BCA absorbances paraugu apjoma kalkulators laboratorijas protokoliem

Aprēķiniet precīzus paraugu apjomus, pamatojoties uz BCA testu absorbances rādījumiem un vēlamo proteīnu masu. Nepieciešams konsekventai proteīnu ielādei rietumu blotēšanā un citās laboratorijas lietojumprogrammās.

BCA absorbcijas paraugu tilpuma kalkulators

Šis rīks aprēķina nepieciešamo paraugu tilpumu, pamatojoties uz BCA absorbcijas rezultātiem un parauga masu. Ievadiet absorbcijas vērtību un parauga masu katram paraugam, lai aprēķinātu atbilstošo parauga tilpumu.

standardCurveTitle

standardCurveTypeLabel

curveTypeStandard

curveTypeEnhanced

curveTypeMicro

curveTypeCustom

Paraugu ievades

Paraugs 1

Parauga nosaukums

BCA absorbcija*

Parauga masa (μg)*

Parauga tilpums

Copy

N/A μL

Aprēķina formula

Parauga tilpums tiek aprēķināts, izmantojot sekojošo formulu:

Parauga tilpums (μL) = Parauga masa (μg) / Olbaltumvielu koncentrācija (μg/μL)

usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

Dokumentācija

BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulators

Ievads

BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulators ir specializēts rīks, kas izstrādāts, lai palīdzētu pētniekiem un laboratoriju tehniķiem precīzi noteikt atbilstošo paraugu tilpumu eksperimentiem, pamatojoties uz BCA (bicinchonīnskābes) analīzes rezultātiem. Šis kalkulators ņem vērā absorbances mērījumus no jūsu BCA analīzes un jūsu vēlamo paraugu masu, lai aprēķinātu precīzu tilpumu, kas nepieciešams konsekventai proteīnu slodzei tādās lietojumprogrammās kā rietumu blotēšana, enzīmu analīzes un citās proteīnu analīzes tehnikās.

BCA analīze ir viena no visplašāk izmantotajām metodēm proteīnu kvantificēšanai biochemijas un molekulārās bioloģijas laboratorijās. Mērot jūsu proteīnu paraugu absorbanci un salīdzinot to ar standarta līkni, jūs varat noteikt proteīna koncentrāciju ar augstu precizitāti. Mūsu kalkulators vienkāršo šo procesu, automātiski pārveidojot absorbances mērījumus par precīziem paraugu tilpumiem, kas nepieciešami jūsu eksperimentiem.

BCA Analīzes un Paraugu Tilpuma Aprēķināšanas Izpratne

Kas ir BCA analīze?

Bicinchonīnskābes (BCA) analīze ir bioķīmiska analīze, lai noteiktu kopējo proteīnu koncentrāciju šķīdumā. Šīs analīzes princips balstās uz Cu²⁺-proteīnu kompleksa veidošanos sārmainos apstākļos, kam seko Cu²⁺ samazināšana uz Cu¹⁺. Samazināšanas daudzums ir proporcionāls klātesošajam proteīnam. BCA veido purpura krāsas kompleksu ar Cu¹⁺ sārmainā vidē, nodrošinot pamatu, lai uzraudzītu vara samazināšanu ar proteīniem.

Purpura krāsas intensitāte palielinās proporcionāli ar proteīna koncentrāciju, ko var izmērīt, izmantojot spektrofotometru apmēram 562 nm. Tad absorbances mērījumi tiek salīdzināti ar standarta līkni, lai noteiktu proteīna koncentrāciju nezināmos paraugos.

Formula paraugu tilpuma aprēķināšanai

Pamatformula paraugu tilpuma aprēķināšanai, pamatojoties uz BCA absorbances rezultātiem, ir:

$\text{Paraugu Tilpums (μL)} = \frac{\text{Paraugu Masa (μg)}}{\text{Proteīna Koncentrācija (μg/μL)}}$

Kur:

Paraugu Tilpums ir nepieciešamais parauga tilpums (mikrolitros, μL)
Paraugu Masa ir vēlamais proteīna daudzums, ko izmantot (mikrogramos, μg)
Proteīna Koncentrācija tiek iegūta no BCA absorbances mērījuma (μg/μL)

Proteīna koncentrācija tiek aprēķināta no absorbances mērījuma, izmantojot standarta līknes vienādojumu:

$\text{Proteīna Koncentrācija (μg/μL)} = \text{Slīpums} \times \text{Absorbance} + \text{Intercepts}$

Tipiskajam BCA analīzes gadījumam slīpums parasti ir aptuveni 2.0, un intercepts bieži ir tuvu nullei, lai gan šīs vērtības var atšķirties atkarībā no jūsu specifiskajiem analīzes apstākļiem un standarta līknes.

Kā izmantot BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulatoru

Mūsu kalkulators vienkāršo paraugu tilpumu noteikšanas procesu, pamatojoties uz BCA analīzes rezultātiem. Izpildiet šos soļus, lai iegūtu precīzus aprēķinus:

Ievadiet Paraugu Informāciju:
- Norādiet parauga nosaukumu (pēc izvēles, bet noderīgi, lai izsekotu vairākiem paraugiem)
- Ievadiet BCA absorbances mērījumu no jūsu spektrofotometra
- Ievadiet vēlamo paraugu masu (proteīna daudzumu, ko vēlaties izmantot μg)
Izvēlieties Standarta Līknes Veidu:
- Standarta (pēc noklusējuma): izmanto tipiskos BCA standarta līknes parametrus
- Uzlabots: uzlabotas jutības protokolam
- Mikro: mikroplaknes protokolam
- Pielāgots: ļauj ievadīt savus slīpuma un intercepta vērtības
Skatiet Rezultātus:
- Kalkulators nekavējoties parādīs nepieciešamo paraugu tilpumu mikrolitros
- Rezultāti tiek attēloti arī kopsavilkuma tabulā vieglai atsaucei
- Vairākiem paraugiem varat pievienot vairāk ierakstu un salīdzināt rezultātus
Kopējiet vai Eksportējiet Rezultātus:
- Izmantojiet kopēšanas pogu, lai pārsūtītu rezultātus uz savu laboratorijas piezīmju grāmatiņu vai citām lietojumprogrammām
- Visi aprēķini var tikt saglabāti turpmākai atsaucei

Solis pa Solim Piemērs

Pastaigāsimies cauri praktiskam piemēram:

Jūs esat veikuši BCA analīzi un ieguvuši absorbances mērījumu 0.75 jūsu proteīna paraugam.
Jūs vēlaties ielādēt 20 μg proteīna savā rietumu blotā.
Izmantojot standarta līkni (slīpums = 2.0, intercepts = 0):
- Proteīna koncentrācija = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
- Nepieciešamais paraugu tilpums = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

Tas nozīmē, ka jums vajadzētu ielādēt 13.33 μL no jūsu parauga, lai iegūtu 20 μg proteīna.

Rezultātu Izpratne

Kalkulators sniedz vairākus svarīgus informācijas gabalus:

Proteīna Koncentrācija: Šī vērtība tiek aprēķināta no jūsu absorbances mērījuma, izmantojot izvēlēto standarta līkni. Tā attēlo proteīna daudzumu uz vienību tilpuma jūsu paraugā (μg/μL).
Paraugu Tilpums: Šis ir jūsu parauga tilpums, kas satur jūsu vēlamo proteīna daudzumu. Šī vērtība ir tā, ko jūs izmantosiet, gatavojot savus eksperimentus.
Brīdinājumi un Ieteikumi: Kalkulators var sniegt brīdinājumus par:
- Ļoti augstām absorbances vērtībām (>3.0), kas var būt ārpus analīzes lineārā diapazona
- Ļoti zemu absorbances vērtību (<0.1), kas var būt tuvu noteikšanas robežai
- Aprēķinātām tilpumiem, kas ir praktiski lieli (>1000 μL) vai mazi (<1 μL)

Lietojumi un Gadījumu Pētījumi

Rietumu Blotu Paraugu Sagatavošana

Viens no visbiežāk sastopamajiem šī kalkulatora lietojumiem ir paraugu sagatavošana rietumu blotēšanai. Konsekventa proteīnu slodze ir izšķiroša, lai nodrošinātu uzticamus rietumu blotu rezultātus, un šis kalkulators nodrošina, ka jūs ielādējat to pašu proteīna daudzumu katram paraugam, pat ja to koncentrācijas atšķiras.

Piemēra darba plūsma:

Veiciet BCA analīzi visiem jūsu proteīnu paraugiem
Izlemiet par konsekventu proteīna daudzumu, ko ielādēt (parasti 10-50 μg)
Izmantojiet kalkulatoru, lai noteiktu nepieciešamos tilpumus katram paraugam
Pievienojiet atbilstošos paraugu buferus un samazināšanas aģentus
Ielādējiet aprēķinātos tilpumus uz jūsu gela

Enzīmu Analīzes

Enzīmu analīzēs bieži ir nepieciešams izmantot noteiktu proteīna daudzumu, lai standartizētu reakcijas apstākļus dažādiem paraugiem vai eksperimentiem.

Piemēra darba plūsma:

Nosakiet proteīna koncentrāciju, izmantojot BCA analīzi
Aprēķiniet tilpumu, kas nepieciešams, lai iegūtu jūsu vēlamo proteīna daudzumu
Pievienojiet šo tilpumu savai reakcijas maisījumam
Turpiniet ar savu enzīmu analīzi

Imunoprecipitācijas Eksperimenti

Imunoprecipitācijas (IP) eksperimentos ir svarīgi sākt ar konsekventu proteīna daudzumu, lai salīdzinātu rezultātus dažādās apstākļos.

Piemēra darba plūsma:

Mēriet proteīna koncentrāciju šūnu vai audu lizātos, izmantojot BCA analīzi
Aprēķiniet tilpumus, kas nepieciešami, lai iegūtu vienādus proteīna daudzumus (parasti 500-1000 μg)
Pielāgojiet visus paraugus uz to pašu tilpumu ar lizēšanas buferi
Turpiniet ar antivielu inkubāciju un nogulsnēšanu

Proteīnu Attīrīšana

Proteīnu attīrīšanas procesā bieži ir nepieciešams izsekot proteīna koncentrāciju un aprēķināt ražību dažādos posmos.

Piemēra darba plūsma:

Vāciet frakcijas attīrīšanas laikā
Veiciet BCA analīzi uz izvēlētajām frakcijām
Aprēķiniet proteīna koncentrāciju un kopējo proteīna daudzumu
Nosakiet tilpumus, kas nepieciešami turpmākām lietojumprogrammām

Papildu Funkcijas un Apsvērumi

Pielāgotas Standarta Līknes

Lai gan kalkulators nodrošina noklusējuma parametrus standarta BCA analīzēm, jūs varat ievadīt arī pielāgotas vērtības, ja esat izveidojis savu standarta līkni. Tas ir īpaši noderīgi, ja:

Strādājat ar nestandarta proteīnu paraugiem
Izmantojat modificētas BCA protokolu
Strādājat klātbūtnē ar vielām, kas var traucēt analīzi

Lai izmantotu pielāgotu standarta līkni:

Izvēlieties "Pielāgots" no standarta līknes opcijām
Ievadiet savas slīpuma un intercepta vērtības
Kalkulators izmantos šīs vērtības visiem turpmākajiem aprēķiniem

Dažādu Paraugu Apstrāde

Kalkulators ļauj pievienot vairākus paraugus un aprēķināt to tilpumus vienlaicīgi. Tas ir īpaši noderīgi, gatavojot paraugus eksperimentiem, kuros nepieciešama konsekventa proteīnu slodze visām nosacījumiem.

Partijas apstrādes priekšrocības:

Ietaupiet laiku, aprēķinot visus tilpumus vienlaicīgi
Nodrošiniet konsekvenci visiem jūsu paraugiem
Vieglāk salīdzināt proteīnu koncentrācijas starp paraugiem
Identificējiet novirzes vai potenciālus mērījumu kļūdas

Saskarsme ar Malu Gadījumiem

Ļoti Augstas Absorbances Vērtības

Ja jūsu absorbances mērījums pārsniedz 2.0, tas var būt ārpus BCA analīzes lineārā diapazona. Šādos gadījumos:

Atšķaidiet savu paraugu un atkārtojiet BCA analīzi
Alternatīvi, izmantojiet kalkulatora brīdinājumu sistēmu, kas iezīmēs potenciāli problemātiskos mērījumus

Ļoti Zemas Absorbances Vērtības

Absorbances mērījumiem, kas ir zem 0.1, jūs varat būt tuvu analīzes noteikšanas robežai, kas var ietekmēt precizitāti. Apsveriet:

Ja iespējams, koncentrējiet savu paraugu
Izmantojiet jutīgāku proteīnu kvantificēšanas metodi
Pielāgojiet savu eksperimentālo dizainu, lai ņemtu vērā zemākus proteīna daudzumus

Praktiski Lieli Aprēķinātie Tilpumi

Ja kalkulators norāda uz tilpumu, kas ir pārāk liels jūsu lietojumam:

Apsveriet proteīna parauga koncentrēšanu
Ja jūsu eksperimenta apstākļi to atļauj, samaziniet vēlamo proteīna daudzumu
Izmantojiet maksimālo praktisko tilpumu un norādiet faktisko izmantoto proteīna daudzumu

Proteīnu Kvantificēšanas Vēsture un BCA Analīze

Precīza proteīnu kvantificēšana ir bijusi pamatprasība biochemijā un molekulārajā bioloģijā kopš šo jomu rašanās. Agrīnās metodes balstījās uz slāpekļa satura noteikšanu, kas bija laikietilpīga un prasīja specializētu aprīkojumu.

Proteīnu Kvantificēšanas Metožu Evolūcija

Kjeldahl Metode (1883): Viena no pirmajām proteīnu kvantificēšanas metodēm, kas balstās uz slāpekļa satura mērīšanu.
Biuret Tests (Agrie 1900 gadi): Šī metode balstās uz reakciju starp peptīdu saitēm un vara joniem sārmainā šķīdumā, radot violetu krāsu.
Lowry Analīze (1951): Izstrādājusi Olivija Lowry, šī metode apvienoja Biuret reakciju ar Folin-Ciocalteu reaģentu, palielinot jutību.
Bradford Analīze (1976): Mariona Bradford izstrādāja šo metodi, izmantojot Coomassie Brilliant Blue G-250 krāsvielu, kas saistās ar proteīniem un pārvieto absorbcijas maksimumu.
BCA Analīze (1985): Izstrādāta Pola Smita un kolēģu pie Pierce Chemical Company, šī metode apvienoja biuret reakciju ar BCA noteikšanu, piedāvājot uzlabotu jutību un saderību ar mazgāšanas līdzekļiem.

BCA Analīzes Izstrāde

BCA analīze pirmo reizi tika aprakstīta 1985. gada rakstā, ko uzrakstīja Smits un citi, ar nosaukumu "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Tā tika izstrādāta, lai risinātu esošo metožu ierobežojumus, jo īpaši traucējumus no dažādām ķīmiskām vielām, kas parasti tiek izmantotas proteīnu ekstrakcijā un attīrīšanā.

Galvenā inovācija bija bicinchonīnskābes izmantošana, lai noteiktu Cu¹⁺ jonus, kas radīti, proteīnu izraisītās Cu²⁺ samazināšanas rezultātā, veidojot purpura krāsas kompleksu, ko var izmērīt spektrofotometriski. Tas nodrošināja vairākas priekšrocības:

Augstāka jutība nekā Biuret metodei
Mazāka pakļautība traucējumiem no neproteīnu vielām salīdzinājumā ar Lowry metodi
Labāka saderība ar mazgāšanas līdzekļiem nekā Bradford analīzei
Vienkāršāka protokola ar mazāku reaģentu un soļu skaitu

Kopš tās ieviešanas BCA analīze ir kļuvusi par vienu no visplašāk izmantotajām proteīnu kvantificēšanas metodēm biochemijas un molekulārās bioloģijas laboratorijās visā pasaulē.

Koda Piemēri Paraugu Tilpuma Aprēķināšanai

Excel Formula

1=IF(B2<=0,"Kļūda: nederīga absorbance",IF(C2<=0,"Kļūda: nederīga paraugu masa",C2/(2*B2)))
2
3' Kur:
4' B2 satur absorbances mērījumu
5' C2 satur vēlamo paraugu masu μg
6' Formula atgriež nepieciešamo paraugu tilpumu μL
7

Python Izpilde

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """Aprēķina proteīna koncentrāciju no absorbances, izmantojot standarta līkni."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("Absorbance nedrīkst būt negatīva")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """Aprēķina nepieciešamo paraugu tilpumu, pamatojoties uz absorbanci un vēlamo masu."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("Paraugu masai jābūt pozitīvai")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("Aprēķinātai proteīna koncentrācijai jābūt pozitīvai")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# Piemēra lietošana
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"Absorbance {absorbance} un vēlamā proteīna masa {sample_mass} μg:")
31    print(f"Proteīna koncentrācija: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"Nepieciešamais paraugu tilpums: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"Kļūda: {e}")
35

R Kods Analīzei

1# Funkcija, lai aprēķinātu proteīna koncentrāciju no absorbances
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("Absorbance nedrīkst būt negatīva")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Funkcija, lai aprēķinātu paraugu tilpumu
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("Paraugu masai jābūt pozitīvai")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("Aprēķinātai proteīna koncentrācijai jābūt pozitīvai")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Piemēra lietošana
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("Absorbance %.2f un vēlamā proteīna masa %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("Proteīna koncentrācija: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("Nepieciešamais paraugu tilpums: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("Kļūda: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript Izpilde

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("Absorbance nedrīkst būt negatīva");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("Paraugu masai jābūt pozitīvai");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("Aprēķinātai proteīna koncentrācijai jābūt pozitīvai");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Piemēra lietošana
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`Absorbance ${absorbance} un vēlamā proteīna masa ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`Proteīna koncentrācija: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`Nepieciešamais paraugu tilpums: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`Kļūda: ${error.message}`);
37}
38

Standarta Līknes Vizualizācija

Attiecība starp absorbanci un proteīna koncentrāciju parasti ir lineāra noteiktā diapazonā. Zemāk ir vizualizācija standarta BCA līknei:

<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>

0.0

<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

Absorbance (562 nm) Proteīna Koncentrācija (μg/μL)

Standarta Līkne Standarta Paraugi

BCA Standarta Līkne

Salīdzinājums ar Citām Proteīnu Kvantificēšanas Metodēm

Atšķirīgas proteīnu kvantificēšanas metodes ir dažādas priekšrocības un ierobežojumi. Šeit ir tas, kā BCA analīze salīdzinās ar citām kopējām metodēm:

Metode	Jutības Diapazons	Priekšrocības	Ierobežojumi	Labāk piemērots
BCA Analīze	5-2000 μg/mL	• Saderīga ar mazgāšanas līdzekļiem • Mazāka proteīnu variācija • Stabils krāsu attīstījums	• Traucē reducējošie aģenti • Ietekmē daži chelating līdzekļi	• Vispārējai proteīnu kvantificēšanai • Paraugiem, kas satur mazgāšanas līdzekļus
Bradford Analīze	1-1500 μg/mL	• Ātra (2-5 min) • Maz traucējošu vielu	• Augsta proteīnu variācija • Nesaderīga ar mazgāšanas līdzekļiem	• Ātri mērījumi • Bez mazgāšanas līdzekļiem
Lowry Metode	1-1500 μg/mL	• Labi izveidota • Laba jutība	• Daudzas traucējošas vielas • Daudzsoļu process	• Vēsturiska konsekvence • Tīri proteīnu paraugi
UV Absorbance (280 nm)	20-3000 μg/mL	• Nedegradējoša • Ļoti ātra • Nav nepieciešamas reaģenti	• Ietekmē nukleīnskābes • Prasa tīrus paraugus	• Tīri proteīnu šķīdumi • Ātri pārbaudes attīrīšanas laikā
Fluorometriskā	0.1-500 μg/mL	• Augstākā jutība • Plašs dinamiskais diapazons	• Dārgas reaģenti • Prasa fluorometru	• Ļoti atšķaidīti paraugi • Ierobežots paraugu tilpums

Biežāk Uzdotie Jautājumi

Kam tiek izmantota BCA analīze?

BCA (bicinchonīnskābes) analīze galvenokārt tiek izmantota, lai kvantificētu kopējo proteīnu koncentrāciju paraugā. Tā ir plaši izmantota biochemijā, šūnu bioloģijā un molekulārajā bioloģijā tādās lietojumprogrammās kā rietumu blotēšana, enzīmu analīzes, imunoprecipitācija un proteīnu attīrīšana.

Cik precīza ir BCA analīze?

BCA analīze parasti ir precīza 5-10% robežās, ja tā tiek veikta pareizi. Tās precizitāte ir atkarīga no vairākiem faktoriem, tostarp standarta līknes kvalitātes, traucējošu vielu neesamības un vai nezināmā proteīna sastāvs ir līdzīgs izmantotā standarta proteīna sastāvam.

Kas var traucēt BCA analīzes rezultātus?

Daudzas vielas var traucēt BCA analīzes rezultātus, tostarp:

Reducējošie aģenti (DTT, β-merkaptu etanols, glutathions)
Chelating aģenti (EDTA, EGTA)
Augstas koncentrācijas vienkāršie cukuri
Lipīdi
Daži mazgāšanas līdzekļi augstās koncentrācijās
Ammonija savienojumi

Kāda ir atšķirība starp BCA un Bradford analīzēm?

Galvenās atšķirības ir:

BCA analīze ir vairāk saderīga ar mazgāšanas līdzekļiem un virsmaktīvām vielām
Bradford analīze ir ātrāka (2-5 minūtes pret 30+ minūtēm BCA)
BCA ir mazāk proteīnu variācijas
Bradford ir jutīgāka pret bāziskām aminoskābēm
BCA ietekmē reducējošie aģenti, bet Bradford ne

Kāpēc mans aprēķinātais paraugu tilpums ir pārāk liels?

Ja jūsu kalkulators rāda ļoti lielu paraugu tilpumu, tas parasti norāda uz zemu proteīna koncentrāciju jūsu paraugā. Tas var būt saistīts ar:

Faktisko zemo proteīna saturu jūsu sākotnējā paraugā
Proteīna zudumu sagatavošanas laikā
Kļūdām BCA analīzes procedūrā
Neprecīzu absorbances mērījumu

Apsveriet savu paraugu koncentrēšanu vai pielāgojiet eksperimentālo dizainu, lai ņemtu vērā zemākus proteīna koncentrācijas līmeņus.

Vai es varu izmantot šo kalkulatoru citām proteīnu kvantificēšanas metodēm?

Šis kalkulators ir īpaši izstrādāts BCA analīzes rezultātiem. Lai gan pamatprincips (koncentrācijas pārvēršana tilpumā) attiecas uz citām metodēm, attiecība starp absorbanci un proteīna koncentrāciju atšķiras starp dažādām analīzēm. Citām metodēm, piemēram, Bradford vai Lowry, jums būtu jāizmanto dažādas standarta līknes parametri.

Kā rīkoties ar paraugiem, kuru absorbance ir ārpus lineārā diapazona?

Ja absorbances mērījumi ir ārpus lineārā diapazona (parasti >2.0):

Atšķaidiet savu paraugu un atkārtojiet BCA analīzi
Izmantojiet citu proteīnu kvantificēšanas metodi
Pielāgojiet standarta līkni, lai iekļautu augstāku koncentrāciju standartus

Kādu proteīnu man izmantot kā standartu?

Govs serumā albumīns (BSA) ir visbiežāk izmantotais standarts BCA analīzēm, jo tas ir:

Vieglāk pieejams un lēts
Ļoti šķīstošs
Stabils šķīdumā
Labi raksturots

Tomēr, ja jūsu paraugos ir dominējošs proteīns, kas būtiski atšķiras no BSA, apsveriet iespēju izmantot šo proteīnu kā savu standartu, lai iegūtu precīzākus rezultātus.

Cik ilgi BCA reakcija ir stabila?

Purpura krāsa, kas attīstās BCA reakcijā, ir stabila vairākas stundas istabas temperatūrā un to var izmērīt jebkurā laikā šajā periodā. Tomēr labākajiem rezultātiem ieteicams izmērīt visus standartus un paraugus apmēram tajā pašā laikā pēc krāsu attīstības.

Vai es varu atkārtoti izmantot standarta līkni no iepriekšējā eksperimenta?

Lai gan tehniski ir iespējams atkārtoti izmantot standarta līkni, tas nav ieteicams precīzai kvantificēšanai. Atšķirības reaģentos, inkubācijas apstākļos un instrumenta kalibrācijā var ietekmēt attiecību starp absorbanci un proteīna koncentrāciju. Lai iegūtu uzticamus rezultātus, katru reizi, kad veicat analīzi, izveidojiet jaunu standarta līkni.

Atsauces

Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Norādījumi. Pieejams: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

Izmēģiniet mūsu BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulatoru Šodien!

Tagad, kad jūs saprotat principus, kas stāv aiz BCA proteīnu kvantificēšanas un paraugu tilpuma aprēķināšanas, izmēģiniet mūsu kalkulatoru, lai vienkāršotu savu laboratorijas darba plūsmu. Vienkārši ievadiet absorbances mērījumus un vēlamo paraugu masu, lai iegūtu tūlītējus, precīzus paraugu tilpuma aprēķinus.

Neatkarīgi no tā, vai gatavojat paraugus rietumu blotēšanai, enzīmu analīzēm vai jebkurai citai proteīnu bāzētai eksperimentēšanai, mūsu kalkulators palīdzēs nodrošināt konsekventus un uzticamus rezultātus. Ietaupiet laiku, samaziniet kļūdas un uzlabojiet savu eksperimentu reproducējamību ar BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulatoru.

🔗

Saistītie Rīki

Atklājiet vairāk rīku, kas varētu būt noderīgi jūsu darbplūsmai

BCA absorbances paraugu apjoma kalkulators laboratorijas protokoliem

BCA absorbcijas paraugu tilpuma kalkulators

standardCurveTitle

Paraugu ievades

Paraugs 1

Aprēķina formula

Dokumentācija

BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulators

Ievads

BCA Analīzes un Paraugu Tilpuma Aprēķināšanas Izpratne

Kas ir BCA analīze?

Formula paraugu tilpuma aprēķināšanai

Kā izmantot BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulatoru

Solis pa Solim Piemērs

Rezultātu Izpratne

Lietojumi un Gadījumu Pētījumi

Rietumu Blotu Paraugu Sagatavošana

Enzīmu Analīzes

Imunoprecipitācijas Eksperimenti

Proteīnu Attīrīšana

Papildu Funkcijas un Apsvērumi

Pielāgotas Standarta Līknes

Dažādu Paraugu Apstrāde

Saskarsme ar Malu Gadījumiem

Ļoti Augstas Absorbances Vērtības

Ļoti Zemas Absorbances Vērtības

Praktiski Lieli Aprēķinātie Tilpumi

Proteīnu Kvantificēšanas Vēsture un BCA Analīze

Proteīnu Kvantificēšanas Metožu Evolūcija

BCA Analīzes Izstrāde

Koda Piemēri Paraugu Tilpuma Aprēķināšanai

Excel Formula

Python Izpilde

R Kods Analīzei

JavaScript Izpilde

Standarta Līknes Vizualizācija

Salīdzinājums ar Citām Proteīnu Kvantificēšanas Metodēm

Biežāk Uzdotie Jautājumi

Kam tiek izmantota BCA analīze?

Cik precīza ir BCA analīze?

Kas var traucēt BCA analīzes rezultātus?

Kāda ir atšķirība starp BCA un Bradford analīzēm?

Kāpēc mans aprēķinātais paraugu tilpums ir pārāk liels?

Vai es varu izmantot šo kalkulatoru citām proteīnu kvantificēšanas metodēm?

Kā rīkoties ar paraugiem, kuru absorbance ir ārpus lineārā diapazona?

Kādu proteīnu man izmantot kā standartu?

Cik ilgi BCA reakcija ir stabila?

Vai es varu atkārtoti izmantot standarta līkni no iepriekšējā eksperimenta?

Atsauces

Izmēģiniet mūsu BCA Absorbance Paraugu Tilpuma Kalkulatoru Šodien!

Saistītie Rīki

Cilindriskā, sfēriskā un taisnstūrveida tvertņu tilpuma kalkulators

Tilpuma uz laukuma kalkulators šķidras pārklājuma aprēķināšanai

Cauruma tilpuma kalkulators: cilindriskās un taisnstūrveida izrakumi

Caurumu tilpuma kalkulators: Mēra cilindriskās izrakumu tilpumus

Kubuļa šūnas tilpuma kalkulators: atrodiet tilpumu no malas garuma

Vienkāršs atšķaidīšanas faktora kalkulators laboratorijas šķīdumiem

Smilšu tilpuma kalkulators: Novērtējiet materiālus jebkuram projektam

Divu fotonu absorbcijas koeficienta kalkulators

Molaritātes kalkulators: šķīduma koncentrācijas rīks