ਐਬਜ਼ੋਰਬੈਂਸ ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ (A260) ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਿਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਮਾਂਜਸਤਾ ਵਾਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀਆਂ ਗਿਣਤੀਆਂ ਹਨ। ਮੋਲੈਕੁਲਰ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਲੈਬਾਂ ਅਤੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਖੋਜ ਲਈ ਅਹਿਮ ਟੂਲ।
ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:
ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਇੱਕ ਅਹਮ ਆਨਲਾਈਨ ਟੂਲ ਹੈ ਜੋ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜਿਸਟ, ਜੈਨੇਟਿਸਟ ਅਤੇ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀ ਟੈਕਨੀਸ਼ੀਅਨ ਨੂੰ ਸਹੀ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨੂੰ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ ਤੋਂ ਨਿਕਾਲਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਮੁਫਤ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਮਿਆਰੀ A260 ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਯੂਵੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਮਾਪਾਂ ਨੂੰ ng/μL ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮੁੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਸਕੇ।
ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਲੈਬੋਰੇਟਰੀਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੂਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ, ਜੋ PCR, ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ, ਕਲੋਨਿੰਗ ਅਤੇ ਹੋਰ ਮੌਲਿਕ ਤਕਨੀਕਾਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇੱਕ ਅਹਮ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਯੰਤਰਣ ਕਦਮ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਾਡਾ ਕੈਲਕੁਲੇਟਰ ਹੱਥ ਨਾਲ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਤੁਹਾਡੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਮਾਤਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਕਾਲਣ ਵੇਲੇ ਗਲਤੀਆਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਬੀਅਰ-ਲੈਂਬਰਟ ਕਾਨੂੰਨ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਹਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇੱਕ ਹੱਲ ਦੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ ਉਸ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਅਬਜ਼ਾਰਬਿੰਗ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਅਤੇ ਹੱਲ ਵਿੱਚ ਰੋਸ਼ਨੀ ਦੇ ਪਾਥ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਸਿੱਧੇ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਲਈ, 1.0 ਦੀ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ 260nm (A260) 'ਤੇ 1cm ਪਾਥ ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੇ ਕੂਵੇਟ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 50 ng/μL ਦੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।
ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ:
ਜਿੱਥੇ:
ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਫਿਰ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ:
260nm 'ਤੇ ਅਬਜ਼ਰਬੈਂਸ (A260):
ਬਦਲਾਅ ਫੈਕਟਰ (50):
ਡਿਲੂਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ:
ਵਾਲਿਊਮ:
ਆਪਣੇ A260 ਪੜ੍ਹਾਈਆਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇਸ ਸਧਾਰਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਾ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ:
ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਕਈ ਮੌਲਿਕ ਬਾਇਓਲੋਜੀ ਅਤੇ ਖੋਜ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਅਹਮ ਹੈ:
ਡੀਐਨਏ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਵੈਕਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਈਗੇਟ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਜਾਣਨਾ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਇਨਸਰਟ-ਟੂ-ਵੈਕਟਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰਮੇਸ਼ਨ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਧਦੀ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ, ਇਨਸਰਟ ਤੋਂ ਵੈਕਟਰ ਦਾ 3:1 ਮੋਲੇਰ ਅਨੁਪਾਤ ਅਕਸਰ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਨਤੀਜੇ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਦੋਹਾਂ ਘਟਕਾਂ ਦੀ ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
PCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1-10 ng ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਵਧੀਆ ਵਧਾਉਣ ਲਈ। ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲਤਾ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਦਕਿ ਬਹੁਤ ਵੱਧ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਮਾਤਰਕ PCR (qPCR) ਲਈ, ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਸਹੀ ਮਿਆਰੀ ਵਕਰਾਂ ਅਤੇ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਮਾਪਣ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
NGS ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਇਨਪੁਟ ਮਾਤਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1-500 ng ਦੇ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ। ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣਾ ਸਫਲ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਮਲਟੀਪਲੈਕਸਡ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਚਲਾਉਣ ਵਿੱਚ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਸੰਤੁਲਿਤ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਲਈ ਅਹਮ ਹੈ।
ਯੂਕੈਰੀਓਟਿਕ ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਨ ਵੇਲੇ, ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਕੋਸ਼ਿਕਾ ਦੇ ਕਿਸਮ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 6-ਵੈੱਲ ਪਲੇਟ ਫਾਰਮੈਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਵੈੱਲ 0.5-5 μg ਪਲਾਸਮਿਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਸਟੈਂਡਰਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਸਹੀ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਮਾਪਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਡੀਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਅਕਸਰ ਸੀਮਿਤ ਅਤੇ ਕੀਮਤੀ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਸਹੀ ਮਾਪਣ ਫੋਰੈਂਸਿਕ ਵਿਗਿਆਨੀਆਂ ਨੂੰ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਿੰਗ ਲਈ ਯੋਗ ਡੀਐਨਏ ਮੌਜੂਦ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਸਟੈਂਡਰਡਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ।
ਰਿਸਟ੍ਰਿਕਸ਼ਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ μg ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਸਹੀ ਡੀਐਨਏ ਸੰਕੇਂਦ੍ਰਤਾ ਜਾਣਨਾ ਐਂਜ਼ਾਈਮ-ਟੂ-ਡੀਐਨਏ ਅਨੁਪਾਤਾਂ ਲਈ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਡਾਈਜੈਸ਼ਨ ਬਿਨਾਂ ਸਟਾਰ ਗਤੀਵਿਧੀ (ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕੱਟਣਾ) ਦੇ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਜਦੋਂ ਕਿ ਯੂਵੀ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰੀ ਡੀਐਨਏ ਮਾਪਣ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਵਿਧੀ ਹੈ, ਕਈ ਵਿਕਲਪ ਮੌਜੂਦ ਹਨ:
ਫਲੂਓਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਵਿਧੀਆਂ:
ਅਗਰੋਜ਼ ਜੈਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ:
ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ PCR:
ਆਪਣੇ ਕਾਰਜ ਦੇ ਲਈ ਵਰਤਣ ਯੋਗ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਹੋਰ ਸੰਦੇਸ਼ ਦੀ ਖੋਜ ਕਰੋ