బీసీఏ అబ్సార్బెన్స్ నమూనా వాల్యూమ్ కాల్క్యులేటర్ ల్యాబ్ ప్రోటోకాళ్స్ కోసం

బీసీఏ అస్సే అబ్సార్బెన్స్ చదువుల మరియు కావాల్సిన ప్రోటీన్ మాస్ ఆధారంగా ఖచ్చితమైన నమూనా వాల్యూమ్‌లను లెక్కించండి. వెస్టర్న్ బ్లాట్స్ మరియు ఇతర ప్రయోగశాల అనువర్తనాలలో సతత ప్రోటీన్ లోడింగ్‌కి అవసరం.

బీసీఏ అబ్సార్బెన్స్ నమూనా వాల్యూమ్ కేల్కులేటర్

ఈ సాధనం BCA అబ్సార్బెన్స్ ఫలితాలు మరియు నమూనా మాస్ ఆధారంగా అవసరమైన నమూనా వాల్యూమ్‌ను లెక్కిస్తుంది. ప్రతి నమూనా కోసం అబ్సార్బెన్స్ విలువ మరియు నమూనా మాస్‌ను నమోదు చేసి, సంబంధిత నమూనా వాల్యూమ్‌ను లెక్కించండి.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

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curveTypeCustom

నమూనా ఇన్‌పుట్స్

నమూనా 1

నమూనా పేరు

BCA అబ్సార్బెన్స్*

నమూనా మాస్ (μg)*

నమూనా వాల్యూమ్

Copy

N/A μL

కేల్కులేషన్ ఫార్ములా

నమూనా వాల్యూమ్‌ను క్రింది ఫార్ములాను ఉపయోగించి లెక్కిస్తారు:

నమూనా వాల్యూమ్ (μL) = నమూనా మాస్ (μg) / ప్రోటీన్ కేంద్రీకరణ (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

దస్త్రపరిశోధన

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर

परिचय

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर एक विशेष उपकरण है जो शोधकर्ताओं और प्रयोगशाला तकनीशियनों को BCA (बिसिनचोनिनिक एसिड) परीक्षण परिणामों के आधार पर प्रयोगों के लिए उपयुक्त नमूना मात्रा को सटीकता से निर्धारित करने में मदद करने के लिए डिज़ाइन किया गया है। यह कैलकुलेटर आपके BCA परीक्षण से अवशोषण रीडिंग और आपकी इच्छित नमूना मात्रा को लेकर सटीक मात्रा की गणना करता है जो पश्चिमी ब्लॉटिंग, एंजाइमेटिक परीक्षणों और अन्य प्रोटीन विश्लेषण तकनीकों जैसे अनुप्रयोगों में सुसंगत प्रोटीन लोडिंग के लिए आवश्यक होती है।

BCA परीक्षण प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले तरीकों में से एक है जो बायोकैमिस्ट्री और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में उपयोग होता है। अपने प्रोटीन नमूनों के अवशोषण को मापकर और उन्हें मानक वक्र से तुलना करके, आप उच्च सटीकता के साथ प्रोटीन सांद्रता निर्धारित कर सकते हैं। हमारा कैलकुलेटर इस प्रक्रिया को स्वचालित करता है, जिससे अवशोषण रीडिंग को आपके प्रयोगों के लिए आवश्यक सटीक नमूना मात्रा में परिवर्तित किया जा सकता है।

BCA परीक्षण और नमूना मात्रा गणना को समझना

BCA परीक्षण क्या है?

बिसिनचोनिनिक एसिड (BCA) परीक्षण एक जैव रासायनिक परीक्षण है जिसका उपयोग समाधान में प्रोटीन की कुल सांद्रता निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस परीक्षण का सिद्धांत क्षारीय स्थितियों के तहत Cu²⁺-प्रोटीन जटिल के निर्माण पर निर्भर करता है, इसके बाद Cu²⁺ का Cu¹⁺ में कमी आना। कमी की मात्रा प्रोटीन की उपस्थिति के अनुपात में होती है। BCA एक क्षारीय वातावरण में Cu¹⁺ के साथ एक बैंगनी रंग का जटिल बनाता है, जो प्रोटीन द्वारा तांबे के कमी की निगरानी के लिए आधार प्रदान करता है।

बैंगनी रंग की तीव्रता प्रोटीन सांद्रता के साथ आनुपातिक रूप से बढ़ती है, जिसे लगभग 562 नैनोमीटर पर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है। अवशोषण रीडिंग को मानक वक्र से तुलना करके अज्ञात नमूनों में प्रोटीन सांद्रता निर्धारित की जाती है।

नमूना मात्रा गणना के लिए सूत्र

BCA अवशोषण परिणामों से नमूना मात्रा की गणना के लिए मौलिक सूत्र है:

$\text{नमूना मात्रा (μL)} = \frac{\text{नमूना मात्रा (μg)}}{\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)}}$

जहां:

नमूना मात्रा आवश्यक नमूना की मात्रा है (माइक्रोलिटर्स, μL में)
नमूना मात्रा उपयोग करने के लिए इच्छित प्रोटीन की मात्रा है (माइक्रोग्राम, μg में)
प्रोटीन सांद्रता BCA अवशोषण रीडिंग से प्राप्त की जाती है (μg/μL में)

प्रोटीन सांद्रता को अवशोषण रीडिंग से मानक वक्र समीकरण का उपयोग करके गणना की जाती है:

$\text{प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)} = \text{Slope} \times \text{Absorbance} + \text{Intercept}$

एक मानक BCA परीक्षण के लिए, सामान्य ढलान लगभग 2.0 है, और अवरोध अक्सर शून्य के करीब होता है, हालाँकि ये मान आपके विशिष्ट परीक्षण स्थितियों और मानक वक्र के आधार पर भिन्न हो सकते हैं।

BCA अवशोषण नमूना मात्रा कैलकुलेटर का उपयोग कैसे करें

हमारा कैलकुलेटर BCA परीक्षण परिणामों से नमूना मात्रा निर्धारित करने की प्रक्रिया को सरल बनाता है। सटीक गणनाएँ प्राप्त करने के लिए निम्नलिखित चरणों का पालन करें:

नमूना जानकारी दर्ज करें:
- अपने नमूने के लिए एक नाम प्रदान करें (वैकल्पिक लेकिन कई नमूनों को ट्रैक करने के लिए सहायक)
- अपने स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से BCA अवशोषण रीडिंग दर्ज करें
- अपनी इच्छित नमूना मात्रा दर्ज करें (आपके उपयोग में आने वाले प्रोटीन की मात्रा μg में)
मानक वक्र प्रकार का चयन करें:
- मानक (डिफ़ॉल्ट): सामान्य BCA मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करता है
- संवर्धित: संवर्धित संवेदनशीलता प्रोटोकॉल के लिए
- सूक्ष्म: माइक्रोप्लेट प्रोटोकॉल के लिए
- कस्टम: आपको अपने स्वयं के ढलान और अवरोध मान दर्ज करने की अनुमति देता है
परिणाम देखें:
- कैलकुलेटर तुरंत माइक्रोलिटर्स में आवश्यक नमूना मात्रा प्रदर्शित करेगा
- परिणामों को आसान संदर्भ के लिए एक सारांश तालिका में प्रस्तुत किया जाएगा
- कई नमूनों के लिए, आप अधिक प्रविष्टियाँ जोड़ सकते हैं और परिणामों की तुलना कर सकते हैं
परिणामों की कॉपी या निर्यात करें:
- प्रयोगशाला नोटबुक या अन्य अनुप्रयोगों में परिणामों को स्थानांतरित करने के लिए कॉपी बटन का उपयोग करें
- सभी गणनाएँ भविष्य के संदर्भ के लिए सहेजी जा सकती हैं

चरण-दर-चरण उदाहरण

आइए एक व्यावहारिक उदाहरण के माध्यम से चलते हैं:

आपने एक BCA परीक्षण किया है और अपने प्रोटीन नमूने के लिए 0.75 का अवशोषण रीडिंग प्राप्त किया है।
आप अपने पश्चिमी ब्लॉट के लिए 20 μg प्रोटीन लोड करना चाहते हैं।
मानक वक्र (ढलान = 2.0, अवरोध = 0) का उपयोग करते हुए:
- प्रोटीन सांद्रता = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- आवश्यक नमूना मात्रा = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

इसका मतलब है कि आपको 20 μg प्रोटीन प्राप्त करने के लिए अपने नमूने का 13.33 μL लोड करना चाहिए।

परिणामों को समझना

कैलकुलेटर कई महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करता है:

प्रोटीन सांद्रता: यह आपके अवशोषण रीडिंग से चयनित मानक वक्र का उपयोग करके गणना की जाती है। यह आपके नमूने में प्रति इकाई मात्रा में प्रोटीन की मात्रा को दर्शाती है (μg/μL में)।
नमूना मात्रा: यह आपके नमूने की मात्रा है जिसमें आपकी इच्छित प्रोटीन मात्रा होती है। यह वह मान है जिसका उपयोग आप अपने प्रयोगों की तैयारी में करेंगे।
चेतावनियाँ और सिफारिशें: कैलकुलेटर निम्नलिखित के लिए चेतावनियाँ प्रदान कर सकता है:
- बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग (>3.0) जो परीक्षण की रैखिक सीमा के बाहर हो सकती है
- बहुत कम अवशोषण रीडिंग (<0.1) जो पहचान सीमा के करीब हो सकती है
- गणना की गई मात्रा जो अव्यावहारिक रूप से बड़ी (>1000 μL) या छोटी (<1 μL) है

अनुप्रयोग और उपयोग के मामले

पश्चिमी ब्लॉट नमूना तैयारी

इस कैलकुलेटर का सबसे सामान्य अनुप्रयोग पश्चिमी ब्लॉटिंग के लिए नमूनों की तैयारी करना है। सुसंगत प्रोटीन लोडिंग विश्वसनीय पश्चिमी ब्लॉट परिणामों के लिए महत्वपूर्ण है, और यह कैलकुलेटर सुनिश्चित करता है कि आप प्रत्येक नमूने के लिए समान मात्रा में प्रोटीन लोड करें, भले ही उनकी सांद्रता भिन्न हो।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

अपने सभी प्रोटीन नमूनों पर BCA परीक्षण करें
लोड करने के लिए एक सुसंगत प्रोटीन मात्रा का निर्णय लें (आमतौर पर 10-50 μg)
कैलकुलेटर का उपयोग करके प्रत्येक नमूने के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करें
नमूना बफर और कमी करने वाले एजेंट की उचित मात्रा जोड़ें
अपने जैल पर गणना की गई मात्रा लोड करें

एंजाइमेटिक परीक्षण

एंजाइमेटिक परीक्षणों के लिए, अक्सर एक विशिष्ट मात्रा में प्रोटीन का उपयोग करना आवश्यक होता है ताकि विभिन्न नमूनों या प्रयोगों के बीच प्रतिक्रिया की स्थितियों को मानकीकरण किया जा सके।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

BCA परीक्षण का उपयोग करके प्रोटीन सांद्रता निर्धारित करें
अपनी इच्छित प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें
इस मात्रा को अपनी प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ें
अपने एंजाइमेटिक परीक्षण के साथ आगे बढ़ें

इम्यूनोप्रेसिपिटेशन प्रयोग

इम्यूनोप्रेसिपिटेशन (IP) प्रयोगों में, एक समान प्रोटीन मात्रा के साथ शुरू करना विभिन्न परिस्थितियों के बीच परिणामों की तुलना के लिए महत्वपूर्ण है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

सेल या ऊतक लिसेट्स के प्रोटीन सांद्रता को BCA परीक्षण का उपयोग करके मापें
समान प्रोटीन मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक मात्रा की गणना करें (आमतौर पर 500-1000 μg)
सभी नमूनों को लिसेट बफर के साथ समान मात्रा में समायोजित करें
एंटीबॉडी इंक्यूबेशन और प्रीसीपिटेशन के साथ आगे बढ़ें

प्रोटीन शुद्धिकरण

प्रोटीन शुद्धिकरण के दौरान, विभिन्न चरणों में प्रोटीन सांद्रता को ट्रैक करना अक्सर आवश्यक होता है।

उदाहरण कार्यप्रवाह:

शुद्धिकरण के दौरान फ्रैक्शन एकत्र करें
चयनित फ्रैक्शन पर BCA परीक्षण करें
प्रोटीन सांद्रता और कुल प्रोटीन मात्रा निर्धारित करें
आगे के अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक मात्रा निर्धारित करें

उन्नत सुविधाएँ और विचार

कस्टम मानक वक्र

हालांकि कैलकुलेटर मानक BCA परीक्षणों के लिए डिफ़ॉल्ट पैरामीटर प्रदान करता है, आप अपने स्वयं के मानक वक्र उत्पन्न करने पर कस्टम मान भी दर्ज कर सकते हैं। यह विशेष रूप से तब उपयोगी होता है जब:

गैर-मानक प्रोटीन नमूनों के साथ काम कर रहे हों
संशोधित BCA प्रोटोकॉल का उपयोग कर रहे हों
ऐसे पदार्थों की उपस्थिति में काम कर रहे हों जो परीक्षण में हस्तक्षेप कर सकते हैं

कस्टम मानक वक्र का उपयोग करने के लिए:

मानक वक्र विकल्पों में "कस्टम" का चयन करें
अपने ढलान और अवरोध मान दर्ज करें
कैलकुलेटर इन मानों का उपयोग सभी आगे की गणनाओं के लिए करेगा

कई नमूनों के साथ काम करना

कैलकुलेटर आपको कई नमूनों को जोड़ने और एक साथ उनकी मात्रा की गणना करने की अनुमति देता है। यह उन प्रयोगों के लिए विशेष रूप से उपयोगी है जिन्हें विभिन्न परिस्थितियों के बीच सुसंगत प्रोटीन लोडिंग की आवश्यकता होती है।

बैच प्रोसेसिंग के लाभ:

एक बार में सभी मात्रा की गणना करके समय बचाएं
सभी नमूनों के बीच सुसंगतता सुनिश्चित करें
नमूनों के बीच प्रोटीन सांद्रता की आसानी से तुलना करें
बाहरी या संभावित माप त्रुटियों की पहचान करें

किनारे के मामलों से निपटना

बहुत उच्च अवशोषण रीडिंग

यदि आपकी अवशोषण रीडिंग 2.0 से अधिक है, तो यह BCA परीक्षण की रैखिक सीमा के बाहर हो सकती है। ऐसे मामलों में:

अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण को दोहराएं
वैकल्पिक रूप से, कैलकुलेटर की चेतावनी प्रणाली का उपयोग करें, जो संभावित रूप से समस्याग्रस्त रीडिंग को चिह्नित करेगी

बहुत कम अवशोषण रीडिंग

0.1 से कम अवशोषण रीडिंग के लिए, आप परीक्षण की पहचान सीमा के करीब हो सकते हैं, जो सटीकता को प्रभावित कर सकता है। विचार करें:

यदि संभव हो तो अपने नमूने को संकेंद्रित करें
अधिक संवेदनशील प्रोटीन मात्रात्मकता विधि का उपयोग करें
आपके प्रयोग के डिज़ाइन को समायोजित करें ताकि कम प्रोटीन मात्रा को समायोजित किया जा सके

अव्यावहारिक रूप से बड़ी गणना की गई मात्रा

यदि कैलकुलेटर एक मात्रा का सुझाव देता है जो आपके अनुप्रयोग के लिए बहुत बड़ी है:

अपने प्रोटीन नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें
यदि आपका प्रयोग अनुमति देता है तो अपनी इच्छित प्रोटीन मात्रा को नीचे की ओर समायोजित करें
अधिकतम व्यावहारिक मात्रा का उपयोग करें और नोट करें कि वास्तव में उपयोग की गई प्रोटीन मात्रा क्या थी

प्रोटीन मात्रात्मकता और BCA परीक्षण का इतिहास

प्रोटीन की सटीक मात्रात्मकता बायोकैमिस्ट्री और आणविक जीवविज्ञान में एक मौलिक आवश्यकता रही है जब से ये क्षेत्र उभरे हैं। प्रारंभिक विधियाँ नाइट्रोजन सामग्री के निर्धारण पर निर्भर थीं, जो समय लेने वाली और विशेष उपकरण की आवश्यकता होती थी।

प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों का विकास

केजेल्डहल विधि (1883): प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे प्रारंभिक विधियों में से एक, जो नाइट्रोजन सामग्री को मापने पर आधारित है।
बायुरेट परीक्षण (1900 के प्रारंभ): यह विधि पेप्टाइड बांड और तांबे के आयनों के बीच प्रतिक्रिया पर निर्भर करती है, जो एक बैंगनी रंग उत्पन्न करती है।
लोवरी परीक्षण (1951): ओलिवर लोवरी द्वारा विकसित, यह विधि बायुरेट प्रतिक्रिया को फोलिन-सिओकलेट रिएक्टेंट के साथ मिलाकर संवेदनशीलता को बढ़ाती है।
ब्रैडफोर्ड परीक्षण (1976): मैरियन ब्रैडफोर्ड द्वारा विकसित, इस विधि में प्रोटीनों के साथ कोमासि ब्रिलियंट ब्लू G-250 डाई का उपयोग किया जाता है, जो प्रोटीनों से बंधता है और अवशोषण अधिकतम को स्थानांतरित करता है।
BCA परीक्षण (1985): पॉल स्मिथ और उनके सहयोगियों द्वारा पियर्स केमिकल कंपनी में विकसित, इस विधि ने मौजूदा विधियों की सीमाओं को दूर करने के लिए बायुरेट प्रतिक्रिया और BCA पहचान को संयोजित किया, जिससे संवेदनशीलता और डिटर्जेंट के साथ संगतता में सुधार हुआ।

BCA परीक्षण का विकास

BCA परीक्षण का पहला वर्णन 1985 में स्मिथ एट अल द्वारा "बिसिनचोनिनिक एसिड का उपयोग करके प्रोटीन की माप" शीर्षक वाले पेपर में किया गया था। इसे मौजूदा विधियों की सीमाओं को दूर करने के लिए विकसित किया गया, विशेष रूप से प्रोटीन निष्कर्षण और शुद्धिकरण में सामान्य रूप से उपयोग किए जाने वाले विभिन्न रसायनों से हस्तक्षेप।

मुख्य नवाचार यह था कि प्रोटीन द्वारा Cu²⁺ के कमी के कारण उत्पन्न Cu¹⁺ का पता लगाने के लिए बिसिनचोनिनिक एसिड का उपयोग किया गया, जो एक बैंगनी रंग के जटिल का निर्माण करता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जा सकता है। इससे कई लाभ प्राप्त हुए:

बायुरेट विधि की तुलना में उच्च संवेदनशीलता
लोवरी विधि की तुलना में विभिन्न पदार्थों से हस्तक्षेप के प्रति कम संवेदनशीलता
ब्रैडफोर्ड परीक्षण की तुलना में डिटर्जेंट के साथ बेहतर संगतता
कम रसायनों और चरणों के साथ सरल प्रोटोकॉल

इसके परिचय के बाद से, BCA परीक्षण बायोकैमिस्ट्री और आणविक जीवविज्ञान प्रयोगशालाओं में प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधि बन गई है।

नमूना मात्रा की गणना के लिए कोड उदाहरण

एक्सेल सूत्र

1=IF(B2<=0,"त्रुटि: अवशोषण अमान्य",IF(C2<=0,"त्रुटि: नमूना मात्रा अमान्य",C2/(2*B2)))
2
3' जहां:
4' B2 में अवशोषण रीडिंग होती है
5' C2 में μg में इच्छित नमूना मात्रा होती है
6' सूत्र आवश्यक नमूना मात्रा μL में लौटाता है
7

पायथन कार्यान्वयन

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करें मानक वक्र का उपयोग करके।"""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """अवशोषण और इच्छित मात्रा के आधार पर आवश्यक नमूना मात्रा की गणना करें।"""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("नमूना मात्रा सकारात्मक होनी चाहिए")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# उदाहरण उपयोग
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"अवशोषण {absorbance} और इच्छित प्रोटीन मात्रा {sample_mass} μg के लिए:")
31    print(f"प्रोटीन सांद्रता: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"आवश्यक नमूना मात्रा: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"त्रुटि: {e}")
35

आर कोड विश्लेषण के लिए

1# अवशोषण से प्रोटीन सांद्रता की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# नमूना मात्रा की गणना करने के लिए फ़ंक्शन
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("नमूना मात्रा सकारात्मक होनी चाहिए")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# उदाहरण उपयोग
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("अवशोषण %.2f और इच्छित प्रोटीन मात्रा %.2f μg के लिए:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("प्रोटीन सांद्रता: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("आवश्यक नमूना मात्रा: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("त्रुटि: %s\n", e$message))
39})
40

जावास्क्रिप्ट कार्यान्वयन

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("अवशोषण नकारात्मक नहीं हो सकता");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("नमूना मात्रा सकारात्मक होनी चाहिए");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("गणना की गई प्रोटीन सांद्रता सकारात्मक होनी चाहिए");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// उदाहरण उपयोग
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`अवशोषण ${absorbance} और इच्छित प्रोटीन मात्रा ${sampleMass} μg के लिए:`);
33  console.log(`प्रोटीन सांद्रता: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`आवश्यक नमूना मात्रा: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`त्रुटि: ${error.message}`);
37}
38

मानक वक्र दृश्यता

अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध आमतौर पर एक निश्चित सीमा के भीतर रैखिक होता है। नीचे BCA वक्र का एक दृश्य है:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

अवशोषण (562 नैनोमीटर) प्रोटीन सांद्रता (μg/μL)

मानक वक्र मानक नमूने

BCA मानक वक्र

अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के साथ तुलना

विभिन्न प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के विभिन्न लाभ और सीमाएँ होती हैं। यहाँ BCA परीक्षण अन्य सामान्य विधियों की तुलना में है:

विधि	संवेदनशीलता सीमा	लाभ	सीमाएँ	सर्वश्रेष्ठ के लिए
BCA परीक्षण	5-2000 μg/mL	• डिटर्जेंट के साथ संगत • प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम • स्थिर रंग विकास	• कमी करने वाले एजेंटों द्वारा हस्तक्षेप • कुछ चेलेटिंग एजेंटों द्वारा प्रभावित	• सामान्य प्रोटीन मात्रात्मकता • डिटर्जेंट वाले नमूने
ब्रैडफोर्ड परीक्षण	1-1500 μg/mL	• त्वरित (2-5 मिनट) • कुछ हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ	• उच्च प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता • डिटर्जेंट के साथ असंगत	• त्वरित माप • डिटर्जेंट-मुक्त नमूने
लोवरी विधि	1-1500 μg/mL	• अच्छी तरह से स्थापित • अच्छी संवेदनशीलता	• कई हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ • कई चरण	• ऐतिहासिक स्थिरता • शुद्ध प्रोटीन नमूने
UV अवशोषण (280 नैनोमीटर)	20-3000 μg/mL	• गैर-विनाशकारी • बहुत तेज • कोई रसायन आवश्यक नहीं	• न्यूक्लिक एसिड द्वारा प्रभावित • शुद्ध नमूनों की आवश्यकता	• शुद्ध प्रोटीन समाधान • शुद्धिकरण के दौरान त्वरित जांच
फ्लोरोमेट्रिक	0.1-500 μg/mL	• उच्चतम संवेदनशीलता • व्यापक गतिशील रेंज	• महंगे रसायन • फ्लोरोमीटर की आवश्यकता	• बहुत पतले नमूने • सीमित नमूना मात्रा

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

BCA परीक्षण का उपयोग किस लिए किया जाता है?

BCA (बिसिनचोनिनिक एसिड) परीक्षण मुख्य रूप से एक नमूने में प्रोटीन की कुल सांद्रता को मापने के लिए किया जाता है। इसका व्यापक उपयोग बायोकैमिस्ट्री, सेल बायोलॉजी, और आणविक जीवविज्ञान में पश्चिमी ब्लॉटिंग, एंजाइम परीक्षण, इम्यूनोप्रेसिपिटेशन, और प्रोटीन शुद्धिकरण जैसे अनुप्रयोगों के लिए किया जाता है।

BCA परीक्षण की सटीकता कितनी है?

BCA परीक्षण आमतौर पर सही ढंग से 5-10% के भीतर होता है जब सही ढंग से किया जाता है। इसकी सटीकता कई कारकों पर निर्भर करती है जिसमें मानक वक्र की गुणवत्ता, हस्तक्षेप करने वाले पदार्थों की अनुपस्थिति, और क्या अज्ञात प्रोटीन की संरचना मानक प्रोटीन के समान है।

BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप करने वाले पदार्थ कौन से हैं?

BCA परीक्षण परिणामों में हस्तक्षेप करने वाले कई पदार्थ हो सकते हैं, जिनमें शामिल हैं:

कमी करने वाले एजेंट (DTT, β-मेर्कैप्टोएथेनॉल, ग्लूटाथियोन)
चेलाटिंग एजेंट (EDTA, EGTA)
सरल शर्करा की उच्च सांद्रता
लिपिड
कुछ डिटर्जेंट उच्च सांद्रता में
अमोनिया यौगिक

BCA और ब्रैडफोर्ड परीक्षणों में क्या अंतर है?

मुख्य अंतर हैं:

BCA परीक्षण डिटर्जेंट और सर्फेक्टेंट के साथ अधिक संगत है
ब्रैडफोर्ड परीक्षण तेज है (2-5 मिनट बनाम BCA के लिए 30+ मिनट)
BCA में प्रोटीन-से-प्रोटीन भिन्नता कम होती है
ब्रैडफोर्ड अधिक संवेदनशीलता के लिए बेसिक अमीनो एसिड पर अधिक प्रभाव डालता है
BCA कमी करने वाले एजेंटों से प्रभावित होता है, जबकि ब्रैडफोर्ड नहीं होता

यदि मेरी गणना की गई नमूना मात्रा बहुत बड़ी है तो क्या करें?

यदि आपका कैलकुलेटर एक बहुत बड़ी नमूना मात्रा दिखाता है, तो यह आमतौर पर आपके नमूने में प्रोटीन की कम सांद्रता को इंगित करता है। यह निम्नलिखित के कारण हो सकता है:

आपके मूल नमूने में वास्तव में कम प्रोटीन सामग्री
तैयारी के दौरान प्रोटीन हानि
BCA परीक्षण प्रक्रिया में त्रुटियाँ
अवशोषण रीडिंग में गलतियाँ

अपने नमूने को संकेंद्रित करने पर विचार करें या यदि संभव हो तो अपनी प्रयोगात्मक डिज़ाइन को समायोजित करें।

क्या मैं इस कैलकुलेटर का उपयोग अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के लिए कर सकता हूँ?

यह कैलकुलेटर विशेष रूप से BCA परीक्षण परिणामों के लिए डिज़ाइन किया गया है। जबकि मौलिक सिद्धांत (संघटन को मात्रा में परिवर्तित करना) अन्य विधियों पर लागू होता है, अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध विभिन्न परीक्षणों में भिन्न होता है। अन्य विधियों जैसे ब्रैडफोर्ड या लोवरी के लिए, आपको विभिन्न मानक वक्र पैरामीटर का उपयोग करने की आवश्यकता होगी।

मैं रैखिक सीमा के बाहर के नमूनों के साथ कैसे निपटूँ?

रैखिक सीमा के बाहर (आमतौर पर >2.0) अवशोषण रीडिंग के लिए:

अपने नमूने को पतला करें और BCA परीक्षण को दोहराएं
एक अलग प्रोटीन मात्रात्मकता विधि का उपयोग करें
मानक वक्र को उच्च सांद्रता मानकों को शामिल करने के लिए समायोजित करें

मुझे किस प्रोटीन को मानक के रूप में उपयोग करना चाहिए?

बोवाइन सीरम एल्बुमिन (BSA) BCA परीक्षणों के लिए सबसे सामान्य मानक है क्योंकि यह:

आसानी से उपलब्ध और सस्ता है
अत्यधिक घुलनशील है
समाधान में स्थिर है
अच्छी तरह से वर्णित है

हालांकि, यदि आपके नमूनों में एक प्रमुख प्रोटीन होता है जो BSA से काफी भिन्न होता है, तो अधिक सटीक परिणामों के लिए उस प्रोटीन का उपयोग मानक के रूप में करने पर विचार करें।

BCA प्रतिक्रिया कितनी देर तक स्थिर रहती है?

BCA प्रतिक्रिया में विकसित बैंगनी रंग कई घंटों तक कमरे के तापमान पर स्थिर रहता है और उस अवधि के भीतर किसी भी समय मापा जा सकता है। हालाँकि, सर्वोत्तम परिणामों के लिए, यह अनुशंसा की जाती है कि सभी मानकों और नमूनों को रंग विकास के बाद लगभग उसी समय मापा जाए।

क्या मैं पिछले प्रयोग से मानक वक्र का पुन: उपयोग कर सकता हूँ?

हालांकि तकनीकी रूप से मानक वक्र का पुन: उपयोग करना संभव है, यह सटीक मात्रात्मकता के लिए अनुशंसित नहीं है। रसायनों, इंक्यूबेशन स्थितियों, और उपकरणों की कैलिब्रेशन में भिन्नता अवशोषण और प्रोटीन सांद्रता के बीच संबंध को प्रभावित कर सकती है। विश्वसनीय परिणामों के लिए, हर बार परीक्षण करने पर एक ताजा मानक वक्र उत्पन्न करें।

संदर्भ

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वॉकर जेएम। "बिसिनचोनिनिक एसिड (BCA) परीक्षण प्रोटीन मात्रात्मकता के लिए।" इन: वॉकर जेएम, संपादक। प्रोटीन प्रोटोकॉल हैंडबुक। स्प्रिंगर; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
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यदि मेरी गणना की गई नमूना मात्रा बहुत बड़ी है तो क्या करें?

क्या मैं इस कैलकुलेटर का उपयोग अन्य प्रोटीन मात्रात्मकता विधियों के लिए कर सकता हूँ?

मैं रैखिक सीमा के बाहर के नमूनों के साथ कैसे निपटूँ?

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BCA प्रतिक्रिया कितनी देर तक स्थिर रहती है?

क्या मैं पिछले प्रयोग से मानक वक्र का पुन: उपयोग कर सकता हूँ?

संदर्भ

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