คำนวณปริมาณที่เหมาะสมสำหรับปฏิกิริยาการเชื่อมต่อ DNA โดยการป้อนความเข้มข้น ความยาว และอัตราส่วนโมลาร์ของเวกเตอร์และแทรก เครื่องมือที่จำเป็นสำหรับชีววิทยาโมเลกุลและวิศวกรรมพันธุศาสตร์
DNA ligation เป็นเทคนิคทางชีววิทยโมเลกุลที่สำคัญที่ใช้ในการเชื่อมต่อ DNA fragments เข้าด้วยกันด้วยพันธะโควาเลนต์ เครื่องมือ DNA Ligation Calculator เป็นเครื่องมือที่จำเป็นสำหรับนักวิจัย ช่วยในการกำหนดปริมาณที่เหมาะสมของ vector และ insert DNA ที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยาการ ligation ที่ประสบความสำเร็จ โดยการคำนวณอัตราส่วนโมลาร์ที่ถูกต้องระหว่าง vector (plasmid) และ DNA fragments insert เครื่องมือนี้ช่วยให้การทดลองการโคลนนิ่งโมเลกุลมีประสิทธิภาพในขณะที่ลดการใช้สารเคมีที่ไม่จำเป็นและปฏิกิริยาที่ล้มเหลว
ปฏิกิริยาการ ligation เป็นพื้นฐานของวิศวกรรมพันธุกรรม ชีววิทยาสังเคราะห์ และขั้นตอนการโคลนนิ่งโมเลกุล พวกเขาอนุญาตให้นักวิทยาศาสตร์สร้างโมเลกุล DNA ที่ประกอบใหม่โดยการแทรกยีนที่สนใจลงใน plasmid vectors เพื่อการเปลี่ยนถ่ายเข้าสู่สิ่งมีชีวิตโฮสต์ในภายหลัง ความสำเร็จของปฏิกิริยาเหล่านี้ขึ้นอยู่กับการใช้ปริมาณ DNA ที่เหมาะสม ซึ่งเป็นสิ่งที่เครื่องมือนี้ช่วยกำหนด
ไม่ว่าคุณจะสร้าง expression vectors, สร้าง gene libraries, หรือทำการ subcloning ตามปกติ เครื่องคำนวณ DNA ligation นี้จะช่วยให้คุณปรับแต่งเงื่อนไขการทดลองของคุณและเพิ่มอัตราความสำเร็จของคุณ โดยการป้อนพารามิเตอร์หลักบางอย่างเกี่ยวกับตัวอย่าง DNA ของคุณ คุณสามารถรับปริมาณที่แน่นอนที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยาการ ligation เฉพาะของคุณได้อย่างรวดเร็ว
เครื่องคำนวณ DNA ligation ใช้สูตรทางชีววิทยโมเลกุลพื้นฐานที่คำนึงถึงขนาดและความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ DNA fragments ที่ถูกเชื่อมต่อ การคำนวณหลักจะกำหนดว่าจำเป็นต้องใช้ insert DNA เท่าใดเมื่อเปรียบเทียบกับ vector DNA ตามความยาวที่เกี่ยวข้องและอัตราส่วนโมลาร์ที่ต้องการ
ปริมาณของ insert DNA ที่จำเป็น (ในหน่วยนาโนกรัม) จะถูกคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:
ที่ไหน:
เมื่อปริมาณที่ต้องการของ insert DNA ถูกกำหนดแล้ว ปริมาณที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยาจะถูกคำนวณ:
มาทำการคำนวณตัวอย่างกัน:
ขั้นตอนที่ 1: คำนวณปริมาณ insert ที่ต้องการ
ขั้นตอนที่ 2: คำนวณปริมาณ
การคำนวณนี้ช่วยให้มั่นใจว่ามีโมเลกุล insert สามโมเลกุลสำหรับโมเลกุล vector หนึ่งโมเลกุลในปฏิกิริยา ซึ่งเพิ่มโอกาสในการ ligation ที่ประสบความสำเร็จ
เครื่องคำนวณ DNA Ligation ของเราออกแบบมาให้ใช้งานง่ายและตรงไปตรงมา ปฏิบัติตามขั้นตอนเหล่านี้เพื่อคำนวณปริมาณที่เหมาะสมสำหรับปฏิกิริยาการ ligation ของคุณ:
ป้อนข้อมูล Vector:
ป้อนข้อมูล Insert:
ตั้งค่าพารามิเตอร์การทดลอง:
ดูผลลัพธ์:
คัดลอกผลลัพธ์ (ถ้าต้องการ):
เครื่องคำนวณจะทำการตรวจสอบความถูกต้องเพื่อให้แน่ใจว่าข้อมูลทั้งหมดเป็นหมายเลขบวกและปริมาณทั้งหมดเพียงพอสำหรับปริมาณ DNA ที่จำเป็น หากตรวจพบข้อผิดพลาดใด ๆ ข้อความแสดงข้อผิดพลาดที่เป็นประโยชน์จะช่วยแนะนำคุณในการแก้ไขข้อมูล
เครื่องคำนวณ DNA Ligation มีค่าใช้จ่ายในแอปพลิเคชันทางชีววิทยโมเลกุลหลายประการ:
กรณีการใช้งานที่พบบ่อยที่สุดคือการโคลนนิ่งโมเลกุลมาตรฐาน ซึ่งนักวิจัยจะใส่ยีนหรือ DNA fragments ลงใน plasmid vectors เครื่องคำนวณช่วยให้มั่นใจในเงื่อนไขที่เหมาะสมสำหรับ:
ในชีววิทยาสังเคราะห์ ซึ่งมักมีการประกอบ DNA หลายชิ้น:
เมื่อพัฒนาชุดตรวจทางโมเลกุล:
สำหรับนักวิจัยที่ทำงานเกี่ยวกับการผลิตโปรตีน:
ในแอปพลิเคชันการแก้ไขจีโนม:
เครื่องคำนวณมีค่าโดยเฉพาะสำหรับสถานการณ์การ ligation ที่ท้าทาย:
ในขณะที่เครื่องคำนวณ DNA Ligation ของเรามีการคำนวณที่แม่นยำสำหรับปฏิกิริยาการ ligation แบบดั้งเดิม แต่ก็มีวิธีการทางเลือกหลายประการในการเชื่อมต่อ DNA fragments:
Gibson Assembly: ใช้เอนไซม์ exonuclease, polymerase, และ ligase ในปฏิกิริยาในหลอดเดียวเพื่อเชื่อมต่อ DNA fragments ที่มีการทับซ้อนกัน ไม่จำเป็นต้องคำนวณการ ligation แบบดั้งเดิม แต่ยังคงมีความสำคัญในอัตราส่วนความเข้มข้น
Golden Gate Assembly: ใช้เอนไซม์การตัดประเภท IIS สำหรับการประกอบที่มีทิศทางและไม่มีรอยแผลจากการเชื่อมต่อหลาย fragment ต้องการปริมาณที่เท่ากันของทุก fragment
SLIC (Sequence and Ligation Independent Cloning): ใช้เอนไซม์ exonuclease เพื่อสร้าง overhangs แบบสายเดี่ยวที่เชื่อมต่อกัน โดยปกติจะใช้อัตราส่วนที่เท่ากันของ fragment
In-Fusion Cloning: ระบบเชิงพาณิชย์ที่อนุญาตให้เชื่อมต่อ fragment ที่มีการทับซ้อนกัน 15 bp ใช้อัตราส่วนเฉพาะตามขนาด fragment
Gateway Cloning: ใช้การ recombination ที่เฉพาะเจาะจงแทนการ ligation ต้องการ vectors ที่เป็นจุดเข้าและจุดปลายที่เฉพาะเจาะจง
Empirical Testing: ห้องปฏิบัติการบางแห่งชอบที่จะตั้งค่าปฏิกิริยา ligation หลายชุดด้วยอัตราส่วน insert:vector ที่แตกต่างกัน (1:1, 3:1, 5:1, 10:1) และกำหนดว่าสิ่งใดทำงานได้ดีที่สุดสำหรับการสร้างที่เฉพาะเจาะจง
Software Calculators: แพ็คเกจซอฟต์แวร์เชิงพาณิชย์เช่น Vector NTI และ SnapGene รวมถึงเครื่องคำนวณการ ligation พร้อมฟีเจอร์เพิ่มเติมเช่นการวิเคราะห์ไซต์การตัด
การพัฒนาการคำนวณ DNA ligation ขนานไปกับการพัฒนาทางเทคนิคการโคลนนิ่งโมเลกุล ซึ่งได้ปฏิวัติวงการชีววิทยโมเลกุลและเทคโนโลยีชีวภาพ
แนวคิดเกี่ยวกับ DNA ligation สำหรับการโคลนนิ่งโมเลกุลเกิดขึ้นในช่วงต้นปี 1970 โดยมีการทำงานที่เป็นแนวหน้าของ Paul Berg, Herbert Boyer, และ Stanley Cohen ซึ่งพัฒนาโมเลกุล DNA ที่ประกอบใหม่เป็นครั้งแรก ในช่วงเวลานี้ ปฏิกิริยาการ ligation ส่วนใหญ่เป็นแบบเชิงทดลอง โดยนักวิจัยใช้การทดลองและความผิดพลาดในการกำหนดเงื่อนไขที่เหมาะสม
การค้นพบเอนไซม์การตัดและ DNA ligase ได้มอบเครื่องมือที่จำเป็นสำหรับการตัดและเชื่อมต่อโมเลกุล DNA T4 DNA ligase ซึ่งแยกได้จาก E. coli ที่ติดเชื้อ T4 bacteriophage กลายเป็นเอนไซม์มาตรฐานสำหรับการเชื่อมต่อ DNA fragments เนื่องจากสามารถ ligate ได้ทั้งปลาย blunt และ cohesive
เมื่อการโคลนนิ่งโมเลกุลกลายเป็นเรื่องปกติ นักวิจัยเริ่มพัฒนาวิธีการที่เป็นระบบมากขึ้นสำหรับปฏิกิริยาการ ligation ความสำคัญของอัตราส่วนโมลาร์ระหว่าง vector และ insert DNA เริ่มชัดเจน นำไปสู่การพัฒนาสูตรพื้นฐานที่ยังคงใช้ในปัจจุบัน
ในช่วงเวลานี้ นักวิจัยได้ตั้งข้อสังเกตว่าการใช้ insert DNA ที่มากเกินไป (โดยปกติ 3:1 ถึง 5:1 อัตราส่วนโมลาร์ของ insert ต่อ vector) มักจะปรับปรุงประสิทธิภาพการ ligation สำหรับแอปพลิเคชันการโคลนนิ่งมาตรฐาน ข้อมูลนี้ถูกแบ่งปันในเอกสารทางห้องปฏิบัติการและค่อยๆ แทรกซึมเข้าไปในคู่มือและตำราเรียนทางชีววิทยโมเลกุล
การเกิดขึ้นของเครื่องมือคอมพิวเตอร์และเครื่องคำนวณออนไลน์ในปี 2000 ทำให้การคำนวณการ ligation ที่แม่นยำเข้าถึงได้มากขึ้นสำหรับนักวิจัย เมื่อเทคนิคทางชีววิทยโมเลกุลมีความซับซ้อนมากขึ้น ความจำเป็นในการคำนวณที่แม่นยำก็มีความสำคัญมากขึ้น โดยเฉพาะสำหรับโครงการการโคลนนิ่งที่ท้าทายซึ่งเกี่ยวข้องกับหลาย fragment หรือ insert ขนาดใหญ่
ในปัจจุบัน การคำนวณ DNA ligation เป็นส่วนสำคัญของเวิร์กโฟลว์การโคลนนิ่งโมเลกุล โดยมีเครื่องคำนวณเฉพาะเช่นเครื่องนี้ช่วยให้นักวิจัยปรับแต่งการทดลองของพวกเขา สูตรพื้นฐานยังคงไม่เปลี่ยนแปลงมากนัก แม้ว่าความเข้าใจของเราที่มีต่อปัจจัยที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพการ ligation จะดีขึ้น
การเกิดขึ้นของวิธีการโคลนนิ่งทางเลือกเช่น Gibson Assembly และ Golden Gate cloning ได้แนะนำความต้องการการคำนวณใหม่ แต่แนวคิดพื้นฐานของอัตราส่วนโมลาร์ระหว่าง DNA fragments ยังคงมีความสำคัญในเทคนิคเหล่านี้
นี่คือตัวอย่างการใช้งานของเครื่องคำนวณ DNA ligation ในหลายภาษาโปรแกรม:
1' Excel VBA Function for DNA Ligation Calculator
2Function CalculateInsertAmount(vectorAmount As Double, vectorLength As Double, insertLength As Double, molarRatio As Double) As Double
3 ' Calculate required insert amount in ng
4 CalculateInsertAmount = vectorAmount * (insertLength / vectorLength) * molarRatio
5End Function
6
7Function CalculateVectorVolume(vectorAmount As Double, vectorConcentration As Double) As Double
8 ' Calculate vector volume in μL
9 CalculateVectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration
10End Function
11
12Function CalculateInsertVolume(insertAmount As Double, insertConcentration As Double) As Double
13 ' Calculate insert volume in μL
14 CalculateInsertVolume = insertAmount / insertConcentration
15End Function
16
17Function CalculateBufferVolume(totalVolume As Double, vectorVolume As Double, insertVolume As Double) As Double
18 ' Calculate buffer/water volume in μL
19 CalculateBufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume
20End Function
21
22' Usage example in a cell:
23' =CalculateInsertAmount(50, 3000, 1000, 3)
241def calculate_ligation_volumes(vector_concentration, vector_length, insert_concentration,
2 insert_length, molar_ratio, total_volume, vector_amount=50):
3 """
4 Calculate volumes for a DNA ligation reaction.
5
6 Parameters:
7 vector_concentration (float): Concentration of vector DNA in ng/μL
8 vector_length (float): Length of vector DNA in base pairs
9 insert_concentration (float): Concentration of insert DNA in ng/μL
10 insert_length (float): Length of insert DNA in base pairs
11 molar_ratio (float): Desired molar ratio of insert:vector
12 total_volume (float): Total reaction volume in μL
13 vector_amount (float): Amount of vector DNA to use in ng (default: 50)
14
15 Returns:
16 dict: Dictionary containing calculated volumes and amounts
17 """
18 # Calculate vector volume
19 vector_volume = vector_amount / vector_concentration
20
21 # Calculate required insert amount
22 vector_length_kb = vector_length / 1000
23 insert_length_kb = insert_length / 1000
24 insert_amount = (vector_amount * insert_length_kb / vector_length_kb) * molar_ratio
25
26 # Calculate insert volume
27 insert_volume = insert_amount / insert_concentration
28
29 # Calculate buffer/water volume
30 buffer_volume = total_volume - vector_volume - insert_volume
31
32 return {
33 "vector_volume": round(vector_volume, 2),
34 "insert_volume": round(insert_volume, 2),
35 "buffer_volume": round(buffer_volume, 2),
36 "insert_amount": round(insert_amount, 2),
37 "vector_amount": vector_amount
38 }
39
40# Example usage
41result = calculate_ligation_volumes(
42 vector_concentration=50,
43 vector_length=3000,
44 insert_concentration=25,
45 insert_length=1000,
46 molar_ratio=3,
47 total_volume=20
48)
49
50print(f"Vector: {result['vector_volume']} μL ({result['vector_amount']} ng)")
51print(f"Insert: {result['insert_volume']} μL ({result['insert_amount']} ng)")
52print(f"Buffer: {result['buffer_volume']} μL")
53print(f"Total: 20 μL")
541function calculateLigationVolumes(vectorConcentration, vectorLength, insertConcentration,
2 insertLength, molarRatio, totalVolume, vectorAmount = 50) {
3 // Convert lengths to kb for calculation
4 const vectorLengthKb = vectorLength / 1000;
5 const insertLengthKb = insertLength / 1000;
6
7 // Calculate required insert amount
8 const insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
9
10 // Calculate volumes
11 const vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
12 const insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
13 const bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
14
15 return {
16 vectorVolume: parseFloat(vectorVolume.toFixed(2)),
17 insertVolume: parseFloat(insertVolume.toFixed(2)),
18 bufferVolume: parseFloat(bufferVolume.toFixed(2)),
19 insertAmount: parseFloat(insertAmount.toFixed(2)),
20 vectorAmount: vectorAmount
21 };
22}
23
24// Example usage
25const result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
26console.log(`Vector: ${result.vectorVolume} μL (${result.vectorAmount} ng)`);
27console.log(`Insert: ${result.insertVolume} μL (${result.insertAmount} ng)`);
28console.log(`Buffer: ${result.bufferVolume} μL`);
29console.log(`Total: 20 μL`);
301public class DNALigationCalculator {
2 public static class LigationResult {
3 public final double vectorVolume;
4 public final double insertVolume;
5 public final double bufferVolume;
6 public final double insertAmount;
7 public final double vectorAmount;
8
9 public LigationResult(double vectorVolume, double insertVolume, double bufferVolume,
10 double insertAmount, double vectorAmount) {
11 this.vectorVolume = vectorVolume;
12 this.insertVolume = insertVolume;
13 this.bufferVolume = bufferVolume;
14 this.insertAmount = insertAmount;
15 this.vectorAmount = vectorAmount;
16 }
17 }
18
19 public static LigationResult calculateLigationVolumes(
20 double vectorConcentration, double vectorLength,
21 double insertConcentration, double insertLength,
22 double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount) {
23
24 // Convert lengths to kb
25 double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
26 double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
27
28 // Calculate required insert amount
29 double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
30
31 // Calculate volumes
32 double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
33 double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
34 double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
35
36 // Round to 2 decimal places
37 vectorVolume = Math.round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
38 insertVolume = Math.round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
39 bufferVolume = Math.round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
40 insertAmount = Math.round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
41
42 return new LigationResult(vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount);
43 }
44
45 public static void main(String[] args) {
46 LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20, 50);
47
48 System.out.printf("Vector: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.vectorVolume, result.vectorAmount);
49 System.out.printf("Insert: %.2f μL (%.2f ng)%n", result.insertVolume, result.insertAmount);
50 System.out.printf("Buffer: %.2f μL%n", result.bufferVolume);
51 System.out.printf("Total: 20 μL%n");
52 }
53}
541#include <iostream>
2#include <cmath>
3#include <iomanip>
4
5struct LigationResult {
6 double vectorVolume;
7 double insertVolume;
8 double bufferVolume;
9 double insertAmount;
10 double vectorAmount;
11};
12
13LigationResult calculateLigationVolumes(
14 double vectorConcentration, double vectorLength,
15 double insertConcentration, double insertLength,
16 double molarRatio, double totalVolume, double vectorAmount = 50.0) {
17
18 // Convert lengths to kb
19 double vectorLengthKb = vectorLength / 1000.0;
20 double insertLengthKb = insertLength / 1000.0;
21
22 // Calculate required insert amount
23 double insertAmount = (vectorAmount * insertLengthKb / vectorLengthKb) * molarRatio;
24
25 // Calculate volumes
26 double vectorVolume = vectorAmount / vectorConcentration;
27 double insertVolume = insertAmount / insertConcentration;
28 double bufferVolume = totalVolume - vectorVolume - insertVolume;
29
30 // Round to 2 decimal places
31 vectorVolume = std::round(vectorVolume * 100.0) / 100.0;
32 insertVolume = std::round(insertVolume * 100.0) / 100.0;
33 bufferVolume = std::round(bufferVolume * 100.0) / 100.0;
34 insertAmount = std::round(insertAmount * 100.0) / 100.0;
35
36 return {vectorVolume, insertVolume, bufferVolume, insertAmount, vectorAmount};
37}
38
39int main() {
40 LigationResult result = calculateLigationVolumes(50, 3000, 25, 1000, 3, 20);
41
42 std::cout << std::fixed << std::setprecision(2);
43 std::cout << "Vector: " << result.vectorVolume << " μL (" << result.vectorAmount << " ng)" << std::endl;
44 std::cout << "Insert: " << result.insertVolume << " μL (" << result.insertAmount << " ng)" << std::endl;
45 std::cout << "Buffer: " << result.bufferVolume << " μL" << std::endl;
46 std::cout << "Total: 20 μL" << std::endl;
47
48 return 0;
49}
50อัตราส่วนโมลาร์ที่เหมาะสมของ insert ต่อ vector มักอยู่ระหว่าง 3:1 ถึง 5:1 สำหรับแอปพลิเคชันการ ligation แบบมาตรฐาน อย่างไรก็ตาม สิ่งนี้อาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับสถานการณ์การ ligation ที่เฉพาะเจาะจง:
หลายปัจจัยสามารถส่งผลต่อประสิทธิภาพการ ligation นอกเหนือจากอัตราส่วนโมลาร์:
โดยทั่วไปแนะนำให้ใช้ DNA vector 50-100 ng สำหรับปฏิกิริยาการ ligation แบบมาตรฐาน การใช้ vector มากเกินไปอาจนำไปสู่พื้นหลังที่สูงขึ้นของ vector ที่ไม่ได้ตัดหรือ self-ligated ในขณะที่ใช้ไม่เพียงพออาจลดประสิทธิภาพการเปลี่ยนถ่าย สำหรับการ ligation ที่ท้าทาย คุณอาจต้องปรับแต่งปริมาณนี้
ใช่ การ ligation แบบ blunt-end โดยทั่วไปมีประสิทธิภาพน้อยกว่าการ ligation แบบ sticky-end (cohesive-end) สำหรับการ ligation แบบ blunt-end ให้ใช้:
สำหรับการประกอบหลาย fragment:
เครื่องคำนวณนี้ออกแบบมาเฉพาะสำหรับการโคลนนิ่งแบบดั้งเดิมที่ใช้เอนไซม์การตัดและ ligase สำหรับ Gibson Assembly อัตราส่วนที่เท่ากันของทุก fragment มักจะถูกแนะนำ (1:1) แม้ว่าการคำนวณพื้นฐานของปริมาณ DNA ตามความยาวจะคล้ายกัน สำหรับ Golden Gate Assembly อัตราส่วนที่เท่ากันของส่วนประกอบทั้งหมดจะถูกใช้เช่นกัน
การ dephosphorylation ของ vector (การลบกลุ่มฟอสเฟต 5') ป้องกันการ ligation ตัวเอง แต่ไม่เปลี่ยนแปลงการคำนวณปริมาณ อย่างไรก็ตาม สำหรับ vector ที่ dephosphorylated:
ปริมาณปฏิกิริยาทั้งหมดที่เหมาะสมที่สุดมักอยู่ที่ประมาณ 10 μL ซึ่งช่วยให้การผสมมีความเพียงพอและป้องกันปัญหาการระเหย หากปริมาณ DNA ที่คำนวณของคุณเกินปริมาณปฏิกิริยาที่ต้องการ คุณมีตัวเลือกหลายประการ:
เวลาการเพาะเลี้ยงที่เหมาะสมแตกต่างกันไปตามประเภทการ ligation:
ใช่ ส่วนผสมการ ligation สามารถเก็บไว้ที่ -20°C และนำกลับมาใช้ใหม่สำหรับการเปลี่ยนถ่ายได้ อย่างไรก็ตาม การละลายและแช่แข็งแต่ละครั้งอาจลดประสิทธิภาพ สำหรับผลลัพธ์ที่ดีที่สุด:
Sambrook J, Russell DW. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Green MR, Sambrook J. (2012). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Engler C, Kandzia R, Marillonnet S. (2008). A one pot, one step, precision cloning method with high throughput capability. PLoS ONE, 3(11), e3647. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0003647
Gibson DG, Young L, Chuang RY, Venter JC, Hutchison CA, Smith HO. (2009). Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases. Nature Methods, 6(5), 343-345. https://doi.org/10.1038/nmeth.1318
Aslanidis C, de Jong PJ. (1990). Ligation-independent cloning of PCR products (LIC-PCR). Nucleic Acids Research, 18(20), 6069-6074. https://doi.org/10.1093/nar/18.20.6069
Zimmerman SB, Pheiffer BH. (1983). Macromolecular crowding allows blunt-end ligation by DNA ligases from rat liver or Escherichia coli. Proceedings of the National Academy of Sciences, 80(19), 5852-5856. https://doi.org/10.1073/pnas.80.19.5852
Addgene - Molecular Biology Reference. https://www.addgene.org/mol-bio-reference/
New England Biolabs (NEB) - DNA Ligation Protocol. https://www.neb.com/protocols/0001/01/01/dna-ligation-protocol-with-t4-dna-ligase-m0202
Thermo Fisher Scientific - Molecular Cloning Technical Reference. https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/cloning-learning-center.html
Promega - Cloning Technical Manual. https://www.promega.com/resources/product-guides-and-selectors/protocols-and-applications-guide/cloning/
ค้นพบเครื่องมือเพิ่มเติมที่อาจมีประโยชน์สำหรับการทำงานของคุณ