🛠️

Whiz Tools

เครื่องคำนวณปริมาณตัวอย่างดูดซับ BCA สำหรับโปรโตคอลในห้องปฏิบัติการ

คำนวณปริมาณตัวอย่างที่แม่นยำตามการอ่านดูดซับของการทดสอบ BCA และมวลโปรตีนที่ต้องการ จำเป็นสำหรับการโหลดโปรตีนที่สม่ำเสมอในเวสเทิร์นบลอตและการใช้งานในห้องปฏิบัติการอื่นๆ

เครื่องคำนวณปริมาตรตัวอย่าง BCA Absorbance

เครื่องมือนี้คำนวณปริมาตรตัวอย่างที่ต้องการตามผลการดูดซึม BCA และมวลตัวอย่าง ป้อนค่าการดูดซึมและมวลตัวอย่างสำหรับแต่ละตัวอย่างเพื่อคำนวณปริมาตรตัวอย่างที่เกี่ยวข้อง

standardCurveTitle

curveTypeStandard
curveTypeEnhanced
curveTypeMicro
curveTypeCustom

ข้อมูลตัวอย่าง

ตัวอย่าง 1

Copy
N/A μL

สูตรการคำนวณ

ปริมาตรตัวอย่างคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:

ปริมาตรตัวอย่าง (μL) = มวลตัวอย่าง (μg) / ความเข้มข้นของโปรตีน (μg/μL)
usageTipsTitle

• tipAbsorbanceRange

• tipSampleMass

• tipSampleVolume

• tipStandardCurve

📚

เอกสารประกอบการใช้งาน

BCA แคลคูลเลเตอร์ปริมาณตัวอย่างการดูดซึม

บทนำ

BCA แคลคูลเลเตอร์ปริมาณตัวอย่างการดูดซึมเป็นเครื่องมือเฉพาะที่ออกแบบมาเพื่อช่วยนักวิจัยและเทคนิคด้านห้องปฏิบัติการในการกำหนดปริมาณตัวอย่างที่เหมาะสมสำหรับการทดลองตามผลการทดสอบ BCA (กรดไบซินโคโนอินิก) แคลคูลเลเตอร์นี้จะนำการอ่านค่าการดูดซึมจากการทดสอบ BCA ของคุณและมวลตัวอย่างที่คุณต้องการมาใช้ในการคำนวณปริมาณที่แม่นยำที่จำเป็นสำหรับการโหลดโปรตีนอย่างสม่ำเสมอในแอปพลิเคชันต่างๆ เช่น การตรวจสอบเวสเทิร์น (western blotting) การทดสอบเอนไซม์ และเทคนิคการวิเคราะห์โปรตีนอื่นๆ

การทดสอบ BCA เป็นหนึ่งในวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดในการวัดปริมาณโปรตีนในห้องปฏิบัติการชีวเคมีและชีววิทยโมเลกุล โดยการวัดการดูดซึมของตัวอย่างโปรตีนของคุณและเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐาน คุณสามารถกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนได้อย่างแม่นยำ แคลคูลเลเตอร์ของเราช่วยทำให้กระบวนการนี้ง่ายขึ้นโดยการแปลงการอ่านค่าการดูดซึมเป็นปริมาณตัวอย่างที่แน่นอนที่จำเป็นสำหรับการทดลองของคุณ

ความเข้าใจเกี่ยวกับการทดสอบ BCA และการคำนวณปริมาณตัวอย่าง

การทดสอบ BCA คืออะไร?

การทดสอบ Bicinchoninic Acid (BCA) เป็นการทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการกำหนดความเข้มข้นรวมของโปรตีนในสารละลาย หลักการของการทดสอบนี้ขึ้นอยู่กับการสร้างของซับซ้อน Cu²⁺-โปรตีนภายใต้สภาวะด่าง ตามด้วยการลด Cu²⁺ เป็น Cu¹⁺ ปริมาณการลดลงนี้มีความสัมพันธ์โดยตรงกับโปรตีนที่มีอยู่ BCA จะสร้างซับซ้อนสีม่วงกับ Cu¹⁺ ในสภาวะด่าง ซึ่งให้พื้นฐานในการตรวจสอบการลดลงของทองแดงโดยโปรตีน

ความเข้มของสีม่วงจะเพิ่มขึ้นตามสัดส่วนกับความเข้มข้นของโปรตีน ซึ่งสามารถวัดได้โดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่ประมาณ 562 นาโนเมตร การอ่านค่าการดูดซึมจะถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานเพื่อกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างที่ไม่รู้จัก

สูตรสำหรับการคำนวณปริมาณตัวอย่าง

สูตรพื้นฐานสำหรับการคำนวณปริมาณตัวอย่างจากผลการดูดซึม BCA คือ:

Sample Volume (μL)=Sample Mass (μg)Protein Concentration (μg/μL)\text{Sample Volume (μL)} = \frac{\text{Sample Mass (μg)}}{\text{Protein Concentration (μg/μL)}}

โดยที่:

  • Sample Volume คือปริมาณของตัวอย่างที่จำเป็น (ในไมโครลิตร, μL)
  • Sample Mass คือปริมาณโปรตีนที่ต้องการใช้ (ในไมโครกรัม, μg)
  • Protein Concentration ได้มาจากการอ่านค่าการดูดซึม BCA (ใน μg/μL)

ความเข้มข้นของโปรตีนจะถูกคำนวณจากการอ่านค่าการดูดซึมโดยใช้สมการเส้นโค้งมาตรฐาน:

Protein Concentration (μg/μL)=Slope×Absorbance+Intercept\text{Protein Concentration (μg/μL)} = \text{Slope} \times \text{Absorbance} + \text{Intercept}

สำหรับการทดสอบ BCA มาตรฐาน ค่าความชันทั่วไปอยู่ที่ประมาณ 2.0 และค่าตัดขวางมักจะใกล้เคียงกับศูนย์ แม้ว่าค่าต่างๆ เหล่านี้อาจแตกต่างกันไปตามเงื่อนไขการทดสอบเฉพาะของคุณและเส้นโค้งมาตรฐาน

วิธีการใช้ BCA แคลคูลเลเตอร์ปริมาณตัวอย่างการดูดซึม

แคลคูลเลเตอร์ของเราช่วยทำให้กระบวนการกำหนดปริมาณตัวอย่างจากผลการทดสอบ BCA ง่ายขึ้น ทำตามขั้นตอนเหล่านี้เพื่อให้ได้การคำนวณที่แม่นยำ:

  1. ป้อนข้อมูลตัวอย่าง:

    • ให้ชื่อสำหรับตัวอย่างของคุณ (ไม่บังคับแต่ช่วยในการติดตามตัวอย่างหลายๆ ตัว)
    • ป้อนการอ่านค่าการดูดซึม BCA จากสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ของคุณ
    • ป้อนมวลตัวอย่างที่คุณต้องการ (ปริมาณโปรตีนที่คุณต้องการใช้ใน μg)

  2. เลือกประเภทเส้นโค้งมาตรฐาน:

    • มาตรฐาน (ค่าเริ่มต้น): ใช้พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน BCA ทั่วไป
    • เพิ่มความไว: สำหรับโปรโตคอลที่มีความไวสูง
    • ไมโคร: สำหรับโปรโตคอลไมโครเพลต
    • กำหนดเอง: อนุญาตให้คุณป้อนค่าความชันและค่าตัดขวางของคุณเอง

  3. ดูผลลัพธ์:

    • แคลคูลเลเตอร์จะแสดงปริมาณตัวอย่างที่จำเป็นในไมโครลิตรทันที
    • ผลลัพธ์จะแสดงในตารางสรุปเพื่อความสะดวกในการอ้างอิง
    • สำหรับตัวอย่างหลายตัว คุณสามารถเพิ่มข้อมูลเพิ่มเติมและเปรียบเทียบผลลัพธ์

  4. คัดลอกหรือส่งออกผลลัพธ์:

    • ใช้ปุ่มคัดลอกเพื่อถ่ายโอนผลลัพธ์ไปยังสมุดบันทLaboratory หรือแอปพลิเคชันอื่นๆ
    • การคำนวณทั้งหมดสามารถบันทึกไว้สำหรับการอ้างอิงในอนาคต

ตัวอย่างทีละขั้นตอน

มาทำตามตัวอย่างที่เป็นรูปธรรมกัน:

  1. คุณได้ทำการทดสอบ BCA และได้การอ่านค่าการดูดซึม 0.75 สำหรับตัวอย่างโปรตีนของคุณ
  2. คุณต้องการโหลดโปรตีน 20 μg สำหรับการตรวจสอบเวสเทิร์น
  3. โดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน (ความชัน = 2.0, ค่าตัดขวาง = 0):
    • ความเข้มข้นของโปรตีน = 2.0 × 0.75 + 0 = 1.5 μg/μL
    • ปริมาณตัวอย่างที่จำเป็น = 20 μg ÷ 1.5 μg/μL = 13.33 μL

หมายความว่าคุณควรโหลด 13.33 μL ของตัวอย่างของคุณเพื่อให้ได้โปรตีน 20 μg

ความเข้าใจเกี่ยวกับผลลัพธ์

แคลคูลเลเตอร์ให้ข้อมูลที่สำคัญหลายประการ:

  1. ความเข้มข้นของโปรตีน: คำนวณจากการอ่านค่าการดูดซึมโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานที่เลือก แสดงถึงปริมาณโปรตีนต่อหน่วยปริมาตรในตัวอย่างของคุณ (μg/μL)

  2. ปริมาณตัวอย่าง: ปริมาณของตัวอย่างที่มีโปรตีนตามที่คุณต้องการ ปริมาณนี้คือสิ่งที่คุณจะใช้เมื่อเตรียมการทดลองของคุณ

  3. คำเตือนและข้อแนะนำ: แคลคูลเลเตอร์อาจให้คำเตือนสำหรับ:

    • การอ่านค่าการดูดซึมที่สูงมาก (>3.0) ที่อาจอยู่นอกช่วงเชิงเส้นของการทดสอบ
    • การอ่านค่าการดูดซึมที่ต่ำมาก (<0.1) ที่อาจอยู่ใกล้กับขีดจำกัดการตรวจจับ
    • ปริมาณที่คำนวณได้ที่มีขนาดใหญ่เกินไป (>1000 μL) หรือเล็กเกินไป (<1 μL)

การใช้งานและกรณีการใช้

การเตรียมตัวอย่างสำหรับการตรวจสอบเวสเทิร์น

หนึ่งในการใช้งานที่พบบ่อยที่สุดสำหรับแคลคูลเลเตอร์นี้คือการเตรียมตัวอย่างสำหรับการตรวจสอบเวสเทิร์น การโหลดโปรตีนอย่างสม่ำเสมอเป็นสิ่งสำคัญสำหรับผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ในการตรวจสอบเวสเทิร์น และแคลคูลเลเตอร์นี้ช่วยให้คุณโหลดโปรตีนในปริมาณเท่ากันสำหรับแต่ละตัวอย่าง แม้ว่าความเข้มข้นจะต่างกัน

ขั้นตอนการทำงาน:

  1. ทำการทดสอบ BCA บนตัวอย่างโปรตีนทั้งหมดของคุณ
  2. ตัดสินใจเกี่ยวกับปริมาณโปรตีนที่สม่ำเสมอที่จะโหลด (โดยทั่วไป 10-50 μg)
  3. ใช้แคลคูลเลเตอร์เพื่อกำหนดปริมาณที่จำเป็นสำหรับแต่ละตัวอย่าง
  4. เพิ่มปริมาณตัวอย่างที่คำนวณได้ลงในบัฟเฟอร์ตัวอย่างและสารลด
  5. โหลดปริมาณที่คำนวณได้ลงในเจลของคุณ

การทดสอบเอนไซม์

สำหรับการทดสอบเอนไซม์ มักจำเป็นต้องใช้ปริมาณโปรตีนที่เฉพาะเจาะจงเพื่อทำให้เงื่อนไขการตอบสนองเป็นมาตรฐานในตัวอย่างหรือการทดลองที่แตกต่างกัน

ขั้นตอนการทำงาน:

  1. กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนโดยใช้การทดสอบ BCA
  2. คำนวณปริมาณที่จำเป็นเพื่อให้ได้ปริมาณโปรตีนที่คุณต้องการ
  3. เพิ่มปริมาณนี้ลงในส่วนผสมการตอบสนองของคุณ
  4. ดำเนินการทดสอบเอนไซม์ของคุณ

การทดลองการตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกัน

ในการทดลองการตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกัน (IP) การเริ่มต้นด้วยปริมาณโปรตีนที่สม่ำเสมอเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการเปรียบเทียบผลลัพธ์ข้ามเงื่อนไขที่แตกต่างกัน

ขั้นตอนการทำงาน:

  1. วัดความเข้มข้นของโปรตีนของไลเซตเซลล์หรือตัวอย่างเนื้อเยื่อโดยใช้การทดสอบ BCA
  2. คำนวณปริมาณที่จำเป็นเพื่อให้ได้ปริมาณโปรตีนที่เท่ากัน (โดยทั่วไป 500-1000 μg)
  3. ปรับตัวอย่างทั้งหมดให้มีปริมาณเท่ากันด้วยบัฟเฟอร์ไลเซส
  4. ดำเนินการกับการบ่มแอนติบอดีและการตกตะกอน

การทำให้โปรตีนบริสุทธิ์

ในระหว่างการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ มักจำเป็นต้องติดตามความเข้มข้นของโปรตีนและคำนวณผลผลิตในขั้นตอนที่แตกต่างกัน

ขั้นตอนการทำงาน:

  1. เก็บตัวอย่างในระหว่างการทำให้บริสุทธิ์
  2. ทำการทดสอบ BCA บนเฟรคชั่นที่เลือก
  3. คำนวณความเข้มข้นของโปรตีนและปริมาณโปรตีนรวม
  4. กำหนดปริมาณที่จำเป็นสำหรับแอปพลิเคชันถัดไป

ฟีเจอร์ขั้นสูงและข้อพิจารณา

เส้นโค้งมาตรฐานที่กำหนดเอง

ในขณะที่แคลคูลเลเตอร์ให้พารามิเตอร์เริ่มต้นสำหรับการทดสอบ BCA มาตรฐาน คุณยังสามารถป้อนค่าที่กำหนดเองได้หากคุณได้สร้างเส้นโค้งมาตรฐานของคุณเอง ซึ่งเป็นสิ่งที่มีประโยชน์โดยเฉพาะเมื่อ:

  • ทำงานกับตัวอย่างโปรตีนที่ไม่เป็นมาตรฐาน
  • ใช้โปรโตคอล BCA ที่ปรับเปลี่ยน
  • ทำงานในสภาวะที่อาจรบกวนการทดสอบ

ในการใช้เส้นโค้งมาตรฐานที่กำหนดเอง:

  1. เลือก "กำหนดเอง" จากตัวเลือกเส้นโค้งมาตรฐาน
  2. ป้อนค่าความชันและค่าตัดขวางของคุณ
  3. แคลคูลเลเตอร์จะใช้ค่าดังกล่าวสำหรับการคำนวณทั้งหมดถัดไป

การจัดการกับตัวอย่างหลายตัว

แคลคูลเลเตอร์อนุญาตให้คุณเพิ่มตัวอย่างหลายตัวและคำนวณปริมาณของพวกเขาในเวลาเดียวกัน ซึ่งเป็นสิ่งที่มีประโยชน์โดยเฉพาะเมื่อเตรียมตัวอย่างสำหรับการทดลองที่ต้องการการโหลดโปรตีนอย่างสม่ำเสมอข้ามเงื่อนไขต่างๆ

ประโยชน์ของการประมวลผลแบบกลุ่ม:

  • ประหยัดเวลาโดยการคำนวณปริมาณทั้งหมดในครั้งเดียว
  • รับประกันความสม่ำเสมอในตัวอย่างทั้งหมดของคุณ
  • เปรียบเทียบความเข้มข้นของโปรตีนระหว่างตัวอย่างได้อย่างง่ายดาย
  • ระบุค่าผิดปกติหรือข้อผิดพลาดในการวัดที่อาจเกิดขึ้น

การจัดการกับกรณีขอบ

การอ่านค่าการดูดซึมที่สูงเกินไป

หากการอ่านค่าการดูดซึมของคุณสูงกว่า 2.0 อาจอยู่นอกช่วงเชิงเส้นของการทดสอบ BCA ในกรณีเช่นนี้:

  1. เจือจางตัวอย่างของคุณและทำการทดสอบ BCA ใหม่
  2. ทางเลือกอื่น ใช้ระบบการเตือนของแคลคูลเลเตอร์ ซึ่งจะทำการแจ้งเตือนการอ่านค่าที่อาจมีปัญหา

การอ่านค่าการดูดซึมที่ต่ำเกินไป

สำหรับการอ่านค่าการดูดซึมที่ต่ำกว่า 0.1 คุณอาจอยู่ใกล้กับขีดจำกัดการตรวจจับของการทดสอบ ซึ่งอาจส่งผลต่อความแม่นยำ พิจารณา:

  1. การเข้มข้นตัวอย่างของคุณหากเป็นไปได้
  2. การใช้วิธีการวัดปริมาณโปรตีนที่มีความไวสูงกว่า
  3. ปรับการออกแบบการทดลองของคุณเพื่อรองรับปริมาณโปรตีนที่ต่ำกว่า

ปริมาณที่คำนวณได้ที่ไม่เหมาะสม

หากแคลคูลเลเตอร์แนะนำปริมาณที่ใหญ่เกินไปสำหรับแอปพลิเคชันของคุณ:

  1. พิจารณาการเข้มข้นตัวอย่างโปรตีนของคุณ
  2. ปรับปริมาณโปรตีนที่ต้องการลงหากการทดลองของคุณอนุญาต
  3. ใช้ปริมาณสูงสุดที่ปฏิบัติได้และบันทึกปริมาณโปรตีนที่ใช้จริง

ประวัติของการวัดปริมาณโปรตีนและการทดสอบ BCA

การวัดปริมาณโปรตีนอย่างแม่นยำเป็นความต้องการพื้นฐานในชีวเคมีและชีววิทยโมเลกุลตั้งแต่ที่สาขาเหล่านี้เกิดขึ้น วิธีการในระยะแรกพึ่งพาการกำหนดปริมาณไนโตรเจน ซึ่งใช้เวลานานและต้องการอุปกรณ์เฉพาะ

การพัฒนาวิธีการวัดปริมาณโปรตีน

  1. วิธี Kjeldahl (1883): หนึ่งในวิธีแรกสำหรับการวัดปริมาณโปรตีน โดยอิงจากการวัดปริมาณไนโตรเจน

  2. การทดสอบ Biuret (ต้นปี 1900): วิธีนี้อิงจากปฏิกิริยาระหว่างพันธะเพปไทด์และไอออนทองแดงในสารละลายด่าง ทำให้เกิดสีม่วง

  3. การทดสอบ Lowry (1951): พัฒนาโดย Oliver Lowry วิธีนี้รวมปฏิกิริยาของ Biuret กับสารฟอลิน-ซิออคัลเตาเพื่อเพิ่มความไว

  4. การทดสอบ Bradford (1976): Marion Bradford พัฒนาวิธีนี้โดยใช้สี Coomassie Brilliant Blue G-250 ซึ่งจับกับโปรตีนและเปลี่ยนการดูดซึมสูงสุด

  5. การทดสอบ BCA (1985): พัฒนาขึ้นโดย Paul Smith และเพื่อนร่วมงานที่ Pierce Chemical Company วิธีนี้รวมปฏิกิริยาของ Biuret กับการตรวจจับ BCA เพื่อให้ความไวที่ดีกว่าและความเข้ากันได้กับสารซักล้าง

การพัฒนาการทดสอบ BCA

การทดสอบ BCA ถูกอธิบายครั้งแรกในเอกสารปี 1985 โดย Smith et al. ชื่อ "Measurement of protein using bicinchoninic acid" ซึ่งพัฒนาเพื่อแก้ไขข้อจำกัดของวิธีการที่มีอยู่ โดยเฉพาะการรบกวนจากสารเคมีต่างๆ ที่ใช้กันทั่วไปในการสกัดและทำให้โปรตีนบริสุทธิ์

นวัตกรรมหลักคือการใช้กรดไบซินโคโนอินิกในการตรวจจับไอออน Cu¹⁺ ที่เกิดจากการลด Cu²⁺ โดยโปรตีน ทำให้เกิดซับซ้อนสีม่วงที่สามารถวัดได้ด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ ซึ่งให้ข้อได้เปรียบหลายประการ:

  1. ความไวสูงกว่าวิธี Biuret
  2. ความไวต่ำต่อการรบกวนจากสารที่ไม่ใช่โปรตีนเมื่อเปรียบเทียบกับวิธี Lowry
  3. ความเข้ากันได้ที่ดีกว่ากับสารซักล้างเมื่อเปรียบเทียบกับการทดสอบ Bradford
  4. โปรโตคอลที่ง่ายกว่าด้วยสารเคมีและขั้นตอนที่น้อยกว่า

ตั้งแต่การแนะนำ การทดสอบ BCA ได้กลายเป็นหนึ่งในวิธีการวัดปริมาณโปรตีนที่ใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุดในห้องปฏิบัติการชีวเคมีและชีววิทยโมเลกุลทั่วโลก

ตัวอย่างโค้ดสำหรับการคำนวณปริมาณตัวอย่าง

สูตร Excel

1=IF(B2<=0,"Error: Invalid absorbance",IF(C2<=0,"Error: Invalid sample mass",C2/(2*B2)))
2
3' โดยที่:
4' B2 มีการอ่านค่าการดูดซึม
5' C2 มีมวลตัวอย่างใน μg
6' สูตรนี้จะส่งคืนปริมาณตัวอย่างใน μL
7

การใช้งาน Python

1import numpy as np
2import matplotlib.pyplot as plt
3
4def calculate_protein_concentration(absorbance, slope=2.0, intercept=0):
5    """คำนวณความเข้มข้นของโปรตีนจากการดูดซึมโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน."""
6    if absorbance < 0:
7        raise ValueError("การดูดซึมไม่สามารถเป็นค่าลบได้")
8    return (slope * absorbance) + intercept
9
10def calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope=2.0, intercept=0):
11    """คำนวณปริมาณตัวอย่างที่จำเป็นตามการดูดซึมและมวลที่ต้องการ."""
12    if sample_mass <= 0:
13        raise ValueError("มวลตัวอย่างต้องเป็นค่าบวก")
14    
15    protein_concentration = calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16    
17    if protein_concentration <= 0:
18        raise ValueError("ความเข้มข้นของโปรตีนที่คำนวณได้ต้องเป็นค่าบวก")
19    
20    return sample_mass / protein_concentration
21
22# การใช้งานตัวอย่าง
23absorbance = 0.75
24sample_mass = 20  # μg
25slope = 2.0
26intercept = 0
27
28try:
29    volume = calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
30    print(f"สำหรับการดูดซึม {absorbance} และมวลโปรตีนที่ต้องการ {sample_mass} μg:")
31    print(f"ความเข้มข้นของโปรตีน: {calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept):.2f} μg/μL")
32    print(f"ปริมาณตัวอย่างที่จำเป็น: {volume:.2f} μL")
33except ValueError as e:
34    print(f"ข้อผิดพลาด: {e}")
35

โค้ด R สำหรับการวิเคราะห์

1# ฟังก์ชันในการคำนวณความเข้มข้นของโปรตีนจากการดูดซึม
2calculate_protein_concentration <- function(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
3  if (absorbance < 0) {
4    stop("การดูดซึมไม่สามารถเป็นค่าลบได้")
5  }
6  return((slope * absorbance) + intercept)
7}
8
9# ฟังก์ชันในการคำนวณปริมาณตัวอย่าง
10calculate_sample_volume <- function(absorbance, sample_mass, slope = 2.0, intercept = 0) {
11  if (sample_mass <= 0) {
12    stop("มวลตัวอย่างต้องเป็นค่าบวก")
13  }
14  
15  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
16  
17  if (protein_concentration <= 0) {
18    stop("ความเข้มข้นของโปรตีนที่คำนวณได้ต้องเป็นค่าบวก")
19  }
20  
21  return(sample_mass / protein_concentration)
22}
23
24# การใช้งานตัวอย่าง
25absorbance <- 0.75
26sample_mass <- 20  # μg
27slope <- 2.0
28intercept <- 0
29
30tryCatch({
31  volume <- calculate_sample_volume(absorbance, sample_mass, slope, intercept)
32  protein_concentration <- calculate_protein_concentration(absorbance, slope, intercept)
33  
34  cat(sprintf("สำหรับการดูดซึม %.2f และมวลโปรตีนที่ต้องการ %.2f μg:\n", absorbance, sample_mass))
35  cat(sprintf("ความเข้มข้นของโปรตีน: %.2f μg/μL\n", protein_concentration))
36  cat(sprintf("ปริมาณตัวอย่างที่จำเป็น: %.2f μL\n", volume))
37}, error = function(e) {
38  cat(sprintf("ข้อผิดพลาด: %s\n", e$message))
39})
40

การใช้งาน JavaScript

1function calculateProteinConcentration(absorbance, slope = 2.0, intercept = 0) {
2  if (absorbance < 0) {
3    throw new Error("การดูดซึมไม่สามารถเป็นค่าลบได้");
4  }
5  return (slope * absorbance) + intercept;
6}
7
8function calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope = 2.0, intercept = 0) {
9  if (sampleMass <= 0) {
10    throw new Error("มวลตัวอย่างต้องเป็นค่าบวก");
11  }
12  
13  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
14  
15  if (proteinConcentration <= 0) {
16    throw new Error("ความเข้มข้นของโปรตีนที่คำนวณได้ต้องเป็นค่าบวก");
17  }
18  
19  return sampleMass / proteinConcentration;
20}
21
22// การใช้งานตัวอย่าง
23try {
24  const absorbance = 0.75;
25  const sampleMass = 20; // μg
26  const slope = 2.0;
27  const intercept = 0;
28  
29  const proteinConcentration = calculateProteinConcentration(absorbance, slope, intercept);
30  const volume = calculateSampleVolume(absorbance, sampleMass, slope, intercept);
31  
32  console.log(`สำหรับการดูดซึม ${absorbance} และมวลโปรตีนที่ต้องการ ${sampleMass} μg:`);
33  console.log(`ความเข้มข้นของโปรตีน: ${proteinConcentration.toFixed(2)} μg/μL`);
34  console.log(`ปริมาณตัวอย่างที่จำเป็น: ${volume.toFixed(2)} μL`);
35} catch (error) {
36  console.error(`ข้อผิดพลาด: ${error.message}`);
37}
38

การแสดงผลเส้นโค้งมาตรฐาน

ความสัมพันธ์ระหว่างการดูดซึมและความเข้มข้นของโปรตีนมักจะเป็นเชิงเส้นภายในช่วงที่แน่นอน ด้านล่างนี้คือการแสดงผลของเส้นโค้งมาตรฐาน BCA:

เส้นโค้งมาตรฐาน BCA สำหรับการวัดปริมาณโปรตีน การแสดงผลความสัมพันธ์เชิงเส้นระหว่างการดูดซึมและความเข้มข้นของโปรตีนในการทดสอบ BCA 0.0 
<text x="150" y="370">0.5</text>
<line x1="150" y1="350" x2="150" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="250" y="370">1.0</text>
<line x1="250" y1="350" x2="250" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="350" y="370">1.5</text>
<line x1="350" y1="350" x2="350" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="450" y="370">2.0</text>
<line x1="450" y1="350" x2="450" y2="355" stroke="#64748b"/>

<text x="550" y="370">2.5</text>
<line x1="550" y1="350" x2="550" y2="355" stroke="#64748b"/>
0.0 
<text x="45" y="300">1.0</text>
<line x1="45" y1="300" x2="50" y2="300" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="250">2.0</text>
<line x1="45" y1="250" x2="50" y2="250" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="200">3.0</text>
<line x1="45" y1="200" x2="50" y2="200" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="150">4.0</text>
<line x1="45" y1="150" x2="50" y2="150" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="100">5.0</text>
<line x1="45" y1="100" x2="50" y2="100" stroke="#64748b"/>

<text x="45" y="50">6.0</text>
<line x1="45" y1="50" x2="50" y2="50" stroke="#64748b"/>

การดูดซึม (562 นาโนเมตร) ความเข้มข้นของโปรตีน (μg/μL)

เส้นโค้งมาตรฐาน ตัวอย่างมาตรฐาน

เส้นโค้งมาตรฐาน BCA

การเปรียบเทียบกับวิธีการวัดปริมาณโปรตีนอื่นๆ

วิธีการวัดปริมาณโปรตีนที่แตกต่างกันมีข้อดีและข้อจำกัดที่แตกต่างกัน นี่คือวิธีการทดสอบ BCA เปรียบเทียบกับวิธีการทั่วไปอื่นๆ:

วิธีการช่วงความไวข้อดีข้อจำกัดเหมาะสำหรับ
การทดสอบ BCA5-2000 μg/mL• เข้ากันได้กับสารซักล้าง
• ความแปรปรวนระหว่างโปรตีนต่ำ
• การพัฒนาสีที่เสถียร		• ถูกขัดขวางโดยสารลด
• ถูกขัดขวางโดยสารเคมีบางชนิด		• การวัดปริมาณโปรตีนทั่วไป
• ตัวอย่างที่มีสารซักล้าง
การทดสอบ Bradford1-1500 μg/mL• รวดเร็ว (2-5 นาที)
• สารรบกวนมีน้อย		• ความแปรปรวนระหว่างโปรตีนสูง
• ไม่เข้ากันได้กับสารซักล้าง		• การวัดอย่างรวดเร็ว
• ตัวอย่างที่ไม่มีสารซักล้าง
วิธี Lowry1-1500 μg/mL• เป็นที่ยอมรับดี
• ความไวดี		• สารรบกวนมากมาย
• ขั้นตอนหลายขั้นตอน		• ความสม่ำเสมอในประวัติศาสตร์
• ตัวอย่างโปรตีนบริสุทธิ์
การดูดซึม UV (280 นาโนเมตร)20-3000 μg/mL• ไม่ทำลาย
• รวดเร็วมาก
• ไม่ต้องใช้สารเคมี		• ถูกขัดขวางโดยกรดนิวคลีอิก
• ต้องการตัวอย่างบริสุทธิ์		• สารละลายโปรตีนบริสุทธิ์
• การตรวจสอบอย่างรวดเร็วในระหว่างการทำให้บริสุทธิ์
ฟลูออโรเมตริก0.1-500 μg/mL• ความไวสูงสุด
• ช่วงไดนามิกกว้าง		• สารเคมีที่มีราคาแพง
• ต้องใช้ฟลูออโรมิเตอร์		• ตัวอย่างที่เจือจางมาก
• ปริมาณตัวอย่างที่จำกัด

คำถามที่พบบ่อย

การทดสอบ BCA ใช้ทำอะไร?

การทดสอบ BCA (กรดไบซินโคโนอินิก) ใช้เพื่อวัดความเข้มข้นรวมของโปรตีนในตัวอย่าง โดยทั่วไปจะใช้ในชีวเคมี ชีววิทยาเซลล์ และชีววิทยโมเลกุลสำหรับแอปพลิเคชันต่างๆ เช่น การตรวจสอบเวสเทิร์น การทดสอบเอนไซม์ การตกตะกอนด้วยภูมิคุ้มกัน และการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์

การทดสอบ BCA มีความแม่นยำแค่ไหน?

การทดสอบ BCA โดยทั่วไปมีความแม่นยำภายใน 5-10% เมื่อดำเนินการอย่างถูกต้อง ความแม่นยำขึ้นอยู่กับหลายปัจจัยรวมถึงคุณภาพของเส้นโค้งมาตรฐาน การไม่มีสารรบกวน และการที่องค์ประกอบโปรตีนที่ไม่รู้จักคล้ายกับโปรตีนมาตรฐานที่ใช้

อะไรบ้างที่สามารถรบกวนผลการทดสอบ BCA?

สารหลายชนิดสามารถรบกวนผลการทดสอบ BCA ได้ รวมถึง:

  • สารลด (DTT, β-mercaptoethanol, glutathione)
  • สารเคมีที่ chelating (EDTA, EGTA)
  • ความเข้มข้นสูงของน้ำตาลธรรมดา
  • ไขมัน
  • สารซักล้างบางชนิดในความเข้มข้นสูง
  • สารแอมโมเนีย

ความแตกต่างระหว่างการทดสอบ BCA และการทดสอบ Bradford คืออะไร?

ความแตกต่างหลักคือ:

  • การทดสอบ BCA เข้ากันได้มากกว่ากับสารซักล้างและสารซัก
  • การทดสอบ Bradford รวดเร็วกว่า (2-5 นาทีเมื่อเปรียบเทียบกับ 30+ นาทีสำหรับ BCA)
  • BCA มีความแปรปรวนระหว่างโปรตีนต่ำกว่า
  • Bradford มีความไวต่อกรดอะมิโนเบสสูงกว่า
  • BCA ถูกขัดขวางโดยสารลด ในขณะที่ Bradford ไม่ถูกขัดขวาง

ทำไมปริมาณตัวอย่างที่คำนวณได้ของฉันถึงใหญ่เกินไป?

หากแคลคูลเลเตอร์แสดงปริมาณที่ใหญ่เกินไป มักแสดงว่าความเข้มข้นของโปรตีนในตัวอย่างของคุณต่ำ อาจเป็นเพราะ:

  1. โปรตีนจริงในตัวอย่างต้นฉบับต่ำ
  2. การสูญเสียโปรตีนระหว่างการเตรียม
  3. ข้อผิดพลาดในกระบวนการทดสอบ BCA
  4. การอ่านค่าการดูดซึมที่ไม่ถูกต้อง

พิจารณาการเข้มข้นตัวอย่างของคุณหรือลดการออกแบบการทดลองของคุณเพื่อรองรับความเข้มข้นโปรตีนที่ต่ำกว่า

ฉันสามารถใช้แคลคูลเลเตอร์นี้สำหรับวิธีการวัดปริมาณโปรตีนอื่นๆ ได้หรือไม่?

แคลคูลเลเตอร์นี้ออกแบบมาเฉพาะสำหรับผลการทดสอบ BCA แม้ว่าหลักการพื้นฐาน (การแปลงความเข้มข้นเป็นปริมาณ) จะใช้ได้กับวิธีการอื่น แต่ความสัมพันธ์ระหว่างการดูดซึมและความเข้มข้นของโปรตีนจะแตกต่างกันไปในแต่ละการทดสอบ สำหรับวิธีการอื่น เช่น Bradford หรือ Lowry คุณจะต้องใช้พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐานที่แตกต่างกัน

ฉันควรจัดการกับตัวอย่างที่มีการดูดซึมอยู่นอกช่วงเชิงเส้นอย่างไร?

สำหรับการอ่านค่าการดูดซึมที่อยู่นอกช่วงเชิงเส้น (โดยทั่วไป >2.0):

  1. เจือจางตัวอย่างของคุณและทำการทดสอบ BCA ใหม่
  2. ใช้วิธีการวัดปริมาณโปรตีนที่แตกต่างกัน
  3. ปรับเส้นโค้งมาตรฐานเพื่อรวมมาตรฐานที่มีความเข้มข้นสูงกว่า

โปรตีนใดที่ฉันควรใช้เป็นมาตรฐาน?

Bovine Serum Albumin (BSA) เป็นมาตรฐานที่ใช้กันทั่วไปที่สุดสำหรับการทดสอบ BCA เพราะว่า:

  • มีให้บริการได้ง่ายและมีราคาถูก
  • มีความสามารถในการละลายสูง
  • เสถียรในสารละลาย
  • มีการศึกษามาอย่างดี

อย่างไรก็ตาม หากตัวอย่างของคุณมีโปรตีนที่โดดเด่นซึ่งแตกต่างจาก BSA อย่างมีนัยสำคัญ ให้พิจารณาใช้โปรตีนดังกล่าวเป็นมาตรฐานของคุณเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำยิ่งขึ้น

สีที่พัฒนาในปฏิกิริยา BCA มีเสถียรภาพนานแค่ไหน?

สีม่วงที่พัฒนาขึ้นในปฏิกิริยา BCA มีเสถียรภาพเป็นเวลาหลายชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องและสามารถวัดได้ตลอดเวลาภายในช่วงเวลานั้น อย่างไรก็ตาม เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุด แนะนำให้วัดมาตรฐานและตัวอย่างทั้งหมดในเวลาที่ใกล้เคียงกันหลังจากการพัฒนาสี

ฉันสามารถใช้เส้นโค้งมาตรฐานจากการทดลองก่อนหน้านี้ได้หรือไม่?

แม้ว่าจะเป็นไปได้ที่จะใช้เส้นโค้งมาตรฐานซ้ำ แต่ไม่แนะนำให้ทำเพื่อให้ได้การวัดที่แม่นยำ ความแปรปรวนในสารเคมี เงื่อนไขการบ่ม และการสอบเทียบเครื่องมืออาจส่งผลต่อความสัมพันธ์ระหว่างการดูดซึมและความเข้มข้นของโปรตีน สำหรับผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ ให้สร้างเส้นโค้งมาตรฐานใหม่ทุกครั้งที่คุณทำการทดสอบ

อ้างอิง

  1. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, et al. "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry. 1985;150(1):76-85. doi:10.1016/0003-2697(85)90442-7

  2. Thermo Scientific. "Pierce BCA Protein Assay Kit." คำแนะนำ. มีให้ที่: https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https%3A%2F%2Fassets.thermofisher.com%2FTFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2FMAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf

  3. Walker JM. "The Bicinchoninic Acid (BCA) Assay for Protein Quantitation." ใน: Walker JM, ed. The Protein Protocols Handbook. Springer; 2009:11-15. doi:10.1007/978-1-59745-198-7_3

  4. Olson BJ, Markwell J. "Assays for determination of protein concentration." Current Protocols in Protein Science. 2007;Chapter 3:Unit 3.4. doi:10.1002/0471140864.ps0304s48

  5. Noble JE, Bailey MJ. "Quantitation of protein." Methods in Enzymology. 2009;463:73-95. doi:10.1016/S0076-6879(09)63008-1

ลองใช้ BCA แคลคูลเลเตอร์ปริมาณตัวอย่างการดูดซึมของเราวันนี้!

ตอนนี้ที่คุณเข้าใจหลักการเบื้องหลังการวัดปริมาณโปรตีน BCA และการคำนวณปริมาณตัวอย่าง ลองใช้แคลคูลเลเตอร์ของเราเพื่อทำให้การทำงานในห้องปฏิบัติการของคุณมีประสิทธิภาพมากขึ้น เพียงป้อนการอ่านค่าการดูดซึมและมวลตัวอย่างที่ต้องการเพื่อรับการคำนวณปริมาณตัวอย่างที่แม่นยำทันที

ไม่ว่าคุณจะเตรียมตัวอย่างสำหรับการตรวจสอบเวสเทิร์น การทดสอบเอนไซม์ หรือการทดลองที่ใช้โปรตีนอื่นๆ แคลคูลเลเตอร์ของเราจะช่วยให้แน่ใจว่าคุณโหลดโปรตีนในปริมาณเท่ากันและเชื่อถือได้สำหรับทุกตัวอย่าง แม้จะมีความเข้มข้นแตกต่างกัน ประหยัดเวลา ลดข้อผิดพลาด และปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำของการทดลองของคุณด้วย BCA แคลคูลเลเตอร์ปริมาณตัวอย่างการดูดซึม

🔗

เครื่องมือที่เกี่ยวข้อง

ค้นพบเครื่องมือเพิ่มเติมที่อาจมีประโยชน์สำหรับการทำงานของคุณ

เครื่องคำนวณปริมาตรถังสำหรับทรงกระบอก, ทรงกลม & ทรงสี่เหลี่ยม

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณปริมาตรเป็นพื้นที่สำหรับการเคลือบของเหลว

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณปริมาตรหลุม: การขุดแบบทรงกระบอกและสี่เหลี่ยม

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณปริมาตรหลุม: วัดปริมาตรการขุดเจาะทรงกระบอก

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณปริมาตรของเซลล์ลูกบาศก์: ค้นหาปริมาตรจากความยาวขอบ

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณปัจจัยการเจือจางสำหรับสารละลายในห้องปฏิบัติการ

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณปริมาณทราย: ประเมินวัสดุสำหรับโครงการใด ๆ

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณสัมประสิทธิ์การดูดซับสองโฟตอน

ลองใช้เครื่องมือนี้

เครื่องคำนวณโมลาริตี้: เครื่องมือความเข้มข้นของสารละลาย

ลองใช้เครื่องมือนี้