Υπολογίστε ακριβείς όγκους δειγμάτων με βάση τις μετρήσεις απορρόφησης της δοκιμής BCA και τη επιθυμητή μάζα πρωτεΐνης. Απαραίτητο για συνεπή φόρτωση πρωτεϊνών σε western blots και άλλες εφαρμογές εργαστηρίου.
Αυτό το εργαλείο υπολογίζει τον απαιτούμενο όγκο δείγματος με βάση τα αποτελέσματα απορρόφησης BCA και τη μάζα του δείγματος. Εισάγετε την τιμή απορρόφησης και τη μάζα του δείγματος για κάθε δείγμα για να υπολογίσετε τον αντίστοιχο όγκο δείγματος.
Ο όγκος δείγματος υπολογίζεται χρησιμοποιώντας τον παρακάτω τύπο:
• tipAbsorbanceRange
• tipSampleMass
• tipSampleVolume
• tipStandardCurve
Ο Υπολογιστής Όγκου Δείγματος Απορρόφησης BCA είναι ένα εξειδικευμένο εργαλείο σχεδιασμένο να βοηθά τους ερευνητές και τους τεχνικούς εργαστηρίων να προσδιορίζουν με ακρίβεια τον κατάλληλο όγκο δείγματος για πειράματα με βάση τα αποτελέσματα της δοκιμής BCA (βικινχονινικού οξέος). Αυτός ο υπολογιστής λαμβάνει τις μετρήσεις απορρόφησης από τη δοκιμή BCA και τη ζητούμενη μάζα δείγματος για να υπολογίσει τον ακριβή όγκο που απαιτείται για συνεπή φόρτωση πρωτεϊνών σε εφαρμογές όπως η western blotting, οι ενζυμικές δοκιμές και άλλες τεχνικές ανάλυσης πρωτεϊνών.
Η δοκιμή BCA είναι μία από τις πιο ευρέως χρησιμοποιούμενες μεθόδους για τον προσδιορισμό της πρωτεϊνικής συγκέντρωσης σε εργαστήρια βιοχημείας και μοριακής βιολογίας. Μετρώντας την απορρόφηση των δειγμάτων πρωτεϊνών σας και συγκρίνοντάς τα με μια καμπύλη αναφοράς, μπορείτε να προσδιορίσετε τη συγκέντρωση πρωτεϊνών με υψηλή ακρίβεια. Ο υπολογιστής μας απλοποιεί αυτή τη διαδικασία, μετατρέποντας αυτόματα τις μετρήσεις απορρόφησης σε ακριβείς όγκους δειγμάτων που απαιτούνται για τα πειράματά σας.
Η δοκιμή Βικινχονινικού Οξέος (BCA) είναι μια βιοχημική δοκιμή για τον προσδιορισμό της συνολικής συγκέντρωσης πρωτεϊνών σε ένα διάλυμα. Η αρχή αυτής της δοκιμής βασίζεται στο σχηματισμό ενός συμπλέγματος Cu²⁺-πρωτεΐνης υπό αλκαλικές συνθήκες, ακολουθούμενη από την αναγωγή του Cu²⁺ σε Cu¹⁺. Η ποσότητα της αναγωγής είναι ανάλογη με την πρωτεΐνη που υπάρχει. Η BCA σχηματίζει ένα μωβ χρώμα με το Cu¹⁺ σε αλκαλικά περιβάλλοντα, παρέχοντας μια βάση για την παρακολούθηση της αναγωγής του χαλκού από τις πρωτεΐνες.
Η ένταση του μωβ χρώματος αυξάνεται αναλογικά με τη συγκέντρωση πρωτεϊνών, η οποία μπορεί να μετρηθεί χρησιμοποιώντας ένα σπεκτροφωτόμετρο περίπου στα 562 nm. Οι μετρήσεις απορρόφησης συγκρίνονται στη συνέχεια με μια καμπύλη αναφοράς για να προσδιοριστεί η συγκέντρωση πρωτεϊνών σε άγνωστα δείγματα.
Ο θεμελιώδης τύπος για τον υπολογισμό του όγκου δείγματος από τα αποτελέσματα απορρόφησης BCA είναι:
Όπου:
Η συγκέντρωση πρωτεϊνών υπολογίζεται από την ανάγνωση απορρόφησης χρησιμοποιώντας την εξίσωση της καμπύλης αναφοράς:
Για μια τυπική δοκιμή BCA, η τυπική κλίση είναι περίπου 2.0 και η επικοινωνία είναι συχνά κοντά στο μηδέν, αν και αυτές οι τιμές μπορεί να διαφέρουν ανάλογα με τις συγκεκριμένες συνθήκες της δοκιμής σας και την καμπύλη αναφοράς.
Ο υπολογιστής μας απλοποιεί τη διαδικασία προσδιορισμού των όγκων δειγμάτων από τα αποτελέσματα της δοκιμής BCA. Ακολουθήστε αυτά τα βήματα για να αποκτήσετε ακριβείς υπολογισμούς:
Εισάγετε Πληροφορίες Δείγματος:
Επιλέξτε Τύπο Καμπύλης Αναφοράς:
Δείτε τα Αποτελέσματα:
Αντιγράψτε ή Εξάγετε τα Αποτελέσματα:
Ας περάσουμε από ένα πρακτικό παράδειγμα:
Αυτό σημαίνει ότι θα πρέπει να φορτώσετε 13.33 μL του δείγματός σας για να αποκτήσετε 20 μg πρωτεΐνης.
Ο υπολογιστής παρέχει αρκετές σημαντικές πληροφορίες:
Συγκέντρωση Πρωτεϊνών: Αυτή υπολογίζεται από την ανάγνωση απορρόφησης χρησιμοποιώντας την επιλεγμένη καμπύλη αναφοράς. Αντιπροσωπεύει την ποσότητα πρωτεϊνών ανά μονάδα όγκου στο δείγμα σας (μg/μL).
Όγκος Δείγματος: Αυτός είναι ο όγκος του δείγματός σας που περιέχει την επιθυμητή ποσότητα πρωτεϊνών. Αυτή η τιμή είναι αυτή που θα χρησιμοποιήσετε κατά την προετοιμασία των πειραμάτων σας.
Προειδοποιήσεις και Συστάσεις: Ο υπολογιστής μπορεί να παρέχει προειδοποιήσεις για:
Μία από τις πιο κοινές εφαρμογές για αυτόν τον υπολογιστή είναι η προετοιμασία δειγμάτων για western blotting. Η συνεπής φόρτωση πρωτεϊνών είναι κρίσιμη για αξιόπιστα αποτελέσματα western blot, και αυτός ο υπολογιστής διασφαλίζει ότι φορτώνετε την ίδια ποσότητα πρωτεϊνών για κάθε δείγμα, ακόμη και όταν οι συγκεντρώσεις τους διαφέρουν.
Παράδειγμα ροής εργασίας:
Για τις ενζυμικές δοκιμές, είναι συχνά απαραίτητο να χρησιμοποιήσετε μια συγκεκριμένη ποσότητα πρωτεϊνών για να τυποποιήσετε τις συνθήκες αντίδρασης σε διαφορετικά δείγματα ή πειράματα.
Παράδειγμα ροής εργασίας:
Σε πειράματα ανοσοκατακράτησης (IP), η εκκίνηση με μια συνεπή ποσότητα πρωτεϊνών είναι σημαντική για τη σύγκριση των αποτελεσμάτων σε διαφορετικές συνθήκες.
Παράδειγμα ροής εργασίας:
Κατά τη διάρκεια του καθαρισμού πρωτεϊνών, είναι συχνά απαραίτητο να παρακολουθείτε τη συγκέντρωση πρωτεϊνών και να υπολογίζετε τις αποδόσεις σε διάφορα στάδια.
Παράδειγμα ροής εργασίας:
Ενώ ο υπολογιστής παρέχει προεπιλεγμένες παραμέτρους για τις τυπικές δοκιμές BCA, μπορείτε επίσης να εισάγετε προσαρμοσμένες τιμές εάν έχετε δημιουργήσει τη δική σας καμπύλη αναφοράς. Αυτό είναι ιδιαίτερα χρήσιμο όταν:
Για να χρησιμοποιήσετε μια προσαρμοσμένη καμπύλη αναφοράς:
Ο υπολογιστής σας επιτρέπει να προσθέσετε πολλά δείγματα και να υπολογίσετε τους όγκους τους ταυτόχρονα. Αυτό είναι ιδιαίτερα χρήσιμο κατά την προετοιμασία δειγμάτων για πειράματα που απαιτούν συνεπή φόρτωση πρωτεϊνών σε πολλές συνθήκες.
Οφέλη της επεξεργασίας παρτίδας:
Εάν η αναγνώριση απορρόφησης σας είναι πάνω από 2.0, μπορεί να είναι εκτός της γραμμικής περιοχής της δοκιμής BCA. Σε αυτές τις περιπτώσεις:
Για αναγνώσεις απορρόφησης κάτω από 0.1, μπορεί να είστε κοντά στο όριο ανίχνευσης της δοκιμής, το οποίο θα μπορούσε να επηρεάσει την ακρίβεια. Σκεφτείτε:
Εάν ο υπολογιστής προτείνει έναν όγκο που είναι πολύ μεγάλος για την εφαρμογή σας:
Ο ακριβής προσδιορισμός των πρωτεϊνών ήταν μια θεμελιώδης απαίτηση στη βιοχημεία και τη μοριακή βιολογία από τότε που αναδύθηκαν αυτοί οι τομείς. Οι πρώιμες μέθοδοι βασίζονταν στον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε άζωτο, που ήταν χρονοβόρες και απαιτούσαν εξειδικευμένο εξοπλισμό.
Μέθοδος Kjeldahl (1883): Μία από τις πρώτες μεθόδους για τον προσδιορισμό της ποσοτικοποίησης πρωτεϊνών, βασισμένη στη μέτρηση της περιεκτικότητας σε άζωτο.
Δοκιμή Biuret (Αρχές 1900): Αυτή η μέθοδος βασίζεται στην αντίδραση μεταξύ των πεπτιδικών δεσμών και των ιόντων χαλκού σε αλκαλικό διάλυμα, παράγοντας ένα βιολετί χρώμα.
Δοκιμή Lowry (1951): Αναπτύχθηκε από τον Όλιβερ Λόουρι, αυτή η μέθοδος συνδύασε την αντίδραση Biuret με το αντιδραστήριο Folin-Ciocalteu, αυξάνοντας την ευαισθησία.
Δοκιμή Bradford (1976): Η Μαρίον Μπράντφορντ ανέπτυξε αυτή τη μέθοδο χρησιμοποιώντας το χρώμα Coomassie Brilliant Blue G-250, το οποίο συνδέεται με τις πρωτεΐνες και μετατοπίζει το μέγιστο απορρόφησης.
Δοκιμή BCA (1985): Αναπτύχθηκε από τον Πολ Σμιθ και τους συνεργάτες του στην εταιρεία Pierce Chemical, αυτή η μέθοδος συνδύασε την αντίδραση Biuret με την ανίχνευση BCA, προσφέροντας βελτιωμένη ευαισθησία και συμβατότητα με απορρυπαντικά.
Η δοκιμή BCA περιγράφηκε για πρώτη φορά σε μια εργασία του 1985 από τους Σμιθ κ.ά. με τίτλο "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Αναπτύχθηκε για να αντιμετωπίσει περιορισμούς των υπαρχουσών μεθόδων, ιδιαίτερα την παρέμβαση διαφόρων χημικών που χρησιμοποιούνται συνήθως στην εξαγωγή και τον καθαρισμό πρωτεϊνών.
Η κύρια καινοτομία ήταν η χρήση του βικινχονινικού οξέος για την ανίχνευση των ιόντων Cu¹⁺ που παράγονται από την αναγωγή του Cu²⁺ από τις πρωτεΐνες, σχηματίζοντας ένα μωβ χρώμα που μπορεί να μετρηθεί σπεκτροφωτομετρικά. Αυτό προσέφερε αρκετά πλεονεκτήματα:
Από την εισαγωγή της, η δοκιμή BCA έχει γίνει μία από τις πιο ευρέως χρησιμοποιούμενες μεθόδους ποσοτικοποίησης πρωτεϊνών σε εργαστήρια βιοχημείας και μοριακής βιολογίας παγκοσμίως.
1=IF(B2<=0,"Σφάλμα: Μη έγκυρη απορρόφηση",IF(C2<=0,"Σφάλμα: Μη έγκυρη μάζα δείγματος",C2/(2*B2)))
2
3' Όπου:
4' B2 περιέχει την ανάγνωση απορρόφησης
5' C2 περιέχει τη ζητούμενη μάζα δείγματος σε μg
6' Ο τύπος επιστρέφει τον απαιτούμενο όγκο δείγματος σε μL
71import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5 """Υπολογίστε τη συγκέντρωση πρωτεϊνών από την απορρόφηση χρησιμοποιώντας την καμπύλη αναφοράς."""
6 if absorbance < 0:
7 raise ValueError("Η απορρόφηση δεν μπορεί να είναι αρνητική")
8 return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11 """Υπολογίστε τον απαιτούμενο όγκο δείγματος με βάση την απορρόφηση και τη ζητούμενη μάζα."""
12 if sample_mass <= 0:
13 raise ValueError("Η μάζα δείγματος πρέπει να είναι θετική")
14
15 protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16
17 if protein_concentration <= 0:
18 raise ValueError("Η υπολογισμένη συγκέντρωση πρωτεϊνών πρέπει να είναι θετική")
19
20 return sample_mass / protein_concentration
21
22# Παράδειγμα χρήσης
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20 # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29 volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30 print(f"Για απορρόφηση {absorbance} και ζητούμενη μάζα πρωτεϊνών {sample_mass} μg:")
31 print(f"Συγκέντρωση πρωτεϊνών: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32 print(f"Απαιτούμενος όγκος δείγματος: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34 print(f"Σφάλμα: {e}")
351# Συνάρτηση για τον υπολογισμό της συγκέντρωσης πρωτεϊνών από την απορρόφηση
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3 if (absorbance < 0) {
4 stop("Η απορρόφηση δεν μπορεί να είναι αρνητική")
5 }
6 return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# Συνάρτηση για τον υπολογισμό του όγκου δείγματος
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11 if (sample_mass <= 0) {
12 stop("Η μάζα δείγματος πρέπει να είναι θετική")
13 }
14
15 protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16
17 if (protein_concentration <= 0) {
18 stop("Η υπολογισμένη συγκέντρωση πρωτεϊνών πρέπει να είναι θετική")
19 }
20
21 return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# Παράδειγμα χρήσης
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20 # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31 volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32 protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33
34 cat(sprintf("Για απορρόφηση %.2f και ζητούμενη μάζα πρωτεϊνών %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35 cat(sprintf("Συγκέντρωση πρωτεϊνών: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36 cat(sprintf("Απαιτούμενος όγκος δείγματος: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38 cat(sprintf("Σφάλμα: %s\n", e$message))
39})
401function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2 if (absorbance < 0) {
3 throw new Error("Η απορρόφηση δεν μπορεί να είναι αρνητική");
4 }
5 return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9 if (sampleMass <= 0) {
10 throw new Error("Η μάζα δείγματος πρέπει να είναι θετική");
11 }
12
13 const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14
15 if (proteinConcentration <= 0) {
16 throw new Error("Η υπολογισμένη συγκέντρωση πρωτεϊνών πρέπει να είναι θετική");
17 }
18
19 return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// Παράδειγμα χρήσης
23try {
24 const absorbance = 0.75;
25 const sampleMass = 20; // μg
26 const slope = 2.0;
27 const intercept = 0;
28
29 const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30 const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31
32 console.log(`Για απορρόφηση ${absorbance} και ζητούμενη μάζα πρωτεϊνών ${sampleMass} μg:`);
33 console.log(`Συγκέντρωση πρωτεϊνών: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34 console.log(`Απαιτούμενος όγκος δείγματος: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36 console.error(`Σφάλμα: ${error.message}`);
37}
38Η σχέση μεταξύ απορρόφησης και συγκέντρωσης πρωτεϊνών είναι συνήθως γραμμική εντός μιας ορισμένης περιοχής. Παρακάτω είναι μια οπτικοποίηση μιας καμπύλης αναφοράς BCA:
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>
<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>
Διαφορετικές μέθοδοι ποσοτικοποίησης πρωτεϊνών έχουν διάφορα πλεονεκτήματα και περιορισμούς. Ακολουθεί πώς η δοκιμή BCA συγκρίνεται με άλλες κοινές μεθόδους:
| Μέθοδος | Εύρος Ευαισθησίας | Πλεονεκτήματα | Περιορισμοί | Καλύτερη Για |
|---|---|---|---|---|
| Δοκιμή BCA | 5-2000 μg/mL | • Συμβατή με απορρυπαντικά • Λιγότερη διακύμανση πρωτεΐνης προς πρωτεΐνη • Σταθερή ανάπτυξη χρώματος | • Παρεμβαίνει από αναγωγικούς παράγοντες • Επηρεάζεται από ορισμένες χημικές ουσίες | • Γενική ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών • Δείγματα που περιέχουν απορρυπαντικά |
| Δοκιμή Bradford | 1-1500 μg/mL | • Γρήγορη (2-5 λεπτά) • Λίγες παρεμβατικές ουσίες | • Υψηλή διακύμανση πρωτεΐνης προς πρωτεΐνη • Μη συμβατή με απορρυπαντικά | • Γρήγορες μετρήσεις • Δείγματα χωρίς απορρυπαντικά |
| Μέθοδος Lowry | 1-1500 μg/mL | • Καλά καθιερωμένη • Καλή ευαισθησία | • Πολλές παρεμβατικές ουσίες • Πολλαπλά βήματα | • Ιστορική συνέπεια • Καθαρά δείγματα πρωτεϊνών |
| UV Απορρόφηση (280 nm) | 20-3000 μg/mL | • Μη καταστροφική • Πολύ γρήγορη • Χωρίς ανάγκη αντιδραστηρίων | • Επηρεάζεται από νουκλεϊκά οξέα • Απαιτεί καθαρά δείγματα | • Καθαρά διαλύματα πρωτεϊνών • Γρήγορες ελέγχους κατά τη διάρκεια του καθαρισμού |
| Φθορομετρική | 0.1-500 μg/mL | • Υψηλότερη ευαισθησία • Ευρύ δυναμικό εύρος | • Ακριβοί αντιδραστήρες • Απαιτεί φθορομετρητή | • Πολύ αραιά δείγματα • Περιορισμένος όγκος δείγματος |
Η δοκιμή BCA (βικινχονινικό οξύ) χρησιμοποιείται κυρίως για τον προσδιορισμό της συνολικής συγκέντρωσης πρωτεϊνών σε ένα δείγμα. Είναι ευρέως χρησιμοποιούμενη στη βιοχημεία, τη βιολογία κυττάρων και τη μοριακή βιολογία για εφαρμογές όπως η western blotting, οι δοκιμές ενζύμων, η ανοσοκατακράτηση και ο καθαρισμός πρωτεϊνών.
Η δοκιμή BCA είναι γενικά ακριβής εντός 5-10% όταν εκτελείται σωστά. Η ακρίβειά της εξαρτάται από αρκετούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένης της ποιότητας της καμπύλης αναφοράς, της απουσίας παρεμβατικών ουσιών και του κατά πόσο η σύνθεση της άγνωστης πρωτεΐνης είναι παρόμοια με την πρωτεΐνη αναφοράς που χρησιμοποιείται.
Πολλές ουσίες μπορούν να παρέμβουν στα αποτελέσματα της δοκιμής BCA, συμπεριλαμβανομένων:
Οι κύριες διαφορές είναι:
Εάν ο υπολογιστής σας δείχνει έναν πολύ μεγάλο όγκο δείγματος, αυτό συνήθως υποδεικνύει χαμηλή συγκέντρωση πρωτεϊνών στο δείγμα σας. Αυτό θα μπορούσε να οφείλεται σε:
Σκεφτείτε να συγκεντρώσετε το δείγμα σας ή να ρυθμίσετε το σχεδιασμό του πειράματός σας για να φιλοξενήσει τη χαμηλότερη συγκέντρωση πρωτεϊνών.
Αυτός ο υπολογιστής είναι ειδικά σχεδιασμένος για αποτελέσματα δοκιμής BCA. Ενώ η βασική αρχή (μετατροπή συγκέντρωσης σε όγκο) ισχύει και για άλλες μεθόδους, η σχέση μεταξύ απορρόφησης και συγκέντρωσης πρωτεϊνών διαφέρει μεταξύ των διαφορετικών δοκιμών. Για άλλες μεθόδους όπως η Bradford ή η Lowry, θα χρειαστεί να χρησιμοποιήσετε διαφορετικές παραμέτρους καμπύλης αναφοράς.
Για αναγνώσεις απορρόφησης εκτός της γραμμικής περιοχής (συνήθως >2.0):
Η Βοοειδής Σερυμική Αλβουμίνη (BSA) είναι το πιο κοινά χρησιμοποιούμενο πρότυπο για τις δοκιμές BCA επειδή είναι:
Ωστόσο, εάν τα δείγματά σας περιέχουν μια κυρίαρχη πρωτεΐνη που διαφέρει σημαντικά από την BSA, σκεφτείτε να χρησιμοποιήσετε αυτήν την πρωτεΐνη ως πρότυπο για πιο ακριβή αποτελέσματα.
Το μωβ χρώμα που αναπτύσσεται στην αντίδραση BCA είναι σταθερό για αρκετές ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και μπορεί να μετρηθεί οποιαδήποτε στιγμή εντός αυτής της περιόδου. Ωστόσο, για καλύτερα αποτελέσματα, συνιστάται να μετράτε όλα τα πρότυπα και τα δείγματα περίπου την ίδια στιγμή μετά την ανάπτυξη χρώματος.
Ενώ είναι τεχνικά δυνατό να επαναχρησιμοποιήσετε μια καμπύλη αναφοράς, δεν συνιστάται για αξιόπιστη ποσοτικοποίηση. Οι διακυμάνσεις στα αντιδραστήρια, τις συνθήκες επώασης και την βαθμονόμηση του οργάνου μπορούν να επηρεάσουν τη σχέση μεταξύ απορρόφησης και συγκέντρωσης πρωτεϊνών. Για αξιόπιστα αποτελέσματα, δημιουργήστε μια φρέσκια καμπύλη αναφοράς κάθε φορά που εκτελείτε τη δοκιμή.
Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7
Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." Οδηγίες. Διαθέσιμο στο: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf
Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." In: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3
Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48
Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1
Τώρα που κατανοείτε τις αρχές πίσω από την ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών BCA και τον υπολογισμό όγκου δείγματος, δοκιμάστε τον υπολογιστή μας για να απλοποιήσετε τη ροή εργαστηρίου σας. Απλά εισάγετε τις αναγνώσεις απορρόφησης και τη ζητούμενη μάζα δείγματος για να αποκτήσετε άμεσους, ακριβείς υπολογισμούς όγκου δείγματος.
Είτε προετοιμάζετε δείγματα για western blotting, ενζυμικές δοκιμές ή οποιοδήποτε άλλο πειραματικό πρωτεϊνικό, ο υπολογιστής μας θα σας βοηθήσει να διασφαλίσετε συνεπή και αξιόπιστα αποτελέσματα. Εξοικονομήστε χρόνο, μειώστε τα σφάλματα και βελτιώστε την αναπαραγωγιμότητα των πειραμάτων σας με τον Υπολογιστή Όγκου Δείγματος Απορρόφησης BCA.
Ανακαλύψτε περισσότερα εργαλεία που μπορεί να είναι χρήσιμα για τη ροή εργασίας σας