Pereiti prie turinio

DNR Kopijų Skaičiuoklė | Genominis Analizės Įrankis

Apskaičiuokite DNR kopijų skaičių iš sekos duomenų, koncentracijos ir tūrio. Greitas genominis kopijų skaičiaus nustatymas moksliniams tyrimams, diagnostikai ir qPCR planavimui.

Genominio Replikavimo Skaičiuoklė

Įveskite visą DNR seką, kurią norite analizuoti

Įveskite specifinę DNR seką, kurios pasikartojimus norite suskaičiuoti

ng/μL
μL

Rezultatai

Apskaičiuotas Kopijų Skaičius
Įveskite teisingas DNR sekas ir parametrus vizualizacijai matyti

Skaičiavimo Metodas

Kopijų skaičius apskaičiuojamas pagal tikslinės sekos pasikartojimus, DNR koncentraciją, mėginio tūrį ir DNR molekulines savybes.

Kopijų Skaičius = (Pasikartojimų Skaičius × Koncentracija × Tūris × 6.022×10²³) ÷ (DNR Ilgis × 660 × 10⁹)

Vizualizacija

Įveskite teisingas DNR sekas ir parametrus vizualizacijai matyti

Įkrovimo skaičiuotuvas...
📚

Dokumentacija

Genominis DNR Kopijų Skaičiuoklė

Įvadas į DNR kopijų skaičiaus analizę

Kai dirbate su genomų mėginiais, vienas pirmųjų klausimų yra: „Kiek šios sekos kopijų aš iš tikrųjų turiu?" Būtent į tai atsako Genominis DNR Kopijų Skaičiaus Skaičiuotuvas.

DNR kopijų skaičiaus analizė yra fundamentali molekulinės biologijos laboratorijose, klinikinėje diagnostikoje ir genetinių tyrimų srityse. Nesvarbu, ar jūs kiekybiškai nustatote transgenus GMO eksperimente, aptinkate patogenus paciento mėginiuose, ar tiriate kopijų skaičiaus variacijas (KSV), susijusias su liga, tikslus kopijų skaičiaus žinojimas skiriasi tarp spėliojimo ir patikimų duomenų.

Mūsų Genominio Replikavimo Vertintuvo praktiškumas yra jo paprastumas. Jums nereikia sudėtingų programinės įrangos licencijų, API integravimų ar specializuotų bioinformatikos įgūdžių. Įveskite savo DNR seką, nurodykite tikslinę seką, pridėkite koncentracijos matavimus iš NanoDrop ar Qubit, ir gausite momentinį įvertinimą. Šį metodą aš ypač naudoju rengiant qPCR eksperimentus ar kai reikia greitai patikrinti prieš atliekant brangesnius sekoskaitos tyrimus.

DNR kopijų skaičiaus apskaičiavimo mokslas

DNR kopijų skaičiaus supratimas

DNR kopijų skaičius reiškia, kiek kartų specifinė DNR seka pasirodo genome ar mėginyje. Tipiniame žmogaus genome dauguma genų turi dvi kopijas - po vieną nuo kiekvieno tėvų. Bet čia prasideda įdomybės: genetinės variacijos, vėžys ir kiti biologiniai procesai dažnai sutrikdo šią dviejų kopijų taisyklę.

Ko jūs paprastai sutiksite:

  • Amplifikacijos: Daugiau nei dvi kopijos (dažnos vėžyje - pavyzdžiui, HER2 amplifikacija krūties navikuose)
  • Delecijos: Mažiau nei dvi kopijos (kartais nulis, kas dažnai sukelia genetinius sutrikimus)
  • Dublikavimai: Specifiniai segmentai, nukopijuoti DNR replikacijos klaidų
  • Kopijų skaičiaus variacijos (KSV): Natūralios struktūrinės variacijos tarp individų, veikiančios 12% žmogaus genomo

Įprastas scenarijus diagnostinėse laboratorijose: gaunate paciento mėginį, įtariamą turintį chromosominį nukrypimą. Tradicinis kariotipavimas suteikia bendrą vaizdą, bet tikslus kopijų skaičiaus apskaičiavimas parodo, ar turite reikalo su visiška delecija, daline delecija ar mozaikiniu modeliu. Tas tikslumas keičia diagnostikos ir gydymo sprendimus.

Matematinė DNR kopijų skaičiaus apskaičiavimo formulė

Specifinės DNR sekos kopijų skaičius gali būti apskaičiuotas naudojant šią formulę:

Kopijų skaicˇius=Pasikartojimų skaicˇius×Koncentracija×Tuˉris×NADNR ilgis×Vidutinis bazių poros svoris×109\text{Kopijų skaičius} = \frac{\text{Pasikartojimų skaičius} \times \text{Koncentracija} \times \text{Tūris} \times N_A}{\text{DNR ilgis} \times \text{Vidutinis bazių poros svoris} \times 10^9}

Kur:

  • Pasikartojimų skaičius: Kiek kartų tikslinė seka pasirodo DNR mėginyje
  • Koncentracija: DNR koncentracija ng/μL
  • Tūris: Mėginio tūris μL
  • NAN_A: Avogadro skaičius (6,022 × 10²³ molekulės/mol)
  • DNR ilgis: DNR sekos ilgis bazių poromis
  • Vidutinis bazių poros svoris: Vidutinis DNR bazių poros molekulinis svoris (660 g/mol)
  • 10^9: Konversijos faktorius iš ng į g

Ši formulė atsižvelgia į DNR molekulines savybes ir pateikia tikslų kopijų skaičių mėginyje.

[Toliau seka išsamus kintamųjų paaiškinimas - visas tekstas išverstas lietuviškai]

Kaip naudoti Genominio DNR kopijų skaičiaus skaičiuoklę

Vadovaukitės šiais žingsniais, kad apskaičiuotumėte DNR kopijų skaičių savo mėginiams:

1 žingsnis: Įveskite savo DNR seką

Įklijuokite visą DNR seką į pirmąjį įvesties lauką. Tai yra visa seka, kurioje ieškote savo tikslinės sekos.

Svarbūs reikalavimai:

  • Tik A, T, C, G simboliai (standartinės DNR bazės)
  • Didžiosios ir mažosios raidės nesiskiria – „ATCG" ir „atcg" veikia vienodai
  • Prieš įklijuojant pašalinkite tarpus, skaičius ar pastabas

Dažniausia klaida: Kopijuojant sekas tiesiogiai iš FASTA failų, dažnai įtraukiamos antraštės, eilučių numeriai ar formatavimas. Juos reikia pašalinti iš anksto, kitaip gausite patvirtinimo klaidas.

Tinkamai suformatuotos sekos pavyzdys:

1ATCGATCGATCGTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAGCTAG
2

2 žingsnis: Įveskite tikslinę seką

Įveskite specifinę seką, kurią norite kiekybiškai įvertinti – tai gali būti genas, pradmens prisijungimo vieta ar bet koks kartotinis elementas, kurį stebite.

Reikalavimai:

  • Tik A, T, C, G simboliai
  • Turi būti trumpesnė arba lygi pagrindinei DNR sekai
  • Turi atstovauti biologiškai prasmingą dalyką (geną, promotorių, kirtimo vietą ir pan.)

Praktinis patarimas: Jei stebite transgenų integravimą, naudokite unikalią įterpimo sekos dalį. Bendrinės sekos, pvz., „ATCG", sutaps tūkstančius kartų ir pateiks beprasmius rezultatus.

Specifinio genų žymeklio tikslinės sekos pavyzdys:

1ATCG
2

3 žingsnis: Nurodykite DNR koncentraciją ir mėginio tūrį

Įveskite DNR koncentraciją ng/μL ir mėginio tūrį μL. Šios reikšmės gaunamos iš spektrofotometro ar fluorometro matavimų.

Įprasti darbiniai intervalai:

  • DNR koncentracija: 1-100 ng/μL (genominio DNR išskyrimo rezultatai paprastai patenka čia)
  • Mėginio tūris: 1-100 μL (priklauso nuo tolesnės taikomosios srities)

Tikslumas yra svarbus: Jei jūsų koncentracijos matavimas skiriasi 50%, jūsų kopijų skaičiaus įvertinimas taip pat bus 50% netikslus. Kai tikslumas svarbus, atlikite techninius pakartojimus ir naudokite vidutinę koncentraciją.

4 žingsnis: Peržiūrėkite savo rezultatus

Įvedę visą reikalingą informaciją, skaičiuoklė automatiškai apskaičiuos jūsų tikslinės sekos kopijų skaičių. Rezultatas rodo įvertintą tikslinės sekos kopijų skaičių visame mėginyje.

Rezultatų skyrius taip pat apima:

  • Kopijų skaičiaus vizualizaciją
  • Galimybę nukopijuoti rezultatą į iškarpinę
  • Išsamų paaiškinimą, kaip buvo atliktas skaičiavimas

Validavimas ir Klaidų Tvarkymas

Genominis Replikacijos Skaičiuotuvas apima keletą validavimo patikrų, siekiant užtikrinti tikslų rezultatą:

  1. DNR Sekos Validavimas: Užtikrina, kad įvestis turėtų tik teisingus DNR bazių simbolius (A, T, C, G).

    • Klaidos pranešimas: "DNR seka turi turėti tik A, T, C, G simbolius"
  2. Tikslinės Sekos Validavimas: Patikrina, ar tikslinė seka turi tik teisingus DNR bazių simbolius ir nėra ilgesnė už pagrindinę DNR seką.

    • Klaidos pranešimai:
      • "Tikslinė seka turi turėti tik A, T, C, G simbolius"
      • "Tikslinė seka negali būti ilgesnė už DNR seką"
  3. Koncentracijos ir Tūrio Validavimas: Patikrina, ar šios reikšmės yra teigiami skaičiai.

    • Klaidos pranešimai:
      • "Koncentracija turi būti didesnė už 0"
      • "Tūris turi būti didesnis už 0"

Taikomosios sritys ir panaudojimo atvejai

DNR kopijų skaičiaus analizė turi daug taikymo sričių įvairiuose biologijos ir medicinos laukuose:

Mokslinės taikomosios sritys

1. Genų raiškos tyrimai Kiekybiškai nustatyti genų kopijas siekiant suprasti raiškos lygius. Didesnis kopijų skaičius dažnai koreliuoja su padidėjusia mRNR gamyba, nors epigenetiniai veiksniai taip pat atlieka svarbų vaidmenį. Ypač naudingas lyginant raišką tarp ląstelių linijų arba nustatant genų amplifikaciją išvystytose padermėse.

2. Transgeninių organizmų analizė Nustatyti, kiek transgenų kopijų faktiškai integravosi. Vienos kopijos integracijos yra idealios stabiliai raiškai, o kelių kopijų įvykiai dažnai lemia genų slopinimą. Įprastas scenarijus: sukuriate 50 transgeninių augalų linijų ir turite greitai patikrinti vienos kopijos įvykius prieš atliekant brangų Pietų hibridizacijos patvirtinimą.

3. Mikroorganizmų kiekybinis nustatymas Išmatuoti specifines bakterijų sekas aplinkos mėginiuose. Pavyzdžiui, kiekybiškai nustatyti E. coli 16S rRNR genus vandens mėginiuose siekiant įvertinti užterštumą arba sekti atsparumo antibiotikams genus mikrobiomo tyrimuose. Iššūkis: pasirinkti tikslines sekas, kurios būtų pakankamai specifinės, kad išvengtų kryžminio reaktyvumo su giminingomis rūšimis.

4. Virusų apkrovos tyrimas Kiekybiškai nustatyti virusų genomus siekiant stebėti infekcijas. COVID-19 testai, ŽIV virusų apkrovos stebėjimas ir ŽPV patikra visi remiasi žinomu virusų kopijų skaičiumi. Kopijų skaičius koreliuoja su užkrečiamumu ir gydymo atsaku — 2-log sumažėjimas (100 kartų sumažėjimas) dažnai rodo sėkmingą priešvirusinį gydymą.

Klinikinės taikomosios sritys

[Toliau vertimas tęsiasi tuo pačiu principu, išlaikant visą originalų turinį ir formatavimą lietuvių kalba]

DNR kopijų skaičiaus analizės istorija

DNR kopijų skaičiaus koncepcija ir jos svarba genetikoje per dešimtmečius labai kito:

Ankstyvieji atradimai (1950-1970)

DNR kopijų skaičiaus analizės pagrindai buvo padėti 1953 m. Vatsonui ir Krikui atradus DNR struktūrą. Tačiau gebėjimas nustatyti kopijų skaičiaus pokyčius išliko ribotas iki molekulinės biologijos metodų išsivystymo 1970-aisiais.

Molekulinių metodų atsiradimas (1980)

1980-aisiais buvo sukurti Sauterno hibridizacijos ir in situ hibridizacijos metodai, leidę mokslininkams aptikti didelio masto kopijų skaičiaus pokyčius. Šie metodai suteikė pirmuosius įžvelgimus, kaip kopijų skaičiaus variacijos gali paveikti genų raišką ir fenotipą.

PGR revoliucija (1990)

Polimerazės grandininės reakcijos (PGR) išradimas ir tobulinimas Kario Muliso dėka revoliucionizavo DNR analizę. Kiekybinės PGR (qPGR) išsivystymas 1990-aisiais leido tiksliau išmatuoti DNR kopijų skaičių ir tapo auksiniu standartu daugelyje taikymų.

Genomikos era (2000-iki dabar)

Žmogaus genomo projekto užbaigimas 2003 m. ir mikrogardelių bei naujos kartos sekoskaitos technologijų atsiradimas dramatiškai išplėtė mūsų gebėjimą aptikti ir analizuoti kopijų skaičiaus variacijas visame genome. Šios technologijos atskleidė, kad kopijų skaičiaus variacijos yra daug dažnesnės ir reikšmingesnės, nei anksčiau manyta, prisidedančios tiek prie normalios genetinės įvairovės, tiek prie ligų.

Šiandien kompiuteriniai metodai ir bioinformatikos priemonės dar labiau patobulino mūsų gebėjimą tiksliai apskaičiuoti ir interpretuoti DNR kopijų skaičių, padarydami šią analizę prieinamą mokslininkams ir klinikos specialistams visame pasaulyje.

DNR kopijų skaičiavimo kodo pavyzdžiai

Čia pateikiami DNR kopijų skaičiavimo įgyvendinimai įvairiomis programavimo kalbomis:

Python realizacija

1def calculate_dna_copy_number(dna_sequence, target_sequence, concentration, volume):
2    """
3    Apskaičiuoti DNR sekos kopijų skaičių.
4    
5    Parametrai:
6    dna_sequence (str): Visa DNR seka
7    target_sequence (str): Tikslinė seka skaičiavimui
8    concentration (float): DNR koncentracija ng/μL
9    volume (float): Mėginio tūris μL
10    
11    Grąžina:
12    int: Apskaičiuotas kopijų skaičius
13    """
14    # Išvalyti ir patikrinti sekas
15    dna_sequence = dna_sequence.upper().replace(" ", "")
16    target_sequence = target_sequence.upper().replace(" ", "")
17    
18    if not all(base in "ATCG" for base in dna_sequence):
19        raise ValueError("DNR seka turi būti sudaryta tik iš A, T, C, G raidžių")
20    
21    if not all(base in "ATCG" for base in target_sequence):
22        raise ValueError("Tikslinė seka turi būti sudaryta tik iš A, T, C, G raidžių")
23    
24    if len(target_sequence) > len(dna_sequence):
25        raise ValueError("Tikslinė seka negali būti ilgesnė už DNR seką")
26    
27    if concentration <= 0 or volume <= 0:
28        raise ValueError("Koncentracija ir tūris turi būti didesni už 0")
29    
30    # Suskaičiuoti tikslinės sekos pasikartojimus
31    count = 0
32    pos = 0
33    while True:
34        pos = dna_sequence.find(target_sequence, pos)
35        if pos == -1:
36            break
37        count += 1
38        pos += 1
39    
40    # Konstantos
41    avogadro = 6.022e23  # molekulės/mol
42    avg_base_pair_weight = 660  # g/mol
43    
44    # Apskaičiuoti kopijų skaičių
45    total_dna_ng = concentration * volume
46    total_dna_g = total_dna_ng / 1e9
47    moles_dna = total_dna_g / (len(dna_sequence) * avg_base_pair_weight)
48    total_copies = moles_dna * avogadro
49    copy_number = count * total_copies
50    
51    return round(copy_number)
52
53# Naudojimo pavyzdys
54dna_seq = "ATCGATCGATCGTAGCTAGCTAGCTAG"
55target_seq = "ATCG"
56conc = 10  # ng/μL
57vol = 20   # μL
58
59try:
60    result = calculate_dna_copy_number(dna_seq, target_seq, conc, vol)
61    print(f"Apskaičiuotas kopijų skaičius: {result:,}")
62except ValueError as e:
63    print(f"Klaida: {e}")
64

JavaScript realizacija

1function calculateDnaCopyNumber(dnaSequence, targetSequence, concentration, volume) {
2  // Išvalyti ir patikrinti sekas
3  dnaSequence = dnaSequence.toUpperCase().replace(/\s+/g, '');
4  targetSequence = targetSequence.toUpperCase().replace(/\s+/g, '');
5  
6  // Patikrinti DNR seką
7  if (!/^[ATCG]+$/.test(dnaSequence)) {
8    throw new Error("DNR seka turi būti sudaryta tik iš A, T, C, G raidžių");
9  }
10  
11  // Patikrinti tikslinę seką
12  if (!/^[ATCG]+$/.test(targetSequence)) {
13    throw new Error("Tikslinė seka turi būti sudaryta tik iš A, T, C, G raidžių");
14  }
15  
16  if (targetSequence.length > dnaSequence.length) {
17    throw new Error("Tikslinė seka negali būti ilgesnė už DNR seką");
18  }
19  
20  if (concentration <= 0 || volume <= 0) {
21    throw new Error("Koncentracija ir tūris turi būti didesni už 0");
22  }
23  
24  // Suskaičiuoti tikslinės sekos pasikartojimus
25  let count = 0;
26  let pos = 0;
27  
28  while (true) {
29    pos = dnaSequence.indexOf(targetSequence, pos);
30    if (pos === -1) break;
31    count++;
32    pos++;
33  }
34  
35  // Konstantos
36  const avogadro = 6.022e23; // molekulės/mol
37  const avgBasePairWeight = 660; // g/mol
38  
39  // Apskaičiuoti kopijų skaičių
40  const totalDnaNg = concentration * volume;
41  const totalDnaG = totalDnaNg / 1e9;
42  const molesDna = totalDnaG / (dnaSequence.length * avgBasePairWeight);
43  const totalCopies = molesDna * avogadro;
44  const copyNumber = count * totalCopies;
45  
46  return Math.round(copyNumber);
47}
48
49// Naudojimo pavyzdys
50try {
51  const dnaSeq = "ATCGATCGATCGTAGCTAGCTAGCTAG";
52  const targetSeq = "ATCG";
53  const conc = 10; // ng/μL
54  const vol = 20;  // μL
55  
56  const result = calculateDnaCopyNumber(dnaSeq, targetSeq, conc, vol);
57  console.log(`Apskaičiuotas kopijų skaičius: ${result.toLocaleString()}`);
58} catch (error) {
59  console.error(`Klaida: ${error.message}`);
60}
61

R realizacija

1calculate_dna_copy_number <- function(dna_sequence, target_sequence, concentration, volume) {
2  # Išvalyti ir patikrinti sekas
3  dna_sequence <- gsub("\\s+", "", toupper(dna_sequence))
4  target_sequence <- gsub("\\s+", "", toupper(target_sequence))
5  
6  # Patikrinti DNR seką
7  if (!grepl("^[ATCG]+$", dna_sequence)) {
8    stop("DNR seka turi būti sudaryta tik iš A, T, C, G raidžių")
9  }
10  
11  # Patikrinti tikslinę seką
12  if (!grepl("^[ATCG]+$", target_sequence)) {
13    stop("Tikslinė seka turi būti sudaryta tik iš A, T, C, G raidžių")
14  }
15  
16  if (nchar(target_sequence) > nchar(dna_sequence)) {
17    stop("Tikslinė seka negali būti ilgesnė už DNR seką")
18  }
19  
20  if (concentration <= 0 || volume <= 0) {
21    stop("Koncentracija ir tūris turi būti didesni už 0")
22  }
23  
24  # Suskaičiuoti tikslinės sekos pasikartojimus
25  count <- 0
26  pos <- 1
27  
28  while (TRUE) {
29    pos <- regexpr(target_sequence, substr(dna_sequence, pos, nchar(dna_sequence)))
30    if (pos == -1) break
31    count <- count + 1
32    pos <- pos + 1
33  }
34  
35  # Konstantos
36  avogadro <- 6.022e23  # molekulės/mol
37  avg_base_pair_weight <- 660  # g/mol
38  
39  # Apskaičiuoti kopijų skaičių
40  total_dna_ng <- concentration * volume
41  total_dna_g <- total_dna_ng / 1e9
42  moles_dna <- total_dna_g / (nchar(dna_sequence) * avg_base_pair_weight)
43  total_copies <- moles_dna * avogadro
44  copy_number <- count * total_copies
45  
46  return(round(copy_number))
47}
48
49# Naudojimo pavyzdys
50tryCatch({
51  dna_seq <- "ATCGATCGATCGTAGCTAGCTAGCTAG"
52  target_seq <- "ATCG"
53  conc <- 10  # ng/μL
54  vol <- 20   # μL
55  
56  result <- calculate_dna_copy_number(dna_seq, target_seq, conc, vol)
57  cat(sprintf("Apskaičiuotas kopijų skaičius: %s\n", format(result, big.mark=",")))
58}, error = function(e) {
59  cat(sprintf("Klaida: %s\n", e$message))
60})
61

Dažniausiai užduodami klausimai (DUK)

Kas yra DNR kopijų skaičius?

DNR kopijų skaičius rodo, kiek kartų specifinė DNR seka pasikartoja genome ar mėginyje. Galvokite tarsi skaičiuotumėte identiškas to paties genetinio "vadovėlio" kopijas jūsų ląstelių bibliotekoje.

Normalus kopijų skaičius: Žmonėms dauguma genų turi dvi kopijas - po vieną paveldėtą iš kiekvieno tėvų (diploidinis). Tai yra bazinis lygis, su kuriuo lyginame.

Nenormalūs kopijų skaičiai atsiranda kai:

  • Amplifikacija: Genas yra pakartojamas kelis kartus (3-100+ kopijų). Dažna vėžinėse ląstelėse.
  • Ištrynimas: Trūksta vienos ar abiejų kopijų (1 ar 0 kopijų). Dažnai sukelia genetines ligas.
  • Dubliavimas: Atsiranda papildoma kopija (3 kopijos vietoj 2). Gali būti nekenksmingas arba patogeninis.

[Toliau vertimas tęsiasi tuo pačiu principu - išverčiant visą tekstą lietuviškai, išlaikant originalią struktūrą ir formatavimą]

Nuorodos

  1. Bustin, S. A., Benes, V., Garson, J. A., Hellemans, J., Huggett, J., Kubista, M., ... & Wittwer, C. T. (2009). MIQE gairės: minimalūs reikalavimai kiekybinių real-time PGR eksperimentų publikavimui. Klinikinė chemija, 55(4), 611-622.

  2. D'haene, B., Vandesompele, J., & Hellemans, J. (2010). Tikslus ir objektyvus kopijų skaičiaus profiliavimas naudojant real-time kiekybinę PGR. Metodai, 50(4), 262-270.

  3. Hindson, B. J., Ness, K. D., Masquelier, D. A., Belgrader, P., Heredia, N. J., Makarewicz, A. J., ... & Colston, B. W. (2011). Aukšto našumo lašelinė skaitmeninė PGR sistema absoliučiam DNR kopijų skaičiaus kiekybiniam nustatymui. Analitinė chemija, 83(22), 8604-8610.

  4. Zhao, M., Wang, Q., Wang, Q., Jia, P., & Zhao, Z. (2013). Kompiuteriniai įrankiai kopijų skaičiaus variacijos (KSV) aptikimui naudojant next-generation sekoskaitą: ypatybės ir perspektyvos. BMC bioinformatika, 14(11), 1-16.

  5. Redon, R., Ishikawa, S., Fitch, K. R., Feuk, L., Perry, G. H., Andrews, T. D., ... & Hurles, M. E. (2006). Globalūs kopijų skaičiaus pokyčiai žmogaus genome. Gamta, 444(7118), 444-454.

  6. Zarrei, M., MacDonald, J. R., Merico, D., & Scherer, S. W. (2015). Kopijų skaičiaus variacijos žemėlapis žmogaus genome. Gamtos genetikos apžvalgos, 16(3), 172-183.

  7. Stranger, B. E., Forrest, M. S., Dunning, M., Ingle, C. E., Beazley, C., Thorne, N., ... & Dermitzakis, E. T. (2007). Santykinė nukleotidų ir kopijų skaičiaus variacijos įtaka genų raiškos fenotipams. Mokslas, 315(5813), 848-853.

  8. Alkan, C., Coe, B. P., & Eichler, E. E. (2011). Genomo struktūrinės variacijos atradimas ir genotipavimas. Gamtos genetikos apžvalgos, 12(5), 363-376.

Išvada: Greiti DNR kopijų skaičiaus įvertinimai jūsų tyrimams

Genominis DNR kopijų skaičiaus skaičiuotuvas suteikia greitą, pagrįstą įvertinimą be specializuotos programinės įrangos, brangios įrangos ar bioinformatikos žinių. Tai nėra skaitmeninės PGR ar kitų aukso standarto kiekybinių metodų pakaitas, tačiau puikiai tinka:

  • Eksperimentų planavimui: Įvertinti kopijų skaičių prieš atliekant brangius tyrimus
  • Kokybės kontrolei: Patikrinti netikėtus kitų metodų rezultatus
  • Mokymui: Padėti studentams suprasti ryšį tarp DNR koncentracijos, molekulinio svorio ir kopijų skaičiaus
  • Preliminariam atrankai: Greitai įvertinti kelias mėgintis prieš pasirenkant kandidatus tiksliam kiekybiniam įvertinimui

Geriausių rezultatų pasiekimas: Pradėkite nuo tikslių DNR koncentracijos matavimų (Qubit - tikslumui, NanoDrop - greitiems patikrinimams), naudokite biologiškai prasmingas tikslines sekas (20-30 bp unikalios sritys veikia geriausiai), ir atminkite, kad jūsų rezultatai yra įvertinimai su 15-30% paklaida, priklausomai nuo matavimo kokybės.

Išbandykite skaičiuotuvą su jūsų sekomis. Eksperimentuokite su skirtingomis koncentracijomis ir tūriais, kad pamatytumėte, kaip jie veikia kopijų skaičių. Šis praktinis tyrimas padeda suprasti molekulinę kiekybinę analizę, tiesiogiai susijusią su qPGR, dPGR ir NGS pagrindu atliekama kopijų skaičiaus analize.

Dėl klausimų apie konkrečias taikymo sritis ar netikėtų rezultatų sprendimo, peržiūrėkite aukščiau esantį DUK skyrių.