ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਦੀ ਸੰਘਣਤਾ, ਲੰਬਾਈਆਂ ਅਤੇ ਮੋਲਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦਰਜ ਕਰਕੇ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਉਤਕ੍ਰਿਸ਼ਟ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ। ਮੋਲੈਕਿਊਲਰ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ ਲਈ ਜਰੂਰੀ ਟੂਲ।
ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਕੋਵੈਲੈਂਟ ਬਾਂਦਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਟੂਲ ਹੈ, ਜੋ ਸਫਲ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਢੰਗਾਂ ਦੀ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਵੈਕਟਰ (ਪਲਾਸਮਿਡ) ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਹੀ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਕੇ, ਇਹ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਬੇਕਾਰ ਰੀਏਜੈਂਟਸ ਅਤੇ ਫੇਲ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਜੀਨਿਕ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ, ਸੰਸਥਾਨਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ, ਅਤੇ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਬੁਨਿਆਦੀ ਹਨ। ਇਹ ਵਿਗਿਆਨੀਆਂ ਨੂੰ ਰੀਕੰਬਿਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਪਲਾਸਮਿਡ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਰੁਚੀ ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਤਾਂ ਜੋ ਹੋਸਟ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਲਈ। ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਡੀਐਨਏ ਘਟਕਾਂ ਦੀ ਉਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਵਰਤੋਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇਸ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੀ ਸਹਾਇਤਾ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਚਾਹੇ ਤੁਸੀਂ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਵੈਕਟਰ ਬਣਾਉਣ, ਜੀਨ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਬਣਾਉਣ ਜਾਂ ਰੁਟੀਨ ਸਬਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰ ਰਹੇ ਹੋ, ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਤੁਹਾਡੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਹਾਲਾਤਾਂ ਨੂੰ ਬਣਾਉਣ ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਸਫਲਤਾ ਦਰ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰੇਗਾ। ਆਪਣੇ ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਬਾਰੇ ਕੁਝ ਮੁੱਖ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਦਾਖਲ ਕਰਕੇ, ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਸਹੀ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ।
ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇੱਕ ਬੁਨਿਆਦੀ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਜੋੜੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਆਕਾਰਾਂ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰਤਾਵਾਂ ਦਾ ਖਿਆਲ ਰੱਖਦਾ ਹੈ। ਮੁੱਖ ਗਣਨਾ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੋੜੀਂਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਕੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਸਬੰਧਿਤ ਲੰਬਾਈਆਂ ਅਤੇ ਚਾਹੀਦੇ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਹੈ।
ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਨੈਨੋਗ੍ਰਾਮ ਵਿੱਚ) ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:
ਜਿੱਥੇ:
ਇੱਕ ਵਾਰੀ ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਹੋ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:
ਚਲੋ ਇੱਕ ਵਾਸਤਵਿਕ ਉਦਾਹਰਣ ਦੇ ਰਾਹੀਂ ਕੰਮ ਕਰੀਏ:
ਕਦਮ 1: ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
ਕਦਮ 2: ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
ਇਹ ਗਣਨਾ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਹਰ ਵੈਕਟਰ ਮੋਲੈਕੂਲ ਲਈ ਤਿੰਨ ਇੰਸਰਟ ਮੋਲੈਕੂਲ ਹਨ, ਜੋ ਸਫਲ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੇ ਮੌਕੇ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ।
ਸਾਡਾ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇਨਟੂਇਟਿਵ ਅਤੇ ਸਧਾਰਨ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਆਪਣੇ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਢੰਗਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਕਦਮਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ:
ਵੈਕਟਰ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾਖਲ ਕਰੋ:
ਇੰਸਰਟ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਾਖਲ ਕਰੋ:
ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਸੈਟ ਕਰੋ:
ਨਤੀਜੇ ਵੇਖੋ:
ਨਤੀਜੇ ਕਾਪੀ ਕਰੋ (ਵਿਕਲਪਿਕ):
ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਸਾਰੇ ਦਾਖਲਾਂ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨੰਬਰਾਂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵੈਰੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਚੈੱਕ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੁੱਲ ਵੋਲਿਊਮ ਲੋੜੀਂਦੇ ਡੀਐਨਏ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਲਈ ਯੋਗ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਕੋਈ ਗਲਤੀਆਂ ਪਾਈਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਮਦਦਗਾਰ ਗਲਤੀ ਸੁਨੇਹੇ ਤੁਹਾਨੂੰ ਦਾਖਲਾਂ ਨੂੰ ਠੀਕ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਨ ਦੇਣਗੇ।
ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਕਈ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਮਤੀ ਹੈ:
ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਕੇਸ ਮਿਆਰੀ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਖੋਜਕਰਤਾ ਜੀਨਾਂ ਜਾਂ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਪਲਾਸਮਿਡ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ:
ਸੰਸਥਾਨਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ, ਜਿੱਥੇ ਕਈ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ:
ਜਦੋਂ ਮੌਲਿਕ ਨਿਦਾਨ ਟੂਲ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਦੀ ਗੱਲ ਆਉਂਦੀ ਹੈ:
ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ:
ਜੀਨੋਮ ਸੰਪਾਦਨ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ:
ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਸਥਿਤੀਆਂ ਲਈ ਕੀਮਤੀ ਹੈ:
ਜਦੋਂ ਕਿ ਸਾਡਾ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਰਵਾਇਤੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਸਹੀ ਗਣਨਾਵਾਂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਕੁਝ ਵਿਕਲਪਿਕ ਤਰੀਕੇ ਹਨ:
ਗਿਬਸਨ ਅਸੈੰਬਲੀ: ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ-ਟਿਊਬ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਐਕਸੋਨੁਕਲੇਜ਼, ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਤੇ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਕੋਈ ਰਵਾਇਤੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਪਰ ਕੇਂਦਰਤਾਵਾਂ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਨੂੰ ਹਾਲੇ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।
ਗੋਲਡਨ ਗੇਟ ਅਸੈੰਬਲੀ: ਦਿਸ਼ਾ-ਵਿਹੀਨ, ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਅਸੈੰਬਲੀ ਲਈ ਟਾਈਪ ਆਈਐਸ ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸਾਰੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਮਾਤਰਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
SLIC (ਸਿਕਵੈਂਸ ਅਤੇ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਇੰਡਿਪੈਂਡੈਂਟ ਕਲੋਨਿੰਗ): ਇਕਸੋਨੁਕਲੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕਲ-ਸਟਰੈਂਡ ਓਵਰਹੈਂਗ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇਕੱਠੇ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਸਮਾਨ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਇਨ-ਫਿਊਜ਼ਨ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਵਪਾਰਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਜੋ 15 bp ਓਵਰਲੈਪ ਨਾਲ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਆਕਾਰਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਗੇਟਵੇ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੇ ਬਦਲੇ ਸਾਈਟ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਦਾਖਲ ਅਤੇ ਮੰਜ਼ਿਲ ਵੈਕਟਰਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਅੰਕੜਾ ਟੈਸਟਿੰਗ: ਕੁਝ ਲੈਬਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ (1:1, 3:1, 5:1, 10:1) ਨਾਲ ਕਈ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਸੈਟ ਕਰਨ ਦੀ ਪ੍ਰੀਫਰੈਂਸ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੰਰਚਨਾਵਾਂ ਲਈ ਕਿਹੜਾ ਚੰਗਾ ਹੈ।
ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ: ਵਪਾਰਕ ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਪੈਕੇਜ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵੈਕਟਰ ਐਨਟੀ ਅਤੇ ਸਨੈਪਜੀਨ ਵਿੱਚ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਹਨ ਜੋ ਵਾਧੂ ਫੀਚਰਾਂ ਨਾਲ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਸਾਈਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ।
ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾਵਾਂ ਦਾ ਵਿਕਾਸ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਹੈ, ਜੋ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟੈਕਨੋਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਾਂਤੀ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦਾ ਵਿਚਾਰ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਲਈ 1970 ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਪੈਦਾ ਹੋਇਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਪੌਲ ਬਰਗ, ਹਰਬਰਟ ਬੋਇਅਰ ਅਤੇ ਸਟੈਨਲੀ ਕੋਹੇਨ ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਰੀਕੰਬਿਨੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਕੰਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਸਮੇਂ, ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਬਹੁਤ ਹੱਦ ਤੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਨ, ਜਿੱਥੇ ਖੋਜਕਾਰ ਸਹੀ ਹਾਲਾਤਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਟ੍ਰਾਇਲ ਅਤੇ ਐਰਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਨ।
ਰਿਸਟਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਜ਼ ਦੀ ਖੋਜ ਨੇ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਕੱਟਣ ਅਤੇ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਨ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਟੂਲ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ। ਟੀ4 ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਜ਼, ਜੋ ਟੀ4 ਬੈਕਟੀਰਿਫੇਜ ਦੁਆਰਾ ਸੰਕ੍ਰਮਿਤ ਈ. ਕੋਲੀ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਮਿਆਰੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਬਣ ਗਿਆ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਬਲੰਟ ਅਤੇ ਕੋਹੀਸਿਵ ਅੰਤਾਂ ਨੂੰ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕਰਨ ਦੀ ਹੈ।
ਜਿਵੇਂ ਜਿਵੇਂ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਆਮ ਹੋਣ ਲੱਗੀ, ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਨੇ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਹੋਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤਾ। ਵੈਕਟਰ ਅਤੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦੀ ਮਹੱਤਤਾ ਸਪਸ਼ਟ ਹੋ ਗਈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਅੱਜ ਵੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਬੁਨਿਆਦੀ ਫਾਰਮੂਲਾ ਵਿਕਸਤ ਹੋਇਆ।
ਇਸ ਸਮੇਂ ਦੌਰਾਨ, ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਨੇ ਇਹ ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਵਧੇਰੇ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 3:1 ਤੋਂ 5:1 ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ) ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਿਆਰੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਗਿਆਨ ਪਹਿਲਾਂ ਲੈਬ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲਾਂ ਰਾਹੀਂ ਸਾਂਝਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਆਹਿਸਤਾ-ਆਹਿਸਤਾ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੇ ਮੈਨੂਅਲਾਂ ਅਤੇ ਪਾਠਕ੍ਰਮਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਗਿਆ।
2000 ਦੇ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਕੰਪਿਊਟੇਸ਼ਨਲ ਟੂਲਾਂ ਅਤੇ ਆਨਲਾਈਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰਾਂ ਦੇ ਆਗਮਨ ਨੇ ਸਹੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਲਈ ਹੋਰ ਸਹੀ ਬਣਾਇਆ। ਜਿਵੇਂ ਜਿਵੇਂ ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਦੀਆਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਹੋਰ ਸੁਧਰ ਗਈਆਂ, ਸਹੀ ਗਣਨਾਵਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੋ ਗਈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਕਈ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟਾਂ ਜਾਂ ਵੱਡੇ ਇੰਸਰਟਾਂ ਵਾਲੇ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰੋਜੈਕਟਾਂ ਲਈ।
ਅੱਜ, ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਗਣਨਾਵਾਂ ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਰਕਫਲੋਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਹਿੱਸਾ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਮਰਪਿਤ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇਹ ਖੋਜਕਾਰਾਂ ਨੂੰ ਆਪਣੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਵਧੀਆ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਬੁਨਿਆਦੀ ਫਾਰਮੂਲਾ ਬਹੁਤ ਹੱਦ ਤੱਕ ਬਦਲਿਆ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਬਾਰੇ ਸਾਡੀ ਸਮਝ ਸੁਧਰੀ ਹੈ।
ਗਿਬਸਨ ਅਸੈੰਬਲੀ ਅਤੇ ਗੋਲਡਨ ਗੇਟ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਰਗੀਆਂ ਵਿਕਲਪਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਉਭਾਰ ਨੇ ਨਵੇਂ ਗਣਨਾ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਪਰ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਦਾ ਬੁਨਿਆਦੀ ਸੰਕਲਪ ਇਨ੍ਹਾਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।
ਇੱਥੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਿੰਗ ਭਾਸ਼ਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਦੇ ਨਿਰਮਾਣ ਹਨ:
1' Excel VBA ਫੰਕਸ਼ਨ ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਲਈ
2Function CalculateInsertAmount(vectorAmount As Double, vectorLength As Double, insertLength As Double, molarRatio As Double) As Double
3 ' ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ng ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
4 CalculateInsertAmount = vectorAmount * (insertLength / vectorLength) * molarRatio
5End Function
6
7Function CalculateVectorVolume(vectorAmount As Double, vectorConcentration As Double) As Double
8 ' ਵੈਕਟਰ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
9 CalculateVectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration
10End Function
11
12Function CalculateInsertVolume(insertAmount As Double, insertConcentration As Double) As Double
13 ' ਇੰਸਰਟ ਵੋਲਿਊਮ ਨੂੰ μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
14 CalculateInsertVolume = insertAmount / insertConcentration
15End Function
16
17Function CalculateBufferVolume(totalVolume As Double, vectorVolume As Double, insertVolume As Double) As Double
18 ' ਬਫਰ/ਪਾਣੀ ਦਾ ਵੋਲਿਊਮ μL ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
19 CalculateBufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume
20End Function
21
22' ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਉਦਾਹਰਣ:
23' =CalculateInsertAmount(50, 3000, 1000, 3)
241def calculate_ligation_volumes(vector_concentration, vector_length, insert_concentration,
2 insert_length, molar_ratio, total_volume, vector_amount=50):
3 """
4 ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਲਈ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ।
5
6 ਪੈਰਾਮੀਟਰ:
7 vector_concentration (float): ng/μL ਵਿੱਚ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਕੇਂਦਰਤਾ
8 vector_length (float): ਬੇਸ ਪੇਅਰਾਂ (bp) ਵਿੱਚ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੰਬਾਈ
9 insert_concentration (float): ng/μL ਵਿੱਚ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਕੇਂਦਰਤਾ
10 insert_length (float): ਬੇਸ ਪੇਅਰਾਂ (bp) ਵਿੱਚ ਇੰਸਰਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੰਬਾਈ
11 molar_ratio (float): ਇੰਸਰਟ:ਵੈਕਟਰ ਦਾ ਚਾਹੀਦਾ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ
12 total_volume (float): μL ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ
13 vector_amount (float): ng ਵਿੱਚ ਵਰਤਣ ਲਈ ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਡਿਫਾਲਟ: 50)
14
15 ਵਾਪਸ ਕਰਦਾ ਹੈ:
16 dict: ਗਣਨਾ ਕੀਤੇ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸਮੇਤਨ ਵਾਲਾ ਡਿਕਸ਼ਨਰੀ
17 """
18 # ਵੈਕਟਰ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
19 vector_volume = vector_amount / vector_concentration
20
21 # ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
22 vector_length_kb = vector_length / 1000
23 insert_length_kb = insert_length / 1000
24 insert_amount = (vector_amount * insert_length_kb / vector_length_kb) * molar_ratio
25
26 # ਇੰਸਰਟ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
27 insert_volume = insert_amount / insert_concentration
28
29 # ਬਫਰ/ਪਾਣੀ ਦੇ ਵੋਲਿਊਮ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
30 buffer_volume = total_volume - vector_volume - insert_volume
31
32 return {
33 "vector_volume": round(vector_volume, 2),
34 "insert_volume": round(insert_volume, 2),
35 "buffer_volume": round(buffer_volume, 2),
36 "insert_amount": round(insert_amount, 2),
37 "vector_amount": vector_amount
38 }
39
40# ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
41result = calculate_ligation_volumes(
42 vector_concentration=50,
43 vector_length=3000,
44 insert_concentration=25,
45 insert_length=1000,
46 molar_ratio=3,
47 total_volume=20
48)
49
50print(f"ਵੈਕਟਰ: {result['vector_volume']} μL ({result['vector_amount']} ng)")
51print(f"ਇੰਸਰਟ: {result['insert_volume']} μL ({result['insert_amount']} ng)")
52print(f"ਬਫਰ: {result['buffer_volume']} μL")
53print(f"ਕੁੱਲ: 20 μL")
541function calculateLigationVolumes(vectorConcentration, vectorLength, insertConcentration,
2 insertLength, molarRatio, totalVolume, vectorAmount = 50) {
3 // ਲੰਬਾਈਆਂ ਨੂੰ kb ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
4 const vectorLengthKb = vectorLength / 1000;
5 const insertLengthKb = insertLength / 1000;
6
7 // ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
8 const insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
9
10 // ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
11 const vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
12 const insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
13 const bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
14
15 return {
16 vectorVolume: parseFloat(vectorVolume.toFixed(2)),
17 insertVolume: parseFloat(insertVolume.toFixed(2)),
18 bufferVolume: parseFloat(bufferVolume.toFixed(2)),
19 insertAmount: parseFloat(insertAmount.toFixed(2)),
20 vectorAmount: vectorAmount
21 };
22}
23
24// ਉਦਾਹਰਣ ਵਰਤੋਂ
25const result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
26console.log(`ਵੈਕਟਰ: ${result.vectorVolume} μL (${result.vectorAmount} ng)`);
27console.log(`ਇੰਸਰਟ: ${result.insertVolume} μL (${result.insertAmount} ng)`);
28console.log(`ਬਫਰ: ${result.bufferVolume} μL`);
29console.log(`ਕੁੱਲ: 20 μL`);
301public class DNALigationCalculator {
2 public static class LigationResult {
3 public final double vectorVolume;
4 public final double insertVolume;
5 public final double bufferVolume;
6 public final double insertAmount;
7 public final double vectorAmount;
8
9 public LigationResult(double vectorVolume, double insertVolume, double bufferVolume,
10 double insertAmount, double vectorAmount) {
11 this.vectorVolume = vectorVolume;
12 this.insertVolume = insertVolume;
13 this.bufferVolume = bufferVolume;
14 this.insertAmount = insertAmount;
15 this.vectorAmount = vectorAmount;
16 }
17 }
18
19 public static LigationResult calculateLigationVolumes(
20 double vectorConcentration, double vectorLength,
21 double insertConcentration, double insertLength,
22 double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount) {
23
24 // ਲੰਬਾਈਆਂ ਨੂੰ kb ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
25 double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
26 double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
27
28 // ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
29 double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
30
31 // ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
32 double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
33 double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
34 double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
35
36 // 2 ਦਸ਼ਮਲਵ ਸਥਾਨਾਂ ਤੱਕ ਗੋਲ ਕਰੋ
37 vectorVolume = Math.round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
38 insertVolume = Math.round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
39 bufferVolume = Math.round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
40 insertAmount = Math.round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
41
42 return new LigationResult(vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount);
43 }
44
45 public static void main(String[] args) {
46 LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20, 50);
47
48 System.out.printf("ਵੈਕਟਰ: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.vectorVolume, result.vectorAmount);
49 System.out.printf("ਇੰਸਰਟ: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.insertVolume, result.insertAmount);
50 System.out.printf("ਬਫਰ: %.2f μL%n", result.bufferVolume);
51 System.out.printf("ਕੁੱਲ: 20 μL%n");
52 }
53}
541#include <iostream>
2#include <cmath>
3#include <iomanip>
4
5struct LigationResult {
6 double vectorVolume;
7 double insertVolume;
8 double bufferVolume;
9 double insertAmount;
10 double vectorAmount;
11};
12
13LigationResult calculateLigationVolumes(
14 double vectorConcentration, double vectorLength,
15 double insertConcentration, double insertLength,
16 double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount = 50.0) {
17
18 // ਲੰਬਾਈਆਂ ਨੂੰ kb ਵਿੱਚ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
19 double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
20 double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
21
22 // ਲੋੜੀਂਦੀ ਇੰਸਰਟ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
23 double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
24
25 // ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ
26 double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
27 double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
28 double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
29
30 // 2 ਦਸ਼ਮਲਵ ਸਥਾਨਾਂ ਤੱਕ ਗੋਲ ਕਰੋ
31 vectorVolume = std::round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
32 insertVolume = std::round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
33 bufferVolume = std::round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
34 insertAmount = std::round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
35
36 return {vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount};
37}
38
39int main() {
40 LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
41
42 std::cout << std::fixed << std::setprecision(2);
43 std::cout << "ਵੈਕਟਰ: " << result.vectorVolume << " μL (" << result.vectorAmount << " ng)" << std::endl;
44 std::cout << "ਇੰਸਰਟ: " << result.insertVolume << " μL (" << result.insertAmount << " ng)" << std::endl;
45 std::cout << "ਬਫਰ: " << result.bufferVolume << " μL" << std::endl;
46 std::cout << "ਕੁੱਲ: 20 μL" << std::endl;
47
48 return 0;
49}
50ਇੰਸਰਟ ਅਤੇ ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 3:1 ਤੋਂ 5:1 ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ:
ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਈ ਕਾਰਕ ਹਨ ਜੋ ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਹਨ:
ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 50-100 ng ਵੈਕਟਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਮਿਆਰੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ। ਜੇਕਰ ਵੱਡਾ ਵੈਕਟਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾਵੇ ਤਾਂ ਇਸ ਨਾਲ ਕੱਟੇ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਕੱਟੇ ਹੋਏ ਵੈਕਟਰ ਦਾ ਪਿਛੋਕੜ ਵਧ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਵਰਤਣ ਨਾਲ ਬਦਲਾਅ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਘਟ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਕ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ, ਤੁਸੀਂ ਇਸ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਹਾਂ। ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਟੀਕੀ-ਐਂਡ (ਕੋਹੀਸਿਵ-ਐਂਡ) ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਕੁਸ਼ਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ, ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ:
ਕਈ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਅਸੈੰਬਲੀ ਲਈ:
ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਸ਼ਨ (5' ਫਾਸਫੇਟ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣਾ) ਆਪਣੇ ਆਪ ਨੂੰ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਪਰ ਇਹ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਬਦਲਦਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਡੀਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟ ਕੀਤੇ ਵੈਕਟਰਾਂ ਲਈ:
ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 10 μL ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਉਚਿਤ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬੇਹਵਾਰੀ ਦੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਡੀਆਂ ਗਣਨਾਵਾਂ ਲੋੜੀਂਦੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵੋਲਿਊਮਾਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਨ, ਤਾਂ ਤੁਹਾਡੇ ਕੋਲ ਕਈ ਵਿਕਲਪ ਹਨ:
ਉਤਕ੍ਰਿਟ ਇੰਕਿਬੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਕਿਸਮ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦਾ ਹੈ:
ਹਾਂ, ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ -20°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਬਦਲਾਅ ਲਈ ਦੁਬਾਰਾ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਹਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥਾਅ ਸਾਈਕਲ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਨਤੀਜਿਆਂ ਲਈ:
ਸੈਂਬਰੂਕ ਜੇ, ਰੱਸਲ ਡਬਲਯੂਡੀ। (2001)। ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਮੈਨੂਅਲ (3ਵਾਂ ਸੰਸਕਰਣ)। ਕੋਲਡ ਸਪ੍ਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ।
ਗ੍ਰੀਨ ਐਮਆਰ, ਸੈਂਬਰੂਕ ਜੇ। (2012)। ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ: ਇੱਕ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਮੈਨੂਅਲ (4ਵਾਂ ਸੰਸਕਰਣ)। ਕੋਲਡ ਸਪ੍ਰਿੰਗ ਹਾਰਬਰ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਪ੍ਰੈਸ।
ਐਂਗਲਰ ਸੀ, ਕੰਡੀਜ਼ੀਆ ਆਰ, ਮੈਰਿਲੋਨਟ ਐਸ। (2008)। ਇੱਕ ਪੋਟ, ਇੱਕ ਕਦਮ, ਪ੍ਰਿਸ਼ਨ ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਰੀਕਾ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਥਰੋਟ ਸਮਰੱਥਾ ਹੈ। PLoS ONE, 3(11), e3647. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0003647
ਗਿਬਸਨ ਡੀਜੀ, ਯੰਗ ਐਲ, ਚੁਆਂਗ ਆਰਵਾਈ, ਵੇਂਟਰ ਜੇਸੀ, ਹੱਚਿਸਨ ਸੀਏ, ਸਮਿਥ ਐਚਓ। (2009)। ਸੈਂਕੜੇ ਕਿਲੋਬੇਸ ਤੱਕ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਅਸੈੰਬਲੀ। ਨੇਚਰ ਮੈਥਡਸ, 6(5), 343-345. https://doi.org/10.1038/nmeth.1318
ਐਸਲਾਨਿਡਿਸ ਸੀ, ਦੇ ਜੋਂਗ ਪੀਜੇ। (1990)। ਪੀਸੀਐਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ-ਇੰਡਿਪੈਂਡੈਂਟ ਕਲੋਨਿੰਗ (LIC-PCR)। ਨਕਲੀ ਐਸਿਡ ਰਿਸਰਚ, 18(20), 6069-6074. https://doi.org/10.1093/nar/18.20.6069
ਜ਼ਿਮਰਮੈਨ ਐਸਬੀ, ਫੀਫਰ ਭੀ। (1983)। ਮੈਕ੍ਰੋਮੋਲਿਕੁਲਰ ਕ੍ਰਾਊਡਿੰਗ ਬਲੰਟ-ਐਂਡ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਨੈਸ਼ਨਲ ਅਕੈਡਮੀ ਆਫ਼ ਸਾਇੰਸਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਨ, 80(19), 5852-5856. https://doi.org/10.1073/pnas.80.19.5852
ਐਡਜੀਨ - ਮੌਲਿਕ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਹਵਾਲਾ। https://www.addgene.org/mol-bio-reference/
ਨਿਊ ਇੰਗਲੈਂਡ ਬਾਇਓਲੈਬਸ (NEB) - ਡੀਐਨਏ ਲਾਈਗੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ। https://www.neb.com/protocols/0001/01/01/dna-ligation-protocol-with-t4-dna-ligase-m0202
ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ - ਮੌਲਿਕ ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਕਨੀਕੀ ਹਵਾਲਾ। https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/cloning-learning-center.html
ਪ੍ਰੋਮੇਗਾ - ਕਲੋਨਿੰਗ ਤਕਨੀਕੀ ਮੈਨੂਅਲ। https://www.promega.com/resources/product-guides-and-selectors/protocols-and-applications-guide/cloning/
ਆਪਣੇ ਕਾਰਜ ਦੇ ਲਈ ਵਰਤਣ ਯੋਗ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਹੋਰ ਸੰਦੇਸ਼ ਦੀ ਖੋਜ ਕਰੋ