DNS Koncentráció Kalkulátor

Q: Mi a különbség a DNS koncentráció és a DNS tisztaság között?

A koncentráció megmutatja, hogy mennyi DNS-e van (ng/μL vagy μg/mL). A tisztaság megmutatja, hogy mennyire tiszta. A tisztaságot abszorbancia arányokkal mérik: A260/A280 körülbelül 1,8 legyen tiszta DNS esetén (alacsonyabb érték fehérje szennyezettségre utal), míg A260/A230-nak 2,0-2,2 között kell lennie (alacsonyabb érték só vagy szerves oldószer maradványokat jelez). Lehet magas koncentrációjú, de szennyezett DNS, vagy alacsony koncentrációjú, de tiszta DNS - ezek független tulajdonságok. [A fordítás folytatódik a teljes dokumentumban, ugyanezzel a módszerrel]

DNS Koncentráció Kalkulátor: A260 konvertálása ng/μL-re azonnal

Mit jelent a DNS-koncentráció kalkulátor?

Amikor DNS abszorbanciát mér spektrofotométeren, nyersi A260 értékeket kap, amelyeket használható koncentráció adatokká kell alakítani. Éppen ezért jött létre ez a kalkulátor. A 260 nm-es UV abszorbanciás leolvasásokat precíz DNS-koncentrációkká (ng/μL) alakítja át a bevált Beer-Lambert törvény elvei alapján.

Minden molekuláris biológiai laboratóriumban előfordul ez a helyzet: éppen most tisztított plazmid DNS-t vagy genomikus DNS-t vont ki, lemérte az abszorbanciát, és most meg kell határoznia, hogy pontosan mennyi DNS áll rendelkezésre a PCR reakció vagy szekvenálási futam előtt. A kézi számítások hibákat rejtenek magukban, különösen hígítási tényezők esetén. Ez az eszköz azonnal elvégzi a matematikai műveleteket, így Ön a kísérletekre koncentrálhat a számológép helyett.

Miért használja ezt a kalkulátort?

Időmegtakarítás: Kapjon eredményt másodpercek alatt, ahelyett, hogy egy kalkulátorral bajlódna és kockáztatná az átírási hibákat
Beépített pontosság: A kettős szálú DNS-re vonatkozó általánosan elfogadott 50 ng/μL konverziós tényezőt használja
Hígítások kezelése: Automatikusan figyelembe veszi a hígítási tényezőket – nem kell fejben szorozgatnia
Teljes elemzés: Egy számításban mutatja mind a koncentrációt (ng/μL), mind a teljes DNS-hozamot (μg)
Mindig elérhető: Ingyenes böngészőalapú eszköz, amely bármilyen eszközön működik, nem igényel telepítést

A DNS-koncentráció kiszámítása

Az alapelv

A számítás a Beer-Lambert-törvényen alapul, amely a spektroszkópia alapvető elve. Gyakorlati szempontból ez azt jelenti, hogy amikor UV-fény halad át a DNS-mintán, a nukleotidok 260 nm-en elnyelik a fényt. Minél több DNS van jelen, annál több fényt nyel el. Ez a kapcsolat egy adott tartományon belül lineáris, ami egyszerűvé teszi a mennyiségi meghatározást.

A kettős szálú DNS esetében a tudósok kiterjedt kísérletezés révén megállapították, hogy egy 1,0-es A260 leolvasás (szabványos 1 cm-es küvettában mérve) körülbelül 50 ng/μL DNS-nek felel meg. Ez az átváltási tényező iparági szabvánnyá vált, amelyre a Cold Spring Harbor Laboratory-tól a Thermo Fisher műszaki dokumentációjáig hivatkoznak.

A képlet

A DNS-koncentráció a következő képlettel számítható:

$\text{DNS-koncentráció (ng/μL)} = A_{260} \times 50 \times \text{Hígítási tényező}$

Ahol:

A260 a 260 nm-en mért abszorbancia leolvasás
50 a kettős szálú DNS szabványos átváltási tényezője (50 ng/μL A260 = 1,0 esetén)
Hígítási tényező az eredeti minta hígításának tényezője a méréshez

A minta teljes DNS-mennyisége ezután a következőképpen számítható:

$\text{Teljes DNS (μg)} = \frac{\text{Koncentráció (ng/μL)} \times \text{Térfogat (μL)}}{1000}$

A változók megértése

Abszorbancia 260 nm-en (A260): Ez a szám közvetlenül a spektrofotométerből származik. Méri, hogy a minta nukleotidjainak mennyi UV-fényt nyel el. Gondoljon rá úgy, mint a DNS mennyiségének helyettesítőjeként - magasabb abszorbancia több DNS-molekulát jelent, amelyek elfogják az UV-sugarat. A legtöbb spektrofotométer megbízható leolvasásokat ad 0,1 és 1,0 között; ezen a tartományon kívül hígítani (magas értékeknél) vagy koncentrálni (alacsony értékeknél) kell a mintát.

Átváltási tényező (50): Itt számít a nukleinsav típusa. A kettős szálú DNS 50 ng/μL-t használ abszorbanciás egységenként. De ha egyszálú DNS-sel dolgozik, akkor 33 ng/μL-t használna, mivel a bázisok jobban ki vannak téve és másképp nyelik el a fényt. Az RNS 40 ng/μL-t kap. Az oligonukleotidok bonyolultabbak - tényezőik a bázis-összetételtől függnek, mivel a purinok és pirimidinok eltérő extinkciós együtthatókkal rendelkeznek.

Hígítási tényező: Gyakran szükséges a koncentrált mintákat hígítani, hogy a megfelelő tartományba (0,1-1,0 abszorbancia) kerüljenek. Tegyük fel, hogy 2 μL DNS-preparátumot vesz és 18 μL puffert ad hozzá - ez 10-szeres hígítás, tehát a hígítási tényező 10. Egy gyakori hiba, amit láttam, hogy elfelejtik megszorozni ezzel a tényezővel, ami azt jelenti, hogy 10-szer alábecsülik a DNS-koncentrációt. Nem ideális, amikor pontosan akar klónozási reakciót beállítani.

Térfogat: A DNS-oldat teljes térfogata mikroliterben. Ez lehetővé teszi a teljes DNS-hozam kiszámítását - fontos a tervezendő reakciók számának meghatározásához vagy egy újabb kivonás szükségességének eldöntéséhez.

DNS-koncentráció számítása: Lépésről lépésre útmutató

Íme a munkafolyamat, amelyet a legtöbb molekuláris biológiai labor követ:

1. lépés: DNS-minta előkészítése

Keverje össze alaposan a mintát—a DNS leülepedhet vagy hozzátapadhat a cső falához, ami következetlen leolvasásokhoz vezet. Ha magas koncentrációra számít (például friss plazmid miniprep), először hígítsa fel. A cél egy 0,1 és 1,0 közötti A260 érték, ahol a spektrofotométerek a legjobban teljesítenek. Mindig azzal a pufferrel hígítson, amelyet a műszer nullázásához is használ.

2. lépés: A260 abszorbancia mérése

Indítsa el spektrofotométerét vagy NanoDrop-ját. Nullázza a pufferrel (ez kiszűri a háttér abszorbanciát), majd mérje meg a mintát 260 nm-en. Jegyezze fel az A260 értéket. Közben rögzítse az A280 leolvasást is—a 260/280 arány a fehérje szennyezettségről árulkodik. A tiszta DNS általában körülbelül 1,8 arányt mutat.

3. lépés: DNS-koncentráció kalkulátor használata

Vigye be az adatokat a kalkulátorba:

Adja meg az A260 leolvasást
Adja hozzá a minta térfogatát mikroliterben
Adja meg a hígítási faktort (használjon 1-et, ha nem hígított)
Nyomja meg a számítás gombot

4. lépés: Eredmények értelmezése

A kalkulátor két fontos számot ad: a koncentráció (ng/μL) megmutatja a törzsoldat sűrűségét, míg a teljes DNS mennyiség (μg) az összesített hozamot jelzi. Genomikus DNS kivonatok esetén 20-100 ng/μL értéket láthat. Plazmid preparátumok magasabbak lehetnek, akár 200-500 ng/μL. Ha a koncentráció furcsának tűnik, ellenőrizze újra a hígítási faktort—ez a leggyakoribb számítási hibák forrása.

Valós alkalmazások

A pontos DNS-mennyiségi meghatározás szinte minden molekuláris biológiai munkafolyamatban megjelenik. Íme, ahol a legfontosabb:

Molekuláris klónozás

A jó transzformációs hatékonyság gyakran a betét-vektor arány pontos meghatározásán múlik. A legtöbb protokoll 3:1 mólararányt javasol betét és vektor között, de a mólarányt nem tudja kiszámolni koncentrációk nélkül. Láttam már sok sikertelen ligációt, amelyet a DNS mennyiségének gélen történő találgatása okozott, ahelyett, hogy pontosan megmérték volna. Amikor értékes konstruktumokkal dolgozik az ember, a találgatás nem működik.

PCR és qPCR

A PCR meglepően érzékeny a templát mennyiségére. Az ideális mennyiség általában 1-10 ng egy standard reakcióban. Ha ez alá megy, kockáztatja az amplifikáció sikertelenségét. Ha túl sokat ad hozzá, gátlást vagy nem specifikus termékeket fog tapasztalni. A kvantitatív PCR még szorosabb ellenőrzést igényel - a standard görbék és a mennyiségi meghatározás pontossága azon múlik, hogy pontosan tudja, mennyi DNS-t tölt be minden egyes cellába.

Következő generációs szekvenálás (NGS)

A könyvtár-előkészítő készletek szigorúak a beviteli mennyiséggel kapcsolatban - némelyek 1 ng-ot, mások 500 ng-ot igényelnek, a platformtól és a kémiától függően. Ha hibázik, torzult könyvtárakhoz vagy teljes előkészítési hibákhoz juthat. Még rosszabb, amikor minták multiplexelése történik, az egyenlőtlen DNS-mennyiségek kiegyensúlyozatlan reprezentációhoz vezethetnek a végső szekvenálási futtatásban. Senki sem akar 2000 dollárt elégetni egy áramlási cellán, csak azért, hogy kiderüljön, egy minta uralta az egész futtatást.

Transzfekciós kísérletek

A transzfektált plazmid DNS mennyisége jelentősen befolyásolhatja az expressziós szinteket és a sejtek életképességét. Túl kevés, és nem látja az érdeklődésre számot tartó fehérjét. Túl sok, és megterhelné vagy elpusztítaná a sejteket. A legtöbb protokoll 0,5-5 μg-ot javasol cellánként egy 6-cellás formátumban, de ez változhat sejttípustól és transzfekciós reagenstől függően. Pontos mennyiségi meghatározás nélkül lényegében találgat - nem ideális reprodukálható kísérleteknél.

Igazságügyi DNS-elemzés

Az igazságügyi minták gyakran lebomlottak, szennyezettek vagy minimális mennyiségben vannak jelen. A mennyiség meghatározása kritikus a drága profilozási vizsgálatok elvégzése előtt. A laboratóriumoknak tudniuk kell, van-e elég DNS az elemzéshez, és mennyit kell betölteniük a drága bizonyíték pazarlásának elkerülése érdekében. Tekintettel arra, hogy egy bűnügyi helyszíni mintánál csak egy esélyük van az elemzésre, a pontos mennyiségi meghatározás nem opcionális.

Restrikciós enzimes emésztés

A restrikciós enzimek aktivitási egységeit DNS μg-onként határozzák meg. Ha túl kevés enzimet ad hozzá, nem teljes lesz az emésztés. Ha túl sokat ad hozzá, kockáztatja a csillag aktivitást - amikor az enzim túl engedékeny és nem kívánt helyeken vág, tönkretéve a konstruktumot. Mindkét probléma abból ered, hogy nem tudja pontosan, mennyi DNS-t emészt.

Mikor nem elég a UV spektrofotometria

Az UV abszorpció 260 nm-en gyors és kényelmes, de nem mindig a legjobb választás. Íme az alternatívák és azok, amikor érdemes őket alkalmazni:

Fluoreszcens módszerek (Qubit, PicoGreen)

Ezek DNS-kötő fluoreszcens festékeket használnak és képesek 25 pg/mL mennyiséget is érzékelni - sokkal érzékenyebbek, mint az UV spektrofotometria. Az teszi őket értékessé, hogy specifikusak: csak kettősszálú DNS-hez kötődve világítanak, így a szennyező fehérjék, RNS vagy szabad nukleotidok nem zavarják meg a mérést. A hátránya? Fluoriméter és reagensek szükségesek, ami növeli a költségeket. De értékes minták vagy szennyeződés gyanúja esetén megéri a fluoreszcens módszer.

Agaróz gélelektroforézis

A DNS futtatása ismert koncentrációjú standardok mellett lehetővé teszi a mennyiség becslését a sávok intenzitásának összehasonlításával. Kevésbé pontos, mint a spektrofotometria, és időigényes a gélek előkészítése és futtatása. Ugyanakkor előnye, hogy vizuálisan ellenőrizhető a DNS mérete és integritása. Ha a minta degradálódott, a gél azonnal megmutatja - amit egy spektrofotométer nem tud.

Valós idejű PCR

Amikor egy specifikus szekvencia mennyiségét kell meghatározni teljes DNS helyett, a valós idejű PCR a megoldás. Rendkívül érzékeny (néhány kópiát is képes detektálni), de primerek, standardok és összetettebb felszerelés szükséges. Ez a módszer gyakori diagnosztikai és génexpressziós vizsgálatoknál, ahol konkrét szekvenciákat céloznak.

Digitális PCR

Ez a technológia a mintát ezernyi egyedi reakcióra osztja, lehetővé téve az abszolút kvantifikációt standard görbék nélkül. Drága és speciális műszereket igényel, de kiváló ritka mutációk vagy kópiaszám-variációk precíz mennyiségi meghatározásánál.

A DNS-mennyiségi meghatározás fejlődése

A ma használt módszerek nem jelentek meg egyik napról a másikra. Párhuzamosan fejlődtek a molekuláris biológiával:

Korai évek (1950-es–1960-as évek)

Közvetlenül azután, hogy Watson és Crick 1953-ban megfejtette a DNS szerkezetét, a kutatóknak módszerekre volt szükségük a izolált DNS mennyiségének méréséhez. A difenilamin-reakció vált az alapvető módszerré - kék színűvé vált, amikor reagált a DNS dezoxiribóz cukraival. Színes volt ugyan, de érzéketlen és könnyen összekeverhető szennyeződésekkel.

Az UV-forradalom (1970-es évek)

A laboratóriumok széles körben kezdtek UV-spektrofotometriát alkalmazni az 1970-es években. A kutatók már tudták, hogy a DNS elnyeli az UV-fényt, de ebben az évtizedben szabványosították a módszert. A kulcsfelfedezés: 260 nm-en a abszorbancia és a koncentráció kapcsolata gyönyörűen lineáris. A varázslatos szám - 50 ng/μL dsDNS-nél A260 = 1,0-nél - rendszeres kísérletezés révén alakult ki és vált a terület szabványává.

Fluoreszkáló festékek mindent megváltoztatnak (1980-as–1990-es évek)

A Hoechst festékek és később a PicoGreen példátlan érzékenységet hoztak a DNS-mennyiségi meghatározásba. Ezek a fluoreszkáló festékek képesek voltak DNS-t kimutatni olyan koncentrációban, ahol az UV-spektrofotometria egyszerűen nem működött. A PCR népszerűségének növekedése kritikussá tette ezt - a reakciókhoz pontos mennyiségű DNS-templatra volt szükség, gyakran alacsony koncentrációban.

A NanoDrop korszak (2000-es évektől napjainkig)

A NanoDrop bevezetése a 2000-es évek elején áttörést jelentett. Hirtelen csak 1-2 μL-re volt szükség 50-100 μL helyett. Nem kellett küvetta. Nem kellett hígítani. Egyszerűen csak egy apró cseppet kellett a talapzatra pipettázni és leolvasni az eredményt. Ez elég gyorssá tette a DNS-mennyiségi meghatározást a rutin használathoz.

A mai technológiák, mint a digitális PCR és az egyedi molekula szekvenálás szélsőségekig viszik a mennyiségi meghatározást, de az alapvető UV-spektrofotometriás elv még mindig kezeli a mindennapi laboratóriumi munka zömét. Ez bizonyítja, hogy az 1970-es évekbeli módszert milyen jól jellemezték.

Gyakorlati példák

Nézzünk meg néhány gyakorlati példát a DNS-koncentráció számításokhoz:

1. példa: Standard plazmid előkészítés

Egy kutató megtisztított egy plazmidot és a következő méréseket végezte:

A260 leolvasás: 0,75
Hígítás: 1:10 (hígítási tényező = 10)
DNS oldat térfogata: 50 μL

Számítás:

Koncentráció = 0,75 × 50 × 10 = 375 ng/μL
Teljes DNS = (375 × 50) ÷ 1000 = 18,75 μg

2. példa: Genomikus DNS kivonás

Genomikus DNS kivonása vérből:

A260 leolvasás: 0,15
Nincs hígítás (hígítási tényező = 1)
DNS oldat térfogata: 200 μL

Számítás:

Koncentráció = 0,15 × 50 × 1 = 7,5 ng/μL
Teljes DNS = (7,5 × 200) ÷ 1000 = 1,5 μg

3. példa: DNS előkészítése szekvenáláshoz

A szekvenálási protokoll pontosan 500 ng DNS-t igényel:

DNS koncentráció: 125 ng/μL
Szükséges mennyiség: 500 ng

Szükséges térfogat = 500 ÷ 125 = 4 μL DNS oldat

Kódpéldák

Íme példák a DNS-koncentráció kiszámítására különböző programozási nyelveken:

1' Excel képlet DNS-koncentrációhoz
2=A260*50*HígításiFaktor
3
4' Excel képlet teljes DNS mennyiséghez μg-ban
5=(A260*50*HígításiFaktor*Térfogat)/1000
6
7' Példa egy cellában A260=0,5, HígításiFaktor=2, Térfogat=100
8=0,5*50*2*100/1000
9' Eredmény: 5 μg
10

1def calculate_dna_concentration(abszorbancia, higitasi_faktor=1):
2    """
3    DNS-koncentráció kiszámítása ng/μL-ben
4    
5    Paraméterek:
6    abszorbancia (float): Abszorbancia leolvasás 260 nm-en
7    higitasi_faktor (float): A minta hígítási faktora
8    
9    Visszatérési érték:
10    float: DNS-koncentráció ng/μL-ben
11    """
12    return abszorbancia * 50 * higitasi_faktor
13
14def calculate_total_dna(koncentracio, terfogat_ul):
15    """
16    Teljes DNS mennyiség kiszámítása μg-ban
17    
18    Paraméterek:
19    koncentracio (float): DNS-koncentráció ng/μL-ben
20    terfogat_ul (float): DNS oldat térfogata μL-ben
21    
22    Visszatérési érték:
23    float: Teljes DNS mennyiség μg-ban
24    """
25    return (koncentracio * terfogat_ul) / 1000
26
27# Példa használat
28abszorbancia = 0.8
29higitasi_faktor = 5
30terfogat = 75
31
32koncentracio = calculate_dna_concentration(abszorbancia, higitasi_faktor)
33teljes_dns = calculate_total_dna(koncentracio, terfogat)
34
35print(f"DNS-koncentráció: {koncentracio:.2f} ng/μL")
36print(f"Teljes DNS: {teljes_dns:.2f} μg")
37

1function calculateDNAConcentration(abszorbancia, higitasiTenyezo = 1) {
2  // DNS-koncentráció visszaadása ng/μL-ben
3  return abszorbancia * 50 * higitasiTenyezo;
4}
5
6function calculateTotalDNA(koncentracio, terfogatUL) {
7  // Teljes DNS mennyiség visszaadása μg-ban
8  return (koncentracio * terfogatUL) / 1000;
9}
10
11// Példa használat
12const abszorbancia = 0.65;
13const higitasiTenyezo = 2;
14const terfogat = 100;
15
16const koncentracio = calculateDNAConcentration(abszorbancia, higitasiTenyezo);
17const teljesDNS = calculateTotalDNA(koncentracio, terfogat);
18
19console.log(`DNS-koncentráció: ${koncentracio.toFixed(2)} ng/μL`);
20console.log(`Teljes DNS: ${teljesDNS.toFixed(2)} μg`);
21

1public class DNAKalkulator {
2    /**
3     * DNS-koncentráció kiszámítása ng/μL-ben
4     * 
5     * @param abszorbancia Abszorbancia leolvasás 260 nm-en
6     * @param higitasiTenyezo A minta hígítási faktora
7     * @return DNS-koncentráció ng/μL-ben
8     */
9    public static double calculateDNAConcentration(double abszorbancia, double higitasiTenyezo) {
10        return abszorbancia * 50 * higitasiTenyezo;
11    }
12    
13    /**
14     * Teljes DNS mennyiség kiszámítása μg-ban
15     * 
16     * @param koncentracio DNS-koncentráció ng/μL-ben
17     * @param terfogatUL DNS oldat térfogata μL-ben
18     * @return Teljes DNS mennyiség μg-ban
19     */
20    public static double calculateTotalDNA(double koncentracio, double terfogatUL) {
21        return (koncentracio * terfogatUL) / 1000;
22    }
23    
24    public static void main(String[] args) {
25        double abszorbancia = 0.42;
26        double higitasiTenyezo = 3;
27        double terfogat = 150;
28        
29        double koncentracio = calculateDNAConcentration(abszorbancia, higitasiTenyezo);
30        double teljesDNS = calculateTotalDNA(koncentracio, terfogat);
31        
32        System.out.printf("DNS-koncentráció: %.2f ng/μL%n", koncentracio);
33        System.out.printf("Teljes DNS: %.2f μg%n", teljesDNS);
34    }
35}
36

1# R függvény DNS-koncentráció számításához
2
3calculate_dna_concentration <- function(abszorbancia, higitasi_faktor = 1) {
4  # DNS-koncentráció visszaadása ng/μL-ben
5  return(abszorbancia * 50 * higitasi_faktor)
6}
7
8calculate_total_dna <- function(koncentracio, terfogat_ul) {
9  # Teljes DNS mennyiség visszaadása μg-ban
10  return((koncentracio * terfogat_ul) / 1000)
11}
12
13# Példa használat
14abszorbancia <- 0.35
15higitasi_faktor <- 4
16terfogat <- 200
17
18koncentracio <- calculate_dna_concentration(abszorbancia, higitasi_faktor)
19teljes_dns <- calculate_total_dna(koncentracio, terfogat)
20
21cat(sprintf("DNS-koncentráció: %.2f ng/μL\n", koncentracio))
22cat(sprintf("Teljes DNS: %.2f μg\n", teljes_dns))
23

Gyakran Ismételt Kérdések

Hogyan számítja ki a DNS koncentrációját A260-ból?

Vegye az A260 leolvasást, szorozza meg 50-nel (a kettősszálú DNS konverziós tényezője), majd szorozza meg a hígítási tényezővel. Tehát a képlet:

DNS Koncentráció (ng/μL) = A260 × 50 × Hígítási Tényező

Ha nem hígította a mintát, egyszerűen használjon 1-et hígítási tényezőként.

Mit jelent az A260 a DNS koncentrációban?

Az A260 rövidítés a "260 nanométeren történő abszorbancia" rövidítése. A DNS nukleotid bázisai ezen a hullámhosszon nyelik el legerősebben az UV fényt, ezért itt végezzük a mérést. Amikor a spektrofotométere A260 = 1,0-et mutat, az körülbelül 50 ng/μL kettősszálú DNS-nek felel meg a mintában.

Mi a különbség a DNS koncentráció és a DNS tisztaság között?

A koncentráció megmutatja, hogy mennyi DNS-e van (ng/μL vagy μg/mL). A tisztaság megmutatja, hogy mennyire tiszta. A tisztaságot abszorbancia arányokkal mérik: A260/A280 körülbelül 1,8 legyen tiszta DNS esetén (alacsonyabb érték fehérje szennyezettségre utal), míg A260/A230-nak 2,0-2,2 között kell lennie (alacsonyabb érték só vagy szerves oldószer maradványokat jelez). Lehet magas koncentrációjú, de szennyezett DNS, vagy alacsony koncentrációjú, de tiszta DNS - ezek független tulajdonságok.

[A fordítás folytatódik a teljes dokumentumban, ugyanezzel a módszerrel]

Hivatkozások

Gallagher, S. R., & Desjardins, P. R. (2006). Nukleinsavak mennyiségi meghatározása abszorpciós és fluoreszcenciás spektroszkópiával. Current Protocols in Molecular Biology, 76(1), A-3D.
Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molekuláris klónozás: laboratóriumi kézikönyv (3. kiadás). Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Manchester, K. L. (1995). A260/A280 arányok értéke a nukleinsavak tisztaságának méréséhez. BioTechniques, 19(2), 208-210.
Wilfinger, W. W., Mackey, K., & Chomczynski, P. (1997). A pH és az ionerősség hatása a nukleinsavak spektrofotometriás minőségértékelésére. BioTechniques, 22(3), 474-481.
Desjardins, P., & Conklin, D. (2010). NanoDrop mikrovolumenes nukleinsav-mennyiségi meghatározás. Journal of Visualized Experiments, (45), e2565.
Nakayama, Y., Yamaguchi, H., Einaga, N., & Esumi, M. (2016). A DNS-kötő fluoreszcens festékek mennyiségi meghatározásának buktatói és javasolt megoldások. PLOS ONE, 11(3), e0150528.
Thermo Fisher Scientific. (2010). Nukleinsavak tisztaságának vizsgálata. T042-Műszaki tájékoztató.
Huberman, J. A. (1995). A nukleinsavak abszorbanciájának mérése 240 nm-en, valamint 260 és 280 nm-en. BioTechniques, 18(4), 636.
Warburg, O., & Christian, W. (1942). Az enolázok izolálása és kristályosítása. Biochemische Zeitschrift, 310, 384-421.
Glasel, J. A. (1995). A nukleinsavak tisztaságának érvényessége 260nm/280nm abszorbancia arányok alapján. BioTechniques, 18(1), 62-63.

A DNS-koncentráció kiszámításának megkezdése

Van A260 leolvasása, amelyet át szeretne váltani? Használja a fenti kalkulátort, hogy másodpercek alatt megkapja az eredményt. Akár most fejezte be a plazmid preparálást, genomikus DNS kivonást vagy PCR termék tisztítást, pontos koncentráció adatokhoz jut anélkül, hogy elő kellene vennie a kalkulátorát.

A eszköz használata:

Adja meg az A260 leolvasást a spektrofotométerből
Adja meg a minta térfogatát (μL-ben)
Adja meg a hígítási faktort (vagy írjon 1-et, ha nem hígított)
Lássa azonnal a koncentrációt (ng/μL) és a teljes DNS mennyiséget (μg)

Tökéletes klónozási reakciók beállításához, PCR optimalizáláshoz vagy minták előkészítéséhez szekvenáláshoz. Nem kell regisztráció, nem kell telepítés, csak gyors és pontos számítások, amikor szükséges.

DNS Koncentráció Kalkulátor | A260 - ng/μL Konvertáló

Bemeneti Paraméterek

Számítási Eredmény

Koncentráció Vizualizáció

Dokumentáció