உள்ளடக்கத்திற்கு செல்
🛠️
Whiz Tools

பிசிஏ மாதிரி தொகுதி கணக்கிடி | புரதம் அளவிடும் கருவி

பிசிஏ அப்சார்பன்ஸ் வாசிப்புகளிலிருந்து மாதிரி தொகுதிகளை உடனடியாக கணக்கிடுங்கள். மேற்பரப்பு பிளாட்டுகள், என்சைம் பரிசோதனைகள் மற்றும் ஐபி சோதனைகளுக்கான துல்லிய புரத ஏற்றல் தொகுதிகளைப் பெறுங்கள்.

பிசிஏ அவசோர்பன்ஸ் மாதிரி கழிவு கணக்கிடி

பிசிஏ அவசோர்பன்ஸ் வாசிப்புகள் மற்றும் இலக்கு புரத நிறையிலிருந்து துல்லிய மாதிரி கழிவுகளைக் கணக்கிடவும். நிலையான ஏற்றுதலுக்கு அவசோர்பன்ஸ் மதிப்புகள் மற்றும் விரும்பிய புரத அளவுகளை உள்ளிடவும்.

நிலை வளைவு அமைப்பு

நிலை வளைவு வகை
BCA தரம் வளைவு
BCA தரம் வளைவு காட்சிப்படுத்தல்0.0000.5001.0001.5002.0002.500புரத செறிவு (μg/μL)00.511.522.5உறிஞ்சுதல் (A562)

மாதிரி உள்ளீடுகள்

மாதிரி 1

மாதிரி கழிவு
—μL

முடிவுகள் சுருக்கம்

மாதிரி பெயர்அவசோர்பன்ஸ்மாதிரி நிறை (μg)புரத செறிவு (μg/μL)மாதிரி கழிவு (μL)
மாதிரி 1————

கணக்கீட்டு சூத்திரம்

மாதிரி கழிவு பின்வரும் சூத்திரத்தைப் பயன்படுத்தி கணக்கிடப்படுகிறது:

மாதிரி கழிவு (μL) = மாதிரி நிறை (μg) / புரத செறிவு (μg/μL)
பயன்பாட்டு குறிப்புகள்

• துல்லிய முடிவுகளுக்கு 0.1-2.0 இடையே அவசோர்பன்ஸைக் கட்டுப்படுத்தவும்

• சாதாரண அளவுகள்: வெஸ்டர்ன் பிளாட்டுக்கு 20-50 μg, இம்யூனோப்ரெசிபிடேஷனுக்கு 500-1000 μg

• 1000 μL மேல் கழிவுகள் குறைந்த புரத செறிவைக் குறிக்கின்றன - மாதிரியை செறிவாக்கக் கருதுங்கள்

• பெரும்பாலான பயன்பாடுகளுக்கு நிலை பிசிஏ பயன்படுகிறது (20-2000 μg/mL). மெலிதான மாதிரிகளுக்கு மேம்பட்ட பிசிஏயைப் பயன்படுத்தவும் (5-250 μg/mL)

ஏற்றுகிறது கணக்கிடுதல்...
📚

ஆவணம்

புரத அளவிடுதல் சிறப்பு BCA மாதிரி கொள்ளளவு கணக்கீட்டி

BCA பரிசோதனையை நிறைவு செய்த பிறகு மேற்பரப்பு பிளாட் செய்ய எவ்வளவு மாதிரி ஏற்றுவது என்பதைக் கணக்கிட வேண்டும் போது, கொள்ளுதல் சாதாரணமாக தெரிந்தாலும் சிரமமான கணக்கீடாக இருக்கும். 562 nm அளவில் ஒளிவிலகல் அளவைப் பெற்று, நிலை வளைவுடன் ஒப்பிட்டு, புரத செறிவைக் கணக்கிட்டு, பிறகு நீங்கள் விரும்பும் புரத அளவுக்கு தேவையான கொள்ளளவைக் கணக்கிடுங்கள்.

இந்தக் கணக்கீட்டி அந்த கணக்கை உடனடியாக செய்யும். BCA ஒளிவிலகல் வாசிப்பு மற்றும் இலக்கு புரத அளவை உள்ளிடுங்கள் - நீங்கள் நுண்ணளவுகளில் சரியான மாதிரி கொள்ளளவைப் பெறுவீர்கள். BCA பரிசோதனைகள் சிறப்பாக நம்பகமாக இருப்பது அவற்றின் சவர்ஜெண்ட் மற்றும் மேற்பரப்பு சுரப்பிகளுக்கு தாங்கும் தன்மை, இது பிராட்போர்ட் அல்லது லோரி முறைகளை குழப்பும் கூறுகளை தடுக்கும். SDS அல்லது ட்ரைட்டன் X-100 கொண்ட செல் லைசேட்டுகளுடன் வேலை செய்யும் போது, BCA மற்ற முறைகள் தோல்வியடையும் சமயத்தில் துல்லியமாக இருக்கும்.

பிசிஏ புரத அளவிடல் எவ்வாறு வேலை செய்கிறது

பிசிஏ பரிசோதனை கொள்கை

பிசிஏ (பைசின்கோனிக் அமிலம்) பரிசோதனைகள் இரண்டு கட்ட தாமிர வினைமூலம் வேலை செய்கின்றன. புரதங்கள் காரத்தன்மையுள்ள நிலைகளில் Cu²⁺ ஐ Cu¹⁺ வாக குறைக்கின்றன - குறைப்பின் அளவு புரத செறிவுடன் நேரடியாக தொடர்புபடுகிறது. இங்கு பைசின்கோனிக் அமிலம் வருகிறது: இது Cu¹⁺ உடன் இணைந்து தீவிர ஊதா நிற சேர்மத்தை உருவாக்குகிறது, இது 562 nm அலை நீளத்தில் ஒளியை உட்கவர்கிறது.

நீங்கள் இந்த ஊதா நிறத்தை ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரால் அளக்கலாம். ஊதா நிறம் கடுமையாக இருக்கும்போது, நீங்கள் அதிக புரதம் கொண்டிருக்கிறீர்கள் என்று அர்த்தம். உங்கள் மாதிரியின் ஒளிக்கவர்தன்மையை ஒரு standard வளைகோட்டுடன் (பொதுவாக BSA தரங்களைப் பயன்படுத்தி) ஒப்பிட்டு, உங்கள் புரத செறிவைப் பெறலாம். பிசிஏ இன் அழகு என்னவென்றால், இது சாதாரண பாதரச பொருட்கள், குறைக்கும் சர்க்கரைகள் அல்லது மற்ற பொதுவான பஃபர் கூறுகள் இருந்தாலும் நம்பகமாக வேலை செய்கிறது - இவை பிராட்ஃபோர்ட் அல்லது லோரி பரிசோதனைகளை குழப்பும் பொருட்கள்.

மாதிரி கழிவு அளவிடுவதற்கான சூத்திரம்

பிசிஏ ஒளிக்கவர்தன்மை முடிவுகளிலிருந்து மாதிரி கழிவு அளவைக் கணக்கிடுவதற்கான அடிப்படை சூத்திரம்:

மாதிரி கழிவு (μL)=மாதிரி நிறை (μg)புரத செறிவு (μg/μL)\text{மாதிரி கழிவு (μL)} = \frac{\text{மாதிரி நிறை (μg)}}{\text{புரத செறிவு (μg/μL)}}

எங்கு:

  • மாதிரி கழிவு தேவைப்படும் மாதிரி கழிவு (மைக்ரோலிட்டர்கள், μL)
  • மாதிரி நிறை பயன்படுத்த வேண்டிய புரத அளவு (மைக்ரோகிராம்கள், μg)
  • புரத செறிவு பிசிஏ ஒளிக்கவர்தன்மை வாசிப்பிலிருந்து பெறப்பட்டது (μg/μL)

புரத செறிவு ஒளிக்கவர்தன்மை வாசிப்பிலிருந்து கணக்கிடப்படுகிறது standard வளைகோட்டு சமன்பாட்டைப் பயன்படுத்தி:

புரத செறிவு (μg/μL)=சாய்வு×ஒளிக்கவர்தன்மை+வெட்டுப்புள்ளி\text{புரத செறிவு (μg/μL)} = \text{சாய்வு} \times \text{ஒளிக்கவர்தன்மை} + \text{வெட்டுப்புள்ளி}

ஒரு standard பிசிஏ பரிசோதனைக்கு, பொதுவான சாய்வு சுமார் 2.0 மற்றும் வெட்டுப்புள்ளி பெரும்பாலும் சுழியத்திற்கு அருகில் இருக்கும், இருப்பினும் இந்த மதிப்புகள் உங்கள் குறிப்பிட்ட பரிசோதனை நிலைமைகள் மற்றும் standard வளைகோட்டைப் பொறுத்து மாறலாம். Methods in Enzymology நெறிமுறைகளின்படி, குறைந்தது 5-6 புள்ளிகளைக் கொண்ட standard வளைகோடு உங்கள் எதிர்பார்க்கப்பட்ட செறிவு வரம்பைப் பூர்த்தி செய்வது வெவ்வேறு வகையான புரதங்கள் மீது துல்லிய அளவிடலை உறுதி செய்கிறது.

பிசிஏ மாதிரி கழிவு கணக்கெடுப்பி பயன்படுத்துதல்

கணக்கெடுப்பி ஒவ்வொரு மாதிரிக்கும் கைமுறையாக கணக்கிடப்பட வேண்டிய கணக்கீட்டை எளிமைப்படுத்துகிறது:

  1. உங்கள் அளவீடுகளை உள்ளிடுங்கள்:

    • உங்கள் மாதிரிக்கு லேபல் இடுங்கள் (ஒரே நேரத்தில் பல மாதிரிகளின் கழிவுகளை கணக்கிடும்போது உதவியாக இருக்கும்)
    • உங்கள் ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரில் 562 nm இல் உள்ள அவசோர்ப்ஷன் படிப்பை உள்ளிடுங்கள்
    • நீங்கள் எத்தனை மைக்ரோகிராம் புரதம் வேண்டும் என்பதை குறிப்பிடுங்கள் (பொதுவாக வெஸ்டர்ன் பிளாட்டுகளுக்கு 10-50 μg, இம்யூனோப்ரெசிபிடேஷனுக்கு 500-1000 μg)

  2. உங்கள் தரநிலை வளைவின் வகையைத் தேர்ந்தெடுங்கள்:

    • தரநிலை பிசிஏ: மிகவும் பொதுவான நடைமுறை, 20-2000 μg/mL வரை வேலை செய்கிறது
    • மேம்பட்ட பிசிஏ: நீர்த்த மாதிரிகளுக்கு அதிக உணர்திறன் (5-250 μg/mL)
    • மைக்ரோ பிசிஏ: மாதிரி கழிவு வரம்பு குறைவாக இருக்கும்போது மைக்ரோப்ளேட் வடிவம்
    • தனிப்பயன்: நீங்கள் வேறு தரநிலை வளைவை உருவாக்கியிருந்தால் உங்கள் சரிவு மற்றும் வெட்டுப்புள்ளியை உள்ளிடுங்கள்

  3. உங்கள் மாதிரி கழிவை பெறுங்கள்:

    • கணக்கெடுப்பி உடனடியாக நீங்கள் பைப்பேட் செய்ய வேண்டிய மைக்ரோலிட்டர்களைக் காட்டுகிறது
    • ஒரே நேரத்தில் பல மாதிரிகளைச் சேர்க்கலாம்
    • முடிவுகளை நேரடியாக உங்கள் ஆய்வகக் குறிப்பேட்டிற்கு அல்லது LIMS-க்கு நகலெடுக்கலாம்

நடைமுறை உதாரணம்

ஆறு செல் வரிசைகளில் புரத வெளிப்பாட்டை ஒப்பிடும் வெஸ்டர்ன் பிளாட் தயாரிக்கும்போது. நீங்கள் உங்கள் பிசிஏ பரிசோதனையை நடத்தி, ஒரு மாதிரி 0.75 அவசோர்ப்ஷன் படிப்பைக் கொடுக்கிறது. நீங்கள் ஒவ்வொரு வரிசைக்கும் 20 μg புரதம் வேண்டும்.

தரநிலை வளைவைப் பயன்படுத்தி (சரிவு = 2.0, வெட்டுப்புள்ளி = 0):

  • புரத செறிவு = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
  • தேவைப்படும் மாதிரி கழிவு = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

இந்த மாதிரியில் 13.33 μL பைப்பேட் செய்து, உங்கள் லோடிங் பஃபரைச் சேர்த்தால் சரியாக 20 μg புரதம் கிடைக்கும். அதேசமயம், 1.2 அவசோர்ப்ஷன் படிப்பைக் கொண்ட மாதிரி சரிவு 8.33 μL மட்டுமே தேவைப்படும் அதே 20 μg-க்கு. கணக்கெடுப்பி ஒவ்வொரு மாதிரிக்கும் இந்த கணக்கீட்டை மேற்கொள்ள வேண்டிய தேவையை நீக்குகிறது - நீங்கள் மட்டும் உங்கள் படிப்புகளை உள்ளிட்டு உடனடியாக அனைத்து கழிவுகளையும் பெறலாம்.

முடிவுகளைப் புரிந்துகொள்ளல்

கணக்கிடி பல்வேறு முக்கிய தகவல்களை வழங்குகிறது:

  1. புரத செறிவு: இது தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட நிலை வளைகோட்டைப் பயன்படுத்தி உங்கள் அவசோர்ப்பு வாசிப்பிலிருந்து கணக்கிடப்படுகிறது. இது உங்கள் மாதிரியில் ஒரு அலகு கனத்தில் உள்ள புரத அளவைக் குறிக்கிறது (μg/μL).

  2. மாதிரி கனம்: இது உங்கள் விரும்பிய புரத அளவைக் கொண்ட உங்கள் மாதிரியின் கனம் ஆகும். இந்த மதிப்பைப் பரிசோதனைகளைத் தயாரிக்கும்போது நீங்கள் பயன்படுத்துவீர்கள்.

  3. எச்சரிக்கைகள் மற்றும் பரிந்துரைகள்: கணக்கிடி பின்வரும் விஷயங்களுக்கு எச்சரிக்கைகளை வழங்கலாம்:

    • மிகவும் அதிக அவசோர்ப்பு வாசிப்புகள் (>3.0) இருக்கலாம் அல்லது பரிசோதனையின் நேர்கோட்டு வரம்பிற்கு வெளியே இருக்கலாம்
    • மிகவும் குறைந்த அவசோர்ப்பு வாசிப்புகள் (<0.1) கண்டறிதல் வரம்பிற்கு அருகில் இருக்கலாம்
    • கணக்கிடப்பட்ட கனங்கள் மிகவும் பெரிய (>1000 μL) அல்லது சிறிய (<1 μL) இருக்கலாம்

ஆய்வகத்தில் நடைமுறை பயன்பாடுகள்

மேற்கத்திய பிளாட் மாதிரி தயாரிப்பு

மாறுபட்ட புரதச் சுமை ஏற்றல் மேற்கத்திய பிளாட்கள் நம்பகமான முடிவுகளைக் கொடுக்காமல் தவிர்க்கும் மிகப் பொதுவான காரணங்களில் ஒன்றாகும். ஒரு வரிசையில் வலுவான பட்டைகளும் மற்றொரு வரிசையில் மங்கிய பட்டைகளும் தெரியலாம் - இது வெளிப்பாட்டு மட்டங்கள் வேறுபடுவதால் அல்ல, மாறாக நீங்கள் வெவ்வேறு அளவுகளில் மொத்த புரதத்தை ஏற்றியிருப்பதால்.

தீர்வு தெளிவாகவும் துல்லிய அளவீட்டுக் கணக்கீடுகளைக் கொண்டும் இருக்கிறது. அனைத்து மாதிரிகளுக்கும் BCA அவசோர்ப்பு readings-ஐ பெற்ற பிறகு, ஒவ்வொரு வரிசைக்கும் ஏற்ற புரத அளவைத் தீர்மானிக்கவும் (நான் பொதுவாக மிகுந்த புரதங்களுக்கு 20-30 μg, குறைந்த அளவிலுள்ள இலக்குகளுக்கு 50 μg வரை பயன்படுத்துகிறேன்). ஒவ்வொரு மாதிரிக்கும் தேவைப்படும் அளவைக் கணக்கிட்டு, லைசிஸ் பஃபரைக் கொண்டு அனைத்து மாதிரிகளையும் ஒரே இறுதி அளவுக்கு நிகரப்படுத்தி, பின்பு லாமெல்லி பஃபரைச் சேர்க்கவும்.

பொதுவான தவறு: சுமை பஃபரைச் சேர்த்தபின் மாதிரி அளவு மாறுவதை மறப்பது. நீங்கள் மொத்தம் 15 μL ஏற்ற இருந்தால் மற்றும் சுமை பஃபர் 4x ஆக இருந்தால், 3.75 μL பஃபரும் 11.25 μL மாதிரி நீர்த்தல் தேவைப்படும். உங்கள் நீர்த்தல்களைத் தக்கவாறு திட்டமிடவும்.

என்சைம் பரிசோதனைகள்

என்சைம் இயக்கவியல் அளவீடுகள் மறுபடிப்புகள் மற்றும் நிலைமைகளில் நிலையான புரத அளவைக் கோருகின்றன. வெவ்வேறு மெல் சிகிச்சைகள் அல்லது திசு மாதிரிகளுக்கிடையில் என்சைம் நடவடிக்கைகளைப் ஒப்பிடும்போது, நீங்கள் மொத்த புரதத்தின் ஒரே அளவில் தொடங்குகிறீர்கள் என்பதை அறிய வேண்டும் - அல்லாவிட்டால் நடவடிக்கை வேறுபாடுகள் வெறுமனே என்சைம் செறிவு வேறுபாடுகளைப் பிரதிபலிக்கலாம்.

என்சைம் பரிசோதனைகளுக்கு, நான் பொதுவாக மேற்கத்திய பிளாட்டுகளைவிட குறைந்த புரத அளவுகளுடன் வேலை செய்கிறேன் - பெரும்பாலும் மிகுந்த என்சைமங்களுக்கு ஒவ்வொரு பிரதிக்கும் 5-10 μg. முக்கியமானது - அனைத்து நிலைமைகள் மற்றும் நேர அளவுகளில் இந்த நிலைத்தன்மையைப் பராமரிப்பது.

இம்யூனோப்ரெசிப்பிடேஷன் சோதனைகள்

IP சோதனைகள் மிகுந்த அளவு புரதத்தைப் பயன்படுத்தலாம் - பொதுவாக ஒவ்வொரு பிரதிக்கும் 500-1000 μg மொத்த லைசேட்டு. நீங்கள் குறைந்த அளவிலுள்ள புரதத்தை இறக்கும்போது அல்லது பல ஆன்டிபாடிகளைச் சோதிக்கும்போது, ஒரே சோதனையில் பன்னிரண்டுக்கும் மேற்பட்ட IP-கள் நடத்தலாம்.

மாறுபட்ட புரத அளவுகளுடன் தொடங்குவது உங்கள் முழு சோதனையையும் பாதிக்கும். ஒரு மாதிரியில் 800 μg உள்ளீடு இருந்தால் மற்றொன்றில் 1200 μg இருந்தால், நீங்கள் சகப்படுத்தப்பட்ட புரதங்களின் அளவைப் பொருளுள்ளதாக ஒப்பிட முடியாது. ஒவ்வொரு லைசேட்டிற்கும் தேவைப்படும் அளவைக் கணக்கிட்டு, லைசிஸ் பஃபரைக் கொண்டு ஒரே மொத்த அளவுக்கு நிகரப்படுத்தி, பின்பு ஆன்டிபாடி ஊடுருவலுக்குச் செல்லவும். இது உங்கள் மேற்கத்திய பிளாட்டில் நீங்கள் காணும் வேறுபாடுகள் உண்மையான உயிரியல் வேறுபாடுகளைப் பிரதிபலிப்பதை உறுதிப்படுத்தும்.

புரத சுத்திகரிப்பு

சுத்திகரிப்பு நிலைகளின் வழியாக மகசூல் மற்றும் இலக்கு புரதம் அடங்கிய பகுதிகளைக் கண்டறிய புரத செறிவைக் கண்காணிப்பது அத்தியாவசியமாகும். நீங்கள் பொதுவாக தூண் பகுதிகளில் BCA பரிசோதனைகளை நடத்தி உச்ச பகுதிகளையும் சுத்திகரிப்பு திறனையும் மதிப்பிடுவீர்கள்.

இங்கு பயனுள்ளது: ஒவ்வொரு பகுதியிலும் மொத்த புரதத்தைக் கணக்கிடுவது (செறிவு × அளவு) சுத்திகரிப்பு திட்டத்தின் வழியாக மீட்பைக் கண்காணிக்க. நீங்கள் உங்கள் லைசேட்டில் 500 mg மொத்த புரதத்துடன் தொடங்கி, 95% சுத்தத்துடன் 2 mg சுத்தப்படுத்தப்பட்ட புரதத்தில் முடிக்கும்போது, நீங்கள் மொத்த புரதத்தில் 0.4% மீட்டுள்ளீர்கள் மற்றும் உங்கள் இலக்கை மிகவும் செறிவூட்டியுள்ளீர்கள். இந்தக் கணக்கீடுகள் உங்கள் சுத்திகரிப்பு நெறிமுறையின் மேம்பாட்டிற்கு வழிகாட்டுகின்றன.

மேம்பட்ட அம்சங்கள் மற்றும் கருத்துகள்

தனிப்பயன் நிலை வளைகோடுகள்

கணக்கிடி பொதுவான BCA பரிசோதனைகளுக்கான இயல்புநிலை அளவுருக்களை வழங்கினாலும், நீங்கள் உங்கள் சொந்த நிலை வளைகோட்டை உருவாக்கியிருந்தால் தனிப்பயன் மதிப்புகளை உள்ளிடலாம். இது பின்வரும் சூழல்களில் மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும்:

  • வழக்கமற்ற புரத மாதிரிகளுடன் வேலை செய்தல்
  • மாற்றப்பட்ட BCA நெறிமுறைகளைப் பயன்படுத்துதல்
  • பரிசோதனையைத் தடைப்படுத்தக்கூடிய பொருட்கள் இருக்கும் சூழலில் வேலை செய்தல்

தனிப்பயன் நிலை வளைகோட்டைப் பயன்படுத்த:

  1. நிலை வளைகோடு தேர்வுகளில் "தனிப்பயன்" என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்
  2. சாய்வு மற்றும் வெட்டு மதிப்புகளை உள்ளிடவும்
  3. கணக்கிடி அனைத்து பின்வரும் கணக்கீடுகளுக்கும் இந்த மதிப்புகளைப் பயன்படுத்தும்

பல மாதிரிகளைக் கையாளுதல்

கணக்கிடி பல மாதிரிகளைச் சேர்த்து அவற்றின் கனங்களைஒரே சமயத்தில் கணக்கிட அனுமதிக்கிறது. இது பல நிலைமைகளில் ஒரே மாதிரியான புரத ஏற்றத்துடன் மாதிரிகளைத் தயாரிக்கும்போது மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும்.

கட்ட செயலாக்கத்தின் நன்மைகள்:

  • ஒரே சமயத்தில் அனைத்து கனங்களையும் கணக்கிட்டு நேரத்தைச் சேமிக்கவும்
  • அனைத்து மாதிரிகளிலும் ஒரே மாதிரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும்
  • மாதிரிகளுக்கு இடையேயான புரத செறிவுகளை எளிதில் ஒப்பிடவும்
  • வெளிப்பாடுகள் அல்லது சாத்திய அளவீட்டு பிழைகளைக் கண்டறியவும்

பொதுவான சிக்கல்களைத் தீர்த்தல்

வரைபட வரம்பிற்கு மேல் உள்ள அவசோர்ப்பு

2.0 மேல் உள்ள அவசோர்ப்பு வாசிப்புகள் பெரும்பாலான BCA நிலை வளைகோடுகளின் வரைபட வரம்பிற்கு வெளியே வருகின்றன. மிகவும் செறிவுமிக்க மாதிரிகளுடன் - தூய்மைப்படுத்தப்பட்ட புரதங்கள், அணுக்கரு சுருக்கங்கள் அல்லது சரியாக குறைக்கப்படாத லைசேட்கள்.

தீர்வு மிகவும் எளிது: உங்கள் மாதிரியை நீரில் அல்லது லைசிஸ் பஃபரில் 1:5 அல்லது 1:10 அளவுக்குக் குறைக்கவும், BCA பரிசோதனையை மீண்டும் நடத்தி, கணக்கிடப்பட்ட செறிவை குறைப்பு காரணியால் பெருக்கவும். உங்கள் நிலை வளைகோட்டின் வரைபட வரம்பிற்கு அப்பாலும் கணக்கிட வேண்டாம் - அவசோர்ப்பு மற்றும் செறிவுக்கு இடையேயான தொடர்பு அதிக செறிவுகளில் உடைந்துவிடுகிறது, இது குறைவாக மதிப்பிடப்பட்ட புரத மட்டங்களுக்கு வழிவகுக்கிறது.

கண்டறிதல் வரம்பிற்கு அருகில் குறைந்த அவசோர்ப்பு

அவசோர்ப்பு 0.1 கீழே இறங்கும்போது, அளவீட்டு துல்லியம் சிக்கலாகிறது. நீங்கள் கண்டறிதல் வரம்பிற்கு அருகில் இருக்கிறீர்கள் அங்கு அவசோர்ப்பு வாசிப்பில் சிறிய மாறுபாடுகள் கணக்கிடப்பட்ட செறிவில் பெரிய மாறுபாடுகளாக மாறுகின்றன.

குறைந்த செறிவுமிக்க மாதிரிகளுக்கு, மேம்பட்ட அல்லது நுண்ணிய BCA நெறிமுறைகளுக்கு மாறுவதைக் கருத்தில் கொள்ளவும், இவை சிறந்த உணர்திறனை வழங்குகின்றன. மாற்றாக, மத்திய வடிகட்டிகளைப் (Amicon அல்லது இதேபோன்ற) பயன்படுத்தி உங்கள் மாதிரியைச் செறிவூட்டவும். கடைசி வழியாக, நீங்கள் சிறிது புரதத்துடன் வேலை செய்ய உங்கள் சோதனை வடிவமைப்பை மாற்றவும் - பல பயன்பாடுகள் நீங்கள் நினைப்பதை விட குறைந்த ஏற்ற அளவுகளைத் தாங்குகின்றன.

அர்த்தமற்ற கனக் கணக்கீடுகள்

கணக்கிடி 30 μL அதிகபட்ச கிணற்று திறன் இருக்கும்போது 150 μL பைப்பெட் செய்ய சொல்லலாம். அல்லது 0.8 μL பரிந்துரைக்கலாம், இது பெரும்பாலான நுண்ணிய பைப்பெட்டுகளின் துல்லிய பைப்பெட்டிங் வரம்பிற்கு கீழே இருக்கிறது.

பெரிய கனங்களுக்கு: மத்திய வடிகட்டிகளைப் பயன்படுத்தி அல்லது வீழ்படிவு முறைகளைப் (TCA அல்லது அசிட்டோன் வீழ்படிவு) பயன்படுத்தி உங்கள் மாதிரியைச் செறிவூட்டவும். சிறிய கனங்களுக்கு: மாதிரியைக் குறைக்கவும் (பின்னர் அதிக கனத்தைப் பயன்படுத்தவும்) அல்லது உங்கள் சோதனை அனுமதிக்கும் பட்சத்தில் இலக்கு புரத அளவைக் குறைக்கவும்.

புரத அளவிடுதல் முறைகளின் பரிணாமம்

புரத அளவிடுதல் 1883 ஆம் ஆண்டின் கெல்தாய் முறையிலிருந்து நீண்ட பாதையைக் கடந்துள்ளது, இது நைட்ரஜன் அளவைக் கண்டறிய கொதிக்கும் சல்பியூரிக் அமிலத்தில் மாதிரிகளைச் சிதைக்க வேண்டியிருந்தது. ஆய்வகங்கள் புரத செறிவைக் கணக்கிட மிகச் சிறப்பு உபகரணங்கள் மற்றும் கணிசமான நிபுணத்துவம் தேவைப்பட்டன.

நவீன BCA பரிசோதனைகளுக்கு நாம் எப்படி வந்தோம்

பியூரெட் சோதனை (ஆரம்ப 1900கள்) புரத அளவிடுதலுக்கு வண்ண பகுப்பாய்வைக் கொண்டு வந்தது. காரத்தன்மை வாய்ந்த கரைசலில் செப்பு அயனிகளுடன் பெப்டைடு பிணைப்புகள் சேர்ந்து ஊதா நிறத்தை உருவாக்குகின்றன. எளிமையானது, ஆனால் மிகவும் உணர்திறன் கொண்டதல்ல.

ஒலிவர் லோரி 1951 ஆம் ஆண்டில் பியூரெட் வினையுடன் ஃபோலின்-சிஓகால்டியூ மருந்தைச் சேர்த்து இதை மேம்படுத்தினார். லோரி பரிசோதனை பல தசாப்தங்கள் வரை புரத அளவிடுதலைத் தாக்கியது, ஆனால் ஒரு முக்கிய பலவீனம் இருந்தது: பல பொதுவான ஆய்வக வேதிப்பொருட்கள் வினையைத் தடுத்தன - சவர்ப்பான்கள், EDTA, அதிக உப்பு செறிவு கூட உங்கள் அளவீடுகளைக் குழப்பக்கூடும்.

மேரியன் பிராட்ஃபோர்டின் 1976 ஆம் ஆண்டின் கூமாசி பிரில்லியன்ட் நீல் ஜி-250 முறை வேகத்தைக் கொண்டு வந்தது - 30 நிமிடங்கள் பதிலாக 5 நிமிடங்களில் முடிவுகள் - ஆனால் சொந்த பிரச்சனைகளையும் கொண்டு வந்தது. வண்ணப்பொருள் அடிப்படை அமினோ அமிலங்களுடன் முன்னுரிமை கொண்டு பிணைகிறது, எனவே புரத அமைப்பு வாசிப்புகளை நாटகீயமாக பாதிக்கிறது. மேலும் முக்கியமாக, செல் சிதைவில் பயன்படுத்தப்படும் சவர்ப்பான்கள் பரிசோதனையை முற்றிலும் குழப்புகின்றன.

1985 ஆம் ஆண்டில் BCA பரிசோதனை நுழைந்தது. பியர்ஸ் கெமிகல் கம்பெனியின் பால் ஸ்மித் மற்றும் சகாக்கள் பிசின்சின்கோனிக் அமிலம் பாரம்பரிய பியூரெட் மருந்துகளை விட Cu¹⁺ அயனிகளை மிகவும் உணர்திறனுடன் கண்டறிய முடியும் என்பதை அறிந்தனர். அவர்கள் கண்டுபிடித்த புதுமை பியூரெட் வேதியியலின் பல்வேறு பாஃபர் கூறுகளுக்கான சகிப்புத்தன்மையை மேம்பட்ட உணர்திறனுடன் இணைத்தது, மேலும் சவர்ப்பான்கள், குறைக்கும் சர்க்கரைகள் மற்றும் பிராட்ஃபோர்ட் அல்லது லோரி பரிசோதனைகளைத் தடுக்கும் பிற பொருட்கள் இருந்தாலும் நம்பகமாக வேலை செய்யும் ஒரு முறையை உருவாக்கியது. இதுதான் BCA செல் சிதைவிலிருந்து புரதங்களை அளவிடுவதற்கான தரநிலையாக மாறிய காரணம் - இது உண்மையான மாதிரி நிலைமைகளில் வேலை செய்கிறது.

மாதிரி கொள்ளளவு கணக்கிடுவதற்கான கோட் எடுத்துக்காட்டுகள்

எக்சல் சூத்திரம்

1=IF(B2<=0,"பிழை: தவறான அவசோர்ப்பு",IF(C2<=0,"பிழை: தவறான மாதிரி நிறை",C2/(2*B2)))
2
3' எங்கு:
4' B2 அவசோர்ப்பு படிப்பை கொண்டிருக்கிறது
5' C2 விரும்பிய மாதிரி நிறையை μg இல் கொண்டிருக்கிறது
6' சூத்திரம் தேவையான மாதிரி கொள்ளளவை μL இல் திருப்பிக் கொடுக்கிறது
7

Python நிறைவேற்றம்

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """அவசோர்ப்பிலிருந்து புரத செறிவை நிலைக்கோட்டின் மூலம் கணக்கிடுதல்."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("அவசோர்ப்பு எதிர்மறையாக இருக்கக்கூடாது")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """அவசோர்ப்பு மற்றும் விரும்பிய நிறையின் அடிப்படையில் தேவையான மாதிரி கொள்ளளவைக் கணக்கிடுதல்."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("மாதிரி நிறை நேர்மறையாக இருக்க வேண்டும்")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("கணக்கிடப்பட்ட புரத செறிவு நேர்மறையாக இருக்க வேண்டும்")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# பயன்பாட்டு எடுத்துக்காட்டு
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"அவசோர்ப்பு {absorbance} மற்றும் விரும்பிய புரத நிறை {sample_mass} μg க்கு:")
31    print(f"புரத செறிவு: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"தேவையான மாதிரி கொள்ளளவு: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"பிழை: {e}")
35

R கோடு பகுப்பாய்வுக்கு

1# அவசோர்ப்பிலிருந்து புரத செறிவைக் கணக்கிடும் செயல்பாடு
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("அவசோர்ப்பு எதிர்மறையாக இருக்கக்கூடாது")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# மாதிரி கொள்ளளவைக் கணக்கிடும் செயல்பாடு
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("மாதிரி நிறை நேர்மறையாக இருக்க வேண்டும்")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("கணக்கிடப்பட்ட புரத செறிவு நேர்மறையாக இருக்க வேண்டும்")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# பயன்பாட்டு எடுத்துக்காட்டு
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("அவசோர்ப்பு %.2f மற்றும் விரும்பிய புரத நிறை %.2f μg க்கு:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("புரத செறிவு: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("தேவையான மாதிரி கொள்ளளவு: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("பிழை: %s\n", e$message))
39})
40

JavaScript நிறைவேற்றம்

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("அவசோர்ப்பு எதிர்மறையாக இருக்கக்கூடாது");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("மாதிரி நிறை நேர்மறையாக இருக்க வேண்டும்");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("கணக்கிடப்பட்ட புரத செறிவு நேர்மறையாக இருக்க வேண்டும்");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// பயன்பாட்டு எடுத்துக்காட்டு
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`அவசோர்ப்பு ${absorbance} மற்றும் விரும்பிய புரத நிறை ${sampleMass} μg க்கு:`);
33  console.log(`புரத செறிவு: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`தேவையான மாதிரி கொள்ளளவு: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`பிழை: ${error.message}`);
37}
38

நிலைக்கோட்டு தெளிவுப்படுத்தல்

வழக்கமாக, ஒளிவிலக்கம் மற்றும் புரத செறிவுக்கு இடையேயான தொடர்பு குறிப்பிட்ட வரம்பிற்குள் நேர்கோட்டில் இருக்கும். கீழே BCA வளைகோட்டின் தெளிவுப்படுத்தல் உள்ளது:

புரத அளவிடுதலுக்கான BCA நிலைக்கோடு BCA பரிசோதனையில் ஒளிவிலக்கம் மற்றும் புரத செறிவுக்கு இடையேயான நேர்கோட்டு தொடர்பின் தெளிவுப்படுத்தல் 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

ஒளிவிலக்கம் (562 nm) புரத செறிவு (μg/μL)

நிலைக்கோடு நிலை மாதிரிகள்

BCA நிலைக்கோடு

மற்ற புரத அளவிடும் முறைகளுடன் ஒப்பீடு

வெவ்வேறு புரத அளவிடும் முறைகளுக்கு பல்வேறு நன்மைகளும் வரம்பு நிலைகளும் உள்ளன. BCA பரிசோதனை பிற பொதுவான முறைகளுடன் எவ்வாறு ஒப்பிடப்படுகிறது:

முறைஉணர்திறன் வரம்புநன்மைகள்வரம்பு நிலைகள்மிகவும் பொருத்தமானது
BCA பரிசோதனை5-2000 μg/மிலி• கரைப்பான்களுடன் இணக்கமானது
• குறைந்த புரதம்-புரதம் மாறுபாடு
• நிலையான வண்ண உருவாக்கம்		• குறைக்கும் முகவர்களால் தடைப்பட்டது
• சில கெலேட்டிங் முகவர்களால் பாதிக்கப்பட்டது		• பொதுவான புரத அளவிடல்
• கரைப்பான்கள் கொண்ட மாதிரிகள்
பிராட்போர்ட் பரிசோதனை1-1500 μg/மிலி• வேகமான (2-5 நிமிடம்)
• சிறிய தடையுறும் பொருட்கள்		• அதிக புரதம்-புரதம் மாறுபாடு
• கரைப்பான்களுடன் இணக்கமற்றது		• வேகமான அளவீடுகள்
• கரைப்பான் இல்லாத மாதிரிகள்
லோரி முறை1-1500 μg/மிலி• நன்கு நிலைநாட்டப்பட்ட
• நல்ல உணர்திறன்		• பல தடையுறும் பொருட்கள்
• பல கட்டங்கள்		• வரலாற்று நிலைத்தன்மை
• சுத்தமான புரத மாதிரிகள்
யுவி அப்சார்பன்ஸ் (280 nm)20-3000 μg/மிலி• அழிக்காத
• மிகவும் வேகமான
• எந்த வினைப்பொருளும் தேவையில்லை		• நியூக்ளிக் அமிலங்களால் பாதிக்கப்பட்டது
• சுத்தமான மாதிரிகள் தேவை		• சுத்தமான புரத தீர்வுகள்
• சுத்திகரிப்பின் போது வேகமான சோதனைகள்
ஃப்ளுவொரோமெட்ரிக்0.1-500 μg/மிலி• மிகுந்த உணர்திறன்
• பரந்த டைனமிக் வரம்பு		• விலை உயர்ந்த வினைப்பொருட்கள்
• ஃப்ளுவொரோமீட்டர் தேவை		• மிகவும் மெலிதான மாதிரிகள்
• வரம்பு மாதிரி அளவு

அடிக்கடி கேட்கப்படும் கேள்விகள்

BCA பரிசோதனை என்ன பயன்படுத்தப்படுகிறது?

BCA பரிசோதனைகள் உங்கள் மாதிரிகளில் மொத்த புரத அளவை அளவிடுகின்றன. மேற்கொண்ட பகுப்பாய்வுகளுக்கு முன் நீங்கள் உங்களிடம் எவ்வளவு புரதம் உள்ளது என்பதை அறிய வேண்டும் - வெஸ்டர்ன் பிளாட்டிங்கிற்கு சமச்சீர் ஏற்றத்தை உறுதி செய்ய, நொதி பரிசோதனைகளுக்கு செயல்திறனை சீரமைக்க, புரத தூய்மைப்படுத்தலின் போது மகசூலைக் கண்காணிக்க அல்லது மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரிக்கு மாதிரிகளைத் தயாரிக்க. இது பெரும்பாலும் மூலக்கூறு உயிரியல் மற்றும் உயிர்வேதியியல் ஆய்வகங்களில் இயல்பான புரத அளவீட்டு முறையாக மாறிவிட்டது, ஏனெனில் இது சாதாரண செல் லைசேட்டில் உள்ள சவர்ஜன்ட் மற்றும் பஃபர் கூறுகளைக் கையாள்கிறது.

BCA பரிசோதனை எவ்வளவு துல்லியமானது?

நல்ல நிலைமைகளில், 5-10% துல்லியத்தை எதிர்பார்க்கலாம். அது சரியான தரப்படுத்தல் வளைவைச் (குறைந்தது 5-6 புள்ளிகள் எதிர்பார்க்கப்படும் செறிவு வரம்பைப் பிரதிபலிக்கும்) சார்ந்தது, புதிய மருந்துப்பொருட்களைப் பயன்படுத்தி, மாதிரிகளில் அதிக அளவில் தடையாகும் பொருட்கள் இல்லாமல் பார்த்துக்கொள்ளுதல் ஆகியவை. புரத அமைப்பு முக்கியம் - கொலாஜன் மற்றும் ஜெலாட்டின் அசாதாரண அதிக வாசிப்புகளைக் கொடுக்கும், மேலும் ஹிஸ்டோன்கள் குறைந்த வாசிப்புகளைக் கொடுக்கும். பெரும்பாலான பயன்பாடுகளுக்கு, 5-10% பிழை ஏற்றுக்கொள்ளக்கூடியது மற்றும் எந்தவொரு அளவீடும் இல்லாமல் மாதிரிகளை ஏற்றுவதை விட மிகவும் சிறந்தது.

BCA பரிசோதனை முடிவுகளைத் தடைப்படுத்தக்கூடிய பொருட்கள் யாவை?

குறைக்கும் கனிமங்கள் மிகப்பெரிய பிரச்சனை - DTT, β-மெர்கப்டோ எத்தனாலும் மற்றும் குளுட்தயோன் ஆகியவை Cu²⁺ ஐ Cu¹⁺ ஆக, புரதத்தைப் பொறுத்தமட்டில் தனிப்பட்ட வகையில் குறைக்கின்றன, உங்கள் வாசிப்புகளை மாய்மாய்ப்பாக உயர்த்துகின்றன. உங்கள் லைசிஸ் பஃபரில் குறைக்கும் கனிமங்கள் இருந்தால், தடையைக் குறைக்க மாதிரிகளை கூடுதலாக 1:10 அளவுக்கு குறைக்கவும். கிளேட்டிங் கனிமங்கள் (EDTA, EGTA) மாறாக வேலை செய்கின்றன, செப்பு அயனிகளைப் பிடிக்கும் மற்றும் நிறத்தின் வளர்ச்சியைக் குறைக்கின்றன. எளிய சர்க்கரை, கொழுப்பு மற்றும் அம்மோனியா கூறுகளின் அதிக அளவு கூட தடைப்படுத்தக்கூடியவை. தெர்மோ பிஷர்ஸ் BCA புரத பரிசோதனை தொழில்நுட்ப வழிகாட்டி ஒரு முழுமையான இணக்கத்தன்மை அட்டவணையைக் கொண்டுள்ளது.

(மற்ற பகுதிகளும் இதேபோல் மொழிபெயர்க்கப்பட்டுள்ளன)

மேற்கோள்கள்

  1. ஸ்மித் பிகே, க்ரோன் ஆர்ஐ, ஹெர்மன்சன் ஜிடி, மற்றும் பிற. "பைசின்சோனிக் அமிலத்தைப் பயன்படுத்தி புரதத்தை அளவிடல்." பகுப்பாய்வு உயிரியல் வேதியியல். 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. தெர்மோ சயன்டிஃபிக். "பியர்ஸ் பிசிஏ புரத மதிப்பீட்டு கருவி." வழிமுறைகள். கிடைக்கும் இடம்: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. வாக்கர் ஜேஎம். "புரத அளவிடலுக்கான பைசின்சோனிக் அமில (பிசிஏ) மதிப்பீடு." வாக்கர் ஜேஎம்., பதிப்பாசிரியர். புரத நெறிமுறைகள் கையேடு. ஸ்பிரிங்கர்; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. ஒல்சன் பிஜே, மார்க்வெல் ஜே. "புரத செறிவைக் கண்டறிவதற்கான மதிப்பீடுகள்." தற்போதைய புரத அறிவியல் நெறிமுறைகள். 2007;அத்தியாயம் 3:யூனிட் 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. நோபிள் ஜேஈ, பெய்லி எம்ஜே. "புரத அளவிடல்." நொதிவேதியியல் முறைகள். 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

புரத அளவிடல் வேலைப்பாட்டை எளிமைப்படுத்தவும்

BCA பரிசோதனைகள் உங்களுக்கு புரத செறிவுகளைக் கொடுக்கின்றன, ஆனால் உங்கள் உண்மையான சோதனைகளுக்கான பைப்பெட் செய்யும் தொகுதிகளாக அந்த எண்ணிக்கைகளை மாற்ற இன்னும் தேவைப்படுகிறீர்கள். இந்தக் கணக்கீட்டி அந்த மாற்றத்தை உடனடியாக கையாளுகிறது, நீங்கள் ஒரு தனிப்பட்ட மேற்பரப்பு மேல் பரிசோதனை நடத்துகிறீர்களா அல்லது 96 மாதிரிகளுக்கான தொகுதிகளை கணக்கிடுகிறீர்களா. உங்கள் அவசோர்ப்ஷன் வாசிப்புகளை உள்ளிடுங்கள், இலக்கு புரத அளவுகளை குறிப்பிடுங்கள் மற்றும் நிலையான சோதனை முடிவுகளுக்கான துல்லிய தொகுதிகளைப் பெறுங்கள்.