದು ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಉತ್ತಮ ಇನ್ಸರ್ಟ್-ಟು-ವೆಕ್ಟರ್ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಪರಿವರ್ತನೆಯ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಗರಿಷ್ಠಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಇನ್ಸರ್ಟ್ ಮತ್ತು ವೆಕ್ಟರ್ ನಡುವಿನ 3:1 ಮೋಲರ್ ಅನುಪಾತವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಎರಡೂ ಘಟಕಗಳ ಖಚಿತ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

PCR ಮತ್ತು qPCR

PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಉತ್ತಮ ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ 1-10 ng ಮಾದರಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಕಡಿಮೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ವಿಸ್ತರಣೆಯ ವಿಫಲತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರೋಧಿಸುತ್ತದೆ. ಪ್ರಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR (qPCR) ಗೆ, ಖಚಿತ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು ಇನ್ನಷ್ಟು ಖಚಿತ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಇದು ಖಚಿತ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು ಖಚಿತ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ.

ಮುಂದಿನ ತಲೆಮಾರಿಗೆ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳಿಸುವಿಕೆ (NGS)

NGS ಗ್ರಂಥಾಲಯ ತಯಾರಿಕಾ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳು ಖಚಿತ ಡಿಎನ್‌ಎ ಇನ್ಪುಟ್ ಪ್ರಮಾಣಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 1-500 ng ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ, ವೇದಿಕೆ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯವನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಯಶಸ್ವಿ ಗ್ರಂಥಾಲಯ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಮತ್ತು ಬಹುಪರಿಮಾಣ ಶ್ರೇಣೀಬದ್ಧಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಓಟಗಳಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಗಳ ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು ಖಚಿತ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳು

ಯೂಕ್ಯಾರಿಯೋಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುವಾಗ, ಉತ್ತಮ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವು ಕೋಶದ ಪ್ರಕಾರ ಮತ್ತು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ವೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ 0.5-5 μg ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಖಚಿತ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಫಾರೆನ್ಸಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ

ಫಾರೆನ್ಸಿಕ್ ಅನ್ವಯಗಳಲ್ಲಿ, ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸೀಮಿತ ಮತ್ತು ಅಮೂಲ್ಯವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಖಚಿತ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಅಳೆಯುವುದು ಫಾರೆನ್ಸಿಕ್ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳಿಗೆ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ ಸಾಕಷ್ಟು ಡಿಎನ್‌ಎ ಇದೆ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಮತ್ತು ನಂತರದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ನಿರ್ಬಂಧಕ ಎಂಜೈಮ್ ಪಚನ

ನಿರ್ಬಂಧಕ ಎಂಜೈಮ್‌ಗಳಿಗೆ μg ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರತಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಖಚಿತ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ತಿಳಿಯುವುದು ಸಂಪೂರ್ಣ ಪಚನವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಲು ಸರಿಯಾದ ಎಂಜೈಮ್-ಟು-ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನುಪಾತಗಳನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಸ್ಟಾರ್ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು (ಅನಿಯಮಿತ ಕತ್ತರಿಸುವಿಕೆ) ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ.

ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆಯ ಪರ್ಯಾಯಗಳು

UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಹಲವಾರು ಪರ್ಯಾಯಗಳು ಇವೆ:

1. ಫ್ಲುಯೋರೆಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳು:

   • ಪಿಕೋಗ್ರೀನ್, ಕ್ಯೂಬಿಟ್ ಮತ್ತು SYBR ಹಸಿರುಂತಹ ಫ್ಲುೋರೆಸೆಂಟ್ ಬಣ್ಣಗಳು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ
   • ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಯಿಂದ ಹೆಚ್ಚು ಸಂವೇದನಶೀಲ (25 pg/mL ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಸಾಧ್ಯ)
   • ಪ್ರೋಟೀನ್, RNA ಅಥವಾ ಮುಕ್ತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳಂತಹ ಅಶುದ್ಧಗಳಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮಿತ
   • ಫ್ಲುೋರೆಮೀಟರ್ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ

2. ಆಗರೋಸ್ ಜೇಲ್ ಇಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್:

   • ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ತಿಳಿದ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣಿತಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ
   • ಡಿಎನ್‌ಎ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಅಖಂಡತೆಯ ಬಗ್ಗೆ ಮಾಹಿತಿ ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ
   • ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಅಥವಾ ಫ್ಲುೋರೆಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಖಚಿತ
   • ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಆದರೆ ದೃಶ್ಯ ದೃಢೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತ

3. ರಿಯಲ್-ಟೈಮ್ PCR:

   • ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಡಿಎನ್‌ಎ ಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಅತ್ಯಂತ ಸಂವೇದನಶೀಲ ವಿಧಾನ
   • ಅತ್ಯಂತ ಕಡಿಮೆ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಸಾಧ್ಯ (ಕೆಲವು ನಕಲುಗಳಿಗೆ)
   • ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ
   • ಕ್ರಮ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ ಅಗತ್ಯವಿರುವಾಗ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

4. ಡಿಜಿಟಲ್ PCR:

   • ಮಾನದಂಡ ವಕ್ರಗಳಿಲ್ಲದೆ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ
   • ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದ ಗುರಿಗಳಿಗಾಗಿ ಅತ್ಯಂತ ಖಚಿತ
   • ದುಬಾರಿ ಮತ್ತು ವಿಶೇಷ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ
   • ಅಪರೂಪದ ಪರಿವರ್ತನೆ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅಳೆಯುವಿಕೆಯ ಇತಿಹಾಸ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ಅನ್ನು ಖಚಿತವಾಗಿ ಅಳೆಯುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಅಣುಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಪ್ರಗತಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಹಳಷ್ಟು ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಹೊಂದಿದೆ:

ಪ್ರಾರಂಭಿಕ ವಿಧಾನಗಳು (1950-1960)

1953 ರಲ್ಲಿ ವಾಟ್ಸನ್ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಕ್ ಅವರಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ರಚನೆಯ ಪತ್ತೆಯ ನಂತರ, ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿದರು. ಪ್ರಾರಂಭಿಕ ವಿಧಾನಗಳು ಡಿಪ್ಹೆನಿಲ್‌ಅಮೈನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಂತಹ ಬಣ್ಣದ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಆಧಾರಿತವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಯಲ್ಲಿ ಡಿಒಕ್ಸಿರಿಬೋಸ್ ಸಕ್ಕರೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸಿದಾಗ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಉತ್ಪತ್ತಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಸಂಬಂಧಿತವಾಗಿ ಅಸಂವೇದನಶೀಲವಾಗಿದ್ದು, ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಕ್ಕೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತವೆ.

ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಯುಗ (1970)

ನೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕೆ UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಯ ಬಳಕೆ 1970 ರಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ನಡೆಯಿತು. ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ 260nm ನಲ್ಲಿ UV ಬೆಳಕನ್ನು ಶೋಷಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಶೋಷಣೆ ಮತ್ತು ಕಾನ್ಸೆಂಟ್ರೇಶನ್ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಶ್ರೇಣಿಯಲ್ಲಿ ರೇಖೀಯವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು. A260 = 1.0 ಗೆ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗಾಗಿ 50 ng/μL ಪರಿವರ್ತನಾ ಅಂಶವು ಈ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಾಪಿತವಾಯಿತು.

ಫ್ಲುಯೋರೆಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕ್ರಾಂತಿ (1980-1990)

1980 ಮತ್ತು 1990 ರಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಫ್ಲುೋರೆಸೆಂಟ್ ಬಣ್ಣಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಕ್ರಾಂತಿಕಾರಿಯಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಿತು, ವಿಶೇಷ